Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF及其受体Flt-1在结直肠癌中的表达及临床意义 被引量：13

1

作者 陈中皓 王学志 +2 位作者 徐铭 杨华 黄忠华 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期290-293,共4页

背景与目的:近年来的研究表明,多种生物学指标与结直肠癌发生、发展以及手术后的复发转移、预后有关。本研究旨在探讨人结直肠癌组织中Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF及其受体Flt-1的表达与各临床病理参数及预后的关系及临床意义。方法... 背景与目的:近年来的研究表明,多种生物学指标与结直肠癌发生、发展以及手术后的复发转移、预后有关。本研究旨在探讨人结直肠癌组织中Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF及其受体Flt-1的表达与各临床病理参数及预后的关系及临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法,检测72例结直肠癌组织及其对照癌旁正常黏膜组织中Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF及其受体Flt-1表达的状况,分析其与临床病理参数及复发转移的关系。结果:在结直肠癌中Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF及其受体Flt-1的表达率分别为62.5%(45/72)、66.7%(48/72)、55.5%(40/72)、61.1%(44/72)、79.2%(57/72),均显著高于对照癌旁正常黏膜组织(P<0.01)。Survivin表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期及术后复发转移有关;MMP-2表达与淋巴结转移、TNM分期、术后复发转移有关;nm23-H1表达与淋巴结转移、TNM分期相关;VEGF表达与浸润深度、TNM分期及术后复发转移有关;而受体Flt-1表达与临床病理及预后因素均无关。结论:Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF与结直肠癌的发生、发展密切相关,联合检测多个相关基因的表达能更准确地判断结直肠癌的生物学特征及预后判断。 展开更多

关键词 结直肠癌 SURVIVIN MMP-2 NM23-H1 VEGF flt-1

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血管内皮生长因子及其Flt-1受体在白血病细胞中的表达 被引量：8

2

作者 张伶 陈辉 +3 位作者 李维 涂植光 冯文莉 黄宗干 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期678-681,共4页

目的　探讨人白血病细胞系血管内皮生长因子 (VEGF)及其Flt 1受体的表达 ,进一步阐明VEGF在白血病细胞异常增殖中的作用机制。方法　以人脐静脉血管内皮细胞系ECV3 0 4作为对照 ,采用RT PCR半定量技术和免疫组化检测体外培养的人白血病... 目的　探讨人白血病细胞系血管内皮生长因子 (VEGF)及其Flt 1受体的表达 ,进一步阐明VEGF在白血病细胞异常增殖中的作用机制。方法　以人脐静脉血管内皮细胞系ECV3 0 4作为对照 ,采用RT PCR半定量技术和免疫组化检测体外培养的人白血病细胞系K5 62和HL 60中VEGF及Flt 1的表达。采用MTT试验观察VEGF反义寡核苷酸 (VEGF AS)对白血病细胞体外增殖的影响。结果　K5 62和HL 60细胞同时表达VEGF和Flt 1mRNA和蛋白。VEGF AS能够抑制白血病细胞体外增殖。结论　在白血病细胞异常增殖中自分泌VEGF可能起着重要作用。 展开更多

关键词 VEGF flt-1受体 K562细胞 HL-60细胞

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可溶性VEGF受体FLT-1克隆、表达及其对血管生成的抑制作用 被引量：4

3

作者 周彩存 谈立松 +1 位作者 唐亮 粟波 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第1期15-18,共4页

目的 :克隆VEGF受体sFLT 1片段 1 3区 ,并使之在原核中进行表达以探讨其对内皮细胞增殖和血管生成方面的抑制作用。方法 :提取脐静脉血管内皮细胞总RNA ,克隆sFLT 1基因 1 3区 ,并使之在QIA表达系统进行表达 ;Ni2 + Sepharose6B亲和层... 目的 :克隆VEGF受体sFLT 1片段 1 3区 ,并使之在原核中进行表达以探讨其对内皮细胞增殖和血管生成方面的抑制作用。方法 :提取脐静脉血管内皮细胞总RNA ,克隆sFLT 1基因 1 3区 ,并使之在QIA表达系统进行表达 ;Ni2 + Sepharose6B亲和层析纯化、复性。应用MTT和鸡胚绒毛尿囊膜血管生成模型 ,探讨重组蛋白对血管生成的抑制作用。结果 :该表达系统能表达sFLT 1基因片段 ,表达量低。纯化后 ,经复性 ,sFLT 1具有与VEGF特异结合功能 ,1μg重组sFLT 1蛋白能抑制 10ngVEGF诱导的脐静脉内皮细胞增殖和 2 0ngVEGF诱导的鸡胚绒毛尿囊膜血管生成。结论 :sFLT 1基因片段能在QIA表达系统中得到表达 ,复性后重组蛋白具有与VEGF结合和拮抗VEGF生物学活性的功能。 展开更多

