编码脑组织Nav1.5钠通道新外显子的克隆、鉴定和分布 被引量：9

1

作者 王军 宗志红 +4 位作者 欧绍武 王运杰 任成涛 林毅 孟晓娜 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第3期255-259,共5页

Nav1.5电压-门控钠通道(VGSC)被认为是心肌的特异性通道,但最近的研究发现,该通道在脑组织尤其是边缘系统中亦广泛分布.此前,在对人神经母细胞瘤细胞钠通道的基因克隆中,发现Nav1.5/SCN5A基因的第6A外显子参与编码该通道.采用人及鼠脑组... Nav1.5电压-门控钠通道(VGSC)被认为是心肌的特异性通道,但最近的研究发现,该通道在脑组织尤其是边缘系统中亦广泛分布.此前,在对人神经母细胞瘤细胞钠通道的基因克隆中,发现Nav1.5/SCN5A基因的第6A外显子参与编码该通道.采用人及鼠脑组织,通过RT-PCR法对Nav1.5钠通道基因进行克隆发现:Nav1.5/SCN5A基因中的第6A外显子参与编码了该通道,而心肌等其他组织却是第6外显子参与编码该通道.人Nav1.5/SCN5A基因的第6A和第6外显子都定位于3号染色体,共有92个碱基,都可以编码产生30个氨基酸,但却有7个氨基酸不同.人和鼠脑组织Nav1.5/SCN5A基因的第6A外显子仅有一个碱基不同,却产生相同的氨基酸序列.RT-PCR法证实第6A外显子在鼠脑的不同部位表达不同,第6外显子在大鼠不同组织中的表达也不同,这为深入研究不同系统中Nav1.5钠通道的功能提供了基础. 展开更多

关键词 第6A外显子 第6外显子 基因克隆 Nav1.5钠通道 脑组织

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蛋白激酶Wee1B在小鼠1-细胞期受精卵中的表达及其定位 被引量：6

2

作者 刘超 肖建英 +3 位作者 任丽莉 刘洋 马浚仁 于秉治 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期863-867,I0001,共6页

目的:检测小鼠1-细胞期受精卵各个细胞周期中蛋白激酶Wee1B的表达水平及其定位水平,初步阐明Wee1B对哺乳动物受精卵早期发育调控的机制。方法:超排卵获得小鼠1-细胞期受精卵,收集卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测Wee1B的mRN... 目的:检测小鼠1-细胞期受精卵各个细胞周期中蛋白激酶Wee1B的表达水平及其定位水平,初步阐明Wee1B对哺乳动物受精卵早期发育调控的机制。方法:超排卵获得小鼠1-细胞期受精卵,收集卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测Wee1B的mRNA和蛋白表达水平;放射自显影测定Wee1B活性;间接免疫荧光观察Wee1B在各个细胞时期的定位。结果:小鼠1-细胞期受精卵G1、S、G2和M期Wee1BmRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05);S、G2和M期Wee1B蛋白表达量与G1期比较差异有统计学意义(P<0.01);与G1期比较,S、G2期Wee1B活性逐渐增高(P>0.05,P<0.01),M期Wee1B活性迅速下降(P<0.01)。G1期和S期细胞Wee1B蛋白偶联的红色荧光信号主要集中分布于细胞核,但在G2期细胞红色荧光信号弥散分布于细胞浆,在M末期和2-细胞期可见红色荧光信号又重新分布于细胞核,细胞浆内荧光减弱。结论:蛋白激酶Wee1B在小鼠1-细胞期受精卵各个细胞周期动态表达,Wee1B蛋白存在核浆转位,Wee1B的定位变化可能调控小鼠受精卵有丝分裂。 展开更多

关键词 Wee1B Wee1蛋白 小鼠 合子 蛋白表达 蛋白定位

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9种Na^＋通道mRNA在5个不同发育阶段大鼠16种组织中表达及变化趋势 被引量：8

3

作者 王军 王运杰 +1 位作者 欧绍武 宗志红 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期656-666,共11页

