胃癌组织及胃癌细胞系中p53的免疫组化研究 被引量：3

1

作者 王立新 林三仁 +2 位作者 叶嗣 雷道年 周爱儒 《北京医科大学学报》 CSCD 1994年第3期222-223,T013,共3页

用ｐ５３单克隆抗体，对１１７例胃癌和非癌组织的石蜡切片及５株胃癌细胞，进行了免疫组化研究。结果５６例进展期胃癌阳性核染２１例，４例早期胃癌无一例阳性，非癌组织均为阴性；５株胃癌细胞均显示阳性着色，通过ＦＡＣＳ分析，５... 用ｐ５３单克隆抗体，对１１７例胃癌和非癌组织的石蜡切片及５株胃癌细胞，进行了免疫组化研究。结果５６例进展期胃癌阳性核染２１例，４例早期胃癌无一例阳性，非癌组织均为阴性；５株胃癌细胞均显示阳性着色，通过ＦＡＣＳ分析，５株胃癌细胞均为非二倍体。说明ｐ５３突变主要在胃癌进展中起作用，可能提示癌肿恶性度高。 展开更多

关键词 P53蛋白 癌 胃肿瘤 免疫组织化学

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TNF-α基因转染对胃癌细胞系的生长抑制效应 被引量：7

2

作者 邹卫 王丽君 张乃蘅 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1997年第1期47-50,共4页

本工作以逆转录病毒为载体将TNF-α基因导入胃癌细胞系MKN28和BGC823,经筛选获阳性克隆MKN28-TNF和BCC823-TNF.对TNF基因在肿瘤细胞中的表达及其对肿瘤细胞的作用进行了探讨.证明外源TNF基因在肿瘤细胞中获得表达;肿瘤细胞生长速度明显... 本工作以逆转录病毒为载体将TNF-α基因导入胃癌细胞系MKN28和BGC823,经筛选获阳性克隆MKN28-TNF和BCC823-TNF.对TNF基因在肿瘤细胞中的表达及其对肿瘤细胞的作用进行了探讨.证明外源TNF基因在肿瘤细胞中获得表达;肿瘤细胞生长速度明显减慢,生长抑制率分别达71%和 66%.HTdR掺入率在TNF基因转染细胞明显降低.转染后的肿瘤细胞丧失了裸鼠体内成瘤能力.实验结果表明TNF基因导入胃癌细胞后,细胞生长及致癌能力受到明显抑制,为TNF最终能用于临床胃癌基因治疗提供了有意义的资料. 展开更多

关键词 胃肿瘤 肿瘤坏死因子 基因疗法

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Alzheimer氏病淀粉样前体蛋白的研究进展 被引量：8

3

作者 陈培利 童坦君 张宗玉 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第2期105-108,共4页

Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ氏病（ＡＤ）是一种发生于老年人群的原发性退行性脑病，其特征性病变为细胞内神经纤维缠绕（ＮＦＴ）及细胞外老年斑（ＳＰ）．构成ＳＰ的主要成分β淀粉样多肽（βＡ）为一由淀粉样前体蛋白（ＡＰＰ）剪切而来的分... Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ氏病（ＡＤ）是一种发生于老年人群的原发性退行性脑病，其特征性病变为细胞内神经纤维缠绕（ＮＦＴ）及细胞外老年斑（ＳＰ）．构成ＳＰ的主要成分β淀粉样多肽（βＡ）为一由淀粉样前体蛋白（ＡＰＰ）剪切而来的分子质量约为４ｋｕ的多肽，其神经毒性可能由其氧化作用和在脂质双层中形成的Ｃａ２＋通道所致．ＡＰＰ的功能目前尚未完全明了，可能具有促进细胞粘附、维护突触膜稳定性等功能．ＡＰＰ主要通过两种途径进行加工修饰：一为分泌途径，由一些假定的分泌酶催化；另一为胞内体溶酶体途径．在形成ＳＰ的βＡ中，较长者比短者更易聚集，因此一些ＡＰＰ突变由于能够释放出更多的较长的βＡ或者使较短的βＡ生成量增加而致发家族性ＡＤ．一些可能在ＡＰＰ的代谢中起着重要作用的因素，如早衰蛋白的突变，也可通过增加βＡ的生成量而致发ＡＤ． 展开更多