关键词 可溶性VEGF受体 flt-1 克隆 血管内皮细胞生长因子 原核表达 血管新生 肿瘤

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人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外区2-3loop在Pichia.pastoris酵母中的表达、纯化及其生物学活性研究 被引量：5

4

作者 马骊 王小宁 +3 位作者 张智清 周小明 曾革非 陈爱君 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期61-65,共5页

目的 :研究人Flt 1胞外区 2 3loopcDNA在Pichia pastoris酵母中的表达 ,获得高效表达的具有生物学活性的重组Flt 1(2 3)。方法 :采用PCR扩增Flt 1(2 3)基因 ,经DNA序列分析后 ,插入含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的Pichia pastoris... 目的 :研究人Flt 1胞外区 2 3loopcDNA在Pichia pastoris酵母中的表达 ,获得高效表达的具有生物学活性的重组Flt 1(2 3)。方法 :采用PCR扩增Flt 1(2 3)基因 ,经DNA序列分析后 ,插入含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的Pichia pastoris酵母表达载体中 ,构建重组质粒pPIC9K Flt 1(2 3) ,转化酵母宿主菌GS115 ,筛选His+ Muts 表型转化子 ,摇瓶培养 ,1%甲醇诱导表达。表达产物经CM SepharoseFF阳离子交换层析和SephacrylS 10 0分子筛层析纯化后 ,测定其生物学活性。结果 :SDS PAGE分析显示 ,表达产物以可溶性分子形式存在于上清中 ,诱导 4d的表达量达上清总蛋白的 6 0 %以上。ELISA及Westernblot实验表明 ,表达产物具有良好的抗原性和特异性。经CM SepharoseFF阳离子交换层析和SephacrylS 10 0分子筛层析纯化后 ,Flt 1(2 3)纯度达到 90 %以上。生物学活性检测证实其具有结合hVEGF1 6 5 的能力和抑制hVEGF1 6 5 对HUVEC的促增殖功能。结论 :获得了具有生物学活性的可溶性重组Flt 1受体胞外区 2 3loop小片段 ,为进一步的动物实验和临床应用打下了基础。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子 flt-1 基因表达 PICHIA.PASTO

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VEGF高表达的胶质瘤细胞C6对共培养微血管内皮细胞表达Flk-1及Flt-1的影响 被引量：5

5

作者 王新红 殷莲华 金惠铭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1365-1369,共5页

目的 :以正常鼠肝细胞系BRL 3A为对照 ,研究VEGF高表达的恶性胶质瘤细胞系C6对体外共培养的肺微血管内皮细胞表达Flt- 1、Flk - 1的影响。方法 :建立体外C6 ,BRL 3A与肺微血管内皮细胞的共培养方法 ,利用免疫细胞化学方法检测共培养后... 目的 :以正常鼠肝细胞系BRL 3A为对照 ,研究VEGF高表达的恶性胶质瘤细胞系C6对体外共培养的肺微血管内皮细胞表达Flt- 1、Flk - 1的影响。方法 :建立体外C6 ,BRL 3A与肺微血管内皮细胞的共培养方法 ,利用免疫细胞化学方法检测共培养后的微血管内皮细胞上VEGF受体Flt- 1、Flk - 1蛋白的表达变化 ,进一步采用RT-PCR和Northernblot分析Flt- 1、Flk - 1mRNA表达的改变。结果 :与胶质瘤细胞C6共培养的微血管内皮细胞Flk- 1、Flt- 1蛋白表达增加 (P <0 0 5) ,而与BRL 3A共培养的内皮细胞Flk - 1、Flt- 1蛋白表达下降 (P <0 0 1 ) ,RT -PCR和Northernblot检测发现与C6共培养后可上调微血管内皮细胞Flk - 1、Flt - 1mRNA的表达 (P <0 0 1 ) ,而与BRL 3A共培养下调了Flk- 1、Flt- 1mRNA的表达 (P <0 0 1 )。结论 :VEGF高表达的胶质瘤细胞C6对共培养的微血管内皮细胞表达Flk - 1、Flt- 1有明显的上调作用 。 展开更多

关键词 VEGF 胶质瘤细胞 微血管内皮细胞 血管新生 免疫细胞化学 FLK-1 flt-1

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电针对脑梗死患者血清VEGF/Flt-1、BDNF表达以及临床效果的影响 被引量：5

6

作者 刘洁 张建刚 马登飞 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2023年第3期231-234,共4页

