激光捕获显微切割技术纯化的鼻咽癌和正常鼻咽上皮细胞的比较蛋白质组学研究 被引量：6

1

作者 程爱兰 黄卫国 +8 位作者 张鹏飞 李茂玉 彭芳 李峰 李萃 易红 李美香 陈主初 肖志强 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第5期521-530,共10页

为筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的分子标志物,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngal epithelial tissue,NNET)中切割纯化NPC细胞和正常鼻... 为筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的分子标志物,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngal epithelial tissue,NNET)中切割纯化NPC细胞和正常鼻咽上皮细胞(normal nasopharyngal epithelial cells,NNEC),应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western blot检测差异蛋白cytokeratin8(CK8)在LCM纯化的NPC细胞和NNEC以及具有不同分化程度或转移潜能的4株NPC细胞中的表达,免疫组织化学检测CK8在63例NPC、28例NNET及20例颈淋巴结转移NPC组织中的表达水平.建立了LCM纯化的NPC细胞和NNEC的2-DE图谱,质谱鉴定了29个差异蛋白质,其中15个蛋白质只在NPC表达或表达明显增高,14个蛋白质在NPC中表达下调或缺失;Western blot结果显示,CK8的表达水平在NPC中较NNET明显下调,并与NPC细胞株的分化程度和转移潜能有关;免疫组织化学结果显示,CK8在NPC组织中的表达较NNET明显下调,在颈淋巴结转移NPC中的表达较原发NPC明显上调.研究结果提示,CK8与NPC分化及淋巴结转移相关,有望成为预测NPC转移和区别NPC分化程度的分子标志物. 展开更多

关键词 激光捕获显微切割 鼻咽癌 蛋白质组学 二维凝胶电泳 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 电喷雾电离串联质谱 Western blot 免疫组织化学

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气相色谱-质谱法同时测定乳酸和7种糖的研究 被引量：10

2

作者 徐正华 李晓宁 +4 位作者 易伦朝 谭斌斌 梁逸曾 曾茂茂 何君 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期142-146,共5页

建立了气相色谱-质谱(GC-MS)法同时测定乳酸和葡萄糖、葡萄糖-6-磷酸、果糖、半乳糖、乳糖、1,5-脱水山梨醇、山梨醇7种糖的方法。选择核糖醇为内标,进样前先进行肟化反应再进行硅烷化反应。采用DB-5熔融石英毛细管柱,升温程序为初始温... 建立了气相色谱-质谱(GC-MS)法同时测定乳酸和葡萄糖、葡萄糖-6-磷酸、果糖、半乳糖、乳糖、1,5-脱水山梨醇、山梨醇7种糖的方法。选择核糖醇为内标,进样前先进行肟化反应再进行硅烷化反应。采用DB-5熔融石英毛细管柱,升温程序为初始温度70℃,保持4min,以8℃/min的速率升至300℃,保持3min。在优化测定条件下各对照品得到良好分离,且在测定范围内具有良好线性关系(r2>0.9983),平均加标回收率为74.5%～104.2%,日间相对标准偏差(RSD)与日内RSD小于9.2%。该方法简便、灵敏度高,已成功应用于2型糖尿病大鼠和健康大鼠血清中乳酸和糖类物质的定性定量分析。 展开更多

关键词 气相色谱-质谱 乳酸 糖 血清 2型糖尿病

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冷藏对新鲜冰冻血浆诱导内皮细胞迁移的影响及其分子机制研究 被引量：1

3

作者 张春芳 谭潭 +3 位作者 李建国 马虹英 陈主初 段朝军 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第6期528-535,共8页

