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北京大学人类疾病基因研究中心“九八五”计划实施三年成果总结
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《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期209-209,共1页
关键词 北京大学人类疾病基因研究中心 “九八五”计划 凋亡促进分子 医学科研
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人类功能基因组研究与开发的进展及对策建议 被引量:2
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作者 韩文玲 马大龙 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期274-276,共3页
关键词 基因组 生物技术
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我国人类功能基因研究进展 被引量:3
3
作者 马大龙 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期337-339,共3页
关键词 功能基因 研究进展 中国 分子克隆 序列分析
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细胞筛选平台在人类功能基因组研究中的应用 被引量:1
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作者 武春晓 石太平 马大龙 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1003-1010,共8页
人类基因组全序列的精细图已完成,当前生命科学面临的重要任务就是如何将基因组序列信息转化为基因的功能信息,了解生命活动的分子机理,改善人类健康,为生物技术发展提供动力.在一系列功能基因组研究新技术中,高通量(high-throughput)... 人类基因组全序列的精细图已完成,当前生命科学面临的重要任务就是如何将基因组序列信息转化为基因的功能信息,了解生命活动的分子机理,改善人类健康,为生物技术发展提供动力.在一系列功能基因组研究新技术中,高通量(high-throughput)和高内涵(high-content)的细胞筛选技术平台已经显示出巨大潜力,发挥着越来越重要的作用.通过在体外培养的哺乳动物细胞中基因过表达或抑制基因表达,分析所产生信号传导通路和/或细胞表型改变,可以直接发现基因功能.近年来一些技术上的进展,使细胞筛选平台具有微量、自动、高效、高通量,以及可以系统研究的特点,已经成为功能基因组研究的核心方法之一.近2 ̄3年来已经出现一批成功应用细胞筛选平台进行大规模功能基因组研究的报道.我国在这一领域的研究也开始起步,将对我国生物技术的源头创新研究产生深远的影响. 展开更多
关键词 功能基因组 高通量 高内涵 细胞筛选技术
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人类新基因C17orf32的电子克隆和编码区序列RT-PCR验证 被引量:22
5
作者 张德礼 丁培国 +2 位作者 凌伦奖 陈润生 马大龙 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期543-549,共7页
利用生物信息学与实验验证的技术路线 ,成功地克隆了人类新基因C17orf32的cDNA (GenBank登记号 :AY0 74 90 7和TPA :BK0 0 0 2 6 0 ) ,发现C17orf32的完整开放阅读框架 (ORF ,31~ 6 5 7bp)cDNA (6 2 7bp)与人类假定基因LOC12 4 919ORF ... 利用生物信息学与实验验证的技术路线 ,成功地克隆了人类新基因C17orf32的cDNA (GenBank登记号 :AY0 74 90 7和TPA :BK0 0 0 2 6 0 ) ,发现C17orf32的完整开放阅读框架 (ORF ,31~ 6 5 7bp)cDNA (6 2 7bp)与人类假定基因LOC12 4 919ORF (2 5~ 80 7bp)的 2 5~ 6 5 1位只有一个碱基不同 .