目的探讨电针对脑梗死患者血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管内皮生长因子受体1/fms样酪氨酸激酶1(VEGF receptor-1/fms-like tyrosine kinase-1,Flt-1)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotr... 目的探讨电针对脑梗死患者血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管内皮生长因子受体1/fms样酪氨酸激酶1(VEGF receptor-1/fms-like tyrosine kinase-1,Flt-1)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的表达以及临床效果的影响。方法收集医院诊治的急性脑梗死患者160例为研究对象,采用随机数字表法将患者分为对照组(80例)与研究组(80例),对照组给予右旋糖酐常规治疗,研究组给予电针治疗。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测VEGF mRNA、Flt-1 mRNA的表达量;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者血清BDNF的水平;比较两组患者的临床治疗效果、神经功能缺损评分与ADL评分;采用ELISA法检测血清白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平;检测患者脑血流动力学指标:颈总动脉的平均血流量(Qm)、平均血流速度(Vm)、外周阻力(Rv)、动态阻力(DR)。结果与对照组比较,研究组患者好转率、总有效率显著升高(P<0.05),无变化发生率与恶化率显著降低(P<0.05);治疗后,两组神经功能缺损评分显著降低(P<0.05),ADL评分显著升高(P<0.05),且对照组与研究组比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,与对照组比较,研究组患者血清VEGF mRNA、BDNF的表达水平显著升高(P<0.05),Flt-1 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05),IL-1β、IL-6、hs-CRP、TNF-α水平显著降低(P<0.05),Qm、Vm水平显著升高(P<0.05),Rv、DR水平显著降低(P<0.05)。结论电针治疗能有效提高急性脑梗死患者血清VEGF、BDNF的表达水平及降低Flt-1的表达水平,可改善患者神经功能及脑血流动力学。 展开更多

关键词 电针 急性脑梗死 VEGF BDNF flt-1

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血管内皮生长因子VEGF及其受体Flt-1在人脑星形细胞瘤中的表达 被引量：2

7

作者 杨东波 杨立庄 +3 位作者 李永利 郑永日 康军 叶伟 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期63-64,共2页

目的 检测血管内皮细胞生长因子VEGF及其受体Flt-1在人脑星形细胞瘤中和正常脑组织的表达,分析二者表达程度与脑星形细胞瘤病理分级的关系。方法采用免疫组织化学的方法,对33例脑星形细胞瘤组织和7例正常脑组织VEGF和Flt-1的表达情况进... 目的 检测血管内皮细胞生长因子VEGF及其受体Flt-1在人脑星形细胞瘤中和正常脑组织的表达,分析二者表达程度与脑星形细胞瘤病理分级的关系。方法采用免疫组织化学的方法,对33例脑星形细胞瘤组织和7例正常脑组织VEGF和Flt-1的表达情况进行了观察。结果VEGF在Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅳ型脑星形细胞瘤之中阳性率分别为11％、50％、75％和75％,而正常成人脑组织无VEGF表达.脑星形细胞瘤与正常成人脑组织VEGF、表达有显著性差异(P<0.01)。7例正常成人脑组织未见Flt-1表达,脑星形细胞瘤Flt-1表达率分别为0、17％、50％和100％,限于肿瘤血管的内皮细胞表达。肿瘤细胞VEGF表达与Flt-1表达呈正相关(r:0.7376,p<0.001),无论VEGF还是Flt-1在坏死区周围表达都明显增强。结论 VEGF及其受体Flt-1在人脑星形细胞瘤和正常脑组织的表达有显著性差异,与脑星形细胞瘤病理分级有关。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子 VEGF 受体 flt-1 脑星形细胞瘤 免疫组织化学

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VEGF和Flt-1在精索静脉曲张大鼠附睾中的表达变化 被引量：1

8

作者 艾庆燕 赵豫凤 +3 位作者 马莉 王艳梅 苗乃周 杨加周 《四川动物》 CSCD 北大核心 2012年第4期626-629,共4页

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt-1在实验性左侧精索静脉曲张(ELV)大鼠附睾组织中的表达变化,探讨它们与精索静脉曲张(VC)的关系及致男性不育的病理生理学机制。方法建立青春期雄性SD大鼠ELV模型,采用免疫组化SP法检测ELV及... 目的研究血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt-1在实验性左侧精索静脉曲张(ELV)大鼠附睾组织中的表达变化,探讨它们与精索静脉曲张(VC)的关系及致男性不育的病理生理学机制。方法建立青春期雄性SD大鼠ELV模型,采用免疫组化SP法检测ELV及对照组附睾中VEGF和Flt-1的表达。结果 VEGF和Flt-1蛋白在大鼠附睾中均有表达,并具有细胞和区域特异性。ELV4周时双侧附睾中VEGF蛋白的表达明显上调(P<0.01),8周时则显著下降(P<0.01);而Flt-1蛋白在ELV4周左侧显著下降(P<0.01),右侧未见明显差异(P>0.05),8周组均显著下降(P<0.01)。结论 ELV引起大鼠附睾中VEGF和Flt-1表达量发生变化,可能影响精子的成熟,是VC引起男性生育力下降甚至不育的原因之一。 展开更多