电压-门控Na^＋通道由1个可单独发挥作用的α亚单位和2～4个起辅助作用的β亚单位构成,在可兴奋细胞动作电位的产生及传导等过程中起重要作用.采用RT-PCR法对5个不同发育阶段（P1、P9、P40、P80、P120）Wistar大鼠16种不同组织的9种Na^... 电压-门控Na^＋通道由1个可单独发挥作用的α亚单位和2～4个起辅助作用的β亚单位构成,在可兴奋细胞动作电位的产生及传导等过程中起重要作用.采用RT-PCR法对5个不同发育阶段（P1、P9、P40、P80、P120）Wistar大鼠16种不同组织的9种Na^＋通道α亚单位及1种β亚单位的mRNA进行检测发现：同种类型Na^＋通道mRNA在大鼠不同组织中的表达不同,不同类型Na^＋通道mRNA在大鼠同一组织中的表达不同.其中,神经系统和心肌组织中Na^＋通道mRNA的表达最高,随着日龄的增加,Na^＋通道mRNA在不同组织中表达的变化趋势不同.Na^＋通道在全身组织中的广泛分布及随发育周期的不同变化趋势,为离子通道病的研究及治疗提供了理论基础. 展开更多

关键词 电压-门控Na+通道 Α亚单位 Β亚单位 WISTAR大鼠 表达趋势

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Nav1.5/SCN5A基因新的变构体编码人脑组织Nav1.5 Na^+通道 被引量：6

4

作者 欧绍武 宗志红 +1 位作者 王军 王运杰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第9期935-944,共10页

河豚毒-抵抗性(TTX-R)Nav1.5 Na+通道是心肌的特异性Na+通道,虽然研究发现神经元中也存在河豚毒-抵抗性Na+电流及Nav1.5/SCN5A mRNA的表达,但其确切的cDNA序列尚不清楚.采用RT-PCR法对人脑组织Nav1.5/SCN5A基因cDNA进行克隆发现:人脑组... 河豚毒-抵抗性(TTX-R)Nav1.5 Na+通道是心肌的特异性Na+通道,虽然研究发现神经元中也存在河豚毒-抵抗性Na+电流及Nav1.5/SCN5A mRNA的表达,但其确切的cDNA序列尚不清楚.采用RT-PCR法对人脑组织Nav1.5/SCN5A基因cDNA进行克隆发现:人脑组织Nav1.5/SCN5A基因cDNA有2种变构体,hB1和hB2(accession number EF629346,EF629347),其中hB1全长6201个碱基,其开放读码框架(ORF)参与编码2016个氨基酸,和人心肌Nav1.5 Na+通道氨基酸序列相同率高达98%,共有28个不同的氨基酸,其中7个集中位于第6A外显子与第6外显子编码区.与人心肌Nav1.5/SCN5A基因cDNA不同的是,在对人脑组织Nav1.5/SCN5A基因cDNA的克隆中未发现该基因第18外显子的选择性剪接,但却发现其第24外显子的选择性剪接,2种选择性剪接体(hB1和hB2)在脑组织中基本同时表达,表达比率接近1∶1,但在心脏中二者的表达比率却与年龄有关.人Nav1.5/SCN5A基因的第24外显子定位于染色体3P21区,共有54个碱基,参与编码18个氨基酸.RT-PCR法证实第24外显子的选择性剪接也可发生在大鼠心脑之外的其他组织中,竞争性PCR法证明,不同组织中2种选择性剪接体的表达比率不同,且随着周龄的增加,2种选择性剪接体在各组织中表达的变化趋势不同.此外,RT-PCR法还发现Wistar大鼠全身16种组织中均可检测到Nav1.5/SCN5A mRNA的表达.上述实验结果说明,Nav1.5 Na+通道在全身组织中分布广泛,但编码人脑组织Nav1.5 Na+通道与心肌组织该离子通道的cDNA序列不同,是Nav1.5/SCN5A基因的2种变构体,这为深入研究不同组织中Nav1.5 Na+通道的功能提供了基础. 展开更多

关键词 Nav1.5/SCN5A基因 基因克隆 选择性剪接 脑组织

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慢性染铅对小鼠海马Ca^(2+)-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响 被引量：4

