突变型人肿瘤坏死因子-α工程菌发酵培养的实验研究 被引量：5

1

作者 孔令洪 李瑶琛 +3 位作者 王一理 尚宁宽 耿宜萍 司履生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期211-214,共4页

目的　优化基因重组人突变型 4 71肿瘤坏死因子 α(TNF α)工程菌的发酵和表达条件。方法　通过改变培养基的组分、pH值、培养温度和诱导表达的条件等 ,采用测定细菌生物量和蛋白表达量等方法 ,确定最适的发酵和表达条件 ,并考察工程菌... 目的　优化基因重组人突变型 4 71肿瘤坏死因子 α(TNF α)工程菌的发酵和表达条件。方法　通过改变培养基的组分、pH值、培养温度和诱导表达的条件等 ,采用测定细菌生物量和蛋白表达量等方法 ,确定最适的发酵和表达条件 ,并考察工程菌中重组质粒的遗传稳定性。结果　突变型 4 71rhTNF α工程菌在 pH值 7.5的SOC培养基中 ,30℃培养、4 2℃诱导 5h时 ,其表达量最大。而且 ,所构建的重组质粒在工程菌DH5α中传代稳定 ,目的蛋白的表达不受影响。结论　优化了基因重组人突变型 4 71rhTNF α工程菌的发酵和表达的最适条件 ,为进一步开发人突变型 4 71rhTNF 展开更多

关键词 突变型人肿瘤坏死因子-α 工程菌 发酵 培养 实验 重组质粒 遗传稳定性 肿瘤细胞

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应用网络STR生物信息对中国14个人群遗传距离的研究 被引量：9

2

作者 宋土生 黄辰 +6 位作者 司履生 胡晓岩 倪磊 李生斌 田英芳 雷莉 第五文科 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期1-4,共4页

目的　研究中国 14个族群间的遗传关系。方法　应用网络生物信息资源 ,收集CSF1PO ,TPOX和TH0 13个STR基因座的广州汉族、贵州汉族、西安汉族、景颇族、傣族、黎族、彝族、瑶族、壮族、回族、蒙古族和藏族的相关遗传资料 ,以及本研究组... 目的　研究中国 14个族群间的遗传关系。方法　应用网络生物信息资源 ,收集CSF1PO ,TPOX和TH0 13个STR基因座的广州汉族、贵州汉族、西安汉族、景颇族、傣族、黎族、彝族、瑶族、壮族、回族、蒙古族和藏族的相关遗传资料 ,以及本研究组完成的新疆哈萨克族和锡伯族相应数据。通过亲缘系数 (I)和遗传距离 (D)分析 ,研究 14个人群间的遗传关系 ,并根据遗传距离绘制遗传树。结果　 14个族群可被归为两个聚类群 :哈萨克族为一群 ,其他民族为另一群 ,属于蒙古人种。蒙古人种聚类群又可分为以下亚群 :傣族、壮族、彝族和黎族为一遗传距离相近的聚类亚群 ;3个汉族人群、藏族、云南回族、景颇族和瑶族为另一亚群 ,但两亚群间关系较密切。宁夏回族、新疆锡伯族与前两者有关 ,但距离较远。 展开更多

关键词 短串联重复序列 民族 遗传距离

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萘乙酸抑制K562细胞增殖作用的初步研究 被引量：6

3

作者 倪磊 黄辰 +4 位作者 宋土生 司履生 宋丽萍 牛跃英 刘利英 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期309-311,319,共4页

目的研究萘乙酸(NAA)对K562细胞增殖的抑制作用。方法应用MTT法、细胞计数法、流式细胞术、分裂指数分析、tunnel法以及姊妹染色单体交换(sister chromatid exchange,SCE)和微核制备,对NAA处理的K562细胞进行细胞增殖、细胞周期、凋亡... 目的研究萘乙酸(NAA)对K562细胞增殖的抑制作用。方法应用MTT法、细胞计数法、流式细胞术、分裂指数分析、tunnel法以及姊妹染色单体交换(sister chromatid exchange,SCE)和微核制备,对NAA处理的K562细胞进行细胞增殖、细胞周期、凋亡以及染色体损伤检测。结果与对照组相比,NAA可以有效抑制K562细胞的生长,并将细胞阻滞在G1期,降低细胞分裂指数,促进细胞凋亡,提高K562细胞SCE频率以及微核形成率。结论NAA具有抑制K562细胞增殖的作用。 展开更多