关键词 精索静脉曲张 VEGF flt-1 附睾 免疫组化

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门脉高压性胃病大鼠VEGF及其受体FLT-1和FLK-1的表达 被引量：1

9

作者 陶平 黄冠 +2 位作者 潘超 戴树龙 王小平 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期589-592,共4页

目的 :探讨门脉高压性胃病(portal hypertensive gastropathy,PHG)模型大鼠胃组织血管内皮生长因子(VEGF)及其受体FLT-1和FLK-1的表达情况。方法:Wistar大鼠60只随机分为PHG组及假手术(SO)组,一期缩窄门静脉主干法制作PHG大鼠模型,术后... 目的 :探讨门脉高压性胃病(portal hypertensive gastropathy,PHG)模型大鼠胃组织血管内皮生长因子(VEGF)及其受体FLT-1和FLK-1的表达情况。方法:Wistar大鼠60只随机分为PHG组及假手术(SO)组,一期缩窄门静脉主干法制作PHG大鼠模型,术后2周用生理测压仪测定门静脉压力,免疫组化法测定大鼠胃组织VEGF及其受体的表达,并利用RT-PCR法测定VEGF及其受体m RNA的表达。结果 :PHG组大鼠门静脉压力显著高于SO组(P<0.05),免疫组化结果显示,PHG组大鼠胃组织细胞胞浆中VEGF及其受体的阳性表达率明显高于SO组(P<0.05);RT-PCR结果显示,PHG组VEGF及其受体m RNA的表达显著高于SO组(P<0.05)。结论:VEGF及其受体FLT-1和FLK-1可能参与PHG的形成。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子 flt-1 FLK-1 门脉高压性胃病 大鼠

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可溶性Flt-1抑制实验性糖尿病大鼠的视网膜血管渗漏(英文) 被引量：1

10

作者 许庆文 《眼科新进展》 CAS 2001年第3期149-152,共4页

目的　血管内皮细胞生长因子 (VEGF)能引起强烈的血管渗漏。越来越多的证据显示糖尿病性视网膜病变时 VEGF含量升高。本课题研究应用可溶性 Flt- 1阻断 VEGF的作用能否抑制视网膜血管渗漏。方法　重约 2 0 0 g的 Sprague- Dawley大鼠通... 目的　血管内皮细胞生长因子 (VEGF)能引起强烈的血管渗漏。越来越多的证据显示糖尿病性视网膜病变时 VEGF含量升高。本课题研究应用可溶性 Flt- 1阻断 VEGF的作用能否抑制视网膜血管渗漏。方法　重约 2 0 0 g的 Sprague- Dawley大鼠通过注射streptozotocin制备糖尿病模型。 1wk后或不给予任何处理 ,或静脉给予可溶性 Flt- 1,或PBS+ 5 0 g· L- 1 甘油 ,或白介素 - 6受体单克隆抗体 ,2 4h后应用伊凡思蓝法测定血管渗漏。枸橼酸钠缓冲液和 streptozotocin注射后未发生糖尿病的大鼠做为对照组。结果　枸橼酸钠缓冲液和 streptozotocin注射后未发生糖尿病的 2种对照组间视网膜血管渗漏无显著差异 (P>0 .0 5 )。糖尿病组和总体对照组相比有显著差异 (P<0 .0 5 )。PBS+ 5 0 g· L- 1 甘油和白介素 - 6受体单克隆抗体处理后糖尿病性大鼠的视网膜血管渗漏无变化 (P>0 .0 5 ) ,但用 2 5 m g· kg- 1 可溶性 Flt- 1处理后糖尿病性大鼠血管渗漏显著降低 (P<0 .0 0 0 1) ,达到正常水平 ,与总体对照组相比 P>0 .0 5。结论　 VEGF在糖尿病性视网膜病变的发生过程中起着十分重要的作用。通过抑制 VEGF可以降低早期糖尿病性视网膜病变的血管渗漏。 展开更多

关键词 血-视网膜屏障 血管内皮细胞生长因子 可溶性flt-1 实验性糖尿病 大鼠

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绵羊妊娠期生殖组织Flt-1基因的克隆及其组织表达量的检测

11

作者 姜怀志 戢爽 +2 位作者 高爱萍 李向军 杨永梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第6期76-79,共4页

试验从雌性绵羊妊娠期不同阶段的输卵管、子宫内膜、卵泡组织中提取总RNA,根据已发表的绵羊Flt-1基因的cDNA序列设计引物,以β-Actin基因为内参,采用RT-PCR扩增绵羊Flt-1基因,将扩增产物克隆于载体后进行序列分析,并应用Kodak Science ... 试验从雌性绵羊妊娠期不同阶段的输卵管、子宫内膜、卵泡组织中提取总RNA,根据已发表的绵羊Flt-1基因的cDNA序列设计引物,以β-Actin基因为内参,采用RT-PCR扩增绵羊Flt-1基因,将扩增产物克隆于载体后进行序列分析,并应用Kodak Science 1 D、Bandscan图像分析软件,推断出不同组织中Flt-1基因的表达量。结果表明,从雌性绵羊妊娠期不同阶段生殖道各组织上皮均获得82 bp的Flt-1基因的扩增片段,且Flt-1基因在雌性绵羊生殖道各组织内的表达量不同。说明Flt-1基因对绵羊的妊娠维持起着重要的作用。 展开更多

