油梨在中国的发展前景 被引量：10

1

作者 施宗强 郑德龙 喻时周 《福建热作科技》 2007年第4期37-38,34,共3页

通过介绍油梨的基本情况,简述油梨生产的不利因素,论述油梨在我国栽培的有利条件及对发展油梨生产的几点建议。

关键词 油梨 发展前景

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一株海洋细菌的鉴定及其活性物质的初步研究 被引量：13

2

作者 吕家森 黄惠琴 +1 位作者 丛明 鲍时翔 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期173-178,共6页

关键词 海洋细菌 鉴定 活性物质 分离纯化

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抗旱基因HDCS1的植物表达载体构建 被引量：9

3

作者 郭卫东 饶景萍 +2 位作者 徐炎 李嘉瑞 郑学勤 《西北植物学报》 CAS CSCD 1999年第3期371-375,共5页

在克隆了二棱大麦第 ３ 组 Ｌ Ｅ Ａ ｃ Ｄ Ｎ Ａ，抗旱基因 Ｈ Ｄ Ｃ Ｓ１ 的基础上，将其连接于ｐ Ｂ Ｉ１２１ 的 Ｃａ Ｍ Ｖ３５ Ｓ 启动子和 Ｎ Ｏ Ｓ终止子之间，构建了 Ｈ Ｄ Ｃ Ｓ１ 的植物表达载体 ｐ Ｂ Ｈ Ｃ，并进... 在克隆了二棱大麦第 ３ 组 Ｌ Ｅ Ａ ｃ Ｄ Ｎ Ａ，抗旱基因 Ｈ Ｄ Ｃ Ｓ１ 的基础上，将其连接于ｐ Ｂ Ｉ１２１ 的 Ｃａ Ｍ Ｖ３５ Ｓ 启动子和 Ｎ Ｏ Ｓ终止子之间，构建了 Ｈ Ｄ Ｃ Ｓ１ 的植物表达载体 ｐ Ｂ Ｈ Ｃ，并进行了 Ｐ Ｃ Ｒ 和酶切鉴定。 展开更多

关键词 抗旱 LEA CDNA 植物表达载体

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用抑制消减杂交法分离巴西橡胶树胶乳特异表达基因 被引量：8

4

作者 邓柳红 罗明武 +2 位作者 曾会才 杨卫帆 张春发 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期32-36,共5页

采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A+)RNA为Tester,叶片Poly(A+)RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressivesubtractivehybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式NorthernDot-Blot筛选鉴定阳性差异片段... 采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A+)RNA为Tester,叶片Poly(A+)RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressivesubtractivehybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式NorthernDot-Blot筛选鉴定阳性差异片段,获得79个胶乳特异表达阳性克隆,部分阳性克隆还通过NorthernBlot杂交及RT-PCR进一步验证。随机挑选部分阳性克隆序列比较分析,结果表明有部分克隆与巴西橡胶树中已知的基因相同,而多数克隆在巴西橡胶树中是新发现,它们与橡胶生物合成、物质代谢运输、信号传导和形态建成等相关。 展开更多

关键词 巴西橡胶树 抑制消减杂交法 胶乳 反式Northern Dot—Blot

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几种海洋微藻基因组DNA的分离提取及PCR检测 被引量：17

5

作者 张桂和 徐碧玉 王珺 《热带海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期68-72,共5页

用改良CTAB法分别提取6种海洋微藻的基因组DNA,发现提取的DNA纯度、产率高(>100μg.g-1鲜重),DNA完整性好。以6种海洋微藻的基因组DNA为模板,并以5'TTCGAGCCAG3'(OPC-01)为随机引物,对PCR反应条件进行研究。结果表明,25μl... 用改良CTAB法分别提取6种海洋微藻的基因组DNA,发现提取的DNA纯度、产率高(>100μg.g-1鲜重),DNA完整性好。以6种海洋微藻的基因组DNA为模板,并以5'TTCGAGCCAG3'(OPC-01)为随机引物,对PCR反应条件进行研究。结果表明,25μl反应体系中,Mg2+、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA和dNTP 5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:2.0mmol.L-1、1.6U、20pmol.L-1、50ng和2.5mmol.L-1。扩增程序优化为:94℃预变性5min,94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸2min,循环45次,最后于72℃再延伸10min。酶切实验结果表明,6种海洋微藻的基因组DNA都能被EcoRⅠ酶切,酶切图谱呈弥散状,满足分子水平操作的要求,可直接应用于进一步的分子生物学实验。 展开更多