关键词 Β淀粉样 前体蛋白 Β淀粉样多肽 早老性痴呆

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血管内皮生长因子受体的结构与功能 被引量：7

4

作者 张曼 周爱儒 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1997年第1期18-22,共5页

血管内皮生长因子 (VEGF)受体是存在于血管内皮细胞 ,介导内皮细胞增殖分化的跨膜受体 .研究较多的有两种VEGF特异受体 :Flt和KDR .Flt和KDR的基因结构及染色体定位已基本确定 ,这二者均属RTKⅢ型受体 ,结构相似 .细胞外区均有 7个类似... 血管内皮生长因子 (VEGF)受体是存在于血管内皮细胞 ,介导内皮细胞增殖分化的跨膜受体 .研究较多的有两种VEGF特异受体 :Flt和KDR .Flt和KDR的基因结构及染色体定位已基本确定 ,这二者均属RTKⅢ型受体 ,结构相似 .细胞外区均有 7个类似免疫球蛋白结构 ,细胞内区催化域均有酪氨酸激酶插入区 .当VEGF与受体结合时 ,引起受体自身的磷酸化 ,发生细胞内反应 .在血管发生与生长、创伤修复、炎症。 展开更多

关键词 血管内皮 生长因子受体 结构 功能

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胸苷激酶基因治疗胃癌的体外实验 被引量：2

5

作者 王新娟 蒋罗化 +1 位作者 张蕾 蔺新力 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第6期983-986,共4页

将单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）导入恶性肿瘤细胞，随后可应用药物丙氧鸟苷（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ， ＧＣＶ）选择性杀死肿瘤细胞．构建了含胸苷激酶与潮霉素磷酸转移酶（ｈｐｈ）融和基因（ＨｙｔＫ）的真核表达载体... 将单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）导入恶性肿瘤细胞，随后可应用药物丙氧鸟苷（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ， ＧＣＶ）选择性杀死肿瘤细胞．构建了含胸苷激酶与潮霉素磷酸转移酶（ｈｐｈ）融和基因（ＨｙｔＫ）的真核表达载体ＬＸｐｓｐ－ＨｙｔＫ．以脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）为介导，将这种质粒与仅含潮霉素Ｂ基因的质粒ＬＸＳＨ 分别转染胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３，用６０ Ｕ／ｍ ｌ潮霉素Ｂ进行筛选，得到了可稳定传代的阳性克隆，分别命名为ＢＧＣ－ＨｙｔＫ 和ＢＧＣ－Ｈｙ．三种细胞的生长曲线无明显差别．用不同浓度的ＧＣＶ 分别作用于ＢＧＣ－ＨｙｔＫ， ＢＧＣ－Ｈｙ 及ＢＧＣ－８２３，０．０２～２００ μｇ／ｍ ｌ 的ＧＣＶ 对ＢＧＣ－ＨｙｔＫ 细胞有明显的杀伤作用（ＩＣ５０＝ ０．０２ μｇ／ｍ ｌ），而对另外两种细胞几乎无毒性作用（ＩＣ５０＞ ２００μｇ／ｍ ｌ）．２０ μｇ／ｍ ｌＧＣＶ 作用９６ ｈ 后，仅存在２０％ 的ＢＧＣ－ＨｙｔＫ 就可使周围的大部分ＨＳＶ－ｔｋ－ 的肿瘤细胞死亡，说明存在较显著的“旁观者效应” 展开更多

关键词 胸苷激酶基因 人胃癌细胞 基因治疗

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啤酒酵母DNA修复基因RAD24温度敏感突变株的分离及其特性的初步研究 被引量：2

