一个新的重组酶系统在转基因植物外源基因删除中的应用 被引量：10

1

作者 罗克明 赵德刚 +1 位作者 Li Yi 裴炎 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期61-66,共6页

为了解决转基因植物可能带来的生物安全性问题,设计了一个新的位点特异性重组酶系统pLFHFGN,该系统中重组酶FLP基因由热激蛋白Hsp18.2基因的启动子控制,所有外源基因(包括重组酶基因FLP、GUS报告基因和NPTII筛选标记基因)都置于两个融... 为了解决转基因植物可能带来的生物安全性问题,设计了一个新的位点特异性重组酶系统pLFHFGN,该系统中重组酶FLP基因由热激蛋白Hsp18.2基因的启动子控制,所有外源基因(包括重组酶基因FLP、GUS报告基因和NPTII筛选标记基因)都置于两个融合识别位点loxFRT之间.将上述重组酶系统通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化烟草,获得的再生植株分别通过GUS组织染色和PCR分析等方法进行鉴定.然后在37℃下热激处理转基因植株,利用GUS组织染色检测重组酶系统在转基因植株T1代幼苗中删除外源基因的效率,结果显示,该系统删除效率达到了48.2%～84.9%,说明通过重组酶系统pLFHFGN能够有效地删除转基因植物中的外源基因,这为解决转基因植物潜在的安全性问题提供了一条新的途径. 展开更多

关键词 转基因植物 酶系统 基因删除 位点特异性重组 GUS报告基因 安全性问题 转基因植株 应用 外源基因 筛选标记基因 根癌农杆菌 PCR分析 热激蛋白 识别位点 介导转化 再生植株 热激处理 系统删除 启动子 重组酶 酶基因 染色

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Cre/Loxp重组酶系统与转基因 被引量：2

2

作者 杨东生 张研 +1 位作者 张建会 杨春 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第8期3916-3918,共3页

Cre/Loxp重组酶系统是一种对转入基因进行组织特异性、定点操作的基因重组系统。该系统可以迅速有效地进行基因的整合性删除、条件性重组、染色体易位等方面的研究,从而可以将其应用于转基因动物和植物领域。

关键词 Cre/Loxp重组酶系统 转基因动物 转基因植物

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重组一氧化氮合酶基因在心血管系统的转染和表达 被引量：3

3

作者 刘建平 何国祥 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期315-316,共2页

一氧化氮 (NO)功能异常在许多心血管系统疾病的发病中起重要作用 ,用转基因方法转移重组一氧化氮合酶(NOS)基因 ,重建内源性 NO功能 ,是心血管系统治疗的新策略 ,本文就重组 NOS转基因在心血管系统的研究进展作一综述。

关键词 心血管系统 转染 表达 重组一氧化氮合酶基因

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利用Cre／loxP位点特异性重组酶系统从转基因植物生产非转基因食品 被引量：2

4

作者 徐茂军 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第8期24-27,共4页

转基因植物中的外源基因是引起转基因植物食品安全性问题的主要原因。通过对Cre／loxP系统介导转基因植物中外源基因选择性切除的最新研究成果进行综述分析，指出利用果实、花粉等组织特异性启动子对重组酶基因的表达进行调控，将转基... 转基因植物中的外源基因是引起转基因植物食品安全性问题的主要原因。通过对Cre／loxP系统介导转基因植物中外源基因选择性切除的最新研究成果进行综述分析，指出利用果实、花粉等组织特异性启动子对重组酶基因的表达进行调控，将转基因植物食用部位的外源基因选择性的切除，是将转基因植物转化为非转基因食品的一条有效途径。 展开更多

关键词 转基因植物 Cer/oxP系统 非转基因食品 外源基因切除 安全性 位点特异性重组酶

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Cre-LoxP重组系统的特点及其在抗体研究中的应用 被引量：2

5

作者 李大旭 马静云 曹永长 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第1期56-60,共5页

Cre-LoxP系统是源于P1噬菌体的一个DNA重组体系,由Cre酶和相应的LoxP位点组成,它能导致重组发生在特定的DNA序列处(LoxP位点),该系统可以将外源基因定点整合到染色体上或将特定DNA片段删除,这种定位重组系统在大容量噬菌体抗体库,抗体重... Cre-LoxP系统是源于P1噬菌体的一个DNA重组体系,由Cre酶和相应的LoxP位点组成,它能导致重组发生在特定的DNA序列处(LoxP位点),该系统可以将外源基因定点整合到染色体上或将特定DNA片段删除,这种定位重组系统在大容量噬菌体抗体库,抗体重排,抗体的类型转换和抗体修饰等研究领域发挥了重要的作用。 展开更多

