干扰素及其最新研究进展 被引量：52

1

作者 孙亚萍 王英明 乔守怡 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期676-679,共4页

关键词 干扰素 鸡胚绒毛尿囊膜 可溶性物质 生物学活性 病毒感染后 抗病毒功能 病毒学家 20世纪

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猪卵透明带-4蛋白在大肠杆菌中高表达的研究 被引量：1

2

作者 孙晓溪 徐万祥 +3 位作者 邱德义 熊艳 李大金 谢毅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期660-663,共4页

目的：在大肠杆菌中高水平地直接表达目的蛋白。方法：用PCR方法从猪卵透明带-l（pZP1）cDNA中扩增pZP4目的基因片段，通过在其5'端和3'端引入的双酶切位点将该完整的目的cDNA定向插入pBV221表达质粒PRPL启动因子下游的多克隆... 目的：在大肠杆菌中高水平地直接表达目的蛋白。方法：用PCR方法从猪卵透明带-l（pZP1）cDNA中扩增pZP4目的基因片段，通过在其5'端和3'端引入的双酶切位点将该完整的目的cDNA定向插入pBV221表达质粒PRPL启动因子下游的多克隆区。结果：此重组表达质粒转化宿主工程菌后经热诱导培养，可在SDS-PAGE凝胶上得到特异性的高表达蛋白条带，而且它在 Wistem blot鉴定实验中能被鼠抗pZP4的单克隆抗体17D3和兔抗pZPIgGe识别。结论：成功地在大肠杆菌高效表达了可被17D3单克隆抗体及ZP多克隆抗体识别的ZP4。 展开更多

关键词 猪 CDNA 大肠杆菌 基因表达 卵透明带-4蛋白

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表观遗传调节与常见疾病的发生 被引量：2

3

作者 高艳虹 李定国 吴超群 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1256-1258,共3页

近年来发现一些表观遗传调节方式以及表观遗传特征变化与多种疾病相关。表观遗传机制的失调将影响染色质结构和基因表达,导致复杂的综合征、多因素疾病及癌症。文章就几种常见疾病的表观遗传机制研究进展作一综述。

关键词 表观遗传 癌症 心血管病 代谢综合征 自身免疫病

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人黏连蛋白基因在肝细胞癌中表达的研究

4

作者 徐斌 居小萍 +1 位作者 胡先贵 夏放 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第3期213-215,共3页

关键词 肝细胞癌 人黏连蛋白 基因表达 FN基因 MRNA

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异烟肼耐药和敏感结核分枝杆菌的比较蛋白质组织学研究（摘要）

5

作者 乐军 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期491-491,共1页

目的研究结核分枝杆菌异烟肼耐药菌株与敏感菌株的蛋白质表达差异,鉴定结核分枝杆菌中与异烟肼耐药相关的菌体蛋白.方法应用双向电泳技术比较2株异烟肼耐药菌株与2株敏感菌株的全菌蛋白表达图谱差异,发现异烟肼耐药结核分枝杆菌表达量... 目的研究结核分枝杆菌异烟肼耐药菌株与敏感菌株的蛋白质表达差异,鉴定结核分枝杆菌中与异烟肼耐药相关的菌体蛋白.方法应用双向电泳技术比较2株异烟肼耐药菌株与2株敏感菌株的全菌蛋白表达图谱差异,发现异烟肼耐药结核分枝杆菌表达量显著增加26个蛋白质斑点,通过基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪进行质谱分析,获得6个明确的肽质量指纹谱,通过蛋白质数据库进行检索分析.结果6个蛋白分别为海藻糖磷酸酶、铁钼蛋白A、莽草酸5脱氢酶、葡萄糖胺果糖6磷酸氨基转移酶、吲哚3甘油磷酸合成酶、TetR家族转录词控因子.结论上述蛋白的鉴定将对发现新型抗结核药物靶位和异烟肼耐药结核病诊断的分子标志物可能有所裨益. 展开更多

关键词 异烟肼 结核分枝杆菌 耐药菌株 蛋白质组织学 诊断 靶位 耐药结核病 基质辅助激光解吸 转录调控 表达量

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重组溶葡萄球菌酶在患子宫内膜炎奶牛体内的药代动力学与残留研究 被引量：4