探讨冷藏是否导致新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)中的转化生长因子-β(transform growth factor-β,TGF-β)发生变化并降低其对内皮细胞迁移的诱导能力及其分子机制.为证实冷藏可能导致FFP中TGF-β的水平升高进而影响其功能,首... 探讨冷藏是否导致新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)中的转化生长因子-β(transform growth factor-β,TGF-β)发生变化并降低其对内皮细胞迁移的诱导能力及其分子机制.为证实冷藏可能导致FFP中TGF-β的水平升高进而影响其功能,首先采用ELISA法分析当天解冻FFP(FFP Day 0)和解冻后4℃冷藏1～5天FFP中TGF-β含量,迁移实验及Western blot分析比较FFP(Day 0)和FFP(Day 5)处理人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells,HPMECs)后的细胞迁移率及TGF-β信号通路Smad2和Smad3磷酸化,进一步采用ALK5-siRNA和ALK5特异性抑制剂阻断细胞TGF-βⅠ型受体ALK5的活性,分析下调TGF-β/Smad2/3信号传导后的内皮细胞迁移率.结果显示:随着冷藏时间的延长,FFP中TGF-β1水平逐渐增加,其增加率为244.31 ng/(L.d)(P<0.05);与FFP(Day 0)相比,FFP(Day 5)诱导内皮细胞HPMECs的TGF-β信号通路Smad2/3磷酸化显著增加(P<0.05);不管是FFP(Day 0)还是FFP(Day 5)体外均能诱导内皮细胞迁移,与FFP(Day 0)相比,FFP(Day 5)诱导细胞迁移能力显著降低(P<0.05);阻断TGF-βⅠ型受体ALK5的活性、下调Smad 3信号传导可恢复FFP(Day5)诱导细胞迁移能力.上述结果表明,FFP能显著诱导内皮细胞迁移,4℃冷藏增加FFP中TGF-β1水平并增加内皮细胞TGF-β1信号传导,进而降低FFP诱导内皮细胞迁移.提示,FFP复苏疗效的提高可能与增加内皮细胞迁移有关,冷藏导致内皮细胞迁移降低进而降低FFP复苏疗效. 展开更多

关键词 冷藏 新鲜冰冻血浆 内皮细胞 迁移 TGF—β/ALK5/Smad2/3

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通心络对血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞活力及组织因子的影响 被引量：14

4

作者 马琦琳 孙明 +5 位作者 杨天■ 李元建 汤参娥 彭振宇 贺石林 陈方平 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期485-489,共5页

目的:研究通心络对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endotheli-alcells,HUVECs)细胞活力(cell viability)及组织因子(tissue factor,TF)的影响和其作用机制。方法:分别用5%,10%,20%的通心络含药血浆预... 目的:研究通心络对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endotheli-alcells,HUVECs)细胞活力(cell viability)及组织因子(tissue factor,TF)的影响和其作用机制。方法:分别用5%,10%,20%的通心络含药血浆预处理内皮细胞30min后加入AngⅡ10-6mol/L孵育HUVECs24h,观察细胞活力变化的量效关系。选择一个最佳浓度的通心络含药血浆预处理内皮细胞30min后加入AngⅡ10-6mol/L孵育HU-VECs24h观察TF,AngⅡ1型受体(AT1) mRNA水平,一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮浓度(NO),并予NOS抑制剂(L-NAME)预处理内皮细胞30min后,再加入通心络含药血浆和AngⅡ,观察孵育24h细胞活力,TF,AT1,NOS及NO变化。结果:通心络能显著提高AngⅡ诱导的血管内皮细胞活力,以10%浓度作用最明显,通心络能降低TF及AT1水平及提高NOS活性和NO浓度;L-NAME可明显抑制通心络对血管内皮的作用。结论:通心络可能通过上调NOS-NO通路提高AngⅡ诱导的内皮细胞活力及抗血栓能力。 展开更多

关键词 通心络 血管紧张素Ⅱ 内皮细胞 细胞活力 组织因子 AngⅡ1型受体 NOS-NO通路

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人支气管上皮癌变各阶段组织蛋白质双向电泳图谱的差异分析 被引量：10

5

作者 吴晓英 肖志强 +6 位作者 陈主初 李萃 李建玲 冯雪萍 易红 梁宋平 陈平 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2004年第3期201-206,211,共7页