经RT PCR验证并cDNA测序、人类表达序列标签 (EST)数据库的BLAST检索和基因组成规律分析三方面的结果 ,均支持C17orf32的序列 ,而不支持LOC12 4 919的编码序列 .C17orf32基因组序列全长 4 6 10kb ,含有 6个外显子和 5个内含子 ,cDNA序列全长 16 79bp ,ORF横跨全部 6个外显子 .该基因ORF翻译起始处符合Kozak规则 ,ORF起始码上游同一相位有终止码 ,ORF后有 2个加尾信号和PolyA尾 .C17orf32基因的成功克隆表明 ,NCBIGENOMEAnnotationProject在 2 0 0 1年 12月预测的人类假定蛋白XP- 0 5 886 5编码基因LOC12 4 919的模式参考序列XM- 0 5 886 5中存在偏差 ,即在C17orf32基因cDNA的 4 0 6与 4 0 7位碱基之间错误插入一个碱基G ,从而导致在插入位点后 ,ORF编码 12 5位氨基酸以后蛋白质序列的改变 ,出现 2 6 0个氨基酸的多肽 .因此 ,应慎重看待计算机注释的人类基因组编码序列 . 展开更多
关键词 人类新基因 C17orf32 电子克隆 编码区序列 RT-PCR 验证
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Chitosan-DNA介导关节基因转移的体外研究 被引量:5
6
作者 张晓玲 史须 +2 位作者 于长隆 傅欣 张继英 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期240-243,233,I005,I006,I007,共8页
目的 :探索体外Chitosan对关节软骨细胞、滑膜细胞的转染。方法 :分离培养兔正常滑膜细胞、软骨细胞 ,使用荧光质粒 pEGFP -C3作为报道基因 ,制备Chitosan -DNA超微颗粒转染兔正常软骨细胞、滑膜细胞 ,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表... 目的 :探索体外Chitosan对关节软骨细胞、滑膜细胞的转染。方法 :分离培养兔正常滑膜细胞、软骨细胞 ,使用荧光质粒 pEGFP -C3作为报道基因 ,制备Chitosan -DNA超微颗粒转染兔正常软骨细胞、滑膜细胞 ,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。结果 :Chitosan能将DNA带入胞内 ,该DNA超微颗粒随时间的延长可缓慢进入胞内 ,其包被的DNA也可以被缓慢释放 ,且对软骨细胞的转染能力强。结论 :Chitosan在体外可介导关节软骨细胞、滑膜细胞基因转移 ,为今后关节疾病非病毒基因转移的研究提供实验依据。 展开更多
关键词 CHITOSAN pEGFP-C3 滑膜细胞 软骨细胞 基因转染 基因治疗 运动医学 非病毒载体
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新细胞因子及细胞凋亡基因的发现与功能研究 被引量:57
7
作者 马大龙 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期488-492,共5页
在人类基因组完成工作框架图以后 ,人类功能基因组学成为最重要的任务之一。我们目前正在重点研究编码细胞因子和凋亡相关分子的人类功能基因。本综述介绍其中的 2个首先由我们实验室克隆的分子 ,即趋化素样因子 1(CKLF1)和程序化细胞... 在人类基因组完成工作框架图以后 ,人类功能基因组学成为最重要的任务之一。我们目前正在重点研究编码细胞因子和凋亡相关分子的人类功能基因。本综述介绍其中的 2个首先由我们实验室克隆的分子 ,即趋化素样因子 1(CKLF1)和程序化细胞死亡分子 5 (PDCD5 ,过去命名为TFAR19)。CKLF1是属于一个新的基因超家族的成员 ,具有体内外对不同白细胞的趋化活性、刺激骨骼肌增殖活性和刺激骨髓细胞增殖活性。在临床应用上 ,重组CKLF1蛋白质有可能用于肌萎缩的治疗 ,CKLF1抑制剂有可能用于变态反应和自身免疫病的治疗。PDCD5是凋亡的正调节分子 ,能够结合胱天蛋白酶 3,并在体外延长其半衰期。较多证据表明 ,PDCD5在肿瘤组织的表达低于正常组织。PDCD5有可能成为肿瘤。 展开更多
关键词 细胞因子 细胞凋亡 CKLF1 PDCD5 TFAR19
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促细胞增殖新基因TOX的功能研究
8
作者 邓唯唯 李静 +4 位作者 高鹏 郝东霞 张璐 石太平 王应 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期369-374,共6页
