猪RIG-1、TLR-9、IRF-3和IRF-7mRNA TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：3

1

作者 王晓玲 蔺文成 +1 位作者 刘芹防 崔尚金 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期953-956,共4页

为建立定量检测猪Ⅰ型干扰素信号传导因子mRNA的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究针对猪Ⅰ型干扰素信号传导因子视黄酸诱导基因-1(RIG-1)、Toll样受体-9(TLR-9)、干扰素调节因子-3(IRF-3)和干扰素调节因子-7(IRF-7)的基因序列设计了特... 为建立定量检测猪Ⅰ型干扰素信号传导因子mRNA的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究针对猪Ⅰ型干扰素信号传导因子视黄酸诱导基因-1(RIG-1)、Toll样受体-9(TLR-9)、干扰素调节因子-3(IRF-3)和干扰素调节因子-7(IRF-7)的基因序列设计了特异性的引物和探针,分别构建了各自的阳性标准重组质粒,同时选择β-actin作为管家基因,建立了检测猪RIG-1、TLR-9、IRF-3、IRF-7的Taq Man荧光定量PCR方法。结果表明:所建立的检测方法荧光定量PCR扩增均无非特异性产物产生;检测下限均达1.0×101 copies/μL;批内及批间变异系数均小于3%。利用该方法对猪细小病毒(PPV)感染48 h的ST细胞中RIG-1、TLR-9、IRF-3和IRF-7mRNA的表达水平进行了检测。结果表明,RIG-1、IRF-3和IRF-7转录水平呈现上调趋势,而TLR-9转录水平呈现下调趋势。本研究建立的TaqMan荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,适于猪Ⅰ型干扰素信号传导因子的定量检测分析。 展开更多

关键词 Ⅰ型干扰素 信号传导因子 荧光定量PCR 检测

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ISG15蛋白促进猪源牛病毒性腹泻病毒2型对Ⅰ型IFN表达抑制的研究 被引量：2

2

作者 陶洁 廖金虎 +2 位作者 张倩 张信军 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期716-720,共5页

为研究ISG15蛋白与猪源牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)相互作用关系,本研究通过RT-PCR扩增ISG15基因并克隆于真核表达载体p EC129中,转染于MDBK细胞,经G418筛选获得稳定表达ISG15蛋白的细胞系E53。将猪源BVDV-2分别感染E53细胞和MDBK细胞... 为研究ISG15蛋白与猪源牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)相互作用关系,本研究通过RT-PCR扩增ISG15基因并克隆于真核表达载体p EC129中,转染于MDBK细胞,经G418筛选获得稳定表达ISG15蛋白的细胞系E53。将猪源BVDV-2分别感染E53细胞和MDBK细胞,收集不同时间点的细胞培养液并测定病毒的TCID50。结果显示ISG15蛋白对猪源BVDV-2复制具有明显抑制作用。利用荧光定量PCR检测猪源BVDV-2感染E53细胞内ISG15基因表达的变化,结果表明,病毒感染的E53细胞内ISG15基因的表达量明显高于对照组,表明猪源BVDV-2感染能够显著提高ISG15基因的表达。此外,利用荧光定量PCR检测经poly I:C处理后感染SH-28株的MDBK和E53细胞内IFN-α和IFN-β表达情况。结果表明MDBK细胞内IFN-α和IFN-β表达量分别下降约2.49倍和3.31倍,而在E53细胞中,IFN-α和IFN-β的表达量分别下降约6.29倍和9.71倍,表明过量表达ISG15蛋白能够促进猪源BVDV-2对Ⅰ型IFN的抑制作用。本实验为进一步研究猪源BVDV-2逃逸细胞先天免疫机制奠定了基础。 展开更多

关键词 iSG15蛋白 猪源BVDV-2 i型干扰素

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Ⅰ型干扰素通路IRF5基因多态性与系统性红斑狼疮的关联性研究 被引量：5

3

作者 李红梅 刘水和 +1 位作者 叶震璇 张华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期574-578,583,共6页

