Pristane诱导小鼠系统性红班狼疮动物模型的研究 被引量：5

1

作者 李金枝 丁隽 +6 位作者 Merim Boukherouba 李昊文 张勇 沈浩 陈学进 王树军 王颖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期119-122,共4页

目的:建立pristane诱导的系统性红斑狼疮(SLE)小鼠模型,并对该小鼠模型的发病机制进行初步的探讨。方法:6-8周龄雌性BALB/c小鼠单次腹腔注射pristane0.5mL,对照组单次腹腔注射PBS0.5mL,注射前及注射后每2周行流式细胞术(FCM)检测外周血... 目的:建立pristane诱导的系统性红斑狼疮(SLE)小鼠模型,并对该小鼠模型的发病机制进行初步的探讨。方法:6-8周龄雌性BALB/c小鼠单次腹腔注射pristane0.5mL,对照组单次腹腔注射PBS0.5mL,注射前及注射后每2周行流式细胞术(FCM)检测外周血中IFN-α分泌细胞(CD11b+Ly6Chigh)的比例及细胞活化状态B220+Aβ1dhigh),ELISA检测血清中自身抗体(anti-dsDNA,anti-smRNP,anti-ribosomalP0)的含量。至6个月处死动物,FCM检测腹腔细胞中IFN-α分泌细胞(CD11b+Ly6Chigh)的比例和脾脏中细胞的活化(B220,Aβ1d),采用直接免疫荧光法标记小鼠肾脏免疫球蛋白复合物及H&E染色评估小鼠肾脏免疫复合物的沉积及损伤情况。结果:小鼠腹腔注射pristane第2个月开始血清总IgG升高,第3个月起出现自身抗体阳性,到个6月时达到最高,并维持高水平至被处死;Pristane处理6个月后,Pristane处理组小鼠出现关节炎症状,肾脏免疫复合物的大量沉积和明显肾脏损伤。Pristane注射2周起,小鼠外周血中IFN-α分泌细胞(CD11b+Ly6Chigh)的比例明显高于PBS注射组,小鼠腹腔细胞中IFN-α分泌细胞的比例也明显升高;同时外周血和脾细胞中B细胞表面MHCII分子Aβ1d的平均荧光强度(MFI)均高于对照组,表明pristane处理组小鼠中B细胞发生了显著活化。结论:BALB/c小鼠腹腔注射pristane可诱导构建小鼠SLE模型,其SLE的发病可能与IFN-α的持续分泌导致B细胞的异常活化有关。该模型的建立为进一步研究SLE的发病机制提供了良好的动物模型。 展开更多

关键词 系统性红斑狼疮 小鼠模型 IFN-Α B细胞活化 自身抗体

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山羊卵泡卵母细胞的采集与体外成熟研究 被引量：4

2

作者 田允波 许丹宁 +1 位作者 黄运茂 陈学进 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期148-150,共3页

为了建立针对山羊卵母细胞的理想体外成熟培养体系,研究了山羊卵泡卵母细胞的采集方法和采集获得的可用卵母细胞的体外成熟培养条件,结果表明:切割法能够获得较多的可用卵母细胞,且明显增加了用于体外成熟的卵母细胞数;卵母细胞在37.0... 为了建立针对山羊卵母细胞的理想体外成熟培养体系,研究了山羊卵泡卵母细胞的采集方法和采集获得的可用卵母细胞的体外成熟培养条件,结果表明:切割法能够获得较多的可用卵母细胞,且明显增加了用于体外成熟的卵母细胞数;卵母细胞在37.0℃下培养的成熟率显著低于在38.5℃、39.0℃下培养的成熟率(P<0.05);卵母细胞培养18 h和培养20h的成熟率极显著低于培养24 h和培养26 h的成熟率(P<0.01);此外,卵母细胞体外成熟培养时,培养液中的胎牛血清添加量以10%～15%为宜。 展开更多

关键词 山羊 卵泡卵母细胞 采集 体外成熟培养

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应用RNA干扰技术体外抑制兔成纤维细胞HGPRT的表达及其核移植研究(英文) 被引量：3

3

作者 郭毅 张传山 +6 位作者 李善刚 李锋 谷瑞环 邢凤英 李垚 姚刚 陈学进 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第7期872-879,共8页