利用GenBank中的数据,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从人的cDNA文库中克隆得到功能基因TOX(thymocyte selection-associated high mobility group box),运用生物信息学分析其结构特性,并通过逆转录PCR(reverse tra... 利用GenBank中的数据,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从人的cDNA文库中克隆得到功能基因TOX(thymocyte selection-associated high mobility group box),运用生物信息学分析其结构特性,并通过逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)分析TOX在细胞系中的表达;利用荧光显微镜观察其亚细胞定位情况;使用细胞生长曲线实验和流式细胞术分析TOX对细胞增殖及细胞周期的影响.结果表明:TOX基因定位于人8号染色体q12.1上,全长4 131bp,编码526个氨基酸,该蛋白质分子质量约为57ku,含有9个外显子和8个内含子,其编码蛋白为高迁移率蛋白家族成员,能参与基因调控等生理过程;TOX基因在白血病细胞系Jurkat和Raji中高表达,并定位于细胞核中;对细胞生长曲线绘制及细胞周期分析表明,TOX能够使细胞生长速度加快,且S期细胞比例明显上升.说明TOX参与了细胞增殖调控,有可能研究开发为药物靶标或疾病标志物. 展开更多
关键词 TOX基因 细胞增殖 细胞周期 药物靶标 疾病标志物
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NF-κB_3结合位点在人TNF-α基因转录调节作用中的研究
9
作者 史须 李卓娅 +3 位作者 龚非力 冯纬 徐勇 熊平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期839-843,共5页
目的 :探讨TNF α启动子中 3个κB位点在调节基因转录中的作用及其与核蛋白作用的亲和力关系。方法 :用含不同调节区域的重组报告基因进行HL 6 0细胞的基因转染 ,检测LPS刺激前后及κB3 反义寡核苷酸封闭后的报告基因表达水平 ;提取LPS... 目的 :探讨TNF α启动子中 3个κB位点在调节基因转录中的作用及其与核蛋白作用的亲和力关系。方法 :用含不同调节区域的重组报告基因进行HL 6 0细胞的基因转染 ,检测LPS刺激前后及κB3 反义寡核苷酸封闭后的报告基因表达水平 ;提取LPS刺激 6h的HL 6 0的细胞核蛋白 ,用凝胶迁移率改变实验及竞争结合实验比较NF κB与TNF α的 3个NF κB位点的亲和力。结果 :尽管TNF α基因中 3个κB位点都参与该基因的诱导和非诱导性转录调节 ,但κB3 位点的作用更为重要 ;3个κB位点能同LPS刺激和非刺激的HL 6 0细胞核蛋白发生特异性结合 ,但LPS刺激的蛋白 DNA复合物电泳条带明显增粗 ,尤其κB3 位点出现 2条明显的特异性条带 ;3个κB位点与LPS诱导后HL 6 0核蛋白的亲和力强弱顺序依次为 :κB2 >κB1 >κB3。结论 :TNF α基因的 3个κB位点都能与NF κB结合 ,从而参与调节HL 6 0细胞TNF α组成性表达和LPS诱导性表达。尽管κB3 位点在对LPS刺激的反应性中发挥的作用最大 ,但这种效应与其同核蛋白亲和力的大小无关。 展开更多
关键词 核因子-ΚB TNF-α启动子 脂多糖 亲和力
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人类新基因CTRP4的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:6
10
作者 谭伟峰 王兰兰 +4 位作者 李琦 罗阳 那达翔 马壮 王露 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期614-617,622,共5页