目的:研究Ⅰ型干扰素通路IRF5基因rs2004640、rs10954213、rs4728142位点的单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮易感性之间的关联。方法:运用Taqman荧光定量PCR检测218例SLE患者及200例健康对照者IRF5基因rs10954213、rs4728142、rs2004640... 目的:研究Ⅰ型干扰素通路IRF5基因rs2004640、rs10954213、rs4728142位点的单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮易感性之间的关联。方法:运用Taqman荧光定量PCR检测218例SLE患者及200例健康对照者IRF5基因rs10954213、rs4728142、rs2004640位点基因型,计算等位基因频率,分析其与SLE的关系;用IIF法和LIA法测定218例SLE患者血浆中抗核抗体、抗双链DNA抗体和特异性抗体,并分析其与IRF5 rs2004640、rs10954213位点基因频率的关系。结果:IRF5 rs2004640位点等位基因T频率分布SLE组高于对照组,差异有统计学意义(χ~2=6.809,P=0.009),基因型GG/TT分布在两组差异有统计学意义(χ~2=5.111,P=0.024,);IRF5 rs10954213位点等位基因G频率分布在SLE组高于对照组,差异有统计学意义(χ~2=4.332,P=0.037);基因型GG在两组的分布差异有统计学意义(χ~2=5.805,P=0.016);IRF5 rs4728142位点等位基因频率及基因型,两组比较差异无统计学意义。SLE组IRF5 rs2004640位点等位基因T和抗Sm抗体、抗Rib-P抗体相关(χ~2=8.512、4.057;P=0.005、0.048)。218例SLE患者中活动期患者特异性抗体主要以Anti-NUC、Anti-His、Anti-Rib-P为主,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:IRF5基因rs2004640、rs10954213基因位点单核苷酸多态性与SLE易感性相关,rs4728142基因位点单核苷酸多态与SLE易感性不相关;IRF5 rs2004640 T等位基因和抗Sm抗体、Anti-Rib-P抗体相关,SLE活动期患者特异性抗体主要以抗ds-DNA抗体、抗NUC抗体、抗His抗体、抗Rib-P抗体为主。 展开更多

关键词 SLE Ⅰ型干扰素通路 干扰素调节因子 基因多态性 抗核抗体

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大黄鱼(Larimichthys crocea)Ⅰ型干扰素基因的特征与表达分析 被引量：9

4

作者 李婵 姚翠鸾 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期499-506,共8页

采用RT-PCR和RACE-PCR技术克隆了大黄鱼(Larimichthys crocea)Ⅰ型干扰素基因全长cDNA序列及其基因组序列,并利用荧光定量PCR技术研究了该基因在大黄鱼不同组织中的表达谱,以及副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、LPS、polyI:C刺激... 采用RT-PCR和RACE-PCR技术克隆了大黄鱼(Larimichthys crocea)Ⅰ型干扰素基因全长cDNA序列及其基因组序列,并利用荧光定量PCR技术研究了该基因在大黄鱼不同组织中的表达谱,以及副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、LPS、polyI:C刺激后大黄鱼脾脏、肝脏和头肾组织中该基因在转录水平的表达变化。结果表明,大黄鱼Ⅰ型IFN基因全长cDNA为878bp,开放阅读框558bp,编码185个氨基酸。推测的大黄鱼Ⅰ型IFN氨基酸序列N端含有20个氨基酸的信号肽,其后包含一个保守的IFabd结构域。大黄鱼Ⅰ型IFN基因包含5个外显子,4个内含子,在大多数组织和细胞中都有表达,其中在血细胞中表达量最高,肌肉中表达量最低。PolyI:C刺激可诱导大黄鱼Ⅰ型干扰素基因在脾脏、头肾和肝脏中的表达量显著上调;LPS刺激可诱导大黄鱼Ⅰ型干扰素基因在脾脏和肝脏中的表达量显著上调;灭活的副溶血弧菌可诱导大黄鱼Ⅰ型干扰素基因在头肾和肝脏中的表达量显著上调。 展开更多

关键词 大黄鱼 Ⅰ型干扰素 结构特征 免疫反应

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猪流行性腹泻病毒感染对猪小肠上皮细胞I型干扰素产生通路的影响 被引量：3

5

作者 丁芳艺 宋海鑫 +5 位作者 梁荣 苗晋锋 费荣梅 刘永杰 余祖功 张金秋 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第1期99-105,共7页