6

作者 朱应葆 韩云 +1 位作者 傅欣 童坦君 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第2期222-226,共5页

以ＹＣｐｌａｃ系列带Ｔｒｐ、Ｈｉｓ和Ｕｒａ标志基因的载体为骨架构建含野生型和经羟胺处理的突变型的啤酒酵母ＲＡＤ２４基因质粒，用质粒替换方法分离ＲＡＤ２４基因温度敏感突变株（ｒａｄ２４－ｔｓ３）．紫外生存试验发现，ｒａ... 以ＹＣｐｌａｃ系列带Ｔｒｐ、Ｈｉｓ和Ｕｒａ标志基因的载体为骨架构建含野生型和经羟胺处理的突变型的啤酒酵母ＲＡＤ２４基因质粒，用质粒替换方法分离ＲＡＤ２４基因温度敏感突变株（ｒａｄ２４－ｔｓ３）．紫外生存试验发现，ｒａｄ２４－ｔｓ３对紫外线敏感；同位素（３Ｈ－ＴｄＲ，３Ｈ－ＵＲ，３Ｈ－Ｌｅｕ）参入试验表明，该突变株ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质合成均较野生型明显降低． 展开更多

关键词 RAD24 突变株 温度敏感 啤酒酵母 DNA 分离

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Rb基因对人视网膜母细胞瘤株SO-Rb50的影响 被引量：1

7

作者 徐斌 王新娟 +3 位作者 高汉林 吕向东 廖晓蓓 易玉珍 《北京医科大学学报》 CSCD 1997年第5期425-428,共4页

目的：探讨视网膜母细胞瘤（Rb）的发生与Rb基因（Rb1）缺失、失活等异常的关系。方法：用逆转录病毒载体pDOR与全长4．7kb野生型Rb1cDNA构建逆转录病毒表达载体pDOR－Rb1+。用脂质体介导法将pDOR－Rb1+转入CRIP包装细胞系。结果：实验... 目的：探讨视网膜母细胞瘤（Rb）的发生与Rb基因（Rb1）缺失、失活等异常的关系。方法：用逆转录病毒载体pDOR与全长4．7kb野生型Rb1cDNA构建逆转录病毒表达载体pDOR－Rb1+。用脂质体介导法将pDOR－Rb1+转入CRIP包装细胞系。结果：实验产生了0．5X105Cfu具有一次感染能力的重组逆转病毒。利用该病毒感染SO-Rb50，经G418筛选，获得了抗G418细胞群体。运用PCR及Southern杂交技术对转染细胞进行检测，结果表明该抗G418细胞中有完整的外源Rb1存在。Northern杂交发现其Rb1mRNA表达水平有所提高。对细胞群体生长速率、软琼脂集落形成能力的测定表明，外源Rb1的表达使SO-Rb50在软琼脂中集落形成能力降低，而群体生长速率无明显影响。结论：外源Rb1对SO-Rb50恶性表型有一定影响。 展开更多

关键词 视网膜母细胞瘤 病因学 基因转染 RB基因

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57kD肺癌抗原的分离纯化、免疫抗体的制备与各型肺癌免疫组织化学分析 被引量：1

8

作者 王向东 郭山春 +5 位作者 姚建民 何丽娟 何永占 吴霞 毛泽斌 童坦君 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 1996年第2期81-85,共5页