5

作者 文涛 孙黎光 +2 位作者 宗志宏 邢伟 刘素媛 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期393-395,共3页

目的通过检测海马Ca2+钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)基因表达来探讨慢性铅中毒影响学习记忆的分子机制。方法小鼠交配后,通过饮水饲以2.4,4.8和9.6mmol·L-1醋酸铅。小鼠子代自胚胎期始即暴露于醋酸铅。幼鼠出生后,先通过哺乳... 目的通过检测海马Ca2+钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)基因表达来探讨慢性铅中毒影响学习记忆的分子机制。方法小鼠交配后,通过饮水饲以2.4,4.8和9.6mmol·L-1醋酸铅。小鼠子代自胚胎期始即暴露于醋酸铅。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。6周后用逆转录聚合酶链反应法观察各组小鼠海马CaMKⅡmRNA的表达。结果3个染铅组小鼠CaMKⅡmRNA水平均明显降低,并具有浓度效应关系。结论铅致CaMKⅡ基因表达水平下降。 展开更多

关键词 铅 Ca^2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶 海马

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下调蛋白激酶Wee1B表达对小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂的促进作用 被引量：3

6

作者 任丽莉 刘超 +4 位作者 刘乙蒙 孟智超 孙静 于秉治 肖建英 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期44-48,I0001,共6页

目的:利用特异性发夹结构Wee1BshRNA,探讨蛋白激酶Wee1B对小鼠受精卵早期发育的影响。方法:超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵并显微注射质粒,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、Control shRNA注射组和Wee1BshRNA注射组,收集各组卵细... 目的:利用特异性发夹结构Wee1BshRNA,探讨蛋白激酶Wee1B对小鼠受精卵早期发育的影响。方法:超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵并显微注射质粒,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、Control shRNA注射组和Wee1BshRNA注射组,收集各组卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测Wee1B shRNA的干涉效能;荧光显微镜观察受精卵的形态变化、计数卵裂率;放射自显影测定Wee1B活性。结果:与TE缓冲液和Control shRNA注射组比较,Wee1BshRNA注射组小鼠1-细胞期受精卵Wee1BmRNA水平和蛋白表达显著降低;与其他3组比较,Wee1BshRNA注射组Wee1B的激酶活性明显降低;未注射组、TE缓冲液注射组和Control shRNA注射组在hCG注射33h后1-细胞期受精卵的卵裂率分别为71.91%±1.74%、72.90%±2.25%和72.28%±2.06%,3组间比较差异无统计学意义(P>0.05);而Wee1BshRNA注射组的卵裂率提高18.00%,为90.00%±0.77%,与其他3组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:Wee1B表达沉默可提高小鼠1-细胞期受精卵的卵裂率,说明Wee1B负调控小鼠受精卵有丝分裂的进程。 展开更多

关键词 Wee1B 短发夹RNA 有丝分裂 受精卵 小鼠

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PI3K信号通路通过SKP2、p27调控肺癌细胞H446,A549增殖 被引量：4

7

作者 解智慧 孟凡鑫 于爱鸣 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期663-665,共3页

目的探讨PI3K信号通路调控肺癌细胞增殖机制。方法培养肺癌细胞系H446和A549,LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,MTT比色法测定细胞生长曲线;Western blot法检测PI3K信号下游蛋白SKP2、p27表达变化;FCM分析细胞周期变化。结果与对照组相... 目的探讨PI3K信号通路调控肺癌细胞增殖机制。方法培养肺癌细胞系H446和A549,LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,MTT比色法测定细胞生长曲线;Western blot法检测PI3K信号下游蛋白SKP2、p27表达变化;FCM分析细胞周期变化。结果与对照组相比,处理组细胞生长速率受到抑制;Western blot结果显示H446、A549细胞中的SKP2蛋白表达水平降低,而p27蛋白表达水平升高;FCM结果表明抑制剂处理后肿瘤细胞阻滞于G1期。结论结果提示肺癌细胞中PI3K信号通路参与SKP2蛋白的表达调控,从而影响p27蛋白的降解,促进细胞周期,加速细胞增殖。 展开更多