关键词 cre-loxp 重组系统 抗体重排 类型转换

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噬菌体phiC31位点重组酶系统在植物转基因中的应用 被引量：3

6

作者 邹丽婷 宋洪元 《安徽农业科学》 CAS 2014年第5期1298-1301,共4页

来源于链霉菌属噬菌体(streptomyces phage)的phiC31定点重组酶系统可诱导重组位点attB(细菌基因组)和attP(噬菌体)之间DNA序列的重组,该重组酶是继Cre/lox重组酶系统和FLP/frt重组酶系统之后的又一种新型位点重组酶系统,在原核和真核... 来源于链霉菌属噬菌体(streptomyces phage)的phiC31定点重组酶系统可诱导重组位点attB(细菌基因组)和attP(噬菌体)之间DNA序列的重组,该重组酶是继Cre/lox重组酶系统和FLP/frt重组酶系统之后的又一种新型位点重组酶系统,在原核和真核生物基因整合、删除和倒位等方面得到广泛应用。文中主要对phiC31重组酶系统的来源、结构特性以及在植物转基因中的应用研究进展进行综述,为phiC31定点重组酶的进一步开发利用提供依据。 展开更多

关键词 关键词phiC31重组酶系统 基因整合 基因删除 基N-N4A

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利用Cre-loxP系统研究细胞间mRNA的传递 被引量：1

7

作者 王梦雪 韩小松 +1 位作者 倪超 王小宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期769-775,共7页

目的利用Cre-loxP重组酶系统研究mRNA在细胞间传递过程及意义。方法构建和筛选稳定表达Cre重组酶的供体细胞及稳定表达loxP-DsRed-loxP-eGFP的受体细胞。将供、受体细胞共培养或在Transwell^TM中共培养,设置单独受体细胞组为对照,72 h... 目的利用Cre-loxP重组酶系统研究mRNA在细胞间传递过程及意义。方法构建和筛选稳定表达Cre重组酶的供体细胞及稳定表达loxP-DsRed-loxP-eGFP的受体细胞。将供、受体细胞共培养或在Transwell^TM中共培养,设置单独受体细胞组为对照,72 h后观察统计各组受体细胞eGFP阳性率,利用细胞免疫荧光细胞染色检测eGFP阳性细胞中Cre表达情况,并探讨供体细胞死亡、细胞膜纳米管、Rho相关激酶(ROCK)信号通路对Cre mRNA传递的影响。结果将供、受体细胞共培养72 h后发现,共培养组eGFP为阳性,单独受体细胞组、Transwell^TM共培养组eGFP均为阴性,表明细胞接触可以介导Cre mRNA传递,免疫荧光染色结果显示Cre蛋白可在受体细胞中翻译和入核。此外,Cre mRNA的传递主要通过活细胞,而膜纳米管及ROCK信号通路抑制剂可部分阻滞该过程。结论mRNA可以通过细胞间接触在活细胞中传递,进入受体细胞后还可翻译成蛋白质发挥生物学功能。 展开更多

关键词 细胞接触 mRNA传递 cre-loxp重组酶系统 膜纳米管

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利用Red同源重组系统进行牛β酪蛋白基因敲除 被引量：8

8

作者 薛可 李峰 +2 位作者 罗光彬 黄玮玮 陈学进 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期570-574,共5页

利用EL350基因工程菌进行同源重组,成功进行基因敲除已有报道,但利用该系统进行乳腺生物反应器质粒构建的研究却未见报道。实验采用含有完整的牛β酪蛋白基因的CSN2质粒作为基因打靶的载体,设计不同的同源臂,成功地敲除了β酪蛋白基因... 利用EL350基因工程菌进行同源重组,成功进行基因敲除已有报道,但利用该系统进行乳腺生物反应器质粒构建的研究却未见报道。实验采用含有完整的牛β酪蛋白基因的CSN2质粒作为基因打靶的载体,设计不同的同源臂,成功地敲除了β酪蛋白基因的编码区。并且同时利用同源重组技术对敲除不同大小的DNA片段的效率进行了研究。为进一步利用CSN2质粒两端的调控序列,插入新的基因,研究其表达功能,或者进行乳腺生物反应器的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 同源重组 牛β酪蛋白基因 cre-loxp重组系统 基因敲除

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Cre-LoxP系统在炭疽芽胞杆菌基因敲除中的应用及eag基因的敲除 被引量：4

