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330个中国城市P空间下公交复杂网络实证研究 被引量:21
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作者 许晴 祖正虎 +2 位作者 徐致靖 张文斗 郑涛 《交通运输系统工程与信息》 EI CSCD 北大核心 2013年第1期193-198,共6页
目前针对中国城市公交复杂网络的实证研究仍然仅限于数个大城市,而对不同规模城市的公交网络在拓扑结构上是否存在不依赖于人口、社会、经济等外部因素的共性特征,以及城市公交系统演化机制的研究尚不多见.本文实证研究了330个中国城市... 目前针对中国城市公交复杂网络的实证研究仍然仅限于数个大城市,而对不同规模城市的公交网络在拓扑结构上是否存在不依赖于人口、社会、经济等外部因素的共性特征,以及城市公交系统演化机制的研究尚不多见.本文实证研究了330个中国城市P空间下公交复杂网络结构特征,发现度分布普遍呈指数分布,表示公交网络演化机制为随机连接而非择优连接;普遍具有较大的簇系数和较小的平均最短路径,呈现典型的小世界特征;网络同配性在N=1 000处发生相变,N>1 000的网络普遍正相关,反之负相关.C<K>与K呈幂律下降关系,表明各城市公交网络具有等级模块性.本文研究结果可为理解城市公交系统演化规律、交通网络建模研究提供指导和参考. 展开更多
关键词 城市交通 公交复杂网络 P空间 实证研究 结构共性
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不同刈割方式对苜蓿草粉营养价值的影响研究 被引量:25
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作者 王常慧 杨建强 +2 位作者 董宽虎 王永新 赵祥 《中国生态农业学报》 CAS CSCD 2004年第3期140-142,共3页
研究表明压扁刈割的苜蓿显著提高其粗蛋白质和胡萝卜素含量 ,降低酸性洗涤纤维和中性洗涤纤维含量 ,与未压扁刈割相比压扁刈割明显缩短干燥时间 ,减少叶片损失和牧草呼吸作用、光化学作用和酶活动损失 ,提高苜蓿草粉质量。压扁刈割显著... 研究表明压扁刈割的苜蓿显著提高其粗蛋白质和胡萝卜素含量 ,降低酸性洗涤纤维和中性洗涤纤维含量 ,与未压扁刈割相比压扁刈割明显缩短干燥时间 ,减少叶片损失和牧草呼吸作用、光化学作用和酶活动损失 ,提高苜蓿草粉质量。压扁刈割显著优于未压扁刈割苜蓿 。 展开更多
关键词 刈割方式 苜蓿草粉 营养价值 影响因素
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肠毒素性大肠杆菌CS3纤毛抗原在痢疾菌中的表达及其免疫效果研究 被引量:4
3
作者 韩照中 应天翼 +4 位作者 曹勇 芮贤良 张兆山 苏国富 黄翠芬 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第5期718-723,共6页
首先通过体内外重组的方法,构建了福氏2a痢疾菌T32asd基因缺陷的突变体FaD,作为抗原载体菌;同时,构建包含asd基因的表达质粒pYX102,与FaD一起,构成宿主-载体平衡致死系统,用于在没有抗生素条件选择的情况下,稳定表达克隆在表达质粒上的... 首先通过体内外重组的方法,构建了福氏2a痢疾菌T32asd基因缺陷的突变体FaD,作为抗原载体菌;同时,构建包含asd基因的表达质粒pYX102,与FaD一起,构成宿主-载体平衡致死系统,用于在没有抗生素条件选择的情况下,稳定表达克隆在表达质粒上的外源抗原基因.将肠毒素性大肠杆菌的CS3菌毛抗原基因克隆至pYX102,构建成重组表达质粒pYX103,ELISA检测结果证实CS3在痢疾菌中可以很好地表达.免疫小鼠后可诱生相应的抗体,虽然口服免疫和注射免疫产生的CS3抗体效价有一定差别,但对痢疾菌的毒株攻击均可提供较好保护.该结果为细菌性腹泻疫苗的研制提供了候选株. 展开更多
关键词 疫苗 痢疾福氏2a菌 CS3纤毛抗原 表达
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恐怖组织网络的实证研究 被引量:7
4
作者 许晴 祖正虎 郑涛 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期242-244,292,共4页
文章利用复杂网路分析方法,结合数据挖掘相关理论,对包含1998—2004年间世界范围内发生的3 411起恐怖袭击事件的数据库进行数据分析,提取相关信息整理后按照一定规则建立起恐怖组织网络,绘制其网络拓扑结构图并计算其复杂网络特征参数,... 文章利用复杂网路分析方法,结合数据挖掘相关理论,对包含1998—2004年间世界范围内发生的3 411起恐怖袭击事件的数据库进行数据分析,提取相关信息整理后按照一定规则建立起恐怖组织网络,绘制其网络拓扑结构图并计算其复杂网络特征参数,得出其符合小世界网络特征的结论,网络的度分布符合无标度特征,标度指数γ≈2.7。 展开更多