关键词 蔡乙酸 K562细胞 细胞增殖

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人ECK基因外显子3的实验研究 被引量：2

4

作者 孔令洪 李瑶琛 +1 位作者 王一理 司履生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期423-426,共4页

目的　建立人eck基因外显子 3(exon 3)的克隆与鉴定方法 ,研究其在ZR 75 1细胞系中的突变情况。方法　设计一对eck基因exon 3特异性引物 ,提取人正常皮肤组织和乳腺癌细胞系ZR 75 1基因组DNA ,并以此作为模板 ,采用聚合酶链反应 (PCR... 目的　建立人eck基因外显子 3(exon 3)的克隆与鉴定方法 ,研究其在ZR 75 1细胞系中的突变情况。方法　设计一对eck基因exon 3特异性引物 ,提取人正常皮肤组织和乳腺癌细胞系ZR 75 1基因组DNA ,并以此作为模板 ,采用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增eck基因exon 3片段 ,克隆入中介载体pUCm T中构建重组质粒 ,转化JM10 9大肠杆菌 ,扩增后经酶切、PCR初步鉴定后 ,进行序列分析。结果　①从正常皮肤组织上皮细胞、ZR 75 1细胞系基因组DNA中 ,经PCR扩增 ,获得了人eck基因exon 3片段 ;②建立了正常皮肤组织、ZR 75 1细胞系eck基因exon 3片段的克隆 ;③ZR 75 1细胞系中eck基因exon 3片段存在突变。结论　从人组织与细胞系基因组DNA中 ,成功地构建了人类eck基因exon 3的克隆 ,并证实eck基因exon 3在ZR 75 1乳腺癌细胞系中有突变 ,为进一步研究eck基因exon 展开更多

关键词 人ECK基因外显子3 基因克隆 聚合酶链反应 基因测序

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肿瘤免疫研究的回顾与展望 被引量：6

5

作者 司履生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期97-100,共4页

20多年来,本校免疫病理研究室一直从事肿瘤免疫的研究,从研究肿瘤浸润淋巴细胞的活化和肿瘤逃逸的机制开始,到探索诱导浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes, TIL)活化的最佳条件,并将这些研究结果转化为肿瘤免疫治疗和免疫预... 20多年来,本校免疫病理研究室一直从事肿瘤免疫的研究,从研究肿瘤浸润淋巴细胞的活化和肿瘤逃逸的机制开始,到探索诱导浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes, TIL)活化的最佳条件,并将这些研究结果转化为肿瘤免疫治疗和免疫预防的实践,从一个侧面反映了人类在征服肿瘤道路上的艰苦历程。 展开更多

关键词 肿瘤免疫 肿瘤逃逸 免疫治疗 免疫预防

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LT-B转基因烟草植株的建立 被引量：4

6

作者 刘红莉 雷霆 +6 位作者 张铮 郑瑾 来宝长 孔令洪 王喆之 王一理 司履生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期425-429,共5页

目的　构建大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (LT B)基因的植物表达载体 ,并建立LT B转基因烟草植株。方法　用PCR从pMMB6 8扩增LT B编码基因 ,将其克隆于 pUCmT和 pBI12 1载体 ,进而构建植物表达双元载体pBI LTB ,LT B基因由CaMV 35S启... 目的　构建大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (LT B)基因的植物表达载体 ,并建立LT B转基因烟草植株。方法　用PCR从pMMB6 8扩增LT B编码基因 ,将其克隆于 pUCmT和 pBI12 1载体 ,进而构建植物表达双元载体pBI LTB ,LT B基因由CaMV 35S启动子控制表达 ;将pBI LTB用电穿孔法导入根瘤农杆菌LBA4 4 0 4 ;采用叶盘共培育法经根瘤农杆菌介导转化烟草 ,获得转基因烟草植株 ;用PCR、Southern、Westernblot和ELISA检测转基因植株。结果　经PCR及Southern杂交分析 ,共发现 12株烟草的基因组中有LT B基因整合 ;Westernblot和ELISA分析表明有 9株转基因烟草能有效表达LT B蛋白 ,其表达量为烟草叶片总可溶蛋白的 3.36～ 10 .5 6 μg·g-1TSP。结论　建立的LT B转基因烟草植株可成功表达LT B ,并具有五聚体结构 ,为进一步生产预防婴幼儿大肠杆菌腹泻可食用疫苗及黏膜免疫佐剂奠定了基础。 展开更多