目的:构建新基因CTRP4的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化rhCTRP4-his蛋白,制备和鉴定小鼠抗人CTRP4多克隆抗体,为进一步研究人类新基因CTRP4的生物学功能奠定基础。方法:从pcDNA3.1-myc/his(-)B-hCTRP4重组载体中通过PCR的方法扩增... 目的:构建新基因CTRP4的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化rhCTRP4-his蛋白,制备和鉴定小鼠抗人CTRP4多克隆抗体,为进一步研究人类新基因CTRP4的生物学功能奠定基础。方法:从pcDNA3.1-myc/his(-)B-hCTRP4重组载体中通过PCR的方法扩增CTRP4基因ORF中不含信号肽的目的基因片段,将得到的片段双酶切定向插入pET-32a中,构建原核表达载体pET-32a-hCTRP4。构建好的质粒在E.coli BL21(DE3)中进行诱导、表达,通过镍亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度。将pcDNA3.1-myc/his(-)B-hCTRP4重组质粒和纯化好的融合蛋白依次免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。并对抗体进行纯化、效价测定以及特异性鉴定。结果:DNA测序证实构建的pET-32a-hCTRP4重组表达载体含有hCTRP4编码序列,其序列比对分析与GenBank中公布序列一致,质粒在E.coli中表达相对分子质量(Mr)为35 000的目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析纯度为95%以上。ELISA法检测抗体效价为1∶20 000,Westernblot、免疫荧光细胞化学和免疫组化分析显示抗体能特异性识别重组hCTRP4以及天然状态hCTRP4蛋白。结论:成功构建了hCTRP4蛋白的原核表达载体,并获得较高纯度的融合蛋白,制备了高效价、高特异性的多克隆抗体。 展开更多
关键词 CTRP4 原核表达 基因免疫 多克隆抗体
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Ig启动子有效启动肿瘤抑制基因的表达研究 被引量:1
11
作者 何峙峤 毋丽娜 +2 位作者 朱晓辉 马腾 邱晓彦 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期136-141,共6页
免疫球蛋白(Ig)启动子在多种上皮性肿瘤细胞具有高启动活性。采用PCR方法获得了Ig重链VH6-1启动子,用该启动子DNA序列替换真核表达载体(PDC316)中巨细胞白血病病毒启动子(CMV)序列,构建了Ig启动子/人增殖抑制基因(hHSG)/PDC316表达载体... 免疫球蛋白(Ig)启动子在多种上皮性肿瘤细胞具有高启动活性。采用PCR方法获得了Ig重链VH6-1启动子,用该启动子DNA序列替换真核表达载体(PDC316)中巨细胞白血病病毒启动子(CMV)序列,构建了Ig启动子/人增殖抑制基因(hHSG)/PDC316表达载体。结果显示,与CMV启动子相比,Ig启动子能够更有效地启动hHSG基因的表达,并显示其生长抑制作用和诱导凋亡作用。提示Ig启动子可作为肿瘤靶向治疗载体中的启动子,在肿瘤基因治疗研究中具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 肿瘤基因治疗 免疫球蛋白启动子 表达载体
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C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)参与免疫及相关疾病的研究进展 被引量:9
12
作者 李新健 王露 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1428-1432,共5页
新型脂肪因子C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)属于CTRP家族成员,在人类和小鼠多种组织中广泛表达。与其他CTRP一样,CTRP6由N端信号肽、短的可变区、胶原结构域和C端C1q球状结构域四部分组成,其结构在进化过程中高度保守。CTRP6参与多... 新型脂肪因子C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)属于CTRP家族成员,在人类和小鼠多种组织中广泛表达。与其他CTRP一样,CTRP6由N端信号肽、短的可变区、胶原结构域和C端C1q球状结构域四部分组成,其结构在进化过程中高度保守。CTRP6参与多种炎症过程,在炎症调节、脂肪组织炎症、类风湿性关节炎(RA)、炎症性肾损伤、血管内皮炎症和肿瘤发生发展过程中起重要作用。我们主要对CTRP6的结构、表达分布及其参与免疫及相关疾病的研究进展进行总结。 展开更多