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是严重危害仔猪肠道健康的病原之一。用病毒感染复数(MOI)=1.0的PEDV感染猪小肠上皮细胞,通过间接免疫荧光试验,证实PEDV能在猪小肠上皮细胞中增殖。通过实时荧光定量PCR(RT-qP... 猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是严重危害仔猪肠道健康的病原之一。用病毒感染复数(MOI)=1.0的PEDV感染猪小肠上皮细胞,通过间接免疫荧光试验,证实PEDV能在猪小肠上皮细胞中增殖。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测,发现Toll样受体3(TLR3)编码基因、视黄醇诱导基因I/黑色素瘤分化相关基因5(RIG-I/MDA5)的mRNA表达水平分别从感染后2 h、4 h开始显著升高(P<0.05),分别在感染后12 h、24 h达到最高值;线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)编码基因的mRNA相对表达量从感染后6 h开始显著升高(P<0.05),随后基本保持不变。下游接头蛋白质β干扰素TIR结构域衔接蛋白质(TRIF)、肿瘤坏死因子相关因子3(TRAF3)、IκB激酶ε(IKK-ε)和TANK结合激酶1(TBK1)编码基因的mRNA相对表达量在感染后4 h出现显著上升(P<0.05),随后IKK-ε编码基因的mRNA相对表达量在感染后8 h达到最高值,TRIF、TRAF3和TBK1编码基因的mRNA相对表达量均在感染后12 h达到最高值。干扰素调节因子3(IRF3)编码基因的mRNA相对表达量在感染早期无显著变化,在感染后24 h达到最高值(P<0.05)。与对照组相比,PEDV感染无法诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)IFN-β编码基因的mRNA相对表达量显著升高,但能有效抑制Poly(I:C)(聚肌胞苷酸)诱导的IFN-β产生。结果表明,PEDV能够在感染早期激活TLRs、RLRs介导的I型IFN产生通路中相关受体及接头蛋白质的基因表达,但最终能抑制干扰素产生,并能在猪小肠上皮细胞中有效增殖。 展开更多

关键词 天然免疫 猪流行性腹泻病毒 猪小肠上皮细胞 i型干扰素

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敲低肝癌细胞STAT3抑制IFN1诱导的HepG2肝癌细胞增殖和迁移 被引量：2

6

作者 李潇芳 王玉琦 +5 位作者 闫奔 房佩佩 马超 徐宁 付晓燕 梁淑娟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期115-122,共8页

目的筛选并制备信号转导子与转录激活子3短发夹RNA(STAT3 shRNA)慢病毒,感染Hep G2肝癌细胞抑制其STAT3表达,观察对1型干扰素(IFN1)诱导的肝癌细胞增殖和迁移的影响及机制。方法设计并合成4段人STAT3基因的干扰序列(STAT3 shRNA 1~STAT3... 目的筛选并制备信号转导子与转录激活子3短发夹RNA(STAT3 shRNA)慢病毒,感染Hep G2肝癌细胞抑制其STAT3表达,观察对1型干扰素(IFN1)诱导的肝癌细胞增殖和迁移的影响及机制。方法设计并合成4段人STAT3基因的干扰序列(STAT3 shRNA 1~STAT3 shRNA 4)以及对照序列(Ctrl shRNA),与p LKO.1-sp6-pgk-GFP连接构建慢病毒表达载体,随后与骨架质粒ps PAX2、p MD2.G共转染HEK293T细胞制备慢病毒并感染Hep G2细胞。Western blot法检测STAT3的蛋白水平,筛选有效序列。敲低STAT3水平后,CCK-8法检测Hep G2细胞的增殖,TranswellTM迁移和划痕实验检测Hep G2细胞的迁移。同时观察2000 U/m L重组人IFNα2b诱导的肝癌细胞增殖、迁移能力的变化,Western blot法检测IFN相关STAT1信号的磷酸化水平。结果筛选对STAT3敲低效果最显著的STAT3 shRNA1和STAT3 shRNA2,敲低STAT3水平后,肝癌细胞增殖和迁移降低。2000 U/m L IFNα2b对细胞的增殖抑制作用更显著,迁移细胞的数量显著下降。敲低STAT3水平后,肝癌细胞STAT1的磷酸化水平升高,在IFNα2b处理后STAT1磷酸化水平进一步升高。结论敲低肝癌细胞STAT3通过上调STAT1信号通路活化,抑制细胞的迁移、增殖,恢复IFN在肝癌细胞中的应答。 展开更多

关键词 1型干扰素(iFN1) 信号转导子与转录激活子3短发夹RNA(STAT3 shRNA) STAT1 SHRNA 肝癌

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TRIM37对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制及IFN-β产生影响的研究 被引量：6

7

作者 崔志莹 董鑫媛 +7 位作者 陈雨 周立坤 赵士杰 李闻 徐朋丽 夏平安 陈静 张宜娜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期385-395,共11页