关键词 flt-1基因 绵羊 组织表达

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hVEGF基因工程生物膜对全层皮肤缺损创面中flt-1和TSP-1表达的影响

12

作者 赵雷 王莉 +4 位作者 姜叙诚 郑林 张帆 赵涵芳 许伟榕 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期47-50,共4页

目的探讨人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因工程生物膜对创面组织fms样酪氨酸酶(flt-1)和血小板反应蛋白-1(TSP-1)表达的影响。方法建立hVEGF基因工程生物膜覆盖大鼠全层皮肤缺损创面的动物模型,将80只SD大鼠随机分为A、B、C、D四组,每... 目的探讨人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因工程生物膜对创面组织fms样酪氨酸酶(flt-1)和血小板反应蛋白-1(TSP-1)表达的影响。方法建立hVEGF基因工程生物膜覆盖大鼠全层皮肤缺损创面的动物模型,将80只SD大鼠随机分为A、B、C、D四组,每组20只,所有动物于背部制备皮肤全层缺损创面。A组:创面覆盖hVEGF基因工程生物膜和Tegaderm切口膜;B组:创面覆盖空白生物膜和Tegaderm切口膜,C组:创面覆盖含空质粒的成纤维细胞种植的生物膜和Tegaderm切口膜;D组:创面覆盖Tegaderm切口膜。采用免疫组化和图像分析的方法,观察各组在术后3、7、14、29d时创面中flt-1和TSP-1表达的情况。结果术后3、7、14d时,A组flt-1阳性细胞数显著高于B、C、D组(P<0.05或P<0.01);术后7、14、29d时A组创面中TSP-1表达显著低于B、C、D组(P<0.01)。结论将hVEGF基因工程生物膜覆盖于大鼠全层皮肤缺损创面,能使创面持续表达flt-1并抑制TSP-1表达,从而促进新生血管形成,有利于创面愈合。 展开更多

关键词 人血管内皮细胞生长因子 flt-1 血小板反应蛋白 创面愈合

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EGF和受体FLT-1、FLK-1在大肠癌中的表达及siRNA沉默VEGF基因对大肠癌细胞系Caco-2、HT29、HCT116生物学特性的影响

13

作者 吴文清 张洪福 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2010年第6期836-836,共1页

目的研究VEGF和受体FLT-1、FLK-1在大肠癌组织中的表达和临床病理因素之间的关系;观察siRNA干扰VEGF基因对不同分化人大肠癌细胞系生物学特性的影响。方法应用免疫组织化学S-P法,检测82例大肠癌及14例大肠正常黏膜组织中VEGF和FLT-1、FL... 目的研究VEGF和受体FLT-1、FLK-1在大肠癌组织中的表达和临床病理因素之间的关系;观察siRNA干扰VEGF基因对不同分化人大肠癌细胞系生物学特性的影响。方法应用免疫组织化学S-P法,检测82例大肠癌及14例大肠正常黏膜组织中VEGF和FLT-1、FLK-1的表达,分析大肠癌组织中FLT-1、FLK-1的表达与大肠癌临床病理参数之间的关系;以脂质体lip-2000为载体,用针对VEGF特异靶点的siRNA转染入3种不同分化人大肠癌细胞系Caco-2、HT29、HCT116后,免疫细胞化学S-P法、WesternBlot检测VEGF蛋白表达变化,MTT法检测对细胞增殖的影响;流式细胞技术检测细胞凋亡。结果①大肠癌组织VEGF和受体FLT-1、FLK-1阳性表达率显著高于正常大肠组织(P<0.05)。VEGF的表达在有无淋巴结转移组和不同的Duke分期中亦有显著差异(P<0.05)。FLT-1和FLK-1在大肠癌组织的阳性表达呈显著正相关,(r=0.457,P<0.05)。②VEGF-siRNA转染Caco-2、HT29、HCT116细胞后,免疫细胞化学结果显示:3种大肠癌细胞系的正常对照组,脂质体对照组及阴性错配对照组VEGF表达均呈深棕黄色强阳性表达,3组无明显差别;转染VEGF-siRNA组阳性细胞数均无明显减少,阳性细胞细胞浆呈浅棕黄色弱阳性表达。Westernblot结果显示:Caco-2、HT29、HCT116细胞VEGF-siRNA组细胞的蛋白条带亮度均明显低于正常对照组、脂质体对照组和阴性错配对照组,3种细胞的VEGF-siRNA组VEGF蛋白表达均较对照组明显下降。③MTT检测结果:与阴性对照组相比,3种细胞的VEGF-siRNA组细胞生长出现明显的抑制(P<0.05)。同一种细胞系VEGF-siRNA组中,不同时段(24h、48h、72h)肿瘤细胞增殖抑制率之间差异有统计学意义(P<0.05),且随着作用时间的增加,抑制率呈上升趋势,表明细胞生长抑制率在一定剂量范围内随时间的增加而增加,具有时间依赖性。同一时间阶段不同细胞(Caco-2、HT29、HCT116)的VEGF-siRNA组的抑制率之间差异有统计学意义(P<0.05)。④流式细胞术检测结果表明:与正常对照和阴性对照细胞组相比,Ca-co-2、HT29、HCT116细胞的VEGF-siRNA组,均出现明显亚二倍体峰,三种大肠癌细胞系VEGF-siRNA组的凋亡率显著高于正常对照组,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 VEGF和受体FLT-1、FLK-1与大肠癌的发生密切相关,VEGF与大肠癌的预后有关。siRNA干扰VEGF基因能有效抑制人大肠癌细胞系VEGF蛋白表达,细胞增殖能力减弱,促进细胞凋亡。以VEGF基因为靶点,利用siRNA技术进行基因治疗有可能成为一种新的有效手段。 展开更多