次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(hypoxanthine guaninephos phoribosyltransferase,HGPRT)的功能缺失与痛风、肾结石和雷纳综合症(Lesch-Nyhan Syndrome)等疾病相关.制作HGPRT基因表达降低的模式动物,将有利于人们对这种疾病的发病机... 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(hypoxanthine guaninephos phoribosyltransferase,HGPRT)的功能缺失与痛风、肾结石和雷纳综合症(Lesch-Nyhan Syndrome)等疾病相关.制作HGPRT基因表达降低的模式动物,将有利于人们对这种疾病的发病机理和治疗做进一步的研究.构建了针对HGPRT基因表达的shRNA干扰载体,并将质粒转染兔成纤维细胞,获得携带该干扰片段的转基因细胞系,经PCR鉴定转基因成纤维细胞克隆阳性率为83.3%.RT-PCR及Western blot检测结果表明转基因干扰成纤维细胞系HGPRT mRNA和蛋白质表达量明显降低.最后,以转基因成纤维细胞进行核移植,囊胚率为27.8%,与正常来源的成纤维细胞囊胚率相比较差异不显著.说明,通过RNAi可稳定干扰兔成纤维细胞HGPRT基因的表达,为进一步通过核移植技术建立HGPRT RNAi转基因兔模型创造条件. 展开更多

关键词 RNA干扰 兔成纤维体细胞 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT) 核移植

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改良线栓法大鼠大脑中动脉阻塞模型的建立 被引量：14

4

作者 孙宇 严国锋 +1 位作者 姜虹 朱也森 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第8期8-10,I0003,共4页

目的对大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型进行改良,通过比较再灌注24 h时大鼠神经功能评分、梗死率、模型制作时间、成功率和死亡率等指标评价改良线栓法大鼠MCAO再灌注模型的有效性。方法12只SD大鼠随机分为对照和模型两组,对照组采... 目的对大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型进行改良,通过比较再灌注24 h时大鼠神经功能评分、梗死率、模型制作时间、成功率和死亡率等指标评价改良线栓法大鼠MCAO再灌注模型的有效性。方法12只SD大鼠随机分为对照和模型两组,对照组采用分离结扎翼腭动脉,从颈外动脉插入线栓至大脑中动脉。模型组采用不分离结扎翼腭动脉,从颈总动脉分叉处插入线栓至大脑中动脉。阻断大脑中动脉血供2 h后将线栓拔出实现再灌注。于再灌注24 h时观察脑组织组织病理学改变,计算比较两组大鼠神经功能评分、模型制作时间、模型成功率和死亡率以及鼠脑切片TTC染色测量脑梗死率。结果两组MCAO模型在再灌注24 h后大鼠神经功能评分、梗死率、模型成功率和死亡率等方面没有显著差异;模型组的模型制作时间显著少于对照组(P<0.05)。结论采用不分离结扎翼腭动脉,由颈总动脉插入线栓的改良线栓法是稳定和可靠的MCAO造模方法。 展开更多

关键词 中动脉阻塞再灌注 模型 动物

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促性腺激素对山羊卵母细胞体外成熟的影响 被引量：2

5

作者 许丹宁 田允波 +1 位作者 黄运茂 陈学进 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第7期6-8,共3页

为了建立针对山羊卵母细胞的理想体外成熟培养体系,本试验研究了在成熟培养液中添加不同浓度的促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH)、促黄体素(luteinizing hormone,LH),不同来源的FSH+LH对山羊卵母细胞体外培养成熟效果的影响... 为了建立针对山羊卵母细胞的理想体外成熟培养体系,本试验研究了在成熟培养液中添加不同浓度的促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH)、促黄体素(luteinizing hormone,LH),不同来源的FSH+LH对山羊卵母细胞体外培养成熟效果的影响。结果表明,采用TCM199添加10%FCS,1～2mg/L17β-E2,10mmol/LHepes,0.055mg/mL丙酮酸钠,2.2mg/mL NaHCO3,500μg/mL链霉素,500μg/mL青霉素,10mg/L FSH及20mg/LLH的培养体系,有利于山羊卵母细胞的体外成熟;进口的和国产FSH和LH对山羊卵母细胞成熟有相同促进效果。 展开更多