6

作者 陆锦春 陈华鹏 +5 位作者 马怀彦 张继恩 江海洋 史为民 沈建忠 黄青山 《中国乳业》 2012年第2期40-44,共5页

子宫内膜炎是奶牛常见的一种生殖系统疾病。溶葡萄球菌酶是一种能直接裂解葡萄球菌细胞壁的肽链内切酶,有望成为治疗奶牛子宫内膜炎的一种新型生物类药物制剂。本试验通过双抗夹心酶联免疫学方法,进行了重组溶葡萄球菌酶在健康和患子宫... 子宫内膜炎是奶牛常见的一种生殖系统疾病。溶葡萄球菌酶是一种能直接裂解葡萄球菌细胞壁的肽链内切酶,有望成为治疗奶牛子宫内膜炎的一种新型生物类药物制剂。本试验通过双抗夹心酶联免疫学方法,进行了重组溶葡萄球菌酶在健康和患子宫内膜炎奶牛体内的药代动力学研究。采用药代动力学软件3p97处理,并对静脉注射重组溶葡萄球菌酶的药物浓度-时间数据进行了最佳模型拟合。结果表明:数据符合一室开放模型,由消除半衰期(T1/2ke)(29.945±1.844)min可知,溶葡萄球菌酶在动物体内消除很快。健康或患病奶牛子宫内灌注800U和1600U重组溶葡萄球菌酶后,不同时间点的尾根静脉血液、牛奶和子宫黏液中的溶葡萄球菌酶的含量检测表明,经子宫黏膜吸收后,在血液和牛奶中没有药物蓄积;静脉注射重组溶葡萄球菌酶后,不同时间点的牛奶中也没有药物蓄积。健康和患病奶牛灌注1600U重组溶葡萄球菌酶,宫内药物有效作用浓度持续时间均达到48h以上。 展开更多

关键词 重组溶葡萄球菌酶 奶牛子宫内膜炎 药代动力学 残留

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重组溶葡萄球菌酶阴道泡腾片的质量研究 被引量：1

7

作者 陆珉 黄青山 张继恩 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第12期14-19,共6页

对重组溶葡萄球菌酶阴道泡腾片进行质量研究。考察泡腾片外观性状、鉴别、酸碱度、融变时限、微生物限度、发泡量、重量差异以及含量测定（主要针对含量测定进行方法学验证）,确定泡腾片质量标准;同时考察泡腾片的稳定性。结果表明,重... 对重组溶葡萄球菌酶阴道泡腾片进行质量研究。考察泡腾片外观性状、鉴别、酸碱度、融变时限、微生物限度、发泡量、重量差异以及含量测定（主要针对含量测定进行方法学验证）,确定泡腾片质量标准;同时考察泡腾片的稳定性。结果表明,重组溶葡萄球菌酶阴道泡腾片外观性状、鉴别、酸碱度、融变时限、微生物限度、发泡量、重量差异结果符合要求,含量测定为标示量的80%～150%。稳定性实验表明在干燥、阴凉、密封条件下,重组溶葡萄球菌酶阴道泡腾片至少能保质24个月。由此确定泡腾片质量符合拟定的企业质量标准。 展开更多

关键词 重组溶葡萄球菌酶 阴道泡腾片 质量研究

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重组溶葡萄球菌酶泡腾栓在母猪体内的药动学与阴道内残留消除研究 被引量：1

8

作者 叶贵子 张幼定 +6 位作者 陆珉 李国栋 张继恩 孙永学 曾东平 陈超 黄青山 《中国猪业》 2013年第3期56-58,共3页

通过双抗夹心酶联免疫学方法,采用药代动力学软件3p97,分别在健康和患阴道炎猪体进行重组溶葡萄球菌酶(rLSP)药代动力学及阴道黏液中活性研究分析,对静脉注射rLSP的药物浓度-时间数据进行最佳模型拟合。结果表明,健康和患阴道炎母猪经... 通过双抗夹心酶联免疫学方法,采用药代动力学软件3p97,分别在健康和患阴道炎猪体进行重组溶葡萄球菌酶(rLSP)药代动力学及阴道黏液中活性研究分析,对静脉注射rLSP的药物浓度-时间数据进行最佳模型拟合。结果表明,健康和患阴道炎母猪经静脉注射rLSP(400U)后,消除半衰期分别为36.10分钟和40.36分钟。健康和患阴道炎母猪经阴道给药rLSP泡腾栓(400U)后,试验母猪血液中均未检测到酶活性,说明rLSP经阴道内黏膜吸收后在血液中没有药物蓄积。健康母猪和患病母猪在给药后36小时阴道内黏液中均能检测到酶活性(分别为7.34ng/mL和4.45ng/mL),而在第48小时均未检出,表明该药物在阴道内至少保持36小时的活性,且作用48小时后无残留。 展开更多