目的制备肺癌抗原和抗体。方法用胰蛋白酶酶解肺癌细胞膜取得多肽混合物，经琼脂糖凝胶和纤维素层析柱分离、纯化，获取肺癌表面抗原，再用电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法确定其性质。用此抗原免疫动物制备相应抗体，并用免疫组织化学方法... 目的制备肺癌抗原和抗体。方法用胰蛋白酶酶解肺癌细胞膜取得多肽混合物，经琼脂糖凝胶和纤维素层析柱分离、纯化，获取肺癌表面抗原，再用电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法确定其性质。用此抗原免疫动物制备相应抗体，并用免疫组织化学方法对８５例肺癌、１０例正常肺和１８例非癌性肺病进行测定。结果此抗原为等电点５．６、分子量为５７０００（５７ｋＤ）的膜蛋白。正常肺和非癌性组织中此抗原表达很低，呈阴性表达；肺癌阳性表达率为８０％，其中鳞癌、腺癌、小细胞肺癌的阳性表达率分别为９４．８０％、７８．２６％和２８．５７％，高分化型鳞癌和腺癌阳性表达率在９０％以上。结论此抗原为不带糖或含糖量很低的多肽，是肺鳞癌和腺癌的共同抗原。 展开更多

关键词 肺肿瘤 抗原 免疫组织化学

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组蛋白乙酰化在转录调节中的作用 被引量：4

9

作者 任庆虎 童坦君 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1997年第4期309-312,共4页

组蛋白乙酰化对染色质结构有重要影响 ,与特定位点的基因活化有直接联系 ,是转录调节的重要方式 ,在细胞生长、分化。

关键词 组蛋白 乙酰化 转录调节

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表皮生长因子对游离细胞核特异基因体外转录的影响 被引量：2

10

作者 李建义 童坦君 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第5期529-534,共6页

ＥＧＦ作用于ＮＣ３Ｈ１０和ＴＣ３Ｈ１０细胞核，对ＲＮＡ聚合酶Ⅱ有促进作用，但对ＲＮＡ聚合酶Ⅰ和酶Ⅲ没有影响，此外还发现转化细胞核内的ＲＮＡ聚合酶Ⅰ和酶Ⅱ的活性比正常细胞高１倍多。但两种细胞的ＲＮＡ聚合酶Ⅱ差别不大。同... ＥＧＦ作用于ＮＣ３Ｈ１０和ＴＣ３Ｈ１０细胞核，对ＲＮＡ聚合酶Ⅱ有促进作用，但对ＲＮＡ聚合酶Ⅰ和酶Ⅲ没有影响，此外还发现转化细胞核内的ＲＮＡ聚合酶Ⅰ和酶Ⅱ的活性比正常细胞高１倍多。但两种细胞的ＲＮＡ聚合酶Ⅱ差别不大。同时，以非放射性标记的ｃ－ｆｏｓ、ＣＬＮ１、ＣＬＮ３探针进行点杂交，结果发现，ＥＧＦ直接作用于细胞核可使ｃ－ｆｏｓ、ＣＬＮ１基因的转录水平提高；但是，对ＣＬＮ３无影响。 展开更多

关键词 表皮生长因子 特异基因 基因转录 细胞 细胞核

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神经生长因子对成纤维细胞游离细胞核的促转录作用 被引量：1

11

作者 李建义 童坦君 《北京医科大学学报》 CSCD 1995年第4期246-248,共3页

据Ｇｒｅｎｆｅｌｌ法提取和纯化了小鼠正常成纤维细胞及其恶性转化细胞的细胞核。通过电镜观察和标志酶的测定，表明此法纯化的细胞核不存在胞膜和细胞浆成分的污染。然后我们用ＮＧＦ刺激纯化的细胞核，发现ＮＧＦ能提高细胞核的体外... 据Ｇｒｅｎｆｅｌｌ法提取和纯化了小鼠正常成纤维细胞及其恶性转化细胞的细胞核。通过电镜观察和标志酶的测定，表明此法纯化的细胞核不存在胞膜和细胞浆成分的污染。然后我们用ＮＧＦ刺激纯化的细胞核，发现ＮＧＦ能提高细胞核的体外转录活性。正常细胞比转化细胞更敏感，并且随ＮＧＦ的浓度的升高，作用更为明显。 展开更多

关键词 神经生长因子 成纤维细胞 细胞核 转录

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鸡AChRγ亚基基因远上游增强子样作用依赖生肌因子 被引量：4

12

作者 肖国芝 贾弘 张迺蘅 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第5期521-524,共4页