关键词 大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 转基因烟草 植物疫苗 根瘤农杆菌

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应用免疫组织化学方法评价组织芯片的可靠性 被引量：3

7

作者 杨军 苏宝山 +4 位作者 王康敏 赵世平 强磊 王一理 司履生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期399-402,408,共5页

目的探讨组织芯片技术在免疫组化试验中的可靠性和提高组织芯片可信性的方法。方法选择82例人乳腺癌标本石蜡蜡块,利用传统制片技术和自行研制的专用器具分别制作常规石蜡切片和组织芯片,采用免疫组化技术检测雌激素受体(ER)、孕激素受... 目的探讨组织芯片技术在免疫组化试验中的可靠性和提高组织芯片可信性的方法。方法选择82例人乳腺癌标本石蜡蜡块,利用传统制片技术和自行研制的专用器具分别制作常规石蜡切片和组织芯片,采用免疫组化技术检测雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达。结果采用自行研制的专用器具制备组织芯片,所得样本的可分析率均在92.9%以上,且随着对同一标本取材数量的增加,其可分析标本率也明显上升。采用传统方法检测的82例乳腺癌标本中ER和PR的阳性率分别为61%和58.5%;采用组织芯片技术,一式一份取材,其阳性率分别为51.9%和50.0%,一式两份方式取材,其阳性率分别为53.8%和53.8%,采用一式三份方式取材,其阳性率分别为57.1%和60.7%,且三种不同取材方式的检测结果与传统制片法之间并无统计学差异(P>0.75)。结论在采用统一制备标准并保证组织芯片质量的前提下,挖取直径1.5mm的组织样本制备组织芯片,尽管组织芯片技术与传统方法检测的结果的一致率仍随着对同一标本取材次数的增加而提高,但是三种不同取材方式的检测结果之间并无统计学差异。因此,一式一份取材制备组织芯片完全可替代传统制片技术用于免疫组织化学乃至原位杂交、荧光原位杂交技术的研究,且可保证组织芯片的可信性和高通量特征。 展开更多

关键词 组织芯片 乳腺癌 雌激素受体 孕激素受体 免疫组化

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氟对体外器官培养人牙胚骨形成蛋白表达的影响 被引量：3

8

作者 陶洪 侯铁舟 +3 位作者 王强 张安波 司履生 王一理 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期124-126,143,共4页

目的　通过研究氟对牙胚发育早期骨形成蛋白 (BMP)表达的影响 ,初步探讨氟在早期牙胚发育中的可能作用机制。方法　 4个月的人胚胎 ,取乳牙胚用RPMI16 4 0培养液进行器官培养 8d。免疫组化法研究 2 5mg·L-1和 5 0mg·L-1的氟... 目的　通过研究氟对牙胚发育早期骨形成蛋白 (BMP)表达的影响 ,初步探讨氟在早期牙胚发育中的可能作用机制。方法　 4个月的人胚胎 ,取乳牙胚用RPMI16 4 0培养液进行器官培养 8d。免疫组化法研究 2 5mg·L-1和 5 0mg·L-1的氟对分泌前期牙胚的影响 ,观察培养第 2、4、6、8天时BMP表达的变化。采用图像分析仪对免疫组化染色结果进行灰度分析。结果　BMP的表达主要在造釉器。成釉细胞 ,中间层细胞和星网状层细胞均有BMP表达 ,牙乳头细胞或成牙本质细胞不表达BMP。 2 5mg·L-1氟时从培养第 6天开始BMP表达增强 ;5 0mg·L-1氟时从培养第 2天到第 6天BMP的表达增强 ,培养第 8天时BMP的表达降低。 展开更多