9

作者 王艳春 姜娜 +6 位作者 展德文 邱炎 袁盛凌 陶好霞 王令春 张兆山 刘纯杰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第7期934-940,共7页

将Cre-LoxP系统应用于Bacillus anthracis中并成功敲除eag基因.以B.anthracis基因组为模板扩增得到上下游同源臂,联合两端带有LoxP位点的壮观霉素抗性基因片段构建好同源重组载体,转化B.anthracisAP422,通过一系列筛选得到带有抗性标记... 将Cre-LoxP系统应用于Bacillus anthracis中并成功敲除eag基因.以B.anthracis基因组为模板扩增得到上下游同源臂,联合两端带有LoxP位点的壮观霉素抗性基因片段构建好同源重组载体,转化B.anthracisAP422,通过一系列筛选得到带有抗性标记的重组菌.然后,通过转入Cre重组酶表达质粒,去除抗性标记,得到eag基因缺失的重组菌,并在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行了系统的鉴定.最终建立了Cre-LoxP系统在B.anthracis中的应用方法,并成功敲除eag基因. 展开更多

关键词 炭疽芽胞杆菌 cre-loxp系统 eag基因 同源重组 基因敲除

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Cre-lox重组系统介导转基因烟草中外源基因删除的研究 被引量：4

10

作者 甄伟 汪阳明 +3 位作者 丁伟 陈溪 胡鸢雷 林忠平 《北京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期477-482,共6页

对Cre在转基因个体中介导的重组效率进行了研究。构建了含有Cre基因 (p35S Cre)和GUS基因侧翼含同向loxP位点的 (loxP p35S GUS loxP)两种植物表达载体。以共转化的技术将两种基因元件同时转化烟草得到转基因植株 ,根据对共转化植株GUS... 对Cre在转基因个体中介导的重组效率进行了研究。构建了含有Cre基因 (p35S Cre)和GUS基因侧翼含同向loxP位点的 (loxP p35S GUS loxP)两种植物表达载体。以共转化的技术将两种基因元件同时转化烟草得到转基因植株 ,根据对共转化植株GUS基因的活性分析、分子检测、PCR检测及对重组后扩增DNA片段进行序列分析表明 :Cre loxP重组系统在转基因烟草中能精确高效地介导转基因的删除 ,但也存在部分植株不能完全删除的现象。 展开更多

关键词 cre-loxp重组系统 转基因烟草 共转化 GUS活性分析 不完全删除 重组效率 LOXP位点

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热诱导FLP重组酶删除转基因烟草外源基因 被引量：11

11

作者 高媛媛 赵德刚 +2 位作者 罗克明 裴炎 LiYi 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期180-184,共5页

利用热激启动子Hsp18．2、nP重组酶基因及其专一识别位点构建了重组酶删除系统的植物表达载体转化烟草。热激处理后转基因植株中FLP重组酶表达并识别两个同向lox P-frt重组酶识别位点，使两位点间的DNA插入片段（包含kn1、gus、nptⅡ基... 利用热激启动子Hsp18．2、nP重组酶基因及其专一识别位点构建了重组酶删除系统的植物表达载体转化烟草。热激处理后转基因植株中FLP重组酶表达并识别两个同向lox P-frt重组酶识别位点，使两位点间的DNA插入片段（包含kn1、gus、nptⅡ基因）从转基因烟草基因组中删除，由kn1基因引起的转基因烟草特殊表型及gus基因产生的蓝色表型消失。 展开更多

关键词 热激启动子 重组酶系统 基因删除

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细胞可透过性Cre重组酶表达、纯化及生物活性检测(英文) 被引量：1

12

作者 郭中敏 徐康 +6 位作者 岳颖 黄冰 唐欢 马芸 洪迅 陈系古 肖东 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第9期784-790,共7页

Cre/loxP系统由Cre位点特异重组酶和可被Cre特异性识别的loxP位点构成,该系统广泛用于条件性基因敲除和表达,以研究基因功能.为了表达和纯化一种细胞可透过性Cre重组酶(即His6 NLS Cre MTS);经IPTG诱导,在BL2 1(DE3)宿主菌成功表达His6... Cre/loxP系统由Cre位点特异重组酶和可被Cre特异性识别的loxP位点构成,该系统广泛用于条件性基因敲除和表达,以研究基因功能.为了表达和纯化一种细胞可透过性Cre重组酶(即His6 NLS Cre MTS);经IPTG诱导,在BL2 1(DE3)宿主菌成功表达His6 NLS Cre MTS融合蛋白,通过His BondNi NTA树脂分离并纯化了该蛋白质,随后借助细胞和非细胞的重组系统成功检测了His6 NLS Cre MTS的生物活性. 展开更多