关键词 山羊 卵母细胞 体外成熟培养 促卵泡素 促黄体素

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成体兔转基因成纤维细胞的克隆分离及其核移植研究 被引量：1

6

作者 张传山 郭毅 +7 位作者 谷瑞环 李善刚 李峰 王伟 丁雷 邢凤英 姚刚 陈学进 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1186-1192,共7页

哺乳动物体细胞核移植及其与转基因技术的结合为转基因动物的研究提供了新的思路和方法.然而,单个转基因细胞克隆的分离培养一直比较困难,很大程度上限制了转基因动物的研制.将pRNAT-U6.1/Neo质粒转染成体兔成纤维细胞,通过24孔细胞培... 哺乳动物体细胞核移植及其与转基因技术的结合为转基因动物的研究提供了新的思路和方法.然而,单个转基因细胞克隆的分离培养一直比较困难,很大程度上限制了转基因动物的研制.将pRNAT-U6.1/Neo质粒转染成体兔成纤维细胞,通过24孔细胞培养板分离培养法获得来源于单个转基因成纤维细胞克隆.由于单个成纤维细胞克隆在新鲜DMEM培养液中生长比较困难或缓慢,采用由DMEM/F12制备的条件性培养液进行筛选.以转基因成纤维细胞为供体细胞进行核移植,囊胚率为23.5%,与来源于成体兔正常成纤维细胞相比较差异不显著.并且利用PCR或多重PCR方法鉴定筛选的转基因细胞克隆及其核移植胚胎中整合的NeoR基因和常染色体β-actinDNA.为转基因哺乳动物细胞的分离培养和核移植胚胎的鉴定提供可靠的方法,缩短了转基因动物的研制周期,降低生产成本,同时为进一步通过核移植技术获得转基因克隆兔提供了条件. 展开更多

关键词 成体兔 细胞分离 多重PCR 核移植 转基因检测

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慢性不完全性睡眠剥夺对幼鼠脂肪细胞因子表达的影响 被引量：1

7

作者 陈喆 杨倩 +6 位作者 陈婷 陈炉 张泽彧 严国锋 戴斐 郑志杰 李生慧 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期614-617,共4页

目的探索慢性不完全性睡眠剥夺对幼鼠循环脂肪细胞因子表达的影响。方法 27只3周龄雄性SD大鼠,随机分为睡眠剥夺组(剥夺组)、睡眠剥夺恢复组(恢复组)、对照组。采用旋转滚轮法建立睡眠剥夺模型。采用酶联免疫吸附法检测血清瘦素、脂联... 目的探索慢性不完全性睡眠剥夺对幼鼠循环脂肪细胞因子表达的影响。方法 27只3周龄雄性SD大鼠,随机分为睡眠剥夺组(剥夺组)、睡眠剥夺恢复组(恢复组)、对照组。采用旋转滚轮法建立睡眠剥夺模型。采用酶联免疫吸附法检测血清瘦素、脂联素、视黄醇结合蛋白4(RBP-4)及内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)的表达水平。采用李氏指数评价幼鼠体质指数。结果与对照组相比,剥夺组李氏指数较大(P<0.05);RBP-4在剥夺组和恢复组的表达水平显著降低(P<0.1);未发现瘦素、脂联素、Vaspin在各组间具有显著性差异。结论慢性睡眠剥夺可引起幼鼠肥胖程度增加、RBP-4在血清中的表达水平降低;且随着睡眠的恢复,这些影响没有得到显著改善。 展开更多

关键词 幼鼠 肥胖 慢性不完全睡眠剥夺 脂肪细胞因子

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味觉受体偶联G蛋白Gγ13和α-gustducin在小鼠雌性生殖系统的表达 被引量：1

8

作者 王雪 蒋满喜 +6 位作者 马政文 王美珊 孔彭成 唐澜 陈学进 李和平 李峰 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第4期39-46,共8页