关键词 rLSP泡腾栓 母猪阴道炎 药代动力学 阴道内残留

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华支睾吸虫成虫全长基因表达文库的构建和基因表达谱的建立 被引量：20

9

作者 徐劲 胡旭初 +4 位作者 应康 吴忠道 陈守义 谢毅 余新炳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第5期383-386,393,共5页

目的　获得尽可能多的华支睾吸虫UNIGENE及全长基因 ,建立成虫基因表达谱 ,为华支睾吸虫发育过程中基因表达的规律和功能基因组学研究奠定基础。方法　构建 pBluescriptⅡSK全长cDNA质粒文库 ,先对 5’端进行随机EST大量测序 ,生物信息... 目的　获得尽可能多的华支睾吸虫UNIGENE及全长基因 ,建立成虫基因表达谱 ,为华支睾吸虫发育过程中基因表达的规律和功能基因组学研究奠定基础。方法　构建 pBluescriptⅡSK全长cDNA质粒文库 ,先对 5’端进行随机EST大量测序 ,生物信息分析后归并UNIGENE ,并对归并的结果进行了 3’端的序列测定 ,根据 3’端测序结果 ,再次进行UNI GENE归并 ,对能够拼接上的克隆进行了序列拼接。对预测为完整基因且未测通的序列 ,进行了引物设计 ,walking反应测序 ,将得到的UNIGENE用点样法制备基因芯片。结果　获得 5’端有效EST序列 4 0 6 6个 ,测序结果UNIGENE分析 ,归并获得1775个UNIGENE ,5’端预测的全长基因为 377个。共获得测通的cDNA序列 2 77个 ,其中全长基因 198个。目前制备的华支睾成虫基因表达谱芯片含有 1775个基因。结论　所构建的华支睾吸虫成虫全长cDNA文库质量较好 ,采用的技术路线获取全长基因建立基因表达谱的效率较高。 展开更多

关键词 华支睾吸虫 基因表达谱 生物信息学

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华支睾吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因的原核表达及重组蛋白的功能鉴定 被引量：5

10

作者 徐劲 郑南才 +4 位作者 吴忠道 陈守义 胡旭初 应康 余新炳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第10期863-866,共4页

目的克隆肝吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因并在大肠杆菌内表达,同时对表达的重组蛋白进行初步的功能分析,为进一步的研究和药物筛选打下基础。方法通过大规模测序从肝吸虫cDNA文库中确定肝吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因,采用PCR方法扩增出目... 目的克隆肝吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因并在大肠杆菌内表达,同时对表达的重组蛋白进行初步的功能分析,为进一步的研究和药物筛选打下基础。方法通过大规模测序从肝吸虫cDNA文库中确定肝吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因,采用PCR方法扩增出目的片段,与表达质粒pGEX-4T-1连接构建重组质粒,IPTG诱导表达;研究重组蛋白的理化性质及酶动力学特征,并寻找可能的抑制剂。结果成功表达出约64 kDa的重组蛋白,凝血酶切后为36 kDa蛋白,其酶活性为63.6U/mg。1.14 mM 4,4′-二甲氨基联苯甲醇处理30 min酶活性下降了60%;吡喹酮、灭滴灵和阿苯哒唑对酶活性无抑制作用;而5’-单磷酸腺苷对重组酶有竞争性抑制作用,其Ki为0.49。结论成功地表达了目的蛋白,为药物筛选提供了一个易于获得的候选蛋白分子。 展开更多

关键词 华支睾吸虫 线粒体苹果酸脱氢酶 异源表达 酶动力学参数 抑制

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华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶活性位点氨基酸点突变对酶活性和热稳定性影响 被引量：4

11

作者 郑南才 黄宝明 +4 位作者 徐劲 黄善盛 胡旭初 陈金中 余新炳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期575-579,共5页