关键词 CRE/LOX P系统 细胞可透过性Cre重组酶 表达 纯化 生物活性检测 细胞和非细胞的重组系统

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Cre/loxP位点特异性重组系统及其在口腔医学领域中的应用 被引量：4

13

作者 张文娟 于丹妮 《国际口腔医学杂志》 CAS 2011年第1期55-58,共4页

Cre/loxP位点特异性重组系统由Cre重组酶和loxP位点组成。Cre重组酶可识别loxP位点并催化2个loxP位点之间的DNA进行精确的位点特异性重组。该系统作用方式简单、重组效率高,可定时、定位地对基因进行修饰,已成为一种定向改变生物活体遗... Cre/loxP位点特异性重组系统由Cre重组酶和loxP位点组成。Cre重组酶可识别loxP位点并催化2个loxP位点之间的DNA进行精确的位点特异性重组。该系统作用方式简单、重组效率高,可定时、定位地对基因进行修饰,已成为一种定向改变生物活体遗传信息的重要的试验工具。本文主要就Cre/loxP系统的结构、重组机制、特点及其在口腔医学领域中的应用作一综述。 展开更多

关键词 位点特异性重组 CRE/LOXP系统 CRE重组酶

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人组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1在Pichia pastoris酵母中重组表达研究 被引量：5

14

作者 李克勤 李春海 颜春洪 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期160-164,共5页

为研究组织型基质金属蛋白酶抑制剂 (TIMPs)的分子作用机制 ,探讨了在 Pichia pastoris酵母中高效表达分泌型人组织型基质金属蛋白酶抑制剂 - 1 (TIMP- 1 )的技术路线 ,并对产物性质进行初步研究 .通过 PCR从含有 TIMP- 1基因的 p BS质... 为研究组织型基质金属蛋白酶抑制剂 (TIMPs)的分子作用机制 ,探讨了在 Pichia pastoris酵母中高效表达分泌型人组织型基质金属蛋白酶抑制剂 - 1 (TIMP- 1 )的技术路线 ,并对产物性质进行初步研究 .通过 PCR从含有 TIMP- 1基因的 p BS质粒获得了该基因的全长序列 ,构建了 p PIC9/T1表达载体 ,电击法转化酵母 ,通过表型筛选和 PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合入 Pichiapastoris酵母基因组中 .SDS- PAGE表明表达量高达 40 mg/L培养上清 .用免疫印迹法确定了产物的正确性 ;同时 ,反向明胶酶谱法证明了重组蛋白具有抑制基质金属蛋白酶的活性 . 展开更多

关键词 组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1 酵母表达系统 反向明胶酶谱 重组表达

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输卵管特异表达人溶菌酶基因重组禽腺联病毒的构建及鉴定

15

作者 吴植 张继玲 +2 位作者 吴萌 崔潇婷 王安平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期2871-2877,共7页

试验旨在利用杆状病毒表达系统制备输卵管特异表达人溶菌酶(h LYZ)的重组禽腺联病毒(recombinant avian adeno-associated virus,r AAAV)。参照已发表的h LYZ基因序列设计1对引物,PCR扩增h LYZ基因片段,亚克隆至含输卵管特异表达盒和禽... 试验旨在利用杆状病毒表达系统制备输卵管特异表达人溶菌酶(h LYZ)的重组禽腺联病毒(recombinant avian adeno-associated virus,r AAAV)。参照已发表的h LYZ基因序列设计1对引物,PCR扩增h LYZ基因片段,亚克隆至含输卵管特异表达盒和禽腺联病毒(AAAV)两侧末端反向重复序列(inverted terminal repeat,ITR)的转移载体中,获得重组杆状病毒转移载体p FB-AIOVLYZ,将其转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒r Bacmid-AIOVLYZ,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒r Bac-AIOVLYZ。将其与表达AAAV结构蛋白的重组杆状病毒r Bac-VP及表达AAAV功能蛋白的重组杆状病毒r Bac-Rep以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为5感染Sf9昆虫细胞,72 h后收集细胞沉淀,并经滤膜过滤、氯仿抽提和PEG沉淀,即为r AAAV-OVLYZ。电镜结果显示,病毒粒子大小约为20 nm,形态结构与野生AAAV相似;PCR结果显示r AAAV含有目的基因;体外细胞表达试验说明r AAAV能介导h LYZ在输卵管细胞中的特异表达。结果表明,本研究利用杆状表达系统成功制备了输卵管特异表达h LYZ基因的r AAAV,为h LYZ的大量制备奠定了基础。 展开更多

