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鲢鱼Cystatin C对冷藏草鱼肉片质构及线粒体途径细胞凋亡的影响
1
作者 李龙飞 李树红 +6 位作者 钱邓帆 蒋宇维 仝浩楠 李晓菲 白水萌 张颖 李冉 《食品科学》 北大核心 2025年第15期145-154,共10页
分析鲢鱼Cystatin C(HmCystatin C)对冷藏鱼肉片质构品质的保持效果,及其对基于线粒体途径的肌肉细胞凋亡的调节作用,旨在探究HmCystatin C作为冷藏水产品潜在天然生物保鲜剂的可能作用机制。实验首先对草鱼肉片进行HmCystatin C注射处... 分析鲢鱼Cystatin C(HmCystatin C)对冷藏鱼肉片质构品质的保持效果,及其对基于线粒体途径的肌肉细胞凋亡的调节作用,旨在探究HmCystatin C作为冷藏水产品潜在天然生物保鲜剂的可能作用机制。实验首先对草鱼肉片进行HmCystatin C注射处理,在经Western blot验证HmCystatin C细胞渗透有效性的基础上,从质构、组织学特性、组织蛋白酶B/L酶活性及活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平监测4℃冷藏72 h内鱼肉片品质的变化。进而通过免疫组化法、TUNEL染色法、分光光度法及透射电镜检测冷藏期间肌肉细胞凋亡、线粒体膜通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)开放性、线粒体膜电位以及线粒体形态损伤程度,同时利用荧光测活法和Western blot分析Caspase-3、Caspase-9活性及蛋白表达量变化。结果表明HmCystatin C能有效渗透至组织细胞内并持续存在,实验组(Cys组)冷藏期间的剪切力和硬度均显著高于对照(Con组),而细胞间隙、组织蛋白酶B/L活性及ROS水平均明显低于Con组,尤其质构劣化被延缓至少24 h;且Hm Cystatin C明显抑制了Cys组的线粒体功能和形态的损伤程度。同时Cys组的Caspase-3、Caspase-9活性被不同程度地抑制,蛋白表达量亦低于Con组。综上推测抑制线粒体途径细胞凋亡及其相关Caspases活性是Hm Cystatin C延缓冷藏草鱼肉片品质劣化的机制之一。 展开更多
关键词 鲢鱼cystatin C 冷藏草鱼肉片 质构特性 线粒体途径细胞凋亡 细胞凋亡酶
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鲢鱼Cystatin C延缓4℃冷藏乌鱼片品质劣变及机制分析
2
作者 李龙飞 李树红 +6 位作者 谭小千 王菲 李冉 蒋宇维 仝浩楠 黎成林 周子函 《四川农业大学学报》 北大核心 2025年第1期71-79,共9页
【目的】鲢鱼Cystatin(HmCystatin C)是兼具半胱氨酸蛋白酶抑制活性及抑菌活性的天然小分子蛋白,在水产加工废弃组织中广泛存在,具有作为水产品天然生物保鲜剂的良好开发前景,研究旨在探索其延缓冷藏鱼肉片品质劣变的潜在机制。【方法... 【目的】鲢鱼Cystatin(HmCystatin C)是兼具半胱氨酸蛋白酶抑制活性及抑菌活性的天然小分子蛋白,在水产加工废弃组织中广泛存在,具有作为水产品天然生物保鲜剂的良好开发前景,研究旨在探索其延缓冷藏鱼肉片品质劣变的潜在机制。【方法】将重组HmCystatin C注射并涂抹于乌鱼肉片后监测4℃冷藏5 d期间的品质变化,分别从HmCystatin C细胞内渗透性、对组织蛋白酶B/L及优势腐败菌的抑制3个角度分析其可能的作用机制。【结果】HmCystatin C处理组(Cys组)冷藏期间各品质指标(感官评分、剪切力、TPA质构、肌纤维断裂指数MFI、结构蛋白完整性、挥发性盐基氮TVB-N、菌落总数)均优于对照组(Con组),保鲜期延长。同时免疫组化检测发现HmCystatin C可以渗透到鱼肉细胞内部,且在整个冷藏期内明显抑制了组织蛋白酶B/L活性;此外,HmCystatin C对从冷藏乌鱼肉片中分离的优势腐败菌,即中间气单胞菌(Aeromonas media)和腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)表现出明显的抑制活性。【结论】HmCystatin C可渗透至鱼肉细胞内部,显著抑制内源性组织蛋白酶B/L活性与腐败微生物的生长,延缓乌鱼肉片4℃冷藏期间的品质劣化。 展开更多
关键词 Hmcystatin C 冷藏乌鱼肉片品质 细胞内渗透性 酶活抑制 抑菌
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血清NGAL和Cystatin C对糖尿病肾病早期诊断的意义研究 被引量：46
3
作者 童俊容 何凤 +5 位作者 罗正茂 张虹 王妍春 黄远航 王寅 张建林 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期810-812,共3页