目的为了研究华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸的点突变对酶活性和热稳定性的影响,进一步了解蛋白分子结构与功能的关系。方法利用PCR技术,对胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸基因进行点突变,与pQE30质粒连接构建重组质... 目的为了研究华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸的点突变对酶活性和热稳定性的影响,进一步了解蛋白分子结构与功能的关系。方法利用PCR技术,对胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸基因进行点突变,与pQE30质粒连接构建重组质粒,转染大肠杆菌后表达蛋白,测定酶活性和圆二色性,测定不同温度时222nm圆二色性改变,确定不同点突变蛋白的热稳定性。结果H195被异亮氨酸、半胱氨酸和酪氨酸置换后,酶活性下降了100倍以上,但随着H195被不同氨基酸置换和H195周围氨基酸被置换情况的不同,不同突变株表达的蛋白酶活性差别很大,H195/I195和H195/Y195突变株表达的蛋白酶活性明显高于H195N197/I195Y197和H195T198/C195M198突变株表达的蛋白酶活性;H195/Y195突变株表达的蛋白与未突变蛋白的二级结构差异明显;H195/Y195和H195T198/C195M198突变株表达的蛋白热稳定性明显降低,tm值分别为63.5℃和64℃,比Cs cMDH的tm值分别下降了4℃和3.5℃。结论活性中心H195的点突变可导致华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶活性的明显下降,而且H195被不同的氨基酸置换后可导致酶活性下降程度的不同,H195周围氨基酸被替换成具有形成氢键或二硫键的氨基酸后,导致酶活性下降更为明显;H195及其周围氨基酸的突变可导致蛋白质二级结构的改变和热稳定性的不同程度下降。 展开更多

关键词 华支睾吸虫 胞浆苹果酸脱氢酶 点突变 圆二色性

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大鼠胰岛分离纯化技术的改进 被引量：15

12

作者 李永翔 李戈 +3 位作者 董维平 陈静 卢大儒 谭建明 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期266-268,共3页

目的探索成年大鼠胰岛的分离纯化理想方法,并对获得的胰岛进行体外功能鉴定。方法通过用胶原酶P液灌注分离成年SD大鼠胰岛,不连续密度梯度离心法纯化胰岛,STZ染色鉴定胰岛,AO/PI染色鉴定胰岛活率,胰岛素释放试验判定胰岛功能,光镜观察... 目的探索成年大鼠胰岛的分离纯化理想方法,并对获得的胰岛进行体外功能鉴定。方法通过用胶原酶P液灌注分离成年SD大鼠胰岛,不连续密度梯度离心法纯化胰岛,STZ染色鉴定胰岛,AO/PI染色鉴定胰岛活率,胰岛素释放试验判定胰岛功能,光镜观察体外培养胰岛的形态学变化。结果纯化后每只大鼠胰岛收获量为(629±102)IEQ,胰岛纯度>90%,胰岛细胞活率>90%,胰岛细胞体外培养液中胰岛素含量在低糖和高糖刺激下的浓度分别为(3.701 5±0.492 0)mIU/L和(10.477 1±2.233 4)mIU/L,刺激指数为2.837 8±0.102 3,体外培养48h几乎完全贴壁,培养3周生长状况仍良好。结论分离条件把握好后,胶原酶P消化、Fi-coll400非连续密度梯度离心法可获得高纯度高活率的大鼠胰岛。 展开更多

关键词 胰岛 分离 纯化

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急性砷染毒的L-02细胞的基因芯片分析 被引量：3

13

作者 顾永清 杨磊 +5 位作者 王国荃 袁秉祥 潘泽民 应康 李遥 谢毅 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期558-560,共3页

目的　用基因芯片分析急性砷染毒时人正常肝细胞 (L 0 2细胞 )基因表达谱的变化。方法　亚砷酸钠染毒L 0 2细胞 2、15、2 4h与未染毒的L 0 2细胞作表达谱基因芯片杂交。结果　L 0 2细胞用砷剂染毒后不同时间基因表达谱不同。hCYR6 1基... 目的　用基因芯片分析急性砷染毒时人正常肝细胞 (L 0 2细胞 )基因表达谱的变化。方法　亚砷酸钠染毒L 0 2细胞 2、15、2 4h与未染毒的L 0 2细胞作表达谱基因芯片杂交。结果　L 0 2细胞用砷剂染毒后不同时间基因表达谱不同。hCYR6 1基因在细胞染毒 2h后就表达增加 ,而在 15h和 2 4h后均不再升高 ;在细胞染毒后的不同时段 ,细胞金属硫蛋白Ⅳ及金属硫蛋白Ⅲ同源基因的表达均显著增加 ;热休克蛋白 86基因在细胞染毒 2h未增加 ,在 15h和2 4h表达均增加。结论　细胞接触砷毒后进入应激状态 ,合成最必需的与解毒功能相关的蛋白 。 展开更多