关键词 PI3K信号 LY294002 SKP2 P27 肺癌 细胞增殖

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dbcAMP通过Cdc25B蛋白调控小鼠1-细胞期受精卵发育 被引量：3

8

作者 刘超 肖建英 +1 位作者 孙小涵 于秉治 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期925-932,共8页

为了研究PKA激活剂dbcAMP通过调控小鼠Cdc25B蛋白S149和S321位点磷酸化状态影响小鼠1-细胞期受精卵的发育,将质粒pBSK-Cdc25B-WT、pBSK-Cdc25B-S149A、pBSK-Cdc25B-S321A和pBSK-Cdc25B-S149A/S321A体外转录成mRNA;显微注射入S期受精卵中... 为了研究PKA激活剂dbcAMP通过调控小鼠Cdc25B蛋白S149和S321位点磷酸化状态影响小鼠1-细胞期受精卵的发育,将质粒pBSK-Cdc25B-WT、pBSK-Cdc25B-S149A、pBSK-Cdc25B-S321A和pBSK-Cdc25B-S149A/S321A体外转录成mRNA;显微注射入S期受精卵中,在2 mmol/LdbcAMP的M16培养基中培养,观察其对受精卵发育、MPF活性及CDC2-pTyr15磷酸化状态的影响.结果显示,在有dbcAMP存在时,各组受精卵卵裂时间延迟,但Cdc25B-S/A-mRNAs注射组受精卵卵裂率明显高于Cdc25B-WT-mRNA注射组,MPF活性提前达到高峰;CDC2-pTyr15磷酸化状态和MPF活性变化相一致.因此,在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,PKA对小鼠Cdc25B蛋白S149位点与S321位点的磷酸化修饰是控制受精卵G2/M转换的重要方式. 展开更多

关键词 细胞分裂周期25B蛋白 蛋白激酶A 有丝分裂促进因子 二丁酰环磷酸腺苷 小鼠受精卵

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CDC25B蛋白亚细胞定位调控小鼠1-细胞期受精卵发育 被引量：3

9

作者 肖建英 刘超 +1 位作者 孙小涵 于秉治 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期33-41,共9页

为探讨小鼠细胞分裂周期25B(CDC25B)蛋白149位丝氨酸磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵中CDC25B的亚细胞定位和发育的影响,应用定制的CDC25B-pS149位的磷酸化和非磷酸化抗体检测小鼠1-细胞期受精卵各细胞时期的磷酸化和非磷酸化状态;应用... 为探讨小鼠细胞分裂周期25B(CDC25B)蛋白149位丝氨酸磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵中CDC25B的亚细胞定位和发育的影响,应用定制的CDC25B-pS149位的磷酸化和非磷酸化抗体检测小鼠1-细胞期受精卵各细胞时期的磷酸化和非磷酸化状态;应用免疫荧光观察各期受精卵中CDC25B蛋白的定位情况;将质粒pEGFP-CDC25B-WT、pEGFP-CDC25B-S149A和pEGFP-CDC25B-S149D融合质粒及空载体质粒显微注射入G1期受精卵中,观察不同显微注射组小鼠1-细胞期受精卵中外源性CDC25B蛋白亚细胞定位.结果显示,CDC25B-S149位丝氨酸在G1和S期被磷酸化,在G2和M期去磷酸化.1-细胞期受精卵从G2向M期的转换过程中,发生了CDC25B向细胞核区的移位,到2-细胞初期,部分CDC25B蛋白又从细胞核回到细胞浆.实验结果提示,小鼠1-细胞期受精卵G2/M期转换过程中,CDC25B的S149位点磷酸化修饰可能是对CDC25B细胞内定位及其活性的精确调节方式. 展开更多

关键词 细胞分裂周期25B 亚细胞定位 有丝分裂 点突变 小鼠受精卵

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大鼠脑组织Nav1.5钠通道的基因克隆及分布分析 被引量：2

10

作者 任成涛 欧绍武 +2 位作者 王运杰 林毅 宗志红 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第8期816-823,共8页