关键词 氟 体外器官培养 人牙胚 骨形成蛋白 造釉细胞 牙胚发育 氟牙症

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绝经前妇女子宫切除前后心理状况调查分析 被引量：3

9

作者 杨筱凤 吴静 王一理 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期20-23,共4页

目的　了解子宫切除前后女性的心理状况改变趋势、程度和影响因素。方法　采用前瞻性研究方法调查 83例接受子宫切除手术女性入院时和术后 3月的心理状况。结果　心理状况调查自评得分显示术后BDI分值、SCL 90(偏执因子除外 )各因子得... 目的　了解子宫切除前后女性的心理状况改变趋势、程度和影响因素。方法　采用前瞻性研究方法调查 83例接受子宫切除手术女性入院时和术后 3月的心理状况。结果　心理状况调查自评得分显示术后BDI分值、SCL 90(偏执因子除外 )各因子得分显著低于术前 ,与他评调查HAMD评分一致 ,中、重度抑郁症发生率由术前 3 3 .7%降至术后 10 .1% ;不同年龄段患者SCL 90改变程度不同 ;术后BDI分值和HAMD得分与术前水平显著正相关 ;术前HAMD评分与受教育年限负相关 ,与主诉正相关 ,术后与产次、有内科合并症正相关 ,与年龄负相关。结论　子宫切除有利于患者身心健康 ;围手术期抑郁好发于年轻、多产、文化程度低、诉述痛经和月经过多及有其他内科疾患的妇女。 展开更多

关键词 绝经前 妇女 子宫切除术 心理状况 调查 影响因素

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沙眼衣原体D型MOMP基因的克隆和序列分析 被引量：2

10

作者 杨章民 韩俊宏 +4 位作者 郑瑾 杨筱凤 来宝长 王一理 司履生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期40-42,共3页

目的　从D型沙眼衣原体培养物中克隆主要外膜蛋白(MOMP)基因。方法　利用细胞培养法扩增沙眼衣原体后,提取基因组为模板,经聚合酶链反应(PCR)扩增全长MOMP基因,并用酶切、PCR扩增及序列测定等方法对重组质粒进行鉴定。结果　成功扩增了M... 目的　从D型沙眼衣原体培养物中克隆主要外膜蛋白(MOMP)基因。方法　利用细胞培养法扩增沙眼衣原体后,提取基因组为模板,经聚合酶链反应(PCR)扩增全长MOMP基因,并用酶切、PCR扩增及序列测定等方法对重组质粒进行鉴定。结果　成功扩增了MOMP基因,并插入克隆载体 pUCmT中。结论　MOMP基因的克隆为进一步开展沙眼衣原体的疫苗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 沙眼衣原体 克隆 主要外膜蛋白

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钙粘附分子在小鼠牙胚发育中的时空表达 被引量：2

11

作者 陶洪 侯铁舟 +4 位作者 来宝长 司履生 王一理 张安波 张琳 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期297-299,共3页

目的　观察钙粘附分子 (cadherins)在小鼠牙胚发育表达的时空顺序及分布 ,揭示钙粘附分子对牙齿发育的形态发生和细胞分化的作用及意义。方法　采用免疫组织化学方法 ,观察钙粘附分子在牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状早期、钟状中期、... 目的　观察钙粘附分子 (cadherins)在小鼠牙胚发育表达的时空顺序及分布 ,揭示钙粘附分子对牙齿发育的形态发生和细胞分化的作用及意义。方法　采用免疫组织化学方法 ,观察钙粘附分子在牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状早期、钟状中期、钟状晚期的表达。结果　钙粘附分子在牙胚发育的不同时期均有表达 ,尤其在钟状中期的成釉细胞、成牙本质细胞染色强阳性。结论　钙粘附分子参与牙齿形态发生及细胞的分化 ,推测钙粘附分子与牙釉质、牙本质的发育、分泌。 展开更多

关键词 钙粘附分子 小鼠 牙胚 发育 时空顺序 时空分布 牙釉质 牙本质

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增强型绿色荧光蛋白标记的Hela细胞株的建立 被引量：2

12

作者 杨军 陈晓黎 +2 位作者 苏宝山 王一理 司履生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期717-719,F0004,共4页

