背景与目的:前列腺癌与乳腺癌作为高发恶性肿瘤,其发生、发展与抑癌基因10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chremosome ten,Pten)及转化相关蛋白53基因(transformation related ...背景与目的:前列腺癌与乳腺癌作为高发恶性肿瘤,其发生、发展与抑癌基因10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chremosome ten,Pten)及转化相关蛋白53基因(transformation related protein 53 gene,Trp53)的功能缺失密切相关,二者同时缺失可加速肿瘤恶性进展并诱导治疗抵抗。基于Cre-loxP系统的基因编辑小鼠自发性肿瘤模型是研究癌症机制的关键工具。研究表明,前列腺特异性启动子前泌蛋白(probasin,Pbsn)的基因驱动的iCre重组酶基因(Pbsn-iCre)可诱导雄性小鼠自发性前列腺癌,但其在雌性乳腺癌中的作用及跨性别表达特征尚未阐明。本研究构建Pten^(fl/fl);Trp53^(fl/fl);Pbsn-iCre^(+)转基因小鼠模型,旨在探究其在前列腺癌与乳腺癌中的自发性肿瘤表型,并验证Pbsn在乳腺组织中的表达特征。方法:利用Cre-loxP系统,通过杂交及连续回交筛选获得基因型稳定的Pten^(fl/fl);Trp53^(fl/fl);Pbsn-iCre^(+)子代小鼠(伦理审查批号:FUSCC-IACUC-2025115)。通过聚合酶链式反应及琼脂糖凝胶电泳验证Pten、Trp53及Pbsn-iCre基因型。通过H-E染色评估肿瘤组织病理学特征。免疫组织化学分析前列腺及乳腺肿瘤组织中Pten、p53蛋白表达水平,并检测Pbsn在乳腺、前列腺、卵巢、心脏、肝脏及肾脏中的分布。结果:Pten^(fl/fl);Trp53^(fl/fl);Pbsn-iCre^(+)雄鼠与雌鼠分别自发前列腺癌或乳腺癌。前列腺癌病理学特征表现为肿瘤呈侵袭性腺泡腺癌结构,伴腺体结构紊乱及基膜破坏;乳腺癌病理学特征表现为浸润性导管癌,伴导管上皮异型增生及间质淋巴细胞浸润。免疫组织化学检测证实前列腺及乳腺的肿瘤组织中Pten与p53蛋白完全失表达,验证了前列腺和乳腺特异性基因敲除效应。免疫组织化学检测也证实了Pbsn蛋白特异性表达于前列腺腺泡上皮、卵泡及乳腺导管上皮细胞,而心脏、肝脏及肾脏中未见表达。结论:Pbsn-iCre在雌性乳腺中存在功能性表达,Pbsn-iCre所诱导的Pten/Trp53同时缺失可驱动雄鼠自发形成前列腺癌、雌鼠自发形成乳腺癌。展开更多
背景与目的:前列腺癌抗原3(prostate cancer antigen 3,PCA3)作为一种长链非编码RNA(lncRNA)已被证实在前列腺癌中高度特异性表达,暗示其可能在前列腺癌中发挥重要作用,为深入研究,我们将完整的PCA3基因转入真核表达载体,并构建慢病毒...背景与目的:前列腺癌抗原3(prostate cancer antigen 3,PCA3)作为一种长链非编码RNA(lncRNA)已被证实在前列腺癌中高度特异性表达,暗示其可能在前列腺癌中发挥重要作用,为深入研究,我们将完整的PCA3基因转入真核表达载体,并构建慢病毒包装系统。方法:从前列腺癌细胞株LNCaP细胞中提取总RNA,运用重叠延伸方法扩增到PCA3基因,测序正确后定向接入真核表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP,酶切鉴定并测序正确后进行慢病毒包装和滴度测定。结果:经PCR鉴定及测序,PCA3表达质粒序列与Gene Bank序列进行Blast比对分析,同源性为99.8%,PCA3慢病毒滴度测定为2×108。结论:PCA3成功插入真核表达载体并完成了慢病毒包装,为深入研究PCA3基因在前列腺细胞中的作用奠定了基础,进而为探索前列腺癌的治疗提供了新的途径。展开更多
背景与目的:可变剪接在细胞增殖、生长、凋亡及分化等复杂的蛋白质功能调控中发挥着至关重要的作用,能参与包括肿瘤在内的多种疾病的发生、发展过程,目前大多数可变剪接调控因子的功能及其作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨KH型剪接调...背景与目的:可变剪接在细胞增殖、生长、凋亡及分化等复杂的蛋白质功能调控中发挥着至关重要的作用,能参与包括肿瘤在内的多种疾病的发生、发展过程,目前大多数可变剪接调控因子的功能及其作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨KH型剪接调控蛋白(KH-type splicing regulatory protein,KHSRP)在肺腺癌中的差异剪接靶基因及靶基因的表达与患者预后及免疫细胞功能的相关性。方法:通过高通量可变剪接测序,筛选KHSRP下游差异剪接靶基因。通过肿瘤免疫评估资源(Tumor IMmune Estimation Resource,TIMER)和阿拉巴马大学伯明翰分校癌症数据分析门户(the University of Alabama at Birmingham cancer data analysis portal,ULCAN)分析KHSRP下游差异剪接靶基因在肺腺癌中的表达。通过Kaplan数据库分析KHSRP下游差异剪接靶基因的表达与患者预后的相关性。通过TIMER免疫模块分析KHSRP下游差异剪接靶基因与免疫细胞功能的相关性。结果:NUMB、ADD3及LIMCH1为KHSRP的下游关键可变剪接靶基因。NUMB、ADD3及LIMCH1在肺腺癌肿瘤组织中均呈低表达,其低表达者预后不良。NUMB、ADD3及LIMCH1与免疫细胞功能呈正相关。结论:在肺腺癌中,NUMB、ADD3及LIMCH1为KHSRP的差异剪接靶基因,且NUMB、ADD3及LIMCH1低表达会导致预后不良,并且与免疫细胞功能呈正相关。展开更多