关键词 复杂网络 恐怖组织 度分布
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国外反生物恐怖演习对我国的启示 被引量:4
5
作者 田德桥 郑涛 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1201-1204,共4页
目的介绍国外重要反生物恐怖演习,分析演习所取得的经验教训,为我国的生物恐怖应对及开展反生物恐怖演习服务。方法搜集整理相关网站及论著中关于反生物恐怖演习的介绍及报告,从这些演习中找到一些规律。结果等一些发达国家非常重视反... 目的介绍国外重要反生物恐怖演习,分析演习所取得的经验教训,为我国的生物恐怖应对及开展反生物恐怖演习服务。方法搜集整理相关网站及论著中关于反生物恐怖演习的介绍及报告,从这些演习中找到一些规律。结果等一些发达国家非常重视反生物恐怖演习工作,通过演习可以发现存在的一些问题以得到改进。结论我国有必要开展相应的反生物恐怖演习,在演习中需要重视及检验领导层的决策,部门间的合作,新成立机构的作用,现存的一些机制需要改进的方面,国际合作,通讯交流,疾病预防控制措施,医疗机构的应对,疫苗及药品的储备等。 展开更多
关键词 生物恐怖 应对 演习
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人类接触行为实证研究综述 被引量:1
6
作者 许晴 祖正虎 +2 位作者 徐致靖 张文斗 郑涛 《复杂系统与复杂性科学》 EI CSCD 北大核心 2013年第1期1-7,共7页
介绍了当前已有的针对人类接触行为模式的实证研究,总结各研究中一致发现的普适规律,如人类接触行为具有高度同配性、特定社会场合下的接触网络具有典型的小世界特性以及接触时间分布呈幂律特性等,这些规律的发现可以指导传染病动力学... 介绍了当前已有的针对人类接触行为模式的实证研究,总结各研究中一致发现的普适规律,如人类接触行为具有高度同配性、特定社会场合下的接触网络具有典型的小世界特性以及接触时间分布呈幂律特性等,这些规律的发现可以指导传染病动力学建模、复杂网络、流行病学等领域的相关研究。 展开更多
关键词 人类动力学 传染病动力学建模 接触行为 实证研究
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美国生物恐怖应对多级实验室网络对我国的启示 被引量:1
7
作者 田德桥 郑涛 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期113-114,共2页
关键词 生物恐怖 实验室应对网络 分析
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一种新型血小板生成素(TPO)模拟肽的合成及功能研究 被引量:2
8
作者 李朝 程度胜 +2 位作者 周艳荣 陈添弥 黄培堂 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期128-131,共4页
为了获得具有与血小板生成素相似的生物学活性且没有其副作用的血小板生成素模拟肽 ,对一种从肽库中筛选到的血小板生成素模拟肽P1进行改构 ,运用多肽化学合成方法制备了模拟肽P2 ,然后进行P2与葡聚糖偶联以及自身氧化形成二聚体 ,利用... 为了获得具有与血小板生成素相似的生物学活性且没有其副作用的血小板生成素模拟肽 ,对一种从肽库中筛选到的血小板生成素模拟肽P1进行改构 ,运用多肽化学合成方法制备了模拟肽P2 ,然后进行P2与葡聚糖偶联以及自身氧化形成二聚体 ,利用MTT法测定其体外活性。结果表明 :所获得的血小板生成素模拟肽P2的EC5 0值较P1提高了 70 0倍 ,达到了 2 0nmol/L ,P2与葡聚糖偶联产物D P2以及P2的二聚体形式 (P2 ) 2 的EC5 0值则分别为 0 .35nmol/L和 0 .14nmol/L。将模拟肽给小鼠皮下注射后检测其外周血指标 ,测定结果证实该肽可以显著提高血循环中血小板数量 ,且不影响其他血液学指标。结论 展开更多
关键词 生物学活性 副作用 血小板生成素模拟肽 二聚体 合成 出血性疾病
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UHRF1在人乳腺癌细胞中调控基因差异表达的鉴定及分析
9
作者 宫春雪 董钦才 +1 位作者 刘萱 曹诚 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期12-19,共8页