关键词 急性砷染毒 L-02细胞 基因芯片 肝细胞 亚砷酸钠

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羧基末端结合蛋白CtBP2与泛素结合酶UBE2Ⅰ的相互作用 被引量：1

14

作者 叶晓霞 石彦 +2 位作者 霍克克 陈东 吴民华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第17期1783-1788,共6页

目的筛选并确定人羧基末端结合蛋白CtBP2的相互作用蛋白。方法用酵母双杂交技术,以人CtBP2为诱饵蛋白筛选人肝cDNA文库,获得与之相互作用的候选蛋白,采用酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验确认相互作用的特异性,最后利用荧光蛋白融合表达... 目的筛选并确定人羧基末端结合蛋白CtBP2的相互作用蛋白。方法用酵母双杂交技术,以人CtBP2为诱饵蛋白筛选人肝cDNA文库,获得与之相互作用的候选蛋白,采用酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验确认相互作用的特异性,最后利用荧光蛋白融合表达技术和荧光显微镜观察确认CtBP2与其相互作用蛋白的亚细胞共定位情况。结果酵母双杂交筛选获得了41个与Bd-CtBP2相互作用的阳性克隆,编码10个不同的蛋白,其中有4个克隆编码泛素结合酶UBE2Ⅰ的不同片段。从人肝cDNA文库中扩增获得UBE2Ⅰ的全长编码序列,酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验证实CtBP2与UBE2Ⅰ能够特异性结合。亚细胞定位研究表明GFP-CtBP2弥散分布于细胞核,DsRed-UBE2Ⅰ不均匀分布于细胞核,有部分点状聚集。两者共转染时能够呈点状共定位于细胞核。结论人CtBP2能够在细胞核内与UBE2Ⅰ特异性相互作用,是UBE2Ⅰ的靶蛋白。 展开更多

关键词 羧基末端结合蛋白 酵母双杂交 泛素结合酶UBE2Ⅰ 免疫共沉淀 亚细胞共定位

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酪氨酸激酶受体通路相关基因在原发胶质母细胞瘤中的表达及其意义 被引量：2

15

作者 杨柳松 胡锦 +2 位作者 周良辅 邵敏华 卢大儒 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2008年第4期254-257,共4页

背景与目的:胶质母细胞瘤是颅内最常见的肿瘤之一,其发病率和死亡率均较高,但我们对其分子生物学机制仍了解甚少。本研究应用低密度表达谱芯片检测人脑原发胶质母细胞瘤组织中酪氨酸激酶受体通路相关基因的表达情况,进一步分析其表达变... 背景与目的:胶质母细胞瘤是颅内最常见的肿瘤之一,其发病率和死亡率均较高,但我们对其分子生物学机制仍了解甚少。本研究应用低密度表达谱芯片检测人脑原发胶质母细胞瘤组织中酪氨酸激酶受体通路相关基因的表达情况,进一步分析其表达变化的意义。方法:使用TaqMan低密度表达芯片技术检测26个酪氨酸激酶受体通路相关基因在10例原发胶质母细胞瘤及9例正常脑组织(脑外伤减压术中所取大脑组织)并通过统计学分析其在胶质母细胞瘤和正常脑组织中的表达差异。结果:在正常脑组织中,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)系统的两个基因MAP2K1及MAP2K4的Ct值分别为1.6±1.7和2.2±2.1,而在原发胶质母细胞瘤中的Ct值分别为3.9±1.5和5.0±2.0,其与正常脑组织的Ct差值分别为-2.3和-2.8(P<0.05)。结论:MAP2K1和MAP2K4基因在原发胶质母细胞瘤中的表达明显下调;酪氨酸激酶受体通路相关基因中MAPK系统基因的表达差异可能与原发胶质母细胞瘤的发生、发展密切相关。 展开更多

关键词 原发胶质母细胞瘤 MAPK通路 酪氨酸激酶受体通路 实时定量PCR

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TGFβ1基因修饰供者树突状细胞降低移植心脏RANTES表达 被引量：1

16

作者 张新华 钟翠平 +3 位作者 周播江 顾云娣 冯久贤 吴超群 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第3期189-192,F002,共5页