目的 :探讨肺鳞癌癌前病变恶性转化的机制。方法 :应用脱氧胆酸 三氯醋酸 (deoxycholate trichloroaeticacid ,DOC TCA)法提纯支气管上皮癌变各阶段组织总蛋白质 ,采用固相pH梯度 (immobilizedpHgradient,IPG)双向凝胶电泳 (two dimens... 目的 :探讨肺鳞癌癌前病变恶性转化的机制。方法 :应用脱氧胆酸 三氯醋酸 (deoxycholate trichloroaeticacid ,DOC TCA)法提纯支气管上皮癌变各阶段组织总蛋白质 ,采用固相pH梯度 (immobilizedpHgradient,IPG)双向凝胶电泳 (two dimensionalelectrophoresis ,2 DE)分离总蛋白质 ,凝胶经银染显色后 ,ImageMaster 2D图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质 ,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (matrix assistedlaserdesorption/ionizationtime of flightmassspectrometry ,MALDI TOF MS)得到相应的肽质指纹图谱 (peptidemassfingerprint,PMF) ,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果 :①重复性检测表明同一例鳞状上皮化生组织的三块凝胶的平均点数为 12 16± 75,平均匹配点数为 10 82± 6 7,匹配率达 89.3% ,且 3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性 ,不同胶间蛋白质点在IEF方向的偏差是 (0 .86 5± 0 .2 4 7)mm ,在SDS PAGE方向上的偏差为 (0 .971± 0 .10 4 )mm ,由此获得了分辨率较高、重复性较好的人支气管上皮癌变各阶段组织的双向凝胶电泳图谱 ,正常上皮、鳞状化生、不典型增生和上皮浸润癌组织凝胶的平均蛋白质点数依次为 1190± 36、12 2 7± 39、12 72± 4 1、132 6± 5 2 ;? 展开更多

关键词 人支气管上皮 癌前病变 肺鳞癌 双向凝胶电泳 质谱分析 质量 蛋白质组

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应用激光捕获显微切割和蛋白质组学技术筛选鼻咽癌的差异表达蛋白质 被引量：5

6

作者 易红 程爱兰 +7 位作者 黄卫国 张鹏飞 李茂玉 彭芳 李峰 李萃 陈主初 肖志强 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期375-383,共9页

目的:筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的差异表达蛋白质,为寻找NPC的分子标志物提供科学依据。方法:采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngeal ep... 目的:筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的差异表达蛋白质,为寻找NPC的分子标志物提供科学依据。方法:采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngeal epithelial tissue,NNET)中纯化NPC细胞和正常鼻咽上皮细胞(normal nasopharyngeal epithelial cells,NNEC),应用二维凝胶电泳(2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western印迹和组织芯片(tissue microarray,TMA)免疫组织化学验证差异蛋白鳞状细胞癌抗原1(SCCA1)在两种组织中的表达水平。结果:建立了LCM纯化的NPC细胞和NNEC的2-DE图谱,质谱鉴定了36个差异蛋白质,其中20个蛋白只在NPC表达或表达上调,16个蛋白在NPC中表达下调或缺失。Western印迹和组织芯片免疫组织化学结果显示:SCCA1在NPC中的表达水平较NNET明显下调,与比较蛋白质组学结果一致。结论:36个差异蛋白可能与NPC的发病有关,为筛选NPC分子标志物奠定了基础。 展开更多

关键词 鼻咽癌 激光捕获显微切割技术 蛋白质组学 二维凝胶电泳 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 电喷雾电离串联质谱 免疫印迹 组织芯片

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静脉血栓的抗磷脂蛋白抗体与抗凝血、纤维蛋白溶解关系 被引量：5

7

作者 陈朝晖 郑艳珍 +1 位作者 唐剑 李宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期733-736,共4页