目的构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的Hela细胞系。方法PCR和DNA测序鉴定pEGFP-C1真核表达质粒,采用Qiagen tip 500进行pEGFP-C1真核表达质粒DNA的提取和纯化;cellfectin转染Hela细胞,G418筛选,有限稀释法单克隆培养,荧光显微镜进行... 目的构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的Hela细胞系。方法PCR和DNA测序鉴定pEGFP-C1真核表达质粒,采用Qiagen tip 500进行pEGFP-C1真核表达质粒DNA的提取和纯化;cellfectin转染Hela细胞,G418筛选,有限稀释法单克隆培养,荧光显微镜进行荧光检测EGFP的表达,采用激光共聚焦显微镜观测器检测荧光特性。结果PCR和DNA测序证实pEGFP质粒结构正确;在倒置荧光显微镜下,转染24h后,部分Hela细胞可见绿色荧光,转染72h时,大约80%Hela细胞内均可见绿色荧光。加入含G418的选择性培养基进行选择性培养,选择荧光较强的Hela细胞经有限稀释,持续筛选及克隆化培养,获得稳定表达绿色荧光的Hela细胞克隆,扩大培养并传至10代以上,将此细胞株命名为Hela-EGFP。激光共聚焦显微镜观察发现:在蓝光(-395nm)激发时,Hela-EGFP细胞绿色荧光激发波长为395nm,最大发射峰为509nm。结论Hela-EGFP细胞株具备稳定表达EGFP的能力,为实时可视化进行宫颈癌侵袭转移机制的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 增强型绿色荧光蛋白 宫颈癌 HELA细胞

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新型EGFP标记的杆状病毒转移载体的构建及EGFP的制备 被引量：2

13

作者 杨军 王一理 司履生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期433-436,459,共5页

目的构建可表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白的昆虫杆状病毒转移载体,利用Sf-9细胞表达、制备EGFP。方法用PCR法从pEGFP质粒中扩增EGFP基因,NcoⅠ/SalⅠ双酶切,克隆入杆状病毒转移载体NcoⅠ/SalⅠ酶切位点之间,获得pFB-EGFP质粒;转... 目的构建可表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白的昆虫杆状病毒转移载体,利用Sf-9细胞表达、制备EGFP。方法用PCR法从pEGFP质粒中扩增EGFP基因,NcoⅠ/SalⅠ双酶切,克隆入杆状病毒转移载体NcoⅠ/SalⅠ酶切位点之间,获得pFB-EGFP质粒;转化E.coliDH10Bac,通过转座子Tn7的介导,获得重组杆状病毒Ac-EGFP;感染Sf-9昆虫细胞;利用激光共聚焦显微镜和SDS-PAGE观察并检测EGFP的表达。非变性法纯化EGFP。结果荧光显微镜和激光共聚焦显微镜证实感染的Sf-9细胞可表达EGFP;通过SDS-PAGE获得的EGFP,大小为27ku。结论重组pFB-EGFP载体具备表达EGFP的能力,为分子生物学研究提供了一种新型可表达EGFP融合蛋白的昆虫杆状病毒表达载体。 展开更多

关键词 昆虫杆状病毒表达系统 增强型绿色荧光蛋白

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去除白蛋白对脑脊液双向凝胶电泳结果的影响 被引量：1

14

作者 周乐 和平 +1 位作者 屈建强 王一理 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期351-353,共3页

目的探讨去除白蛋白对脑脊液双向凝胶电泳的影响。方法应用HiTrapTMBlue分离柱,特异性去除脑脊液中的白蛋白,然后对去除白蛋白前后的脑脊液样本进行双向凝胶电泳研究,对比分析其结果。结果未清除白蛋白脑脊液标本双向凝胶电泳可检出约20... 目的探讨去除白蛋白对脑脊液双向凝胶电泳的影响。方法应用HiTrapTMBlue分离柱,特异性去除脑脊液中的白蛋白,然后对去除白蛋白前后的脑脊液样本进行双向凝胶电泳研究,对比分析其结果。结果未清除白蛋白脑脊液标本双向凝胶电泳可检出约200个蛋白点,而去除白蛋白后的脑脊液标本双向凝胶电泳仅检出约30余个蛋白点。大量其他蛋白信息伴随白蛋白同时丢失,剩余的蛋白信息很难全面反映脑脊液的蛋白质组学图谱。结论去除白蛋白可能会造成其他相应蛋白分子的丢失,进而会影响到脑脊液双向凝胶电泳的研究结果。 展开更多