关键词 海洋微藻 DNA提取 CTAB 酶切 PCR检测

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马铃薯多酚氧化酶基因克隆及反义表达载体构建 被引量：9

6

作者 王清 王蒂 +1 位作者 黄俊生 郭安平 《西北植物学报》 CAS CSCD 2003年第10期1745-1749,共5页

从甘农薯1号马铃薯试管苗叶片中提取总DNA,根据Genebank报道的马铃薯多酚氧化酶基因 POT32 序列,设计合成了带有BamH 、Sac 特定酶切位点的2对特异引物,通过PCR获得1840bP和476bP的扩增产物.测序结果表明,1840bp的扩增产物与Genebank中... 从甘农薯1号马铃薯试管苗叶片中提取总DNA,根据Genebank报道的马铃薯多酚氧化酶基因 POT32 序列,设计合成了带有BamH 、Sac 特定酶切位点的2对特异引物,通过PCR获得1840bP和476bP的扩增产物.测序结果表明,1840bp的扩增产物与Genebank中发表的序列一致,476bp的扩增产物正是欲扩增的马铃薯多酚氧化酶基因的同源片段.将2个扩增产物反向连接到表达载体PC3中,通过双酶切鉴定后,按直接导入法实现反义基因表达载体质粒向农杆菌EHA105的导入;并经PCR鉴定证明,此质粒已整合到农杆菌Ti上. 展开更多

关键词 马铃薯 PPO基因克隆 反义基因表达载体构建

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二棱大麦LEA cDNA的克隆与测序 被引量：10

7

作者 郭卫东 饶景萍 +1 位作者 李嘉瑞 郑学勤 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第2期8-12,共5页

从二棱大麦 ( H ordeum distichon Linn.)幼苗中提取总 RNA,通过 RT- PCR获得目的片段 HDCS1 ,并采用 T-载体进行克隆。测序结果表明 ,HDCS1全长 664bp,含有 1个完整的阅读框架。其编码蛋白质全长 2 0 2个氨基酸 ,含有 8个由 1 1个氨基... 从二棱大麦 ( H ordeum distichon Linn.)幼苗中提取总 RNA,通过 RT- PCR获得目的片段 HDCS1 ,并采用 T-载体进行克隆。测序结果表明 ,HDCS1全长 664bp,含有 1个完整的阅读框架。其编码蛋白质全长 2 0 2个氨基酸 ,含有 8个由 1 1个氨基酸残基组成的基元序列 ,属第 3组 LEA蛋白。HDCS1与大麦 ( H ordeum vulgare L.) L EA蛋白、HVA1具有高度同源性 ,其差异在于 HDCS1比 HVA1缺少一个完整的由 1 展开更多

关键词 二棱大麦 LEA基因 克隆 序列分析 抗旱基因工程

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固定化金属螯合亲和膜纯化重组抗菌肽研究 被引量：6

8

作者 魏琪 姚汝华 鲍时翔 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第4期401-403,共3页

用自行制备的固定化金属螯合亲和膜对N端含六个组氨酸标记的重组抗菌肽进行了分离纯化 ,并较好地解决了金属离子泄露问题 .实验表明 ,固定化金属螯合亲和膜性能优于传统琼脂糖凝胶介质 ,完全适用于分离纯化含有多组氨酸标记的重组蛋白质 .