为了探讨静脉血栓的病因病理及其与抗凝血、纤维蛋白溶解的关系 ,对 4 7例静脉血栓 (VT)患者用酶联免疫法检测抗心肌磷脂抗体 (ACA) ,用凝血法测定狼疮抗凝物 (LA)和抗活化蛋白C抗性 (APCR) ,用多聚酶链反应内切酶法鉴定因子VLeiden ,... 为了探讨静脉血栓的病因病理及其与抗凝血、纤维蛋白溶解的关系 ,对 4 7例静脉血栓 (VT)患者用酶联免疫法检测抗心肌磷脂抗体 (ACA) ,用凝血法测定狼疮抗凝物 (LA)和抗活化蛋白C抗性 (APCR) ,用多聚酶链反应内切酶法鉴定因子VLeiden ,用发色底物法测定抗凝血酶Ⅲ (ATⅢ )、蛋白C(PC)、纤溶酶原 (Plg)、组织纤溶酶原激活物 (tPA)、组织纤溶酶原激活物抑制物 (tPAI)等抗凝血、纤维蛋白溶解活性。结果表明 :VT患者中 3 4 %有ACA和 (或 )LA阳性 ,其中以ACAIgG和LA为主 ;9.5 %的Plg缺乏 ,8.3 %的tPAI升高 (明显高于对照 ,P <0 0 0 5 ) ;ATⅢ、PC、tPA缺乏者依次为 4 .5 %、4 .5 %、2 .8% (与对照无差异性 ,P >0 .0 5 ) ;ATⅢ、PC、Plg联合缺乏者 1例 ;APCR未发现相应的factorVLeiden ;抗磷脂蛋白抗体 (APA)阳性和阴性组之间的各抗凝血和纤维蛋白溶解活性没有明显差异性 ;4例APCR阳性 ,3例ACA和 (或 )LA阳性 ,这 3例血浆和正常血浆混合后 2例APCR并没有完全得到纠正。结论 :抗磷脂蛋白抗体和纤维蛋白溶解异常是VT较多见的相关病理因素 ;LA和 (或 )ACA干扰蛋白C抗凝血途径 ,使之形成获得性APCR ,而此APCR可能是体内导致易栓的病因之一。 展开更多

关键词 静脉血栓 抗磷脂蛋白抗体 抗活化性蛋白C抗性 纤维蛋白溶解 抗凝血

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鼻咽癌放疗残灶中HSP70/HSP27蛋白的表达 被引量：4

8

作者 王润文 周高峰 +1 位作者 黄生鹏 冯雪萍 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1091-1095,共5页

目的:分析鼻咽癌原发组织HSP70/HSP27蛋白表达与放疗残灶的相关性,探讨HSP70/HSP27表达对鼻咽癌放疗残灶的预测价值。方法:应用SP免疫组织化学法检测58例鼻咽癌原发组织HSP70/HSP27热休克蛋白表达,其中规范放疗后有残存癌灶的28例鼻咽... 目的:分析鼻咽癌原发组织HSP70/HSP27蛋白表达与放疗残灶的相关性,探讨HSP70/HSP27表达对鼻咽癌放疗残灶的预测价值。方法:应用SP免疫组织化学法检测58例鼻咽癌原发组织HSP70/HSP27热休克蛋白表达,其中规范放疗后有残存癌灶的28例鼻咽癌为实验组,随访5年无癌灶复发的30例为对照病例。结果:HSP70和HSP27在实验组阳性表达率分别为92.9%(26/28)和53.6%(15/28),而在对照组的阳性表达率为53.3%(16/30)和53.3%(16/30),HSP70阳性表达率在两组间比较有统计学差异(P<0.05),而HSP27阳性表达率在两组间比较无统计学差异(P>0.05);HSP70和HSP27在实验组共同阳性表达率为50.0%(14/28),对照组为16.7%(5/30),两者比较有统计学差异(P<0.05);两者共同阴性表达率在实验组和对照组分别为3.6%(1/28)和10.0%(3/30),两者相比无统计学差异(P>0.05)。结论:HSP70在鼻咽癌抗放射损伤中可能起重要作用,检测鼻咽癌组织HSP70蛋白表达对预测鼻咽癌放射后癌灶残存可能有重要价值。 展开更多

关键词 鼻咽癌 放疗 残灶 HSP70 HSP27 SP免疫组织化学

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锂盐对中枢神经系统ERK-1/2信号通道活性和Bcl-2家族蛋白表达的影响 被引量：2

9

作者 李建玲 荆照政 +3 位作者 易红 冯雪萍 陈主初 肖志强 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第4期330-334,共5页