关键词 HCT116细胞 受体flt-1 siRNA干扰 大肠癌细胞系 VEGF基因 CACO-2 FLK-1 HT29

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人源分泌型血管内皮细胞生长因子受体flt-1(Ⅰ～Ⅳ/区)的基因克隆及其腺病毒载体的构建和表达 被引量：5

14

作者 张华 寿成超 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期625-630,共6页

肿瘤的生长、转移与血管形成密切相关 ,利用基因治疗的方法将抗血管形成的因子导入体内是目前肿瘤生物治疗研究的重要策略 .血管内皮细胞生长因子 (VEGF)在血管生成中起重要作用 ,因此阻断VEGF与相应受体的结合成为抗血管形成的重要靶... 肿瘤的生长、转移与血管形成密切相关 ,利用基因治疗的方法将抗血管形成的因子导入体内是目前肿瘤生物治疗研究的重要策略 .血管内皮细胞生长因子 (VEGF)在血管生成中起重要作用 ,因此阻断VEGF与相应受体的结合成为抗血管形成的重要靶点 .通过RT PCR从人脐静脉内皮细胞克隆了VEGF受体Flt 1的信号肽及胞外Ⅰ～Ⅳ区cDNA ,即可溶性sFlt 1的cDNA片段 .利用Ad Easy体系 ,在细菌BJ5 183中同源重组后 ,转染包装细胞 2 93,成功包装出重组flt 1腺病毒 ,利用它可有效地感染低分化胃黏液腺癌细胞株MGC80 3.经RT PCR ,免疫沉淀及免疫印迹等不同方法检测表明 ,被感染细胞能表达并分泌Flt 1的胞外区蛋白 ,为后续进行抗肿瘤血管形成的基因治疗研究奠定了基础 . 展开更多

关键词 人源分泌型血管内皮细胞生长因子受体 flt-1 基因克隆 腺病毒载体 构建 表达 肿瘤

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可溶性VEGF受体Flt-1的基因克隆及其活性产物在原核中的表达 被引量：5

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作者 安平 董志伟 寿成超 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第1期62-66,共5页

可溶性血管内皮细胞生长因子受体 ( Flt- 1 )具有受体拮抗剂作用 ,可竞争结合血管内皮细胞生长因子 ,( VEGF)并与其膜表面受体 Flt- 1及 KDR形成异源二聚体 ,最终阻断 VEGF的生物学活性 .利用 RT- PCR技术从人脐静脉内皮细胞扩增出 Flt... 可溶性血管内皮细胞生长因子受体 ( Flt- 1 )具有受体拮抗剂作用 ,可竞争结合血管内皮细胞生长因子 ,( VEGF)并与其膜表面受体 Flt- 1及 KDR形成异源二聚体 ,最终阻断 VEGF的生物学活性 .利用 RT- PCR技术从人脐静脉内皮细胞扩增出 Flt- 1胞外 ～ 区 c DNA片段 ,通过基因重组将该片段克隆于谷胱甘肽转移酶 ( GST)融合蛋白表达载体 PGEX2 -T中 ,连接产物转化大肠杆菌XL1 - blue,经 IPTG诱导可获大量稳定表达的 Flt- 1 - GST融合蛋白 .该表达产物经变性复性处理后 ,可特异性结合 12 5 - VEGF.大量具有活性的可溶性 Flt- 1的获得有助于新的抗肿瘤血管形成方法的探索 . 展开更多