关键词 亲和层析 亲和膜 抗菌肽 纯化 IMAC

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芪合酶基因的克隆与植物表达载体的构建 被引量：4

9

作者 谭琳 郑学勤 +1 位作者 康由发 施江 《热带作物学报》 CSCD 2003年第2期42-45,共4页

为获得含白藜芦醇且具有保健作用的转基因番茄,进行了芪合酶基因克隆、植物表达载体构建及导入受体细胞的研究。从葡萄2个品种———雷司令和粉红玫瑰的叶片中提取基因组DNA,并以其为模板,经PCR扩增芪合酶基因,各获得一长约1.6Kb的片段... 为获得含白藜芦醇且具有保健作用的转基因番茄,进行了芪合酶基因克隆、植物表达载体构建及导入受体细胞的研究。从葡萄2个品种———雷司令和粉红玫瑰的叶片中提取基因组DNA,并以其为模板,经PCR扩增芪合酶基因,各获得一长约1.6Kb的片段,将这2个片段分别连接到pGEM-Teasy和pUCm-T上进行测序,1个片段长为1622bp(命名为S1),另一个片段长为1617bp(命名为S2)。然后将S1正向插入pEV2的果实特异性启动子TFP2和NOS终止子,构建了植物表达载体pEV2S1;将S2正向插入植物表达载体pBI121的35S启动子和NOS终止子之间,构建了植物表达载体pBS2。将重组体pEV2S1和pBS2转化大肠杆菌E.coliXL1,并对重组体进行了筛选和鉴定。 展开更多

关键词 芪合酶基因 基因克隆 植物表达载体 转基因番茄 白藜芦醇 基因转化

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PRSV-CP转基因番木瓜表达与抗病能力关系的研究 被引量：15

10

作者 周鹏 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1996年第2期77-83,共7页

利用ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ（点杂交）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ（分子杂交）等技术，分析了ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜转录水平（ｍＲＮＡ）的表达，再通过ＲＮＡ斑点杂交和间接斑点ＥＬＩＳＡ等技术估测了ＲＮＡ、蛋白质在ＰＲＳＶ... 利用ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ（点杂交）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ（分子杂交）等技术，分析了ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜转录水平（ｍＲＮＡ）的表达，再通过ＲＮＡ斑点杂交和间接斑点ＥＬＩＳＡ等技术估测了ＲＮＡ、蛋白质在ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜中的表达量，最后通过大田攻毒试验检测了ＲＮＡ、蛋白质的表达量与抗病能力的关系。 展开更多

关键词 番木瓜 转基因番木瓜 杂交 抗病性

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无机焦磷酸化酶基因的克隆与植物表达载体的构建 被引量：2

11

作者 黄东杰 张树珍 +2 位作者 冯翠莲 顾丽红 范海阔 《热带作物学报》 CSCD 2007年第2期69-73,共5页

提取面包酵母基因组DNA,用无机焦磷酸化酶(PPase)基因特异引物通过PCR扩增出864bp的片段,并将该片段克隆至pMD18-T上。序列分析结果表明,该克隆序列与GeneBank上的PPase基因序列同源性达到100%。进一步将叶肉细胞特异性启动子rbcS和PPas... 提取面包酵母基因组DNA,用无机焦磷酸化酶(PPase)基因特异引物通过PCR扩增出864bp的片段,并将该片段克隆至pMD18-T上。序列分析结果表明,该克隆序列与GeneBank上的PPase基因序列同源性达到100%。进一步将叶肉细胞特异性启动子rbcS和PPase基因克隆至植物表达载体pCBI上,构建了由rbcS启动子调控的PPase基因植物表达载体pCBIPR。通过冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌EHA105中,为农杆菌介导的PPase基因对植物的遗传转化奠定基础。 展开更多

关键词 甘蔗 Ppase RBCS 植物表达载体

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无机焦磷酸化酶融合基因克隆分析及表达载体的构建 被引量：1

12

作者 范海阔 黄东杰 +2 位作者 刘巧泉 顾丽红 张树珍 《西南农业学报》 CSCD 2007年第6期1267-1271,共5页

无机焦磷酸化酶(PPa)基因是植物糖代谢过程中的蔗糖合成调控基因,为将该基因运用于甘蔗转基因的研究,从面包酵母克隆了该基因,利用生物信息学方法对该基因进行组成成分和理化性质分析,预测分析其疏水性/亲水性,并将其核苷酸和编码氨基... 无机焦磷酸化酶(PPa)基因是植物糖代谢过程中的蔗糖合成调控基因,为将该基因运用于甘蔗转基因的研究,从面包酵母克隆了该基因,利用生物信息学方法对该基因进行组成成分和理化性质分析,预测分析其疏水性/亲水性,并将其核苷酸和编码氨基酸序列提交Genbank进行比对分析。利用从武运粳8号水稻中克隆得到Rub isco小亚基基因(rbcS)的5'上游调控区rbcS启动子,构建了由rbcS引导的无机焦磷酸化酶融合基因,并将其转入根癌农杆菌EHA105菌株中。 展开更多