目的 :分析长期服用锂盐对中枢神经系统ERK 1/ 2信号传导通道活性以及Bcl 2家族蛋白表达的影响 ,探讨锂盐治疗躁狂抑郁症作用的可能分子机制。方法 :将 40只健康的雄性Wistar大鼠随机均分为锂盐组和对照组。锂盐组大鼠用每公斤含 2 .4g... 目的 :分析长期服用锂盐对中枢神经系统ERK 1/ 2信号传导通道活性以及Bcl 2家族蛋白表达的影响 ,探讨锂盐治疗躁狂抑郁症作用的可能分子机制。方法 :将 40只健康的雄性Wistar大鼠随机均分为锂盐组和对照组。锂盐组大鼠用每公斤含 2 .4g碳酸锂的饲料喂养 ,对照组大鼠用常规饲料喂养 ,4周后取大鼠海马和额叶制备蛋白样本 ,WesternBlotting分析海马和额叶组织MEK ,ERK 1/ 2 ,RSK1,CREB的磷酸化水平 (活化程度 )以及Bcl 2和Bax蛋白的表达水平。结果 :与对照组比较 ,锂盐增强大鼠海马和额叶MEK ,ERK 1/ 2 ,RSK1和CREB的活性 ,上调海马和额叶Bcl 2表达 ,下调海马和额叶Bax表达。结论 :长期服用锂盐激活中枢神经系统ERK 1/ 2信号传导通道 ,调节中枢神经系统Bcl 2家族蛋白表达 ,这些作用可能与锂盐抗躁狂抑郁症的作用有关。 展开更多

关键词 锂盐 中枢神经系统 ERK-1/2 信号通道 活性 BCL-2家族 蛋白表达 影响 双向情感障碍

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中青年女性肥胖与骨密度的关系 被引量：3

10

作者 汤参娥 雷闽湘 +1 位作者 吴静 孙志香 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第3期313-314,共2页

关键词 中青年 女性 肥胖 骨密度 体重指数 骨峰值

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采用定量蛋白质组学技术筛选急性髓系白血病HL-60细胞的甲基化相关基因(英文) 被引量：1

11

作者 汤参娥 谭潭 +7 位作者 肖艳华 阮林 李萃 彭芳 李茂玉 张鹏飞 易红 肖志强 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期641-648,共8页

目的:筛选人急性髓系白血病细胞株HL-60甲基化沉默基因,为揭示白血病的发病机制及防治提供科学依据。方法:应用荧光差异双向凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference gel electro-phoresis,F-2D-DIGE)分离甲基转移酶抑制剂5-... 目的:筛选人急性髓系白血病细胞株HL-60甲基化沉默基因,为揭示白血病的发病机制及防治提供科学依据。方法:应用荧光差异双向凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference gel electro-phoresis,F-2D-DIGE)分离甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2-脱氧胞苷(5-aza-2-dC)处理与未处理的HL-60细胞的总蛋白质,Decyder和PDquest图像分析软件识别差异表达蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术鉴定差异表达蛋白质。结果:建立了5-aza-2-dC处理与未处理的HL-60细胞蛋白质的F-2D-DIGE图谱,图像分析识别了53个差异表达的蛋白质点,质谱分析鉴定了35个差异表达的蛋白质,其中32个蛋白质在5-aza-2-dC处理后的HL-60细胞中表达上调,3个蛋白质表达下调。结论:35个差异表达蛋白可能与甲基化相关,为白血病的表观遗传学研究提供了有价值的信息。 展开更多

关键词 HL-60 甲基化 荧光差异双向凝胶电泳 5-杂氮-2-脱氧胞苷

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幽门螺杆菌改变人肝细胞系HepG2蛋白质表达谱

12

作者 张艳 范学工 +4 位作者 陈仁 肖志强 冯雪萍 田雪飞 陈朝晖 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第7期561-565,共5页

目的研究H.pylori作用后肝细胞系HepG2蛋白质表达谱的改变,通过对差异蛋白质点的鉴定与分析,以探讨H.pylori对肝细胞的病理作用。方法采用体外肝细胞和H.pylori共培养,应用双向凝胶电泳分离H.pylori处理前后细胞总蛋白,筛选出差异表达... 目的研究H.pylori作用后肝细胞系HepG2蛋白质表达谱的改变,通过对差异蛋白质点的鉴定与分析,以探讨H.pylori对肝细胞的病理作用。方法采用体外肝细胞和H.pylori共培养,应用双向凝胶电泳分离H.pylori处理前后细胞总蛋白,筛选出差异表达的蛋白质点,并进行质谱分析鉴定。结果鉴定出7种表达上调的蛋白质点,包括整合素-β1、蛋白激酶C-α、LIM同源盒蛋白Lhx1、真核翻译起始因子2-β亚单位、PINCH蛋白、MAPK激酶3、Ras相关蛋白Rab-37等。这些蛋白质参与了基因表达调控、细胞免疫、细胞生长、信号传导等众多事件。结论H.pylori可能通过介导这些蛋白质的上调而发挥对HepG2细胞的病理作用。这种蛋白质组的差异分析有助于进一步研究H.pylori与人类肝胆疾病的关系。 展开更多