关键词 C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6) 炎症 综述
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人增殖抑制基因(HSG)对肿瘤细胞系化疗敏感性的作用 被引量:15
13
作者 王萍 毋丽娜 +4 位作者 蒋春笋 李志新 张颖妹 陈光慧 邱晓彦 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期117-120,共4页
目的:将人增殖抑制基因 (hHSG)用电子穿孔的转基因方式转染到体外培养的人肿瘤细胞系中,观察hHSG基因对内源性hHSG表达水平不同的肿瘤细胞系的化疗敏感性的影响。方法:首先用免疫组化方法检测不同组织来源的肿瘤细胞系中hHSG的表达水平... 目的:将人增殖抑制基因 (hHSG)用电子穿孔的转基因方式转染到体外培养的人肿瘤细胞系中,观察hHSG基因对内源性hHSG表达水平不同的肿瘤细胞系的化疗敏感性的影响。方法:首先用免疫组化方法检测不同组织来源的肿瘤细胞系中hHSG的表达水平,然后选择内源性hHSG表达水平较低的肺腺癌 (A549 )和内源性hHSG表达水平较高的宫颈癌(HeLaS3)细胞系,用电穿孔方法转染含有hHSG的真核表达载体 (pEGFP hHSG) 24h后,加入放线菌酮(CHX),采用细胞计数、MTT法观察hHSG对肿瘤细胞增殖抑制作用及对CHX的化疗敏感性的影响。结果:hHSG在不同组织来源的肿瘤细胞系都有不同程度的表达, pEGFP hHSG转染到两种内源性hHSG表达水平不同的肿瘤细胞系后,这两种肿瘤细胞的生长增殖都明显受到抑制,同时外源性的hHSG也增强了这些肿瘤细胞系对CHX的敏感性。结论:外源性hHSG可不依赖其内源性表达水平而抑制肿瘤细胞的增殖,与CHX并用可增强肿瘤细胞对CHX的敏感性,具有协同作用。 展开更多
关键词 化疗敏感性 抑制基因 人肿瘤细胞系 免疫组化方法 真核表达载体 增殖抑制作用 抑制肿瘤细胞 组织来源 内源性 CHX 体外培养 基因方式 放线菌酮 细胞计数 MTT法 不同程度 生长增殖 协同作用 外源性 水平 转染 G基因 HHS
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程序化死亡基因5(PDCD5)在骨关节炎软骨中的表达及意义 被引量:13
14
作者 程爱新 王莺 +2 位作者 马大龙 周昊嵬 娄思权 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期481-484,共4页
目的 :研究程序化死亡基因 5 (PDCD5 )在正常及骨关节炎关节软骨中的表达规律 ,探讨PDCD5在骨关节炎发病中的作用。方法 :取 2 0例骨关节炎及 10例股骨颈骨折行关节置换术时切除的关节软骨 ,分离软骨细胞 ,留取组织块制作石蜡切片。分... 目的 :研究程序化死亡基因 5 (PDCD5 )在正常及骨关节炎关节软骨中的表达规律 ,探讨PDCD5在骨关节炎发病中的作用。方法 :取 2 0例骨关节炎及 10例股骨颈骨折行关节置换术时切除的关节软骨 ,分离软骨细胞 ,留取组织块制作石蜡切片。分别用流式细胞术、直接免疫荧光、激光共聚焦显微镜及RT -PCR检测PDCD5在正常及骨关节炎软骨细胞内的表达水平及部位 ,免疫组织化学检测PDCD5在关节软骨内的表达特征。结果 :在骨关节炎软骨细胞中PDCD5表达上调 ,以细胞核内增强为主 ;在骨关节炎的组织切片中PDCD5表达增强 ,阳性细胞主要分布在表层及深层 ,而在股骨颈骨折中PDCD5阳性细胞主要分布在表层及中层。结论 :PDCD5可能参与了骨关节炎软骨细胞的凋亡过程 。 展开更多
关键词 程序化死亡基因5 PDCD5 骨关节炎 软骨 表达
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维生素D受体基因多态性与牙周炎的关系 被引量:11
15
作者 张立 孟焕新 +5 位作者 赵红珊 李启艳 徐莉 陈智滨 释栋 冯向辉 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期37-40,共4页