为了阐明大鼠脑组织Nav1.5钠通道α亚单位的编码基因、分子特性及其在不同发育阶段各脑叶的分布差异,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对大鼠脑组织Nav1.5钠通道α亚单位进行了克隆(命名为rN1),并比较其在不同发育阶段各脑叶的分布... 为了阐明大鼠脑组织Nav1.5钠通道α亚单位的编码基因、分子特性及其在不同发育阶段各脑叶的分布差异,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对大鼠脑组织Nav1.5钠通道α亚单位进行了克隆(命名为rN1),并比较其在不同发育阶段各脑叶的分布情况.rN1基因编码2016个氨基酸残基,序列分析显示,其与rH1氨基酸相似性为96.53%,与hNbR1相似性为96.13%.在DI-S3～S4发现与rH1不同的一个新的外显子(第7外显子),同时发现DⅡ～Ⅲ选择性剪切了第20外显子(53个氨基酸残基)的异构体(命名为rN1-2).分布结果显示,大鼠脑组织Nav1.5钠通道α亚单位在不同发育阶段各脑叶分布有明显的差异,研究证实,Nav1.5钠通道在大鼠脑组织显著表达,存在脑叶的分布差异,而且随着脑组织的发育,其表达逐渐趋于稳定,实验证实Nav1.5钠通道基因编码了一个新的外显子而且其表达范围更加广泛. 展开更多

关键词 大鼠 钠通道 基因克隆 分布 脑组织

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用Fura-2双波长荧光法测定小鼠海马细胞内游离钙 被引量：3

11

作者 高明奇 张天彪 +1 位作者 滕赞 孙黎光 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期197-198,200,共3页

目的:探讨小鼠海马细胞分离及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的测定。方法:低浓度胰蛋白酶消化、分离海马细胞,采用Ca2+荧光指示剂Fura2双波长荧光法测定[Ca2+]i。结果:海马细胞存活率超过95%。细胞外Ca2+1.0mmol/L时,静息状态下海马细胞[Ca... 目的:探讨小鼠海马细胞分离及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的测定。方法:低浓度胰蛋白酶消化、分离海马细胞,采用Ca2+荧光指示剂Fura2双波长荧光法测定[Ca2+]i。结果:海马细胞存活率超过95%。细胞外Ca2+1.0mmol/L时,静息状态下海马细胞[Ca2+]i为(210±10.7)nmol/L。30mmol/LKCl可显著增加[Ca2+]i,并且KCl的这种效应呈一定的剂量依赖关系。结论:低浓度胰蛋白酶消化分离小鼠海马细胞简单、可靠;Fura2建立的双波长荧光法灵敏、可靠。 展开更多

关键词 FURA-2 细胞内游离钙 海马细胞 小鼠

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碱性成纤维细胞生长因子对卵巢癌CAOV3细胞cyclin D1及GADD153表达的影响 被引量：6

12

作者 叶丽平 温有锋 +1 位作者 聂海褀 张莹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1882-1885,共4页

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人卵巢癌CAOV3细胞细胞周期调节蛋白cyclinD1及GADD153表达的影响,探讨bFGF促进人卵巢癌CAOV3细胞增殖、抑制凋亡的信号机制。方法:利用无血清饥饿诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡。分为对照组、bFGF... 目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人卵巢癌CAOV3细胞细胞周期调节蛋白cyclinD1及GADD153表达的影响,探讨bFGF促进人卵巢癌CAOV3细胞增殖、抑制凋亡的信号机制。方法:利用无血清饥饿诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡。分为对照组、bFGF组。分别应用MTT、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳观察25、50、75μg/L bFGF对CAOV3细胞增殖率、细胞周期及细胞凋亡的影响。利用Western blotting检测bFGF对CA-OV3细胞cyclin D1、GADD153以及转录因子(c-Fos、c-Jun)表达的影响。结果:与对照组相比,bFGF呈剂量依赖性加速CAOV3细胞细胞周期进程,促进细胞增殖,抑制饥饿诱导的凋亡(P<0.01);呈时间依赖性促进cyclinD1、c-Fos、c-Jun,抑制GADD153蛋白表达(P<0.01)。结论:bFGF可能通过上调cyclin D1、c-Fos、c-Jun,下调GADD153表达促进细胞增殖,抑制饥饿诱导的卵巢癌CAOV3细胞凋亡。 展开更多