关键词 细胞系HepG2 蛋白质表达谱 幽门螺杆菌 H.pylori 蛋白激酶C-Α 人肝 整合素β-1 MAPK激酶 基因表达调控 病理作用 s相关蛋白 差异表达 分析鉴定 表达上调 结果鉴定 电泳分离 Β亚单位 起始因子 细胞免疫 细胞生长 信号传导

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胆囊收缩素刺激小鼠胰腺腺泡肽链的延伸及其分子机制

13

作者 谢群 汤参娥 +2 位作者 苏涛 张欣 段朝军 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1202-1208,共7页

目的:研究胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)、碳酸胆碱(carbachol,CCh)及血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)体外刺激小鼠胰腺腺泡细胞肽链的延伸及其作用的分子机制。方法:采用3H-亮氨酸掺入法分别测定基础状态及CCK,CCh... 目的:研究胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)、碳酸胆碱(carbachol,CCh)及血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)体外刺激小鼠胰腺腺泡细胞肽链的延伸及其作用的分子机制。方法:采用3H-亮氨酸掺入法分别测定基础状态及CCK,CCh及VIP处理后胰腺腺泡细胞肽链延伸率;Western印迹分析基础状态和上述促分泌素处理后真核细胞延伸因子(eEF2)及其激酶磷酸化水平,进一步用MEK抑制剂(PD98059)、SAPK/P38抑制剂(SB202190)、mTOR抑制剂(rapamycin)处理细胞,分别阻断MEK,SAPK/P38和mTOR3种信号通路和磷酸酶抑制剂花萼海绵诱癌素A预处理再用CCK处理胰腺腺泡,分析eEF2及其激酶eEF2K磷酸化水平。结果:体外除VIP外,其他2种促分泌素均能诱导胰腺腺泡细胞肽链的延伸。CCK和CCh处理后真核细胞延伸因子eEF2Thr56去磷酸化及其激酶Ser366磷酸化水平增加,PD98059,SB202190和rapamycin特异性抑制MEK,SAPK/P38和mTOR信号通路以及磷酸酶抑制剂花萼海绵诱癌素A均能部分性逆转CCK诱导的eEF2去磷酸化。结论:CCK可通过MEK,SAPK/P38和mTOR信号通路诱导真核细胞延伸因子eEF2Thr56去磷酸化,参与小鼠胰腺腺泡细胞肽链的延伸调节。 展开更多

关键词 胆囊收缩素 肽链的延伸 胰腺腺泡

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鼻咽癌细胞中p53相互作用蛋白质的分离和鉴定 被引量：7

14

作者 胡巍 肖志强 +8 位作者 陈主初 李建玲 张鹏飞 冯雪萍 易红 余艳辉 唐新科 刘清萍 梁宋平 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第7期628-634,共7页

鼻咽癌中p5 3基因突变罕见 ,但绝大部分鼻咽癌中存在p5 3蛋白过表达 /聚集且功能失活 .然而 ,到目前为止p5 3蛋白失活的机制仍然不清楚 .为揭示鼻咽癌中p5 3蛋白功能失活的机制 ,采用免疫共沉淀技术分别富集鼻咽癌细胞系HNE1和HNE2的p5 ... 鼻咽癌中p5 3基因突变罕见 ,但绝大部分鼻咽癌中存在p5 3蛋白过表达 /聚集且功能失活 .然而 ,到目前为止p5 3蛋白失活的机制仍然不清楚 .为揭示鼻咽癌中p5 3蛋白功能失活的机制 ,采用免疫共沉淀技术分别富集鼻咽癌细胞系HNE1和HNE2的p5 3结合蛋白 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)对免疫沉淀复合物进行分离 ,从胶中切取p5 3结合蛋白条带 ,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱 (LC ESI MS/MS)分析 ,得到相应的肽序列标签 (peptidesequencetags ,PST) ,通过搜索数据库在鼻咽癌细胞系中鉴定了 9个p5 3结合蛋白 .分别是热休克蛋白 70 (HSP70 )家族成员GRP 78和GRP 75、HSP90家族成员GRP 94、核纤层蛋白A/C (LaminA/C)、α actinin 4、Ezrin/Cytovillin、DNA复制准许因子 /MCM3蛋白 (DNAreplicationlicensingfactor/minichromosomemaintenance 3protein ,MCM3)、CD98/ 4F2heavychain和蛋白激酶C (PKC) .并用免疫共沉淀和蛋白质印迹分析技术对HNE1细胞蛋白条带 3鉴定的p5 3相互作用蛋白之一HSP78进行了验证 .首次在鼻咽癌细胞中鉴定了 9个p5 3结合蛋白 ,为阐明鼻咽癌中p5 3蛋白聚集及失活的机制提供了重要依据和线索 . 展开更多