关键词 脑脊液 白蛋白 双向凝胶电泳

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Anti-CD3 scFv-B7.1真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的初步表达

15

作者 杨章民 孔令洪 +2 位作者 来宝长 王一理 司履生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期542-544,548,共4页

目的　构建anti CD3scFv B7.1真核表达载体 ,并进行初步表达。方法　采用重叠延伸拼接法 (splicingbyoverlapextention ,SOE)将anti CD3scFv和B7.1(V +C)两个基因片段通过spacer序列连接 ,将融合基因克隆入T载体 ,并测序证实。在此基础... 目的　构建anti CD3scFv B7.1真核表达载体 ,并进行初步表达。方法　采用重叠延伸拼接法 (splicingbyoverlapextention ,SOE)将anti CD3scFv和B7.1(V +C)两个基因片段通过spacer序列连接 ,将融合基因克隆入T载体 ,并测序证实。在此基础上构建真核表达载体pcDNA/anti CD3scFv B7.1,并经脂质体法转染COS 7细胞 ,免疫组织化学法检测表达。结果　获得了序列与预期完全相同的融合基因 ;构建了抗CD3scFv B7.1融合基因真核表达载体 ;在COS 7细胞中获得初步表达。结论　成功构建及表达抗CD3scFv B7.1融合基因真核表达载体 ,为进一步研究抗CD3scFv B7. 展开更多

关键词 Anti-CD3 scFv-B7.1 COS-7细胞 抗CD3单链抗体 基因表达 肿瘤 生物治疗 真核表达载体

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HPV-6/11 L1/E6、HPV-6/11 L1/E7嵌合DNA疫苗质粒的构建

16

作者 刘鹏 李昂 +4 位作者 马军 尚宁宽 来宝长 司履生 王一理 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期413-415,442,共4页

目的　构建HPV 6 / 11L1/E6、HPV 6 / 11L1/E7预防、治疗性DNA疫苗质粒。方法　运用PCR扩增HPV 6 /11L1、E6、E7序列 ,PCR产物连接至pGEMT Easy质粒 ,测序鉴定正确后 ,分别连接至真核表达载体pVAX ,再用酶切、连接而构建成HPV 6 / 11L1 ... 目的　构建HPV 6 / 11L1/E6、HPV 6 / 11L1/E7预防、治疗性DNA疫苗质粒。方法　运用PCR扩增HPV 6 /11L1、E6、E7序列 ,PCR产物连接至pGEMT Easy质粒 ,测序鉴定正确后 ,分别连接至真核表达载体pVAX ,再用酶切、连接而构建成HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX质粒。运用电穿孔法将所获得质粒转染COS 7细胞 ,免疫组化检测蛋白表达情况。结果　所构建质粒的插入目的片段测序正确 ;免疫组化检测在胞浆胞核可见棕黄色点状阳性产物沉积。结论　所构建的HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX融合蛋白表达质粒可在体外表达L1 E6 /L1 E7蛋白 。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒6/11型 DNA疫苗 聚合酶链反应 HPV相关性疾病

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新型自体肿瘤细胞疫苗治疗进展期肿瘤患者的免疫学检测

17

作者 姚德茂 尹贻明 +5 位作者 张亚玲 李旭 崔玲 孟绍青 司履生 王一理 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期83-85,共3页