为了检测味觉受体偶联G蛋白Gγ13和α-gustducin基因在雌性生殖系统的表达,探讨2种G蛋白在雌性生殖机能中可能发挥的作用及其在生殖医学方面的潜在应用。用RT-PCR和超敏ABC免疫组化方法,检测Gγ13和α-gustducin在6周龄间情期小鼠卵巢... 为了检测味觉受体偶联G蛋白Gγ13和α-gustducin基因在雌性生殖系统的表达,探讨2种G蛋白在雌性生殖机能中可能发挥的作用及其在生殖医学方面的潜在应用。用RT-PCR和超敏ABC免疫组化方法,检测Gγ13和α-gustducin在6周龄间情期小鼠卵巢、子宫、输卵管组织中的基因表达和蛋白分布。结果表明,在小鼠雌性生殖系统中均发现Gγ13和α-gustducin基因的转录子,免疫组化研究进一步证实了Gγ13和α-gustducin确实在小鼠卵巢颗粒黄体细胞、卵母细胞、子宫外膜、子宫内膜腺体、子宫肌层、输卵管浆膜和输卵管黏膜处存在阳性分布。本试验表明味觉受体偶联G蛋白Gγ13和α-gustducin在雌性小鼠生殖系统中广泛分布,预示着雌性生殖系统也可能对味觉物质进行感知,为进一步研究味觉受体在雌性生理机能中可能发挥的调控功能奠定初步的研究基础,同时也为味觉的细胞生物学研究提供新方向。 展开更多

关键词 Gγ13 α—gustducin 卵巢 子宫 输卵管 G蛋白

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吲哒帕胺联合依那普利对自发性高血压大鼠的降压效果 被引量：1

9

作者 袁春萍 严国锋 潘振业 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期197-199,共3页

目的研究吲哒帕胺联合依那普利对自发性高血压大鼠(SHR)的降压效果。方法40只SHR随机分成四组(n=10):空白对照组、吲哒帕胺组、依那普利组、吲哒帕胺+依那普利组。以灌胃方式分别给予不同剂量药物。观察不同剂量及药物处理状况下,SHR体... 目的研究吲哒帕胺联合依那普利对自发性高血压大鼠(SHR)的降压效果。方法40只SHR随机分成四组(n=10):空白对照组、吲哒帕胺组、依那普利组、吲哒帕胺+依那普利组。以灌胃方式分别给予不同剂量药物。观察不同剂量及药物处理状况下,SHR体质量、心率和血压的变化。结果给药期间及给药后,各药物组不同剂量给药对SHR体质量的增长和心率均无明显影响。吲哒帕胺+依那普利组SHR经不同剂量给药后,血压均较给药前显著降低(P均<0.05),其降压程度与单一药物组相比效果更明显(P<0.05)。结论吲哒帕胺联合依那普利比单一降压药更能显著降低SHR的血压。 展开更多

关键词 高血压 吲哒帕胺 依那普利 自发性高血压大鼠

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线粒体靶向抗氧化剂Mitoquinone对湖羊冻精损伤的保护作用 被引量：6

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作者 吕松洁 付丽 +5 位作者 范文华 张树山 吴彩凤 徐皆欢 戴建军 张德福 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2554-2559,共6页

旨在研究线粒体靶向抗氧化剂Mitoquinone(MitoQ)对湖羊冷冻精子的保护作用。本研究选择健康的成年种公羊精液,将其分成6等份。不含MitoQ者设为对照组(M0),M1、M2、M3、M4和M5组分别为含50、100、150、200和400 nmol·L^-1 MitoQ的... 旨在研究线粒体靶向抗氧化剂Mitoquinone(MitoQ)对湖羊冷冻精子的保护作用。本研究选择健康的成年种公羊精液,将其分成6等份。不含MitoQ者设为对照组(M0),M1、M2、M3、M4和M5组分别为含50、100、150、200和400 nmol·L^-1 MitoQ的添加组。精子经冷冻解冻后检测活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性等精子质量指标,同时进行超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)等抗氧化指标检测。结果表明,当MitoQ添加的浓度为150 nmol·L^-1(M3组)时,其解冻后精子的活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高,分别达55.00%、52.34%、48.32%、54.51%和51.28%,其线粒体活性显著高于其他组(P<0.05)。M3组解冻后精子的SOD和GSH-Px值分别为203.90 U·mL^-1和123.62 U·L^-1,两者均显著高于M0、M1、M4和M5组(P<0.05);M3组解冻后精子的ROS和MDA值分别为298.34 U·mL^-1和4.99 nmol·L^-1,显著低于其他组(P<0.05)。当MitoQ的添加浓度提高至200(M4组)和400 nmol·L^-1(M5组)时,冻精质量开始下降,并表现为对精子的氧化损伤。在湖羊冷冻精液中,添加150 nmol·L^-1的MitoQ可显著降低精子氧化损伤,提高冻精品质,当MitoQ的添加浓度超过200 nmol·L^-1时对冷冻精子没有保护作用。 展开更多