关键词 flt-1 原核表达 结合活性 VEGF受体阻断剂

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VEGF受体flt-1和KDR在骨髓间充质干细胞中的表达及意义 被引量：5

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作者 张秀英 李一雷 +1 位作者 任淑萍 李玉林 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期487-490,F002,共5页

目的:观察血管内皮生长因子(VEGF)受体flt1和KDR在成人骨髓间充质干细胞(MSCs)的表达情况,探讨MSCs分化为血管内皮细胞的可能性。方法:采用Percoll(1.073g·mL-1)分离液分离骨髓单个核细胞,体外培养MSCs,流式细胞术分析鉴定MSCs的纯... 目的:观察血管内皮生长因子(VEGF)受体flt1和KDR在成人骨髓间充质干细胞(MSCs)的表达情况,探讨MSCs分化为血管内皮细胞的可能性。方法:采用Percoll(1.073g·mL-1)分离液分离骨髓单个核细胞,体外培养MSCs,流式细胞术分析鉴定MSCs的纯度,在激光共聚焦扫描显微镜(LSCM)下观察flt1和KDR的表达,RTPCR检测VEGF作用下flt1及KDR表达改变情况。结果:经Percoll分离、体外培养扩增的MSCs,细胞纯度可达95%左右;flt1和KDR定位于MSCs的胞膜及胞浆;经VEGF处理的MSCs和flt1mRNA的表达较对照组增强,KDRmRNA的表达无明显改变。结论:培养的MSCs在体外稳定扩增,具有VEGF受体,传导VEGF的刺激,在适宜的环境和诱导因子的作用下,MSCs有望分化为血管内皮细胞。 展开更多

关键词 造血干细胞 间充质干细胞 fit-1 KDR显微镜检查 共焦 内皮生长因子 逆转录聚合酶链反应

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小发夹RNA对白血病K562细胞血管内皮生长因子受体Flt-1基因表达的抑制作用

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作者 沈慧玲 许文林 +1 位作者 袁伟 江云伟 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第6期1413-1418,共6页

本研究观察小发夹RNA对白血病细胞血管内皮生长因子受体flt-1基因表达的抑制作用并探讨其对白血病细胞侵袭能力的影响及作用机制。采用脂质体介导的方法将构建的人flt-1基因特异性shRNA真核表达载体转染入K562细胞,用G418抗性筛选获得... 本研究观察小发夹RNA对白血病细胞血管内皮生长因子受体flt-1基因表达的抑制作用并探讨其对白血病细胞侵袭能力的影响及作用机制。采用脂质体介导的方法将构建的人flt-1基因特异性shRNA真核表达载体转染入K562细胞,用G418抗性筛选获得阳性克隆;抽提基因组DNA,用PCR方法验证shRNA基因对K562细胞的转染;以RT-PCR和免疫印迹反应检测flt-1 mRNA和蛋白表达量的变化;用Boyden小室体外侵袭实验检测白血病细胞的侵袭能力;RT-PCR方法检测白血病细胞MMP-2和MMP-9的表达。结果表明,flt-1基因特异性shRNA真核表达载体转染入白血病细胞株K562,G418筛选2周获得阳性克隆;PCR检测证实shRNA基因整合入白血病细胞基因DNA;携有shRNA的flt-1基因能明显下调白血病细胞内flt-1基因mRNA表达水平;设计的2种不同flt-1 shRNA序列能不同程度干扰flt-1基因和蛋白在细胞中的表达,两组阳性细胞中flt-1基因表达抑制率分别为46.1%和65.4%;flt-1 shRNA转染白血病细胞系K562细胞后,MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平均较转染前明显下降;阳性细胞穿透人工重组基底膜的能力(4.3±1.2)%较对照组(12.7±1.9)%及(9.6±1.7)%明显降低(p<0.01)。结论:VEGF受体flt-1特异性shRNA的真核表达载体能够高效转染入白血病细胞株K562,有效抑制flt-1基因的表达,并使白血病细胞体外侵袭能力减弱,MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平下降。这提示VEGF可能通过与其受体结合调控MMP-2和MMP-9的方式,参与白血病细胞的转移。 展开更多

关键词 白血病 K562细胞 血管内皮生长因子 flt-基因 小发夹RNA RNA干扰

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腺病毒介导的RNA干扰降低VEGF受体FLT-1,KDR转录抑制血管形成

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作者 许剑锋 沈维干 彭琬昕 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期89-93,共5页