文摘背景与目的:前列腺癌与乳腺癌作为高发恶性肿瘤,其发生、发展与抑癌基因10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chremosome ten,Pten)及转化相关蛋白53基因(transformation related protein 53 gene,Trp53)的功能缺失密切相关,二者同时缺失可加速肿瘤恶性进展并诱导治疗抵抗。基于Cre-loxP系统的基因编辑小鼠自发性肿瘤模型是研究癌症机制的关键工具。研究表明,前列腺特异性启动子前泌蛋白(probasin,Pbsn)的基因驱动的iCre重组酶基因(Pbsn-iCre)可诱导雄性小鼠自发性前列腺癌,但其在雌性乳腺癌中的作用及跨性别表达特征尚未阐明。本研究构建Pten^(fl/fl);Trp53^(fl/fl);Pbsn-iCre^(+)转基因小鼠模型,旨在探究其在前列腺癌与乳腺癌中的自发性肿瘤表型,并验证Pbsn在乳腺组织中的表达特征。方法:利用Cre-loxP系统,通过杂交及连续回交筛选获得基因型稳定的Pten^(fl/fl);Trp53^(fl/fl);Pbsn-iCre^(+)子代小鼠(伦理审查批号:FUSCC-IACUC-2025115)。通过聚合酶链式反应及琼脂糖凝胶电泳验证Pten、Trp53及Pbsn-iCre基因型。通过H-E染色评估肿瘤组织病理学特征。免疫组织化学分析前列腺及乳腺肿瘤组织中Pten、p53蛋白表达水平,并检测Pbsn在乳腺、前列腺、卵巢、心脏、肝脏及肾脏中的分布。结果:Pten^(fl/fl);Trp53^(fl/fl);Pbsn-iCre^(+)雄鼠与雌鼠分别自发前列腺癌或乳腺癌。前列腺癌病理学特征表现为肿瘤呈侵袭性腺泡腺癌结构,伴腺体结构紊乱及基膜破坏;乳腺癌病理学特征表现为浸润性导管癌,伴导管上皮异型增生及间质淋巴细胞浸润。免疫组织化学检测证实前列腺及乳腺的肿瘤组织中Pten与p53蛋白完全失表达,验证了前列腺和乳腺特异性基因敲除效应。免疫组织化学检测也证实了Pbsn蛋白特异性表达于前列腺腺泡上皮、卵泡及乳腺导管上皮细胞,而心脏、肝脏及肾脏中未见表达。结论:Pbsn-iCre在雌性乳腺中存在功能性表达,Pbsn-iCre所诱导的Pten/Trp53同时缺失可驱动雄鼠自发形成前列腺癌、雌鼠自发形成乳腺癌。
文摘背景与目的:前列腺癌抗原3(prostate cancer antigen 3,PCA3)作为一种长链非编码RNA(lncRNA)已被证实在前列腺癌中高度特异性表达,暗示其可能在前列腺癌中发挥重要作用,为深入研究,我们将完整的PCA3基因转入真核表达载体,并构建慢病毒包装系统。方法:从前列腺癌细胞株LNCaP细胞中提取总RNA,运用重叠延伸方法扩增到PCA3基因,测序正确后定向接入真核表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP,酶切鉴定并测序正确后进行慢病毒包装和滴度测定。结果:经PCR鉴定及测序,PCA3表达质粒序列与Gene Bank序列进行Blast比对分析,同源性为99.8%,PCA3慢病毒滴度测定为2×108。结论:PCA3成功插入真核表达载体并完成了慢病毒包装,为深入研究PCA3基因在前列腺细胞中的作用奠定了基础,进而为探索前列腺癌的治疗提供了新的途径。
文摘背景与目的:可变剪接在细胞增殖、生长、凋亡及分化等复杂的蛋白质功能调控中发挥着至关重要的作用,能参与包括肿瘤在内的多种疾病的发生、发展过程,目前大多数可变剪接调控因子的功能及其作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨KH型剪接调控蛋白(KH-type splicing regulatory protein,KHSRP)在肺腺癌中的差异剪接靶基因及靶基因的表达与患者预后及免疫细胞功能的相关性。方法:通过高通量可变剪接测序,筛选KHSRP下游差异剪接靶基因。通过肿瘤免疫评估资源(Tumor IMmune Estimation Resource,TIMER)和阿拉巴马大学伯明翰分校癌症数据分析门户(the University of Alabama at Birmingham cancer data analysis portal,ULCAN)分析KHSRP下游差异剪接靶基因在肺腺癌中的表达。通过Kaplan数据库分析KHSRP下游差异剪接靶基因的表达与患者预后的相关性。通过TIMER免疫模块分析KHSRP下游差异剪接靶基因与免疫细胞功能的相关性。结果:NUMB、ADD3及LIMCH1为KHSRP的下游关键可变剪接靶基因。NUMB、ADD3及LIMCH1在肺腺癌肿瘤组织中均呈低表达,其低表达者预后不良。NUMB、ADD3及LIMCH1与免疫细胞功能呈正相关。结论:在肺腺癌中,NUMB、ADD3及LIMCH1为KHSRP的差异剪接靶基因,且NUMB、ADD3及LIMCH1低表达会导致预后不良,并且与免疫细胞功能呈正相关。