目的 探讨移植前输注入TGFβ1基因修饰树状细胞(dendritic cell,DC)对移植心脏正常T细胞表达和分泌的活化调节因子(RANTES)表达的影响。方法 TGFβ1-pcDNA3重组质粒转染供者DC,静脉输注异体大鼠,1周后检测TGFβ1-DC在受者脾和淋巴结的... 目的 探讨移植前输注入TGFβ1基因修饰树状细胞(dendritic cell,DC)对移植心脏正常T细胞表达和分泌的活化调节因子(RANTES)表达的影响。方法 TGFβ1-pcDNA3重组质粒转染供者DC,静脉输注异体大鼠,1周后检测TGFβ1-DC在受者脾和淋巴结的分布。TUNEL法检测受者大鼠脾T细胞凋亡水平,并检测受者脾RANTES表达的变化;同时另一部分输注大鼠接受同种异体心脏移值,观察DC输注后移植心脏存活时间变化,比较移植后不同时间排斥反应级别,免疫组化检测移植心脏 RANTES的表达。结果 TGFβ1-DC输注受者后,1周内可在脾和淋巴结内形成微嵌合,并有效诱导T细胞的凋亡。TGFβ1-DC输注大鼠移植后排斥反应明显低于对照组,移植心脏存活时间明显延长,并发现移植心脏RANTES表达明显低于对照组。结论 TGFβ1-DC能有效降低移植心脏RANTES表达,增强移植心脏免疫耐受性。 展开更多

关键词 移植心脏 TGFΒ1 RANTES 输注 表达 DC 大鼠 PCDNA3 重组质粒 分泌

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SYBR Green实时定量PCR检测人原发脑胶质瘤中REV3和REV7基因的表达 被引量：1

17

作者 奚才华 王慧博 +3 位作者 赵世光 张舒羽 卢大儒 胡锦 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期491-493,共3页

目的运用实时定量PCR检测跨损伤修复基因REV3和REV7在人脑原发脑胶质瘤组织中的表达水平,探讨其和肿瘤级别之间的关系。方法采用SYBR Green实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测跨损伤修复基因REV3和REV7的mRNA在85例原发胶质瘤(Ⅱ级2... 目的运用实时定量PCR检测跨损伤修复基因REV3和REV7在人脑原发脑胶质瘤组织中的表达水平,探讨其和肿瘤级别之间的关系。方法采用SYBR Green实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测跨损伤修复基因REV3和REV7的mRNA在85例原发胶质瘤(Ⅱ级20例、Ⅲ级20例和Ⅳ级45例)和14例正常脑组织中的表达水平,统计学分析表达水平和肿瘤级别之间的关系。结果与正常组织相比,REV3和REV7在各病理级别胶质瘤中均表达上调(P<0.05);并且REV3在Ⅳ级胶质瘤中的表达比在Ⅱ级和Ⅲ级中都要高(P<0.05)。秩相关分析表明:REV3的表达量与胶质瘤病理分级呈正相关性(r=0.454,P<0.001)。结论REV3和REV7在胶质瘤组织中均高表达,而且REV3表达水平和恶性程度有密切联系。 展开更多

关键词 REV3 REV7 跨损伤修复 脑胶质瘤 实时定量PCR SYBR Green

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重组溶葡萄球菌酶成品蛋白含量测定方法的建立 被引量：1

18

作者 许燕 张宜涛 +2 位作者 叶贵子 陆海荣 黄青山 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期54-58,共5页

重组溶葡萄球菌酶(recombinant lysostaphin,rLysn)对金黄色葡萄球菌具有良好的抗菌活性,是一种新型抗菌药物,含有该酶的药用制剂在临床上能有效控制金葡菌感染。为在rLysn成品中增加蛋白含量测定以控制制剂的质量,建立了成品中rLysn蛋... 重组溶葡萄球菌酶(recombinant lysostaphin,rLysn)对金黄色葡萄球菌具有良好的抗菌活性,是一种新型抗菌药物,含有该酶的药用制剂在临床上能有效控制金葡菌感染。为在rLysn成品中增加蛋白含量测定以控制制剂的质量,建立了成品中rLysn蛋白含量测定方法,并进行验证。采用体积排阻高效液相色谱法(size exclusion high performance liquid chromatograph,SEHPLC)测定rLysn理化对照品及成品蛋白质含量。色谱柱:TSK gel 2000SWXL(7.8 mm×30 cm,5μm);流动相:20 mmol/L磷酸缓冲液(pH7.0)+0.3 mol/L NaCl;流速:0.5 mL/min;柱温:25℃;检测波长:280 nm。结果显示,rLysn在2-32μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r2=1);低、中、高3种浓度的rLysn理化对照品空白加标平均回收率为102.9%,成品加标平均回收率为102.1%;3种不同上样量在不同时间内测定,蛋白含量RSD<1%;每隔1 h测定同一支供试品溶液,蛋白含量RSD为0.98%;同一批供试品溶液取6份进样,蛋白含量RSD为1.71%。实验结果表明,采用SE-HPLC方法简便,准确性、精密度、稳定性及重复性好,可用于rLysn成品蛋白质含量的测定。 展开更多