UHRF1(ubiquitin-like with PHD and Ring finger domains 1)是一种维持DNA甲基化修饰的表观遗传调控因子,在胚胎发育和肿瘤发生发展及预后中发挥重要作用。研究鉴定了受UHRF1调控的差异表达基因,并对基因参与的细胞功能、代谢途径和疾... UHRF1(ubiquitin-like with PHD and Ring finger domains 1)是一种维持DNA甲基化修饰的表观遗传调控因子,在胚胎发育和肿瘤发生发展及预后中发挥重要作用。研究鉴定了受UHRF1调控的差异表达基因,并对基因参与的细胞功能、代谢途径和疾病相关通路进行分析。提取UHRF1敲低细胞(MCF-7/shRNA-UHRF1)和对照组细胞(MCF-7/shRNA-Scramble)的RNA进行RNA-Seq测序,利用DESeq2软件对差异表达基因进行鉴定,并通过qRTPCR对部分基因进行验证。利用Gene ontology(GO)功能聚类、Kyoto Encylopedia of Genes and Genomes(KEGG)代谢通路富集分析、Disease ontology(DO)疾病聚类分析等方法分析差异基因的潜在功能。研究共鉴定出2926个受UHRF1调控的差异表达基因,与对照组相比,shRNA-UHRF1细胞中有1453个基因下调表达,1473个基因上调表达。GO和KEGG分析显示,差异表达基因主要参与细胞代谢、免疫调节、信号传导、心血管疾病和肿瘤发生等。DO功能富集分析显示这些基因参与癌症和神经性疾病。研究结果表明,表观遗传调控因子UHRF1介导的DNA甲基化可在转录水平上调控基因的差异表达,为UHRF1参与调控相关信号通路提供数据支持。 展开更多
关键词 UHRF1 MCF-7细胞 表观遗传调控因子 RNA-SEQ 差异表达基因
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幽门螺杆菌重组腺病毒双价疫苗的构建及免疫学评价 被引量:4
10
作者 刘秀丽 刘纯杰 +3 位作者 陶好霞 李淑琴 李勣 张兆山 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第8期716-721,共6页
幽门螺杆菌 (Hp)是导致胃炎、消化道溃疡和胃癌的的主要病原菌 .利用基因重组技术 ,成功将Hp的ureB和hspA基因融合 .将ureB hspA融合基因成功构建到腺病毒载体上 .检测结果表明 ,该重组腺病毒具有侵染真核细胞能力 ,且能在真核细胞中表... 幽门螺杆菌 (Hp)是导致胃炎、消化道溃疡和胃癌的的主要病原菌 .利用基因重组技术 ,成功将Hp的ureB和hspA基因融合 .将ureB hspA融合基因成功构建到腺病毒载体上 .检测结果表明 ,该重组腺病毒具有侵染真核细胞能力 ,且能在真核细胞中表达目标抗原 .以血清中IgG和新鲜粪便中sIgA ,评价其免疫效果 ,结果显示 。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 重组腺病毒 尿素酶B 热休克蛋白A 体液免疫 黏膜免疫反应
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外源性rhEGF对放射复合创伤伤口愈合的促进作用 被引量:7
11
作者 谷庆阳 崔彩彬 +5 位作者 高亚兵 马清钧 李永兰 夏国伟 王春杰 王德文 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期103-105,共3页
采用宏观、光镜、免疫组化 (显示Ⅲ型胶原 )和原位杂交 (检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA)等方法 ,动态观察外用rhEGF对大鼠放射复合创伤伤口愈合病变过程的影响。结果表明 :①rhEGF可促进放射复合伤口内肉芽组织的形成。伤后 7天见rhEGF用药创面... 采用宏观、光镜、免疫组化 (显示Ⅲ型胶原 )和原位杂交 (检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA)等方法 ,动态观察外用rhEGF对大鼠放射复合创伤伤口愈合病变过程的影响。结果表明 :①rhEGF可促进放射复合伤口内肉芽组织的形成。伤后 7天见rhEGF用药创面肉芽组织含量较对照创面明显增多。②rhEGF可促进血管生成。伤后 7天见EGF用药创面肉芽组织中有较对照创面明显增多的新生毛细血管网。③应用rhEGF可间接增加Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和分泌。④rhEGF可促进表皮重建 ,使用药创面较对照创面提前约 2天愈合。 展开更多