目的:探讨汉族人种中维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)基因多态性与牙周炎的关系。方法:选取90名侵袭性牙周炎患者、34名慢性牙周炎患者和91名健康对照者,抽取外周静脉血,提取基因组DNA,应用TaqⅠ限制性内切酶,采用聚合酶链反应-限... 目的:探讨汉族人种中维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)基因多态性与牙周炎的关系。方法:选取90名侵袭性牙周炎患者、34名慢性牙周炎患者和91名健康对照者,抽取外周静脉血,提取基因组DNA,应用TaqⅠ限制性内切酶,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性的方法检测VDR基因的多态性。结果:(1)Tt基因型在侵袭性牙周炎患者中的检出率高于健康对照者,但差异无统计学意义(16.7%vs7.7%,P=0.065),而在女性侵袭性牙周炎患者与女性健康对照者之间,Tt基因型频率的差异有统计学意义(20.8%vs4.2%,P<0.05);在男性侵袭性牙周炎患者与男性健康对照者间,Tt基因型的频率则几乎没有差异(10.8%vs11.6%,P>0.05);(2)在慢性牙周炎患者与健康对照者间,Tt基因型的频率差异无显著性(P>0.05)。结论:携带Tt型VDR基因可能是中国汉族女性患侵袭性牙周炎的危险因素。 展开更多
关键词 牙周炎 多态现象 遗传 受体 骨化三醇
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果蝇程序化死亡基因5(PDCD5)同源cDNA的克隆和序列分析 被引量:7
16
作者 王应 张颖妹 +3 位作者 杨田 周周 狄春辉 马大龙 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期143-147,共5页
为了解人类白血病细胞凋亡相关新基因 TFAR1 9(PDCD5,programmed cell death5)在不同种属间的序列同源性 ,利用 EST(expression sequence tag)拼接、RT- PCR、DNA序列测定技术及计算机分析技术 ,首次成功地进行了果蝇 PDCD5同源 c DNA... 为了解人类白血病细胞凋亡相关新基因 TFAR1 9(PDCD5,programmed cell death5)在不同种属间的序列同源性 ,利用 EST(expression sequence tag)拼接、RT- PCR、DNA序列测定技术及计算机分析技术 ,首次成功地进行了果蝇 PDCD5同源 c DNA编码区基因克隆和序列分析 .发现果蝇与小鼠及果蝇与人 PDCD5在核苷酸水平上分别有 57.5%和 57.1 %的同源性 ,在氨基酸水平上分别有 46.8%和 46.4%的同源性 .功能区分析发现 ,果蝇 PDCD5c DNA编码 1 33个氨基酸 ,计算机预测可能是一种核蛋白 ,含 5个可能的酪蛋白激酶 (casein kinase )磷酸化位点 ,2个可能的 PKC磷酸化位点 ,与人 PDCD5的功能区类似 .因而果蝇 PDCD5是与人 PDCD5同源的新基因 ,可能都与细胞程序化死亡相关 . 展开更多
关键词 果蝇 PDCD5 TFAR19 序列分析 细胞凋亡基因 基因克隆
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大鼠趋化素样因子对成肌细胞促增殖作用的研究 被引量:6
17
作者 夏东岚 娄雅欣 +4 位作者 韩文玲 李现亭 宋泉声 张颖妹 马大龙 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期313-315,共3页
目的 探讨大鼠趋化素样因子 1和 2 (rCKLF1、2 )对成肌细胞的增殖促进作用。方法 构建pcDNA3.1/rCKLF1和pcDNA3.1/rCKLF2真核表达载体 ,并瞬时转染 2 93T细胞 ,收获培养上清。分别以3 H -TdR掺入和MTT比色法 ,分析rCKLF1和rCKLF2对小... 目的 探讨大鼠趋化素样因子 1和 2 (rCKLF1、2 )对成肌细胞的增殖促进作用。方法 构建pcDNA3.1/rCKLF1和pcDNA3.1/rCKLF2真核表达载体 ,并瞬时转染 2 93T细胞 ,收获培养上清。分别以3 H -TdR掺入和MTT比色法 ,分析rCKLF1和rCKLF2对小鼠肌母细胞系C2C12和原代肌卫星细胞增殖的促进作用。结果 成功地构建了rCKLF1和rCKLF2的真核表达质粒 ,并在SV4 0转化的 2 93T细胞中瞬时表达rCKLF1和rCKLF2。瞬时转染上清能够使C2C12细胞的3 H -TdR的掺入值增加 2倍或 3倍。MTT比色法分析表明 ,rCKLF1和rCKLF2的转染上清 ,对Wistar大鼠乳鼠肌卫星细胞具有增殖促进作用。结论 rCKLF1和rCKLF2能够促进骨骼肌细胞的增殖 。 展开更多