本实验室前期通过质谱分析筛选到宿主因子三方基序蛋白37(TRIM37),推测其可能与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的复制相关。为探究TRIM37对PRRSV复制的影响,本研究将不同剂量的PRRSV HN07-1株(MOI分别为0.01、0.1、1)分别感染猪肺泡巨... 本实验室前期通过质谱分析筛选到宿主因子三方基序蛋白37(TRIM37),推测其可能与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的复制相关。为探究TRIM37对PRRSV复制的影响,本研究将不同剂量的PRRSV HN07-1株(MOI分别为0.01、0.1、1)分别感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)和MARC-145细胞后不同时间(6 h、12 h、24 h、36 h和48 h),采用荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中内源TRIM37的转录水平,结果显示PRRSV能够刺激这两种细胞内源TRIM37的转录,并且PRRSV以MOI 1及感染后24 h细胞中TRIM37的转录水平最高,感染后36 h和48 h细胞中TRIM37的转录水平较感染后24 h有所下降但仍显著高于对照组(P<0.05)。从MARC-145细胞中经PCR扩增TRIM37基因并克隆至pCAGGS-HA中构建真核表达质粒pCAGGS-HA-TRIM37,经双酶切及测序鉴定正确后转染MARC-145细胞,24 h后以MOI 1将HN07-1株感染细胞,感染后不同时间分别采用qPCR、western blot、病毒滴度(TCID50)测定和间接免疫荧光试验(IFA)检测PRRSV的复制情况。结果显示,与转染空载体pCAGGS-HA的对照细胞相比,过表达TRIM37后细胞中PRRSV ORF7的转录水平、N蛋白的表达水平(感染后48 h和72 h)及病毒滴度(感染后36 h与48 h)均显著(P<0.05)或者极显著(P<0.01)下降。针对TRIM37基因设计3对特异性的TRIM37 siRNA-1/2/3,转染MARC-145细胞后,利用qPCR检测TRIM37 siRNA的干扰效率,结果显示,TRIM37 siRNA-2能够有效降低TRIM37的转录水平。将TRIM37 siRNA-2转染MARC-145细胞后再以MOI 1 HN07-1株感染,感染后不同时间分别采用qPCR、western blot和病毒滴度(TCID50)测定检测PRRSV的复制情况。结果显示,与转染NC siRNA的对照细胞相比,干扰TRIM37表达的细胞中PRRSV ORF7的转录水平、N蛋白的表达水平及病毒滴度均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高。进一步将不同剂量的pCAGGS-HA-TRIM37与报告质粒pRL-TK-Luc和pIFN-β-Luc共转染HEK293T细胞;同时将不同剂量的pCAGGS-HA-TRIM37与报告质粒pRL-TK-Luc和pISRE-Luc共转染HEK293T细胞,18 h后加入poly(I:C)处理上述各组细胞,6 h后利用双荧光素酶试剂盒检测各组细胞中IFN-β和ISRE启动子的活性。将pCAGGS-HA-TRIM37转染HEK293T细胞,18 h后加入poly(I:C)处理细胞,6 h后采用qPCR检测细胞中相关干扰素刺激基因(ISG)(ISG15、CXCL10、MX1和OAS1)相对转录水平。双荧光素酶试验结果显示,与转染空载体的对照细胞相比,过表达TRIM37显著上调细胞中poly(I:C)激活的IFN-β和ISRE启动子的活性(P<0.05),且这种上调作用具有剂量依赖性。qPCR结果显示,与转染空载体的对照细胞相比,过表达TRIM37显著上调细胞中poly(I:C)激活的ISG15、CXCL10、MX1和OAS1 mRNA的转录水平(P<0.05)。本研究首次表明TRIM37能够通过促进细胞中相应干扰素的表达抑制PRRSV复制,该结果丰富了病毒感染过程中PRRSV-宿主相互作用的网络和机制,深化了对PRRSV致病机制的认知。 展开更多

关键词 宿主因子三方基序蛋白37 猪繁殖与呼吸综合征病毒 i型干扰素信号通路

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慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中STING基因表达与HBV DNA载量的关系 被引量：10

8

作者 杨晓燕 张平安 +1 位作者 牛志立 王方平 《中国感染控制杂志》 CAS 北大核心 2018年第3期196-201,共6页

目的观察慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞干扰素刺激基因(STING)和I型干扰素(IFN)α、βmRNA的表达,及其与乙型肝炎病毒载量之间的关系。方法选择2016年2月—2017年2月在武汉大学人民医院感染科未经治疗的CHB患者88例(CHB组),以... 目的观察慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞干扰素刺激基因(STING)和I型干扰素(IFN)α、βmRNA的表达,及其与乙型肝炎病毒载量之间的关系。方法选择2016年2月—2017年2月在武汉大学人民医院感染科未经治疗的CHB患者88例(CHB组),以及同期进行体检的健康者74例(对照组),通过实时荧光定量PCR检测STING,IFN-α和IFN-βmRNA表达,用2^(-ΔΔCT)的方法计算相对表达量,并对计算结果进行统计学分析。结果CHB组患者外周血中STING,IFN-α和IFN-βmRNA的表达分别是健康对照组的2.95、3.14、2.01倍,两组间比较差异均有统计学意义(t值分别为-4.72,-3.41,-2.31,均P<0.05);CHB患者STING相对表达量HBV DNA病毒载量≤10^(4 )IU/mL组分别是HBV DNA病毒载量10~4~10^(5 )IU/mL组、10~5~10^(6 )IU/mL组和>10^(6 )IU/mL组的2.98、3.76、3.97倍,差异有统计学意义(P<0.05);CHB组患者STING与IFN-α、IFN-βmR-NA表达呈正相关性(r值分别为0.475、0.503,均P<0.05)。结论CHB患者体内STING表达升高,且STING高表达影响HBV复制。 展开更多