关键词 P53 鼻咽癌 免疫共沉淀 液相色谱-电喷雾串联质谱 相互作用蛋白 蛋白质印迹

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肝素联合肝干细胞经脾移植治疗SD大鼠急性肝损伤 被引量：3

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作者 黄增辉 曾珊 +2 位作者 欧阳淼 董娟娟 申竑 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期411-416,共6页

目的:探讨肝素联合肝干细胞(WB-F344细胞)经脾移植对大鼠急性肝损伤的治疗作用。方法:构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体,体外培养、扩增WB-F344细胞,携带GFP基因的慢病毒转染WB-F344细胞。通过腹腔注射四氯化碳(CC l4)建立大... 目的:探讨肝素联合肝干细胞(WB-F344细胞)经脾移植对大鼠急性肝损伤的治疗作用。方法:构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体,体外培养、扩增WB-F344细胞,携带GFP基因的慢病毒转染WB-F344细胞。通过腹腔注射四氯化碳(CC l4)建立大鼠急性肝损伤模型,造模后24 h分别将1 mL含2×107个肝干细胞和8μL肝素的悬液经脾注入大鼠体内。移植术后1 d获取肝脏和脾脏标本进行荧光检测,分别于术后3,7,14和28 d尾静脉抽血送肝功能检测,获取肝脏组织行病理学检测。结果:经慢病毒转染3 d后,WB-F344细胞表达GFP;GFP阳性细胞经脾移植1 d后到达肝脏;实验组大鼠的肝功能和肝脏损伤修复明显优于对照组(P<0.05)。结论:经脾联合肝素和WB-F344细胞移植对CC l4所导致的大鼠急性肝损伤有明显的治疗作用。 展开更多

关键词 肝素 肝干细胞 经脾移植 急性肝损伤

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骨形态发生蛋白-4对肝干细胞增殖与分化的影响 被引量：2

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作者 董娟娟 曾珊 +3 位作者 欧阳淼 黄增辉 Yuewen Gong 申竑 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期539-545,共7页

目的:探讨骨形态发生蛋白-4(BMP-4)对大鼠肝干细胞系WB-F344的增殖及分化的影响。方法:采用50 ng/mL的基因重组BMP-4作用于WB-F344细胞,以BMP-4拮抗剂Noggin(200 ng/mL)阻断BMP-4的作用为对照。在实验不同时间点,通过四甲基偶氮唑盐(MTT... 目的:探讨骨形态发生蛋白-4(BMP-4)对大鼠肝干细胞系WB-F344的增殖及分化的影响。方法:采用50 ng/mL的基因重组BMP-4作用于WB-F344细胞,以BMP-4拮抗剂Noggin(200 ng/mL)阻断BMP-4的作用为对照。在实验不同时间点,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测BMP-4对WB-F344增殖的影响,透射电镜下观察细胞的超微结构特征,RT-PCR检测各试验组中WB-F344细胞可能分化表型特异性分子标志物的mRNA表达。结果:细胞增殖实验显示:在不同作用时间点,BMP-4干预组的细胞吸光值均高于Noggin处理组和空白对照组。透射电镜下可观察到BMP-4干预后的WB-F344细胞具有分化良好的上皮细胞的超微结构特征。RT-PCR显示BMP-4诱导WB-F344分化后,肝干细胞的肝细胞特异性分子标志物的mRNA显著表达。结论:BMP-4可促进肝干细胞WB-F344的增殖,并诱导其向肝细胞定向分化。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白-4 肝干细胞 增殖 分化

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