关键词 碱性成纤维细胞生长因子 细胞周期蛋白D1 生长抑制和DNA损伤诱导基因153 卵巢肿瘤

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Wee1B蛋白S15位点突变抑制小鼠1-细胞期受精卵的发育 被引量：3

13

作者 刘超 肖建英 +1 位作者 任丽莉 于秉治 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期52-59,共8页

为研究小鼠Wee1B蛋白S15位点磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,构建pcDNA3.1/V5-His-TOPO-Wee1B-S15A(Ser突变成Ala)/D(Ser突变成Asp)突变体,体外转录成mRNAs.对小鼠进行超排卵后当晚与雄鼠1∶1合笼,第2 d早取受精卵后培养至S... 为研究小鼠Wee1B蛋白S15位点磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,构建pcDNA3.1/V5-His-TOPO-Wee1B-S15A(Ser突变成Ala)/D(Ser突变成Asp)突变体,体外转录成mRNAs.对小鼠进行超排卵后当晚与雄鼠1∶1合笼,第2 d早取受精卵后培养至S期,显微注射Wee1B-WT(野生型)/KD(激酶失活型)-mRNAs和突变体Wee1B-S15A/D-mRNAs,观察其对受精卵发育、有丝分裂促进因子(MPF)活性及CDC2-pTyr15磷酸化状态的影响.结果表明,过表达Wee1B-WT和Wee1B-S15A/D可有效抑制受精卵有丝分裂进程,明显降低卵裂率.过表达模拟磷酸化的突变明显抑制MPF的活性,CDC2-pTyr15磷酸化状态和MPF活性变化相一致.因此,在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,PKA对小鼠Wee1B蛋白S15位点的磷酸化修饰是控制受精卵G2/M转换的重要方式. 展开更多

关键词 Wee1B 蛋白激酶A 有丝分裂促进因子 小鼠受精卵

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胰腺神经内分泌肿瘤中DJ-1蛋白高表达的临床意义 被引量：5

14

作者 杨立新 张丽娜 张天彪 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期112-118,共7页

背景与目的:胰腺神经内分泌肿瘤(pancreatic neuroendocrine neoplasms,PNENs)症状复杂多样,易发生误诊和漏诊。本研究旨在探讨PNENs中DJ-1蛋白表达水平及其在病程进展及预后中的临床意义。方法:采用ELISA法检测16例PNENs及25例健康人... 背景与目的:胰腺神经内分泌肿瘤(pancreatic neuroendocrine neoplasms,PNENs)症状复杂多样,易发生误诊和漏诊。本研究旨在探讨PNENs中DJ-1蛋白表达水平及其在病程进展及预后中的临床意义。方法:采用ELISA法检测16例PNENs及25例健康人血清中DJ-1蛋白的水平,采用免疫组织化学法检测了78例PNENs病理组织中DJ-1蛋白的表达情况。结果:PNENs患者血清中DJ-1蛋白水平显著高于健康人(36.19±6.71vs 24.68±5.94 ng/m L;P<0.001);53.8%的PNENs组织中DJ-1蛋白呈阳性表达(42/78);PNENs组织中DJ-1表达水平与淋巴结转移(P=0.033)、远处转移(P=0.017)、TNM分期(P=0.012)、以及病理分级(P=0.049)呈显著正相关;作为非独立风险因素,DJ-1阳性表达与PNENs患者OS(P=0.003)及DFS(P=0.018)缩短均显著相关。结论:PNENs存在DJ-1蛋白高表达,且与肿瘤的侵袭转移、病程进展及不良预后相关。 展开更多

关键词 胰腺神经内分泌肿瘤 DJ-1 免疫组织化学 生存分析

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电压-门控Na^＋通道α亚单位Nav1．5 被引量：2

15

作者 王军 欧绍武 +1 位作者 王运杰 宗志红 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期287-294,共8页