关键词 重组禽腺联病毒(rAAAV) 人溶菌酶(hLYZ) 杆状病毒表达系统 鉴定

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家蚕杆状病毒DNA聚合酶在Bac-to-Bac系统的表达及活性检测

16

作者 陈慧卿 楚茨 周亚竟 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1049-1052,共4页

DNA复制是杆状病毒生活史中最重要的事件,其中DNA聚合酶是病毒复制过程的关键酶。从家蚕杆状病毒(Bm NPV)基因组PCR扩增获得DNA聚合酶基因Bm NPV-pol的序列,利用Bac-to-Bac系统构建重组杆状病毒v Bm NPV-POL,并感染家蚕5龄幼虫,通过SDS-... DNA复制是杆状病毒生活史中最重要的事件,其中DNA聚合酶是病毒复制过程的关键酶。从家蚕杆状病毒(Bm NPV)基因组PCR扩增获得DNA聚合酶基因Bm NPV-pol的序列,利用Bac-to-Bac系统构建重组杆状病毒v Bm NPV-POL,并感染家蚕5龄幼虫,通过SDS-PAGE和Western blotting检测重组Bm NPV-POL蛋白在蚕体内成功表达,经Ni-NTA柱纯化获得了纯度较高的重组Bm NPV-POL蛋白。以poly(d A)/oligo(d T)为模板,比较在原核细胞和家蚕杆状病毒表达系统获得的重组Bm NPV-POL蛋白的酶活性,结果表明在家蚕幼虫体内表达并纯化的重组Bm NPV-POL的酶活性明显较高。利用家蚕杆状病毒表达系统简便、快速获得重组Bm NPV-POL蛋白,有助于后续对Bm NPV复制机制的研究。 展开更多

关键词 DNA聚合酶 家蚕杆状病毒表达系统 重组蛋白 酶活性

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位点特异性重组酶Cre的克隆、表达、纯化及体外活性鉴定

17

作者 高虹 张传生 +2 位作者 魏影允 胡国法 劳为德 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第6期31-33,共3页

克隆了Cre基因 ,分别构建了真核表达载体 pEF EBFP Cre和 pGEX Cre,在大肠杆菌中表达了Cre重组酶 ,并证明了重组酶的删除特性 。

关键词 位点特异性重组酶Cre 克隆 纯化 体外活性 鉴定 CRE/LOXP系统 原核表达 CRE基因 基因表达 大肠杆菌

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一种快捷可靠评价链霉菌噬菌体准ФC31整合酶功能的双荧光报告系统(英文)

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作者 徐焕宇 马晴雯 +4 位作者 任兆瑞 巩芷娟 黄淑帧 曾凡一 曾溢滔 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第7期929-933,共5页

在NIH3T3细胞中构建了一种链霉菌噬菌体准ФC31整合酶报告系统.该报告载体同时编码红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白,与编码准ФC31整合酶的载体共转染可以反映准ФC31整合酶的活性.细胞中从红色荧光到绿色荧光的变化和百分比的变化可经流式... 在NIH3T3细胞中构建了一种链霉菌噬菌体准ФC31整合酶报告系统.该报告载体同时编码红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白,与编码准ФC31整合酶的载体共转染可以反映准ФC31整合酶的活性.细胞中从红色荧光到绿色荧光的变化和百分比的变化可经流式细胞仪检出.随着转染中准ФC31整合酶表达载体的比例升高,表达绿色荧光的细胞比例上升.准ФC31整合酶表达载体和报告系统载体比例在10∶1时,可达最高约90%的红绿荧光转变率.这表明该准ФC31整合酶报告系统提供了一种在细胞中快捷可靠的评价准ФC31整合酶功能的方法. 展开更多

关键词 ФC31整合酶 报告系统 位点特异性重组 NIH3T3细胞系

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牦牛胃溶菌酶抗小鼠腹泻的研究 被引量：1

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作者 杨杜基 袁小迪 +5 位作者 李飙 张雨寒 孙鸿炜 刘益丽 袁国荣 江明锋 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1952-1963,共12页