关键词 慢性乙型肝炎 干扰素刺激基因 病毒载量 i型干扰素

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cGAS-STING通路异常激活及其抑制剂在免疫和炎症疾病中的研究进展 被引量：12

9

作者 李文欣 张贺峰 +1 位作者 谢作权 段文虎 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2001-2005,共5页

cGAS-STING通路是针对多种类型病原体进行免疫防御的主要途径之一,环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)通过识别细胞质的DNA分子,催化生成第二信使cGAMP(cyclic GMP-AMP)与干扰素基因刺激因子(STING)结合,诱导产生I型干扰素(IFN-I),激活机体先... cGAS-STING通路是针对多种类型病原体进行免疫防御的主要途径之一,环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)通过识别细胞质的DNA分子,催化生成第二信使cGAMP(cyclic GMP-AMP)与干扰素基因刺激因子(STING)结合,诱导产生I型干扰素(IFN-I),激活机体先天免疫系统。cGAS-STING通路的适当激活有助于机体实现自我保护,因此,近年来STING激动剂在肿瘤免疫治疗的研究中引起了广泛关注,一些候选药物已进入临床研究,用于多种肿瘤治疗。与此同时,cGAS-STING通路异常激活会导致自身免疫性疾病的发生,获得了药物研究者的广泛关注并积极开发其抑制剂。该文总结了cGAS-STING通路的机制和调控位点,概述了cGAS-STING通路相关的免疫和炎症疾病及其抑制剂的研究进展。 展开更多

关键词 环鸟苷酸-腺苷酸合成酶 干扰素基因刺激因子 环状二核苷酸 i型干扰素 抑制剂 免疫疾病

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传染性支气管炎病毒nsp4和nsp15通过调节NF-κB和IRF3信号通路抑制Ⅰ型干扰素表达 被引量：2

10

作者 徐刚 马淑慧 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第3期6-10,13,共6页

为探究传染性支气管炎病毒(IBV)的非结构蛋白在其抑制Ⅰ型干扰素表达作用中的机理,本试验利用IBV流行毒株感染原代鸡胚肾细胞,通过添加poly(I∶C),检测细胞中Ⅰ型干扰素的表达水平,并构建IBV流行毒株各非结构蛋白真核表达载体,转染鸡胚... 为探究传染性支气管炎病毒(IBV)的非结构蛋白在其抑制Ⅰ型干扰素表达作用中的机理,本试验利用IBV流行毒株感染原代鸡胚肾细胞,通过添加poly(I∶C),检测细胞中Ⅰ型干扰素的表达水平,并构建IBV流行毒株各非结构蛋白真核表达载体,转染鸡胚成纤维细胞(DF-1)后转染poly(I∶C),检测细胞中IFN-β、NF-κB以及IRF3的mRNA表达水平。结果显示,IBV JS株能显著抑制由poly(I∶C)诱导的I型干扰素的表达,且nsp3、nsp4、nsp7、nsp14以及nsp15在此过程中发挥重要作用,nsp4和nsp15可通过抑制上游信号通路中的NF-κB或IRF3的表达来抑制IFN-β的转录,拮抗I型干扰素反应。本试验结果可为深入研究IBV的致病机理及其逃避宿主免疫应答的机制提供理论基础。 展开更多

关键词 传染性支气管炎病毒 Ⅰ型干扰素 NSP4 nsp15

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Ⅰ型干扰素在HIV-1感染中的作用具有两面性

11

作者 张立国 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2018年第9期966-970,共5页

Ⅰ型干扰素(以下简称为干扰素)是重要的抗病毒因子,也是临床上治疗病毒感染性疾病的药物.然而,干扰素在HIV感染中的作用一直存在争议.最近在HIV感染的人源化小鼠模型中发现,干扰素具有抑制HIV复制和破坏抗病毒免疫的双重作用.在抗病毒... Ⅰ型干扰素(以下简称为干扰素)是重要的抗病毒因子,也是临床上治疗病毒感染性疾病的药物.然而,干扰素在HIV感染中的作用一直存在争议.最近在HIV感染的人源化小鼠模型中发现,干扰素具有抑制HIV复制和破坏抗病毒免疫的双重作用.在抗病毒药物治疗的同时,注射干扰素受体的阻断抗体显著提高抗HIV特异性免疫反应,延缓停药后病毒反弹.这些研究结果提示,干扰素有望成为研发治疗艾滋病新型药物的靶点. 展开更多