关键词 重组溶葡萄球菌酶 蛋白质含量 体积排阻高效液相色谱法

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利用SMART技术构建中国人肝组织cDNA酵母双杂交文库

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作者 叶晓霞 霍克克 +1 位作者 陈东 梁艳清 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1175-1180,共6页

目的:针对人类肝脏蛋白质组计划中大规模基因克隆及构建肝脏蛋白相互作用图谱的研究需要,改造酵母双杂交载体pPC86和pDBleu,并构建中国人肝组织cDNA文库,为肝脏蛋白质组计划的研究奠定基础。方法:设计并合成特定寡核苷酸序列,经过处理... 目的:针对人类肝脏蛋白质组计划中大规模基因克隆及构建肝脏蛋白相互作用图谱的研究需要,改造酵母双杂交载体pPC86和pDBleu,并构建中国人肝组织cDNA文库,为肝脏蛋白质组计划的研究奠定基础。方法:设计并合成特定寡核苷酸序列,经过处理形成具有黏性末端的双链DNA片段,插入到pPC86、pDBLeu载体相应的酶切位点处,从而获得改造的新载体。利用改造后的载体、中国人正常肝组织mRNA和Clontech公司SMART文库构建试剂盒构建NpDBLeu-cDNA文库。结果:酶切鉴定和DNA测序证实改造后载体插入位点和序列正确,成功获得新载体NpPC86和NpDBLeu。滴度测试表明,所构建NpDBLeu肝组织cDNA文库容量为1.93×106cfu,转化子重组效率为95.2%,扩增文库达到109cfu·mL-1。结论:利用SMART技术成功构建了中国人肝组织cDNA酵母双杂交文库。 展开更多

关键词 SMART技术 肝组织 载体改造 CDNA文库

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携带鼠源基因的沙门氏菌对肿瘤的预防作用

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作者 李玉华 陈慧 +5 位作者 郭坤元 解咏梅 杜江 张明徽 黄建生 任大明 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期537-541,共5页

探讨减毒鼠伤寒沙门氏菌作为口服基因治疗载体的可行性 .通过电转化法将真核表达载体 pCMVmIL 12、pCMVmGM CSF、EGFPN1导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1中 ,经由胃管饲于BALB/c和C5 7BL/ 6小鼠 .6周后分别用 4T1乳腺癌细胞和Lewis肺癌... 探讨减毒鼠伤寒沙门氏菌作为口服基因治疗载体的可行性 .通过电转化法将真核表达载体 pCMVmIL 12、pCMVmGM CSF、EGFPN1导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1中 ,经由胃管饲于BALB/c和C5 7BL/ 6小鼠 .6周后分别用 4T1乳腺癌细胞和Lewis肺癌细胞进行攻击 .通过流式细胞仪、共聚焦显微镜检测绿色荧光蛋白在小鼠各组织中的表达 ,通过PCR和ELISA的方法检测mIL 12、mGM CSF基因的整合和表达情况 .并考察肿瘤的受抑情况和小鼠的生存期 .结果表明 :在小鼠的肝、脾、小肠、肾脏和肿瘤中可检测到绿色荧光蛋白的表达和相应细胞因子基因的整合 .血清中相应的细胞因子水平较对照组明显升高 (P <0 0 5 ) ,生存期远远超过对照组小鼠 (P <0 0 5 ) .减毒沙门氏菌可作为口服基因治疗载体 ,为肿瘤的预防和治疗提供一条简便、安全。 展开更多

关键词 基因治疗 减毒沙门氏菌 鼠白细胞介绿-12 鼠粒巨系集落刺激因子 肿瘤 预防

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