先前曾报告鸡ＡＣｈＲγ亚基基因５＇连接区－５３８／－２８８片段（含一对Ｅ盒子）与生肌调节因子（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）的相互作用，为进一步观察ＤＮＡ－ｍｙｏｇｅｎｉｎ相互作用对γ基因转录激活功能的影响，利用瞬时表达体系研究... 先前曾报告鸡ＡＣｈＲγ亚基基因５＇连接区－５３８／－２８８片段（含一对Ｅ盒子）与生肌调节因子（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）的相互作用，为进一步观察ＤＮＡ－ｍｙｏｇｅｎｉｎ相互作用对γ基因转录激活功能的影响，利用瞬时表达体系研究了鸡ｎＡＣｈＲγ亚基基因５＇端－５３８／－２８８片段调控机能。ＣＡＴ分析表明：γ基因－５３８／－２８８片段可显著激活ｔｋ启动子在分化的Ｃ２Ｃ１２肌细胞中的转录活性，但不能激活在未分化Ｃ２Ｃ１２肌细胞中的转录活性。这种组织特异性转录激活作用与距离无关，因而是一个典型的增强子；－５３８／－２８８片段的增强子样作用既依赖于两毗邻Ｅ盒子的完整性，又依赖于ｍｙｏｇｅｎｉｎ等生肌调节因子的存在。强化表达ｍｙｏｇｅｎｉｎ可激活ｐＢＬＣＡＴ２－γ（－５３８／－４３３）和ｐＢＬＣＡＴ２－γ（－４３２／－２８８）（各含一个Ｅ盒子）在分化肌细胞中的表达，究竟是克隆片段中的独立Ｅ盒子对这种表达起贡献还是出现在克隆位点附近的反向Ｅ盒子（ＧＴＣＧＡＣ）或ｔｋ启动子中的另一个Ｅ盆子起作用？尚不十分清楚。 展开更多

关键词 鸡 AchRγ亚基基因 增强子 生肌因子

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鸡AChRγ亚基基因远端E盒子与myogenin的相互作用 被引量：3

13

作者 肖国芝 贾弘 张迺蘅 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第5期516-520,共5页

业已证明，鸡ｎＡｃｈＲγ亚基基因５＇连接区，－５０９／－３０２，－３２４／＋３６片段可独立激活异源启动子ＳＶ４０的转录活性；γ基因近端两个Ｅ盒子（ＣＡＮＮＴＧ）与生肌调节因子（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）的相互作用及转录激活分... 业已证明，鸡ｎＡｃｈＲγ亚基基因５＇连接区，－５０９／－３０２，－３２４／＋３６片段可独立激活异源启动子ＳＶ４０的转录活性；γ基因近端两个Ｅ盒子（ＣＡＮＮＴＧ）与生肌调节因子（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）的相互作用及转录激活分析表明，近端两个Ｅ盒于是γ启动子活性必不可少的，但却是不充分的。利用胶阻滞和ＤＮａｓｅⅠ足纹试验观察了鸡ｎＡｃｂＲγ基因远端Ｅ盒子与ＧＳＴ－ｍｙｏｇｅｎｉｎ融合蛋白的相互作用。胶阻滞试验证明，－５３８／－２８８片段可与ｍｙｏｇｅｎｉｎ相互结合，引起（３２）￣ｐ标记的ＤＮＡ片段在ＰＡＧＥ中迁移率减慢，这种胶阻滞现象可被含Ｅ盒子的未标记片段消除，并被抗鸡ｍｙｏｇｅｎｉｎ单克隆抗体或抗血清所改变。ＤＮａｓｅⅠ足纹试验证明，ｍｙｏｇｅｎｉｎ系通过γ基因转录起始点上游－４２９／－４２４及－４６３／－４５８两个Ｅ盒子与γ基因５＇连接区－５３８／－２８８相互作用。 展开更多

关键词 鸡 AchRγ亚基基因 E盒子 MYOGENIN

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