关键词 伤口愈合 胶原 放射复合创伤 RHEGF
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二硫键稳定的抗肝癌人源化scFv-hTNFα突变体融合基因在大肠杆菌中表达 被引量:5
12
作者 孙志伟 俞炜源 +3 位作者 孙岩 吴涛 林建波 刘彦仿 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期221-224,共4页
目的 提高抗肝癌抗体靶向人肿瘤坏死因子(hscFv2 5-hTNFα)的稳定性和杀伤活性 ,并探讨该新型靶向细胞因子在大肠杆菌中的可溶性表达。方法 以引物PCR法和重叠延伸PCR法 ,对人源化抗肝癌hscFv2 5及hTNFα基因进行定点突变 ,构建重组... 目的 提高抗肝癌抗体靶向人肿瘤坏死因子(hscFv2 5-hTNFα)的稳定性和杀伤活性 ,并探讨该新型靶向细胞因子在大肠杆菌中的可溶性表达。方法 以引物PCR法和重叠延伸PCR法 ,对人源化抗肝癌hscFv2 5及hTNFα基因进行定点突变 ,构建重组表达载体 pGEX -hFvT ,并以IPTG在大肠杆菌中诱导表达。用免疫组化染色和MTT比色法 ,分别检测重组蛋白的抗体和hTNFα突变体的双重活性。结果 重组基因在大肠杆菌中获得高效可溶性表达。表达产物具有抗体和hTNFα突变体的双重活性 ,重组蛋白的稳定性得到大幅度提高 ,抗体活性于 4℃放置 3个月活性无明显下降 ,抗肿瘤活性较天然hTNFα高 4倍。结论 重组基因在大肠杆菌中获得了高效功能性表达 ;重组蛋白稳定性及抗肿瘤活性得到大幅度提高 。 展开更多
关键词 肝细胞肝癌 单链抗体 TNFΑ 突变体 靶向细胞因子 可溶性表达
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细胞自噬与肿瘤 被引量:19
13
作者 李玲 徐小洁 叶棋浓 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期995-1001,共7页
自噬是广泛存在于真核细胞内的一种细胞分解自身构成成分的生命现象.细胞内的双层膜结构与溶酶体结合后其内包裹的受损、变形或衰老细胞器蛋白质等被水解酶类降解.细胞自噬具有多种生理功能,生命体借此维持蛋白质代谢平衡及细胞环境稳定... 自噬是广泛存在于真核细胞内的一种细胞分解自身构成成分的生命现象.细胞内的双层膜结构与溶酶体结合后其内包裹的受损、变形或衰老细胞器蛋白质等被水解酶类降解.细胞自噬具有多种生理功能,生命体借此维持蛋白质代谢平衡及细胞环境稳定,这一过程在细胞清除废物、结构重建、生长发育调节中发挥重要作用.细胞自噬也与肿瘤的存活和死亡等过程密切相关.近年来对细胞自噬的研究有了较大的深入,本文主要对自噬体的形态和发生过程及其分子机制、信号调节通路、自噬研究的检测方法,以及自噬与细胞凋亡和肿瘤发生的关系等方面进行概述,以期较全面地了解细胞自噬作用和最新研究动态. 展开更多
关键词 细胞自噬 信号调控 细胞凋亡 肿瘤
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CTB/CS3融合蛋白与GM1结合能力和免疫原性的分析 被引量:3
14
作者 米凯霞 李勣 +1 位作者 张兆山 方荣祥 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第2期278-284,共7页
免疫霍乱毒素B亚单位 (CTB)或肠毒素大肠杆菌 (ETEC)定居因子CS3可使人体对ETEC的侵染有保护作用 .为探索研制ETEC双组分亚单位疫苗的可行性 ,利用大肠杆菌诱导表达系统表达了CTB与CS3的融合蛋白 (CTB/CS3) .蛋白质印迹结果表明 ,诱导... 免疫霍乱毒素B亚单位 (CTB)或肠毒素大肠杆菌 (ETEC)定居因子CS3可使人体对ETEC的侵染有保护作用 .为探索研制ETEC双组分亚单位疫苗的可行性 ,利用大肠杆菌诱导表达系统表达了CTB与CS3的融合蛋白 (CTB/CS3) .蛋白质印迹结果表明 ,诱导表达的 2 9ku蛋白具有CTB和CS3蛋白双重抗原性 .经Ni NTA亲和层析纯化获得重组蛋白CTB/CS3,复性的重组蛋白可以部分形成五聚体并保留了与神经节苷脂GM1的结合能力 .动物实验表明 ,融合蛋白CTB/CS3具有CTB和CS3蛋白的双重免疫原性 ,同时 。 展开更多
关键词 CTB/CS3融合蛋白 GML 结合能力 免疫原性 免疫霍乱毒素B亚单位 肠毒素大肠杆菌 疫苗 婴幼儿急性腹泻
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人肝梭曼水解酶的微量比色测定及性质 被引量:6
15