关键词 Ⅰ型干扰素 人免疫缺陷病毒 艾滋病 免疫治疗

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全身性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞内cAMP、血清α干扰素和IgG的关系

12

作者 苏作为 陈秀珠 +1 位作者 徐惠堂 刘春明 《同济医科大学学报》 CSCD 北大核心 1990年第4期225-228,共4页

本文测定了25例全身性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞(PBLs)内cAMP、cGMP含量与比值,血清α干扰素(IFN-α)和兔疫球蛋白G(IgG)水平,结果显示SLE患者PBLs内cAMP为2.79±0.9pmol/10~6细胞,cAMP/cGMP为10.21±3.41(P<0.05),血... 本文测定了25例全身性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞(PBLs)内cAMP、cGMP含量与比值,血清α干扰素(IFN-α)和兔疫球蛋白G(IgG)水平,结果显示SLE患者PBLs内cAMP为2.79±0.9pmol/10~6细胞,cAMP/cGMP为10.21±3.41(P<0.05),血清IFN-α、IgG水平方明显高于正常对照组。血清IFN-α与PBLs内cAMP含量、血清IFN-α与IgG水平,PBLs内cAMP含量与血清IgG水平等间均呈直线相关(r分别为0.7824,0.8401,0.7641,P值均<0.05)。结果提示:SLE患者血清高水平IFN-α可能是导致PBLs内cAMP含量增高,并由此而产生血清免疫球蛋白水平增加等变化的原因之一。 展开更多

关键词 红斑狼疮 淋巴细胞 CAMP 干扰素

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RIG-Ⅰ对Ⅰ型干扰素信号通路的调控 被引量：1

13

作者 穆晓玲 《农业灾害研究》 2018年第1期28-32,37,共6页

对RIG-Ⅰ介导的抗病毒反应所涉及的活化机制以及ISG化、磷酸化和泛素化等调控机制进行了介绍。

关键词 抗病毒免疫 RiG-i i型干扰素 病毒RNA 调控分子

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DAPK2调控Ⅰ型干扰素启动子的初步研究

14

作者 孙悦 潘利洁 +5 位作者 孙文泽 朱进进 庄宝灿 沈继龙 余莉 曹苑苑 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期10-18,共9页

为揭示RLR信号通路中激酶对Ⅰ型干扰素的调控作用,本研究利用双荧光素酶报告系统及qRT-PCR实验鉴定出一个可以负调控Ⅰ型干扰素信号通路的激酶DAPK2;并对其调控特异性、激酶活性以及调控位置进行了探索。结果表明,通过使用不同的荧光素... 为揭示RLR信号通路中激酶对Ⅰ型干扰素的调控作用,本研究利用双荧光素酶报告系统及qRT-PCR实验鉴定出一个可以负调控Ⅰ型干扰素信号通路的激酶DAPK2;并对其调控特异性、激酶活性以及调控位置进行了探索。结果表明,通过使用不同的荧光素酶启动子以及qRT-PCR试验发现,DAPK2可以特异性地负调控RLR信号通路中Ⅰ型干扰素的产生,并且主要集中在IRF3介导的通路上,对NF-κB控制的炎症因子无明显调控作用。利用不同阶段的信号蛋白激活IFN-β启动子发现DAPK2的作用位点在VISA和TBK1之间。其激酶活性突变体对RLR通路调控作用的缺失表明DAPK2的调控作用依赖其激酶活性。本研究为DAPK2在未来应用于治疗病毒引起的动物传染病提供了可能的药物靶标及理论指导。 展开更多

关键词 RLR DAPK2 Ⅰ型干扰素 天然免疫

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自噬通过调节免疫系统影响系统性红斑狼疮发病的研究进展 被引量：1

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作者 马天贞 唐红辉 +5 位作者 陈璇 郭雨晴 张利平 李柏青 席进 王元元 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第7期649-654,共6页