Nav1·5α亚单位是电压-门控Nav1·5Na+通道发挥作用的核心亚单位,在心肌中首先被成功克隆,是心脏电生理活动最主要的Na+通道α亚单位.最新的研究发现,Nav1·5不仅可以在神经元等非心肌组织中表达,而且其表达的选择性剪接... Nav1·5α亚单位是电压-门控Nav1·5Na+通道发挥作用的核心亚单位,在心肌中首先被成功克隆,是心脏电生理活动最主要的Na+通道α亚单位.最新的研究发现,Nav1·5不仅可以在神经元等非心肌组织中表达,而且其表达的选择性剪接体的类型及电生理学特性与心肌Nav1·5亦不同.目前,不仅对Nav1·5发挥功能的调控机制及与心脏传导功能障碍等疾病的发病关系有了深入的了解,而且一些常见疾病,如肿瘤和癫痫等的发生也被认为可能和Nav1·5有关.本文结合国内外对Nav1·5的最新研究及本小组的工作,对Nav1·5的结构、选择性剪接、基因定位、电生理学活性及与疾病的关系作一详细综述. 展开更多

关键词 Nav1.5α亚单位 电压-门控 选择性剪接 功能 疾病

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L78部分氨基酸残基对SERCA1a钙转运功能的影响 被引量：2

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作者 王国丽 DAIHO Takashi +4 位作者 YAMASAKI Kazuo DANK0 Stefania 王彪 宿文辉 SUZUKI Hiroshi 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第8期796-803,共8页

跨肌浆网膜的钙离子ATP酶SERCA1a可在水解ATP的同时逆浓度梯度从胞浆转运钙离子入肌浆网,引发收缩的骨骼肌细胞舒张.目前对SERCA1a结构与功能的研究,要领先于对其他P型离子转运ATP酶的研究.为了解SERCA1a跨膜螺旋M7与M8膜内侧连接部Link... 跨肌浆网膜的钙离子ATP酶SERCA1a可在水解ATP的同时逆浓度梯度从胞浆转运钙离子入肌浆网,引发收缩的骨骼肌细胞舒张.目前对SERCA1a结构与功能的研究,要领先于对其他P型离子转运ATP酶的研究.为了解SERCA1a跨膜螺旋M7与M8膜内侧连接部Linker78(L78)的功能,我们评估了L78部分氨基酸残基突变对SERCA1a反应循环的影响,发现:除G864A之外的所有突变体均可不同程度地降低钙离子转运速率;G862或P863氨基酸残基的突变导致SERCA1a的ATP酶活性显著降低或丧失,并引起由ATP或无机磷酸Pi生成的磷酸化酶中间体EP量显著减少;A893被P取代对SERCA1a的影响与G862、P863突变相似;与野生型SERCA1a相比,G864A与FMQ873-875单突变体ATP酶活性及EP生成量无明显差别.上述结果表明,M7、M8膜内侧连接部L78不仅与跨膜区钙离子转运过程密切相关,而且L78在GPG862-864处及A893附近的正确转折对胞浆结构域P的磷酸化也具有关键的远距离调控作用,提示L78的结构及柔度对SERCA1a构象正常的周期性变化至关重要. 展开更多

关键词 P型ATP酶 钙离子ATP酶 SERCA 定点诱变 反应循环

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原子力显微镜在液相条件下的成像分析 被引量：3

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作者 张天彪 党国全 关一夫 《电子显微学报》 CAS CSCD 2008年第5期395-399,共5页

本研究利用原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)分别对Al2O3纳米模板、云母片及数字光盘在固相及液相条件下进行形貌扫描和云母片上的力-距离曲线测量。实验结果分析表明液相条件可以降低针尖的展宽效应,使得形貌成像更能够显示... 本研究利用原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)分别对Al2O3纳米模板、云母片及数字光盘在固相及液相条件下进行形貌扫描和云母片上的力-距离曲线测量。实验结果分析表明液相条件可以降低针尖的展宽效应,使得形貌成像更能够显示出物体的细微结构。在液相条件下,由于样品表面消除了静电效应和液体的阻滞力结果,力-距离曲线显示了较好的力均一性。这些结果为AFM实验技术研究生理条件下的生物样品的形态学及生物分子之间的相互作用力提供了实验可行性。 展开更多