关键词 转基因甘蔗 PPA 水稻rbcS 生物信息学

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芒果的组织培养 被引量：4

13

作者 罗安定 符少萍 张银东 《热带农业科学》 1999年第6期80-84,共5页

收集了近２０ ａ 来芒果组织培养方面的研究成果，并进行综合分析。

关键词 芒果 组织培养 条件 方法

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番茄1-氨基环丙烷羧酸ACC合成酶基因的克隆及其反义基因表达载体的构建 被引量：1

14

作者 李小娟 邵寒霜 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1999年第1期34-37,共4页

从成熟番茄果实中分离mRNA，以Oligo（dT）为引物在AMV逆转录酶作用下合成ACC2cDNA第一链，以cDNA为模板通过PCR扩增ACC2基因，获得1.45kb的扩增片段，将此片段克隆到BS质粒的EcoRV位点上，对插入片段两端进行部分序列分析，随后，将此... 从成熟番茄果实中分离mRNA，以Oligo（dT）为引物在AMV逆转录酶作用下合成ACC2cDNA第一链，以cDNA为模板通过PCR扩增ACC2基因，获得1.45kb的扩增片段，将此片段克隆到BS质粒的EcoRV位点上，对插入片段两端进行部分序列分析，随后，将此片段以反方向插入双元载体pBI151的35S启动子和NOS终止子之间，通过三条交配法将携带反义ACC2基因的中间表达载体pBA7转入根癌农杆菌LBA4404，得到了完整的Ti质粒表达载体系统。 展开更多

关键词 ACC合成酶基因 PCR 反义基因

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甲醇毕赤氏酵母表达体系 被引量：3

15

作者 陈偿 《热带农业科学》 1999年第2期36-43,共8页

甲醇毕赤氏酵母体系是最近才发展起来的商业化外源蛋白生产的重组寄主系统,为分子发酵工程最新的酵母表达体系这一研究领域提供了参考。根据国外研究成果,介绍了该酵母体系的生物学特性、载体及宿主分子生物学;阐述了毕赤氏酵母表达策... 甲醇毕赤氏酵母体系是最近才发展起来的商业化外源蛋白生产的重组寄主系统,为分子发酵工程最新的酵母表达体系这一研究领域提供了参考。根据国外研究成果,介绍了该酵母体系的生物学特性、载体及宿主分子生物学;阐述了毕赤氏酵母表达策略及发酵策略,并揭示了利用该系统进行基因工程研究和商业化外源蛋白生产的潜力。 展开更多

关键词 甲醇毕赤氏酵母 表达体系 酵母 蛋白

全文增补中

基因枪法将Glu基因导入甘蔗愈伤组织

16

作者 李小娟 李继红 《广西蔗糖》 2003年第3期6-7,5,共3页

将含有Glu基因(β-1,3-葡聚糖酶基因)的植物表达载体pBluG通过基因枪法将Clu基因导入甘蔗叶片愈伤组织,在Km抗性培养基上诱导再生植株,获得的再生植株经PCR检测,证明外源Glu基因已整合到甘蔗基因组中。

关键词 基因枪法 Glu基因 基因导入 甘蔗 愈伤组织 植物表达载体 再生植株 PCR检测

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海南岛王下沟兰科植物多样性研究

17

作者 施宗强 林芳升 喻时周 《福建热作科技》 2008年第4期20-22,共3页

简要介绍海南坝王岭山区的王下沟一带兰科植物物种和生境的多样性,通过对沟谷内兰科植物的种类、数目、生境、海拔等项目进行综合调查,进一步研究和分析了沟谷兰科植物的物种多样性以及现阶段沟谷兰科植物所面临的问题,并对王下沟内丰... 简要介绍海南坝王岭山区的王下沟一带兰科植物物种和生境的多样性,通过对沟谷内兰科植物的种类、数目、生境、海拔等项目进行综合调查,进一步研究和分析了沟谷兰科植物的物种多样性以及现阶段沟谷兰科植物所面临的问题,并对王下沟内丰富而宝贵的兰科植物物种资源的合理利用和保护提出了一些意见和建议。 展开更多

关键词 海南 王下沟 兰科植物 多样性

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