自噬是一种基本的生物体代谢过程,对机体免疫防御、物质代谢和内环境稳态发挥作用,与免疫调节密切相关。系统性红斑狼疮(SLE)是主要由免疫系统失调导致的弥散性结缔组织性疾病,由于免疫系统对机体本身物质的免疫识别紊乱而产生自身抗体... 自噬是一种基本的生物体代谢过程,对机体免疫防御、物质代谢和内环境稳态发挥作用,与免疫调节密切相关。系统性红斑狼疮(SLE)是主要由免疫系统失调导致的弥散性结缔组织性疾病,由于免疫系统对机体本身物质的免疫识别紊乱而产生自身抗体,可侵犯全身各组织器官,不同部位呈现不同的临床表现,目前其发病机制及治疗受到广泛研究。在机体正常代谢中,自噬可参与到固有免疫和适应性免疫中,调节机体的免疫反应,对维持正常的免疫功能和内环境的稳态发挥重要作用。研究发现SLE患者表现为免疫功能紊乱,自噬水平失调。而通过干预自噬也会影响免疫系统的功能,改善SLE的症状。自噬在参与固有免疫和适应性免疫中,清除代谢产物、调节免疫细胞的生存周期,并有研究发现调节自噬的药物可改善SLE的疾病进展。本文将对自噬通过调节免疫系统功能影响SLE发病的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 系统性红斑狼疮(SLE) 自噬 Ⅰ型干扰素 中性粒细胞 综述

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结核分枝杆菌Rv3641c抑制巨噬细胞Ⅰ型干扰素应答并促进胞内存活的研究

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作者 金雯 耿敏 +6 位作者 胡苏洁 张馨阳 李文琴 郑成坤 焦新安 陈祥 徐正中 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第4期385-391,共7页

目的探究结核分枝杆菌Rv3641c基因对于宿主Ⅰ型干扰素应答的免疫调控功能和机制。方法使用穿梭质粒pMV261构建Rv3641c过表达重组耻垢分枝杆菌,对重组菌的生物学特性进行分析,探究Rv3641c对于分枝杆菌生长曲线、菌落形态和抗逆性的影响... 目的探究结核分枝杆菌Rv3641c基因对于宿主Ⅰ型干扰素应答的免疫调控功能和机制。方法使用穿梭质粒pMV261构建Rv3641c过表达重组耻垢分枝杆菌,对重组菌的生物学特性进行分析,探究Rv3641c对于分枝杆菌生长曲线、菌落形态和抗逆性的影响。随后,Rv3641c过表达耻垢分枝杆菌感染RAW264.7细胞,通过RT-PCR测定抑制Ⅰ型干扰素通路相关基因转录表达,通过ELISA测定IFN-β蛋白表达水平,并测定胞内存活水平。结果成功构建过表达重组耻垢分枝杆菌rMS::pMV261-Rv3641c,生物学特性分析结果显示Rv3641c不影响分枝杆菌生长,但是显著改变分枝杆菌菌落形态并提高了其对于H2O2抗逆性水平。重组菌感染实验结果显示Rv3641c显著下调宿主细胞IFN-α、IFN-β和下游ISGs基因CXCL10、IFIT2和IL-1β转录水平,同时Rv3641c显著下调IFN-β蛋白表达水平。胞内定殖实验结果显示过表达重组菌感染组,胞内分枝杆菌显著高于空载体组,表明Rv3641c可以促进分枝杆菌胞内存活。结论结核分枝杆菌Rv3641c基因可以抑制宿主Ⅰ型干扰素应答并促进分枝杆菌胞内存活,为深入探究结核分枝杆菌免疫逃逸功能及抗结核药物新靶标挖掘提供了新思路。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 Ⅰ型干扰素 免疫逃逸 胞内存活 Rv3641c

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基于Mx启动子和荧光素酶报告基因定量检测鸡Ⅰ型干扰素生物学活性的研究 被引量：4

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作者 陈伟业 葛金英 +6 位作者 肇慧君 胡森 温志远 曹文雁 王喜军 黄克和 步志高 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期123-128,共6页

为了探索并建立快速、敏感、准确的Ⅰ型干扰素生物学活性定量分析方法,本研究克隆了鸡Mx启动子(Mxp),并在其下游连接荧光素酶(Luciferase,luc)报告基因,构建鸡Ⅰ型干扰素活性检测质粒pMxp-luc。以pMxp-luc瞬时转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,... 为了探索并建立快速、敏感、准确的Ⅰ型干扰素生物学活性定量分析方法,本研究克隆了鸡Mx启动子(Mxp),并在其下游连接荧光素酶(Luciferase,luc)报告基因,构建鸡Ⅰ型干扰素活性检测质粒pMxp-luc。以pMxp-luc瞬时转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,24 h后用鸡IFN-α/β处理细胞,结果荧光素酶基因在Mx启动子的作用下获得转录表达;荧光素酶的表达量与干扰素的抗病毒活性有着良好的线性相关性,并在干扰素处理细胞6 h后就可以检测;对鸡IFN-α和IFN-β检测的敏感性分别约为抗病毒活性定量检测方法的10和100倍。该检测系统与传统抗病毒定量检测方法相比,具有快速简便、准确敏感、便于高通量检测等优势,在禽类乃至哺乳动物干扰素生物学基础和应用研究及产业化过程中具有重要应用价值。 展开更多