关键词 AFM 液相 形貌图像 力-距离曲线

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BAG3蛋白Ser187位点磷酸化诱导人甲状腺癌FRO细胞上皮间质转化 被引量：2

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作者 陈明红 李美欣 +3 位作者 刘宝琴 李超 王华芹 李宁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1213-1219,共7页

Bcl-2相关抗凋亡蛋白3(Bcl-2 associated athanogene 3,BAG3)是BAG家族的重要成员,调节肿瘤细胞的粘附、迁移和侵袭,促进恶性肿瘤的复发和转移.本室前期工作证明,PKCδ可催化BAG3的Ser187位点磷酸化.本文研究BAG3蛋白磷酸化修饰对甲状腺... Bcl-2相关抗凋亡蛋白3(Bcl-2 associated athanogene 3,BAG3)是BAG家族的重要成员,调节肿瘤细胞的粘附、迁移和侵袭,促进恶性肿瘤的复发和转移.本室前期工作证明,PKCδ可催化BAG3的Ser187位点磷酸化.本文研究BAG3蛋白磷酸化修饰对甲状腺癌FRO细胞EMT表型转化的影响.稳定转染野生型WT-BAG3、模拟磷酸化型S187D-BAG3、阻碍磷酸化型S187A-BAG3 FRO细胞后,观察细胞形态的变化.结果显示,稳定转染模拟磷酸化型S187D-BAG3引起甲状腺癌FRO细胞呈现明显的间质细胞形态.实时PCR和Western印迹,结果显示,稳定表达S187D-BAG3显著上调间质细胞标记物N-cadherin和波形蛋白mRNA与蛋白质在FRO细胞的表达,但下调上皮细胞标记物E-cadherin的mRNA和蛋白质的表达.同时,免疫荧光结果显示,稳定过表达S187D-BAG3的FRO细胞,E-cadherin和β-catenin出现向核周的内化.本文结果提示,BAG3蛋白磷酸化修饰可诱导甲状腺癌FRO细胞上皮间质转化. 展开更多

关键词 Bcl-2相关抗凋亡蛋白3(BAG3) 磷酸化 上皮细胞间质转化

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Genistein对CAOV3细胞增殖的抑制作用 被引量：1

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作者 张颐 尚海 +1 位作者 孙黎光 姜雪峰 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第1期28-30,共3页

目的 观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂genistein对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用,探讨其信号传导机制。方法 以不同浓度的bFGF和genistein诱导CAOV3细胞,通过MTT比色法观察genis... 目的 观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂genistein对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用,探讨其信号传导机制。方法 以不同浓度的bFGF和genistein诱导CAOV3细胞,通过MTT比色法观察genistein对细胞增殖的抑制作用;利用[γ-32P]ATP掺人外源性底物的方法,液体闪烁测定TPK和蛋白激酶C(PKC)活性的变化。结果 bFGF使该细胞株增殖比明显增加,细胞内TPK、PKC活性升高;genistein使细胞增殖比明显下降,抑制细胞内TPK、PKC活性,且genistein对bFGF诱导的TPK和PKC活性抑制更显著。结论 bFGF可能通过TPK途径激活PKC来调控CAOV3细胞增殖,genistein可有效阻滞此传导途径,从而抑制细胞增殖。 展开更多

关键词 GENISTEIN CAOV3细胞增殖 抑制作用 酪氨酸蛋白激酶 碱性成纤维细胞生长因子 卵巢癌

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芽殖酵母细胞周期的检查点调控 被引量：1

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作者 李新鸣 杨晓临 孙黎光 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期49-51,共3页

芽殖酵母是研究真核细胞的模式菌。细胞周期检查点是确保细胞周期正常运行的一种调控机制。就芽殖酵母细胞周期检查点调控加以介绍。

关键词 细胞周期 检查点调控 芽殖酵母

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