目的　探讨自体肿瘤疫苗的作用机制。方法　 2 0例进展期肿瘤患者术后第 4周开始以自体肿瘤细胞疫苗行主动免疫治疗。免疫接种共 4次 ,每次间隔 7～ 10d ;接种前 3d及第 4次接种后一周 ,采集外周血 ,分离单个核细胞 ,以流式细胞分析术 ... 目的　探讨自体肿瘤疫苗的作用机制。方法　 2 0例进展期肿瘤患者术后第 4周开始以自体肿瘤细胞疫苗行主动免疫治疗。免疫接种共 4次 ,每次间隔 7～ 10d ;接种前 3d及第 4次接种后一周 ,采集外周血 ,分离单个核细胞 ,以流式细胞分析术 /细胞内细胞因子检测法测定CD8+ IFN γ+ ,CD8+ IL 10 + 细胞及CD4+ IFN γ+ ,CD4+ IL 10 + 细胞 ;同时采集血清 ,ELISA法检测血清IFN γ、IL 10水平。结果　自体肿瘤细胞疫苗治疗后 :①血清IFN γ水平升高 [(7.16± 2 .91)ng·L- 1升至 (11.68± 4.86)ng·L- 1,P <0 .0 5] ;而IL 10水平下降 [2 1.0 4± 13 .81)ng·L- 1降至 (13 .41± 5.71)ng·L- 1,P <0 .0 5] ;②CD8+ IFN γ+ 阳性细胞由 (3 .80± 1.45) %升至 (6.94± 2 .63 ) % ;CD4+ IFN γ+ 阳性细胞由 (3 .0 9± 1.52 ) %升至 (5.2 0± 2 .94) % (P <0 .0 5) ;③病人耐受良好。 展开更多

关键词 自体肿瘤细胞疫苗 治疗 进展期肿瘤 免疫学 检测 细胞因子

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酒精诱导的小鼠生殖系统损伤与一氧化氮的关系

18

作者 黄辰 康新勤 +5 位作者 宋土生 司履生 倪磊 张庆华 胡晓岩 胡劲松 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期30-31,共2页

目的　研究酒精饲养小鼠精子死亡率和活动率与睾丸一氧化氮 (NO)形成的关系。方法　应用灌胃的方法饲养酒精组小鼠 ,并检测小鼠精子死亡率、活动率以及睾丸NO含量和NOS活性。结果　酒精饲养小鼠精子死亡率明显高于对照组 ,而活动率以及N... 目的　研究酒精饲养小鼠精子死亡率和活动率与睾丸一氧化氮 (NO)形成的关系。方法　应用灌胃的方法饲养酒精组小鼠 ,并检测小鼠精子死亡率、活动率以及睾丸NO含量和NOS活性。结果　酒精饲养小鼠精子死亡率明显高于对照组 ,而活动率以及NO含量和NOS活性均低于对照组。 展开更多

关键词 精子 酒精 一氧化氮 生殖系统损伤

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B7.1胞外编码区的真核表达及其生物活性

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作者 杨章民 王一理 司履生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期526-529,共4页

目的　真核表达B7.1细胞外编码区以研究其生物学活性。方法　电穿孔法将重组质粒pDisplay/B7.1(V +C)导入人子宫颈癌细胞株 ,免疫组化及核酸原位杂交法分别检测其蛋白及mRNA表达 ,3 H TdR掺入法测定表达物对T细胞的刺激作用 ;MTT法研究... 目的　真核表达B7.1细胞外编码区以研究其生物学活性。方法　电穿孔法将重组质粒pDisplay/B7.1(V +C)导入人子宫颈癌细胞株 ,免疫组化及核酸原位杂交法分别检测其蛋白及mRNA表达 ,3 H TdR掺入法测定表达物对T细胞的刺激作用 ;MTT法研究转染细胞 T细胞混合培养引发的细胞毒性杀伤作用。结果　B7.1细胞外区在Hela细胞表面表达 ,所表达的B7.1细胞外区在抗CD3单抗存在的情况下具有刺激T细胞活化的特性 ,重组质粒转染的Hela细胞与T细胞混合培养可引起细胞毒性杀伤。结论　真核表达的B7.1(V +C)具有T细胞共刺激活性 ,可用于构建肿瘤免疫治疗之双功能分子。 展开更多

关键词 B7.1 细胞外区 真核表达 生物活性

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一个遗传性共济失调家系报告 被引量：1

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作者 张庆华 第五文科 +4 位作者 宋土生 黄辰 倪磊 司履生 康新勤 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期610-610,共1页

关键词 遗传性共济失调 家系 常染色体显性遗传 神经系统变性

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