关键词 鸡Ⅰ型干扰素 生物活性检测 鸡Mx启动子 萤光素酶

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猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域基因的克隆表达及其多克隆抗体制备 被引量：1

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作者 杨青原 张军杰 +3 位作者 秦运杰 王冬梅 夏平安 崔保安 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期420-424,共5页

为了克隆表达猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域(IFN2EC)基因,试验采用RT-PCR技术从健康仔猪肺巨噬细胞中扩增出猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域基因的cDNA序列,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,并将阳性重组质粒转化BL21(DE3)菌株,IFN2EC重组蛋白... 为了克隆表达猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域(IFN2EC)基因,试验采用RT-PCR技术从健康仔猪肺巨噬细胞中扩增出猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域基因的cDNA序列,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,并将阳性重组质粒转化BL21(DE3)菌株,IFN2EC重组蛋白得到高效表达.将融合蛋白IFNR2EC免疫BALB/C小鼠,获得鼠抗IFN2EC融合蛋白多克隆抗体,将得到的融合蛋白多克隆抗体采用间接ELISA和Western-blotting试验方法检测.本研究成功构建重组表达质粒pET-IFNR2EC,ELISA测定多克隆抗体的效价为1∶12800,Western-blotting试验结果表明,制备的鼠抗IFNR2EC融合蛋白多克隆抗体可以与融合蛋白进行特异性结合,从而证明融合蛋白具有很好的免疫原性. 展开更多

关键词 猪i型干扰素受体ii 胞外域 克隆 原核表达

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抗经干扰素处理的SMMC7721肝癌细胞系单克隆抗体HAb23的制备 被引量：2

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作者 姬亚友 刘彦仿 +1 位作者 陈志南 隋延仿 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1990年第1期47-50,共4页

作者将经人α-干扰素处理的SMMC7721肝癌细胞系作为抗原免疫小鼠,通过细胞融合,筛选得到一株具有分泌一定特异性的抗肝癌单克隆抗休HAb23细胞株,经亚类鉴定HAb23为IgG1。HAb23细胞株性质稳定。在体外连续培养3个月均有抗体分泌。将冻存... 作者将经人α-干扰素处理的SMMC7721肝癌细胞系作为抗原免疫小鼠,通过细胞融合,筛选得到一株具有分泌一定特异性的抗肝癌单克隆抗休HAb23细胞株,经亚类鉴定HAb23为IgG1。HAb23细胞株性质稳定。在体外连续培养3个月均有抗体分泌。将冻存的HAb23细胞复苏,其克隆的阳性率保持100％。对30例肝细胞性肝癌及其它组织进行免疫组化染色,其中25例肝癌呈阳性,阳性率达83.3％,正常肝组织、肝炎、肝硬化组织均为阴性。 展开更多

关键词 肝细胞癌 干扰素 i型 单克隆抗体

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解旋酶DDX41在人牙髓组织及牙髓细胞中的表达

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作者 杨小军 侯晋 +1 位作者 李心竹 胡娇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期587-590,共4页

目的研究解旋酶DDX41在人牙髓组织和细胞中的表达,为深入探讨其在龋病及牙髓病天然免疫应答过程中的作用奠定基础。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学和免疫组织化学技术对人牙髓组织和牙髓细胞中DDX41的表达和定位进... 目的研究解旋酶DDX41在人牙髓组织和细胞中的表达,为深入探讨其在龋病及牙髓病天然免疫应答过程中的作用奠定基础。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学和免疫组织化学技术对人牙髓组织和牙髓细胞中DDX41的表达和定位进行分析。结果 RT-PCR结果显示DDX41 m RNA在人牙髓细胞中有显著表达;免疫细胞化学和免疫组织化学染色结果显示DDX41在牙髓细胞的胞浆和胞核中皆有表达,但胞核中的表达水平较低;在牙髓组织中,DDX41主要在牙髓组织表面的成牙本质细胞的胞浆和胞核中皆有表达。结论人牙髓组织中的成牙本质细胞作为牙髓免疫的效应细胞之一,在龋病和牙髓炎的免疫反应过程中,细胞内可能存在DDX41/STING依赖的TBK1-IRF3-IFN-β信号通路的活化。 展开更多

关键词 解旋酶 DDX41 牙髓组织 Ⅰ型干扰素 天然免疫反应

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