本研究用细菌内同源重组的方法构建了针对VEGF受体FLT-1,KDR的siRNA表达重组腺病毒Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR,感染HUVEC细胞,观察两种病毒对HUVEC细胞体外增殖和形成微血管的干扰作用.通过RT-PCR实验表明,Ad H1-siRNA/FLT-1和... 本研究用细菌内同源重组的方法构建了针对VEGF受体FLT-1,KDR的siRNA表达重组腺病毒Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR,感染HUVEC细胞,观察两种病毒对HUVEC细胞体外增殖和形成微血管的干扰作用.通过RT-PCR实验表明,Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR均可特异性地下调血管内皮细胞(HUVEC)中的FLT-1mRNA和KDR mRNA水平.与对照组相比,FLT-1的mRNA水平下降为40%,KDR的mRNA水平下降为52%.Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR对HUVEC细胞增殖均有干扰作用,加入病毒9 d后,对照组的细胞平均计数为31.5×104/μL,Ad H1-siRNA/FLT-1干扰病毒对照组为28×104/μL,Ad H1-siRNA/KDR干扰组为21.5×104/μL.Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR对HUVEC细胞在Matrigel上形成微血管均有干扰作用,对照组每HPF形成微血管数量为10.75条,Ad H1-siRNA/FLT-1干扰病毒对照组为10.25条,实验组Ad H1-siRNA/KDR每HPF形成微血管数量为7条.证明Ad H1-siRNA/FLT-1,Ad H1-siRNA/KDR均可干扰血管形成. 展开更多

关键词 血管生成 血管内皮生长因子受体 RNA干扰

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人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外配体结合域的筛选及其结构分析

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作者 马骊 张智清 +3 位作者 王小宁 陈爱君 姚立红 姜忠良 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期40-45,共6页

血管内皮生长因子受体 Flt- 1胞外区具有 7个免疫球蛋白样的袢 (Ig- like loop) ,氨基端 3个loop负责与其配体 VEGF的结合 .为了寻求能与配体结合的更小的 Flt- 1片段 ,在对 Flt- 1胞外前3个 loop氨基酸组成和晶体结构分析的基础上 ,应... 血管内皮生长因子受体 Flt- 1胞外区具有 7个免疫球蛋白样的袢 (Ig- like loop) ,氨基端 3个loop负责与其配体 VEGF的结合 .为了寻求能与配体结合的更小的 Flt- 1片段 ,在对 Flt- 1胞外前3个 loop氨基酸组成和晶体结构分析的基础上 ,应用酵母双杂交系统对 Flt- 1的配体结合域进行筛选 .利用 PCR技术 ,从人胎盘 c DNA文库扩增出 4个截短的 Flt- 1 c DNA,分别含胞外第 2 ,1 - 2 ,2 - 3和 1 - 3个 loop,构建酵母双杂交系统融合表达质粒 ,并将 p GBT9/h VEGF165与 p GAD42 4 /Flt- 1 s两两配对转化酵母菌 SFY52 6,采用滤纸法和液体培养定量检测法对阳性克隆进行β-半乳糖苷酶活性分析 .结果显示 ,Flt- 1胞外 loop 2 - 3与 loop 1 - 3的配体结合能力相差不大 ,loop 1 - 2的结合力较弱 ,单独第 2个 loop无配体结合能力 . 展开更多

关键词 血管内皮生长因子 受体 酵母双杂交 晶体结构 肿瘤组织

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脑星形细胞瘤MMP-9、Flt-1表达与微血管密度的关系及其意义 被引量：5

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作者 陈志琴 顾霞 史艳侠 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期653-656,共4页

目的探讨不同组织学类型的脑星形细胞瘤MMP-9、Flt-1表达与微血管密度(MVD)和恶性程度的关系。方法采用免疫组化方法检测50例星形细胞瘤中MMP-9、Flt-1和CD34的表达,并通过CD34免疫组化结果测定肿瘤组织中MVD。结果MMP-9、Flt-1在各型... 目的探讨不同组织学类型的脑星形细胞瘤MMP-9、Flt-1表达与微血管密度(MVD)和恶性程度的关系。方法采用免疫组化方法检测50例星形细胞瘤中MMP-9、Flt-1和CD34的表达,并通过CD34免疫组化结果测定肿瘤组织中MVD。结果MMP-9、Flt-1在各型脑星形细胞瘤中均有不同程度的表达;不同组织学类型,其阳性表达的强度存在着明显的差异。在WHO分级中Ⅲ～Ⅳ级脑星形细胞瘤MMP-9的阳性表达为(76.52±3.38)%,Flt-1为(72.90±2.64)%,MVD为87.00±4.18;Ⅰ～Ⅱ级MMP-9的阳性表达为(27.90±2.53)%,Flt-1为(29.67±2.87)%,MVD为48.62±4.05。Ⅲ～Ⅳ级MMP-9、Flt-1和MVD的表达明显高于Ⅰ～Ⅱ级(P<0.01);三者的表达呈正相关。结论MMP-9、Flt-1表达和MVD与脑星形细胞瘤的组织学类型及恶性程度相关,有可能做为判断肿瘤恶性程度及预后的辅助指标。 展开更多

关键词 脑肿瘤 星形细胞瘤 基质金属蛋白酶-9 Fit-1 微血管密度

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