作者 王青定 孙曼霁 +1 位作者 黄培堂 黄翠芬 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期245-249,共5页
建立了人肝二异丙基氟磷酸酯酶(DFPase,EC.3.1.8.2.)的微量比色测定法并探讨了此酶的部分生化性质。梭曼在过硼酸钠及丙酮存在时,可与盐酸联苯胺反应生成橙黄色偶氮化合物,橙黄色产物的量与梭曼量在10-200... 建立了人肝二异丙基氟磷酸酯酶(DFPase,EC.3.1.8.2.)的微量比色测定法并探讨了此酶的部分生化性质。梭曼在过硼酸钠及丙酮存在时,可与盐酸联苯胺反应生成橙黄色偶氮化合物,橙黄色产物的量与梭曼量在10-200nmol范围内呈正相关。本文将此呈色反应与酶反应相结合,通过测定剩余梭曼的量来测定酶活力,并探讨了测定的最适条件。测定的变异系数为5%,测得人肝DFPase的Km值为3mmol·L-1,最适pH范围为7.0-7.2,酶反应时间为25min,在-20℃保存7个月,或在37℃保温18h活性无明显丧失,反复冻融3次活性不变,但经冻融6次时活性下降1/5.人肝DFPase活性主要存在于细胞的可溶性部分。 展开更多
关键词 比色法 梭曼 二异丙基 氟磷酸酯 水解酶
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幽门螺杆菌尿素酶B基因的克隆与高效表达 被引量:3
16
作者 刘纯杰 张兆山 +3 位作者 陶好霞 李淑琴 周围 黄翠芬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期464-465,共2页
目的克隆并表达幽门螺杆菌尿素酶B基因。方法提取幽门螺杆菌染色体DNA用PCR方法扩增尿素酶B基因。将其克隆至表达载体pQE30,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。结果分离得到了1.7kb的ureB基因片段,并在大肠杆菌中实现了该基因的高效表达。... 目的克隆并表达幽门螺杆菌尿素酶B基因。方法提取幽门螺杆菌染色体DNA用PCR方法扩增尿素酶B基因。将其克隆至表达载体pQE30,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。结果分离得到了1.7kb的ureB基因片段,并在大肠杆菌中实现了该基因的高效表达。在37℃诱导表达4h后,表达产物约占细菌总蛋白的34.0%。表达以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在,其中主要是包涵体的形式,目的蛋白占不溶性蛋白的55.8%。结论幽门螺杆菌ureB基因的克隆与表达为Hp疫苗的研制打下了基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶B 基因克隆 高效表达
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不同剂量rhGM-CSF cDNA直接注射小鼠骨骼肌的表达 被引量:1
17
作者 叶棋浓 王恒梁 +3 位作者 苏国富 张述 鲍云华 赵瑞华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1996年第3期226-229,共4页
将表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的重组真核表达质粒(pCG1),以30μg和60μg的剂量分别直接注射小鼠骨骼肌,观察不同剂量的质粒(pCG1)在小鼠体内分泌表达rhGM-CSF的情况。ELISA检测表明,注射60μg质粒DNA的小鼠血液中测得... 将表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的重组真核表达质粒(pCG1),以30μg和60μg的剂量分别直接注射小鼠骨骼肌,观察不同剂量的质粒(pCG1)在小鼠体内分泌表达rhGM-CSF的情况。ELISA检测表明,注射60μg质粒DNA的小鼠血液中测得的rhGM-CSF含量与对照组相比有显著差别,而注射30μg质粒DNA的小鼠血液中rhGM-CSF含量与对照组相比无显著差别。以60μg质粒DNA直接注射骨骼肌后第15~20天左右表达量最高,平均约91ng/ml。生物学活性检测结果显示,注射60μg质粒DNA的小鼠血液能维持GM-CSF依赖的TF-1细胞的生长。这提示用质粒DNA直接注射小鼠骨骼肌时,质粒DNA必须达到足够的量。 展开更多
关键词 RHGM-CSF CDNA 直接注射 小鼠 骨骼肌 表达 基因治疗 基困转染
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肠毒素大肠杆菌定居因子CS6抗原基因在痢疾杆菌中的表达 被引量:1