关键词 rCKLF 细胞增殖 G2C12细胞 肌卫星细胞
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应用nested和touch down PCR技术分离牦牛CAPN1大亚基基因EST 被引量:6
18
作者 蔡欣 吴建平 +3 位作者 徐明旭 张利平 汪虹英 刘雅楠 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第2期14-18,共5页
 钙激活中性蛋白酶1(CAPN1)基因是影响肉嫩度的侯选基因。根据GeneBank中已公布的CAPN1基因cDNA序列设计同源PCR引物,通过RT,nested和touch-downPCR技术从牦牛肌肉组织总RNA中分离目的序列,与pGEM-T-easy载体连接后转化DH5α感受态菌株...  钙激活中性蛋白酶1(CAPN1)基因是影响肉嫩度的侯选基因。根据GeneBank中已公布的CAPN1基因cDNA序列设计同源PCR引物,通过RT,nested和touch-downPCR技术从牦牛肌肉组织总RNA中分离目的序列,与pGEM-T-easy载体连接后转化DH5α感受态菌株,通过PCR扩增、限制性酶切和测序分析鉴定阳性克隆。分离到的基因片段为牦牛CAPN1大亚基的部分编码序列,在GeneBank中的注册号为AY197555,与奶牛、人、食蟹猴、小鼠、绵羊以及大鼠相应序列的同源性分别为98%,89%,89%,83%,96%和81%,在不同物种之间具有较强的保守性。CAPN1基因EST的分离为进一步研究牦牛CAPN1基因奠定了基础。此研究表明,在总RNA质量不理想的情况下,同时采用这2种技术可以较大限度地获取目的序列。 展开更多
关键词 nested和touch-down PCR EST分离 CAPN1大亚基基因 牦牛
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放射性Annexin V活体检测细胞凋亡的研究进展 被引量:4
19
作者 陈大明 金小海 +3 位作者 罗志福 张锦荣 王凡 马大龙 《原子能科学技术》 EI CAS CSCD 2004年第1期35-42,共8页
概述了放射性AnnexinV活体检测细胞凋亡的研究状况,介绍了这类显像剂在医学临床研究上的优越性,并对放射性标记AnnexinV显像剂的研究方法和进展进行了评述。
关键词 细胞凋亡 显像剂 活体检测 PCD 生命科学 放射性AnnexinV
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人类新细胞因子CKLFSF2羧基端蛋白在大肠杆菌中的表达纯化、抗体制备与鉴定 被引量:1
20
作者 钟英成 石爽 +5 位作者 张颖妹 莫晓宁 刘大振 宋泉声 韩文玲 王应 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第1期93-99,共7页
哺乳动物细胞表达的人类新细胞因子——趋化素样因子超家族成员-2(CKLFSF2)存在分泌形式,位于CKLFSF2分子的羧基端,具有细胞趋化作用.为进一步研究CKLFSF2羧基端蛋白的结构和生物学功能及抗体制备,构建了GST-CKLFSF2C51原核表达质粒,经... 哺乳动物细胞表达的人类新细胞因子——趋化素样因子超家族成员-2(CKLFSF2)存在分泌形式,位于CKLFSF2分子的羧基端,具有细胞趋化作用.为进一步研究CKLFSF2羧基端蛋白的结构和生物学功能及抗体制备,构建了GST-CKLFSF2C51原核表达质粒,经原核表达、亲和层析、凝胶过滤,获得GST-CKLFSF2C51融合蛋白和CKLFSF2羧基端蛋白(CKLFSF2C51),纯度可达到95%以上.GST-CKLFSF2C51融合蛋白用于制备多克隆抗体,ELISA方法检测抗体效价阳性,蛋白质印迹检测CKLFSF2哺乳动物细胞超表达细胞裂解液,获得特异性条带与预期大小一致.CKLFSF2C51经N端测序,质谱鉴定与预期结果一致,该蛋白质具有对PC-3细胞趋化的活性,并且该活性可被制备的多克隆抗体中和.上述结果表明,原核CKLFSF2羧基端蛋白具有与CKLFSF2真核表达蛋白类似的细胞趋化活性,原核CKLFSF2羧基端蛋白制备的多克隆抗体可用于免疫组织化学、蛋白质印迹检测,并能中和CKLFSF2蛋白的趋化活性作用. 展开更多
关键词 趋化素样因子超家族成员-2 重组蛋白纯化 多克隆抗体 趋化 免疫组织化学 抗体中和作用
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