关键词 冻精 湖羊 MITOQ 抗氧化

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血管内介入技术制作兔局灶性脑缺血模型

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作者 陈丽 戴炯 +5 位作者 严国锋 沈加林 邱永明 许建荣 陈学进 江基尧 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期585-588,593,共5页

目的建立一种微创、可控性强的兔局灶性脑缺血再灌注模型。方法健康成年新西兰家兔66只,随机分为模型组(n=34)和假手术组(n=32),采用血管内介入技术将微导丝由股动脉送入栓塞右侧大脑中动脉,2 h后拔除微导丝建立模型,而假手术组微导丝... 目的建立一种微创、可控性强的兔局灶性脑缺血再灌注模型。方法健康成年新西兰家兔66只,随机分为模型组(n=34)和假手术组(n=32),采用血管内介入技术将微导丝由股动脉送入栓塞右侧大脑中动脉,2 h后拔除微导丝建立模型,而假手术组微导丝进入右侧大脑中动脉后即退出。临床神经功能检查家兔左侧肢体对疼痛刺激的反应、蹲立时的姿势和行走时的步态;分别于术后6 h、12 h和2周处死模型组和假手术组各24只家兔,取脑组织并行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,观察梗死灶情况;术后2周处死剩余家兔,取脑组织并行苏木精-伊红(HE)染色,观察脑组织病理学变化。结果在模型组,临床神经功能检查显示家兔出现不同程度的偏瘫症状,建模成功率为94.12%;TTC染色证实术后6 h存在脑梗死灶,12 h后脑梗死灶趋于稳定;术后2周脑组织HE染色显示右侧额顶叶脑组织缺血性改变。假手术组家兔未出现上述症状及病变。结论采用血管内介入技术制作兔局灶性脑缺血再灌注模型,该方法微创、可控性强,模型稳定可靠,是用于研究局灶性脑缺血较为理想的动物模型。 展开更多

关键词 血管内介入技术 脑缺血再灌注 动物模型 兔

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利用CRISPR-Cas9敲除Tyr基因制作白化C57BL/6N小鼠 被引量：2

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作者 常秋荣 刘丽丽 +5 位作者 王会阳 付丽 邢凤英 李垚 陈学进 李善刚 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期493-500,共8页

目的 为了获得白化的C57BL/6N小鼠,扩大其在皮肤移植和胚胎干细胞方面研究中的应用。方法 通过体外设计合成Cas9 mRNA和系列sgRNA(single guide RNAs),注射到小鼠的受精卵内,破坏合成C57BL/6N小鼠黑色素生成必须的酪氨酸酶(tyrosinase,T... 目的 为了获得白化的C57BL/6N小鼠,扩大其在皮肤移植和胚胎干细胞方面研究中的应用。方法 通过体外设计合成Cas9 mRNA和系列sgRNA(single guide RNAs),注射到小鼠的受精卵内,破坏合成C57BL/6N小鼠黑色素生成必须的酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)基因序列的第1和第2外显子,产生基因突变,获得F0代白化的C57BL/6N小鼠,然后经过重复回交和自交,形成白化C57BL/6N小鼠近交系。结果 经过注射两对sgRNA,成功的获得了F0代的白化小鼠,在Tyr基因的第1和第2外显子中均发生了缺失突变,小鼠可以将突变基因传递给后代,并在其后代中产生了纯合的白色C57BL/6N小鼠,最后对白化小鼠突变类型进行了分析。结论 通过CRISPR-Cas9技术破坏了小鼠Tyr基因,成功地建立了白化C57BL/6N小鼠近交系,为将来的嵌合体制作、组织移植提供了新的研究工具。 展开更多

关键词 白化 Tyr 基因敲除 CRISPR-Cas9 C57BL/6N 小鼠

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