18
作者 罗刚 李淑琴 +4 位作者 王令春 赵莹 郑继平 段海清 张兆山 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第2期154-158,共5页
通过体外重组的方法 ,将asd基因插入重组表达质粒 ,使抗生素抗性失活 ,并与弗氏志贺氏菌FWL0 1构成宿主 载体平衡致死系统 .通过蛋白质印迹结果表明 ,在没有抗生素条件选择的情况下 ,可稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CS6 .重组菌... 通过体外重组的方法 ,将asd基因插入重组表达质粒 ,使抗生素抗性失活 ,并与弗氏志贺氏菌FWL0 1构成宿主 载体平衡致死系统 .通过蛋白质印迹结果表明 ,在没有抗生素条件选择的情况下 ,可稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CS6 .重组菌通过口服和鼻饲免疫小鼠后 ,可以诱生CS6血清IgG抗体 ;同时可以检测到分泌型IgA产生 ,表明重组菌可以诱导相应的黏膜免疫反应 . 展开更多
关键词 肠毒素大肠杆菌 痢疾杆菌 宿主-载体平衡致死系统 活载体疫苗 基因表达 CS6抗原基因
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人铜锌超氧化物歧化酶真核表达载体的构建及在酿酒酵母中的分泌表达 被引量:2
19
作者 李雪莲 马一君 +3 位作者 武峰 史兆兴 王恒梁 黄留玉 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第1期127-130,共4页
目的:探讨酿酒酵母中人铜锌超氧化物歧化酶(hCu/Zn-SOD)的分泌表达。方法:采用RT-PCR技术从人胃总RNA中分离扩增hCu/Zn-SOD的cDNA,与酿酒酵母交配因子(MF)α信号肽编码序列融合,将融合基因插入大肠杆菌-酵母细胞穿梭型质粒pYES2.0,构建... 目的:探讨酿酒酵母中人铜锌超氧化物歧化酶(hCu/Zn-SOD)的分泌表达。方法:采用RT-PCR技术从人胃总RNA中分离扩增hCu/Zn-SOD的cDNA,与酿酒酵母交配因子(MF)α信号肽编码序列融合,将融合基因插入大肠杆菌-酵母细胞穿梭型质粒pYES2.0,构建真核分泌表达质粒pYES-MS,将其转化入酿酒酵母的缺陷型菌株INVSc1中,用半乳糖进行诱导表达,采用SDS-PAGE、蛋白质免疫印迹分析及电泳谱活性染色测定表达产物分泌情况及其活性。结果:该工程菌可高效表达一相对分子质量约为21000的蛋白并与兔抗人Cu/Zn-SOD多抗有特异的免疫反应,同时在培养基上清中检测到此表达蛋白的分泌,具有特异性SOD酶活性。结论:作者成功构建了pY-ES-MS/INV菌株,该菌株大量表达有天然酶活性的hCu/Zn-SOD,并有部分hCu/Zn-SOD分泌到酵母细胞外,为开发hCu/Zn-SOD的基因工程产品奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 人铜锌超氧化物歧化酶 酿酒酵母 分泌表达
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人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体FrGGI的构建、表达及特性分析 被引量:2
20
作者 刘士辉 黄培堂 +2 位作者 徐秀英 朱恒奇 黄翠芬 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第6期625-630,共6页
为了获得半衰期延长,特异活性提高及具有PAL-1抗性的新型t-PA溶栓剂,利用基因重组及定位突变技术构建了t-PA的K1、K2区糖基化位点消除,PAI-1结合位点缺失,F与E区连接序列His44~Ser50置换为纤粘... 为了获得半衰期延长,特异活性提高及具有PAL-1抗性的新型t-PA溶栓剂,利用基因重组及定位突变技术构建了t-PA的K1、K2区糖基化位点消除,PAI-1结合位点缺失,F与E区连接序列His44~Ser50置换为纤粘蛋白Ⅰ型F区间连接序列GluSerLysProGluAlaGluGlu的t-PA组合突变体FrGGI,并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达。对表达产物的生物学特性分析表明,FrGGI在大鼠血浆中的半衰期延长了15倍,并获得了PAI-1抗性,是一株很有希望的新型溶栓剂候选株。 展开更多
关键词 组织型 纤溶酶原激活剂 突变体 T-PA 溶栓药
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