本研究采用PichiaPink^(TM)毕赤酵母表达系统对牦牛胃溶菌酶进行异源表达,以探索提高重组牦牛胃溶菌酶表达量的方法以及重组牦牛胃溶菌酶对大肠杆菌O111所致小鼠腹泻的治疗作用。试验选取10只体重相近的无特定病原体昆明小鼠,用大肠杆菌... 本研究采用PichiaPink^(TM)毕赤酵母表达系统对牦牛胃溶菌酶进行异源表达,以探索提高重组牦牛胃溶菌酶表达量的方法以及重组牦牛胃溶菌酶对大肠杆菌O111所致小鼠腹泻的治疗作用。试验选取10只体重相近的无特定病原体昆明小鼠,用大肠杆菌O111建立小鼠腹泻模型;建模成功后取30只小鼠随机分为6组,每组5只,设对照组、腹泻模型组、牦牛胃溶菌酶组、重组牦牛胃溶菌酶组、抗生素治疗组、溶菌酶产品治疗组,除对照组和腹泻模型组外其余各组灌胃给药,记录小鼠采食量及体重;第4天采血后全部扑杀,取小鼠十二指肠组织制切片做形态学观察;取肠道内容物进行肠道菌群Alpha和Beta多样性分析。结果表明:重组牦牛胃溶菌酶在诱导96 h时表达量最高,分子质量约为15.6 ku,比活性为1428.58 U/mg。攻毒后腹泻模型组、溶菌酶产品治疗组与对照组相比采食量显著降低(P<0.05);腹泻模型组与对照组相比,白细胞数、淋巴细胞数和中性粒细胞数均有极显著升高(P<0.01);十二指肠病理解剖观察发现,牦牛胃溶菌酶组肠道绒毛有所增长且厚度增加;重组牦牛胃溶菌酶组肠绒毛有所恢复。Alpha多样性分析发现,牦牛胃溶菌酶组的Simpson指数与对照组相比显著增加(P<0.05);腹泻模型组的变形菌门和弯曲杆菌门相对丰度显著增加(P<0.05);重组牦牛胃溶菌酶组和牦牛胃溶菌酶组的厚壁菌门和拟杆菌门相对丰度有所增加。本研究表明,牦牛胃溶菌酶对大肠杆菌引起的腹泻有较好的治疗效果。由于牦牛胃溶菌酶具备较强抗胃蛋白酶能力,其原酶及重组酶在饲料添加剂以及在食品加工和医疗卫生等领域具有一定的应用潜力。 展开更多

关键词 牦牛胃溶菌酶 PichiaPinkTM毕赤酵母表达系统 重组牦牛溶菌酶 肠道菌群 小鼠腹泻

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光控诱导重组系统的开发与应用

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作者 谢甜 王梅 +3 位作者 高瑞钰 苗艳尼 张燚铭 蒋婧 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期655-671,共17页

位点特异性重组系统由重组酶和特异性识别位点两部分组成,是一种强大的基因操作工具,被广泛运用于生命科学研究。已开发的诱导型重组系统以时空方式精准调控细胞和动物的基因表达,被用于基因功能研究、细胞谱系示踪和疾病治疗等领域。... 位点特异性重组系统由重组酶和特异性识别位点两部分组成,是一种强大的基因操作工具,被广泛运用于生命科学研究。已开发的诱导型重组系统以时空方式精准调控细胞和动物的基因表达,被用于基因功能研究、细胞谱系示踪和疾病治疗等领域。根据诱导重组酶时空表达方式的不同,诱导型重组系统可分为化学诱导和光控诱导两种方式。光控诱导重组系统是利用光作为诱导剂,根据光控方式和对象的不同,可进一步分为光笼和光遗传学两类。光笼诱导重组系统是利用光敏基团来控制化学诱导剂或重组酶,光诱导前它们的活性被光敏基团抑制;在特定光照射后,它们的活性被恢复,进而实现光控诱导基因重组。光遗传学诱导重组系统是通过光遗传学开关介导分割型重组酶的重新激活来诱导基因重组。其中光遗传学开关由一系列基因编码的光敏蛋白组成,包括隐花色素、VIVID蛋白、光敏色素等。这些类型丰富的光控诱导重组系统为从高时空分辨率的维度解析基因的表达和功能提供了更多的工具,以满足日益复杂的生命科学研究需求。本文主要对不同类型光控诱导重组系统的开发原理及应用进行综述,比较其优缺点,最后对未来开发更多光控重组系统进行展望,旨在为系统优化升级提供理论基础和指导。 展开更多

关键词 光控诱导重组系统 光笼 光遗传学开关 位点特异性重组酶 时空调控

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