目的探讨糖尿病肾病(DN)患者血清NGAL、CystatinC的改变及其对DN早期诊断的临床意义。方法选择2型糖尿病(T2DM)患者55例,根据尿清蛋白排泄率(UAER)分为3组,正常清蛋白尿(NA)组15例、微量清蛋白尿(MA)组17例、临床肾病(CN)组23例;同期选... 目的探讨糖尿病肾病(DN)患者血清NGAL、CystatinC的改变及其对DN早期诊断的临床意义。方法选择2型糖尿病(T2DM)患者55例,根据尿清蛋白排泄率(UAER)分为3组,正常清蛋白尿(NA)组15例、微量清蛋白尿(MA)组17例、临床肾病(CN)组23例;同期选取非肾病患者15例作为对照组。应用ELISA法检测患者血清NGAL(sNGAL)水平,应用免疫速率散射比浊法检测CystatinC水平,分析血清NGAL及Cystatin C水平与肾小球滤过率(GFR)之间的相关关系,应用受试者操作特征(ROC)曲线评价二者诊断DN的敏感度。结果(1)MA组、CN组患者血清NGAL和CystatinC水平均较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05),其中CN组患者血清NGAL和Cystatin C水平最高〔分别为(845.8±68.8)ng/ml和(3.58±1.21)mg/L〕。(2)Pearson相关分析:糖尿病患者血清NGAL和CystatinC水平与GFR均呈负相关(r值分别为-0.871和-0.792,P<0.01),且血清NGAL与GFR的相关性更密切。(3)两组患者血清NGAL和CystatinCROC曲线下的面积分别为0.839和0.720。结论糖尿病患者血清NGAL与GFR有较好的相关性,NGAL是诊断早期DN敏感而准确的指标,有望用于临床监测。 展开更多
关键词 NGAL cystatin C 糖尿病肾病 早期诊断
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检测肺癌患者血清Cathepsin X及Cystatin C的临床意义 被引量：9
4
作者 张学德 侯彦丽 +4 位作者 牛泽群 李维 孟夏 张娜 杨拴盈 《中国肺癌杂志》 CAS 北大核心 2013年第8期411-416,共6页
背景与目的组织蛋白酶X(Cathepsin X,Cat X)是最近发现的一种组织蛋白酶(Cathepsins,Cats)家族成员。近年来研究表明CatX与多种恶性肿瘤发生、发展有关。本研究旨在探讨肺癌患者血清CatX及cystatinC的表达与临床特征及预后的关系。方法... 背景与目的组织蛋白酶X(Cathepsin X,Cat X)是最近发现的一种组织蛋白酶(Cathepsins,Cats)家族成员。近年来研究表明CatX与多种恶性肿瘤发生、发展有关。本研究旨在探讨肺癌患者血清CatX及cystatinC的表达与临床特征及预后的关系。方法采用ELISA法定量检测84例肺癌患者及36例健康对照者血清CatX及cystatinC表达。结果肺癌患者血清Cat X和cystatin C水平明显高于健康人(P<0.01);CatX水平与肺癌病理类型之间有相关的趋势(P=0.076)。血清cystatin C水平与肺癌TNM分期正相关(P=0.01),cystatinC/CatX与淋巴结转移之间有相关趋势(P=0.058)。CatX表达水平与肺癌患者总生存期(overallsurvival,OS)相关,高水平CatX肺癌患者OS更短。Cox单因素回归示CatX高表达以及TNM分期是影响肺癌预后独立因素,Cox多因素回归显示,仅TNM分期是患者预后的独立危险因素。结论肺癌患者中血清CatX和cystatinC水平升高,检测肺癌患者Cat X和cystatin C血清水平对于指导临床肺癌诊断、评估预后有重要意义。 展开更多
关键词 CATHEPSIN X cystatin C 肺肿瘤 血清
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蛇毒cystatin基因转染抗人胃腺癌细胞体外侵袭作用的研究 被引量：9
5
作者 万榕 郑海音 +2 位作者 宋军 林旭 林建银 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第17期961-965,共5页
目的:探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)对人胃腺癌细胞SGC7901侵袭转移的抑制作用。方法:采用人工拼接方法合成蛇毒cystatincDNA,构建pcDNA3.1/sv-cystatin真核表达质粒,经脂质体转染将pcDNA3.1/sv-cystatin质粒和pcDNA3.1质... 目的:探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)对人胃腺癌细胞SGC7901侵袭转移的抑制作用。方法:采用人工拼接方法合成蛇毒cystatincDNA,构建pcDNA3.1/sv-cystatin真核表达质粒,经脂质体转染将pcDNA3.1/sv-cystatin质粒和pcDNA3.1质粒分别导入胃腺癌细胞系SGC7901;利用RT-PCR和Westernblot检测SGC7901细胞中sv-cystatin基因的表达;应用细胞-基质粘附实验、细胞运动实验及重建基底膜侵袭实验分析sv-cystatin表达对SGC7901细胞粘附、运动和侵袭能力的影响。结果:转染sv-cystatin基因后,SGC/sv-cystatin细胞克隆中可检测到sv-cystatin的明显表达,SGC/sv-cystatin细胞的运动能力和体外穿越重建基底膜的能力明显低于转染空载体细胞和未转染的SGC7901细胞,但其体外粘附能力未见明显变化。结论:sv-cystatin基因的表达可使胃癌SGC7901细胞体外运动能力及侵袭能力明显减弱,提示sv-cystatin具有抑制胃癌细胞侵袭转移的作用。 展开更多
关键词 胃肿瘤 转染 蛇毒cystatin 表达
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鼻咽癌患者血清MIP-3α与cystatin A表达及其临床意义 被引量：7
6
作者 李军 汤敏中 +7 位作者 陆爱英 钟伟铭 高健全 郑裕明 曾洪 陈万生 梁伟 蔡永林 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期845-851,共7页
背景与目的:目前,检测鼻咽癌的病灶残留、复发、远处转移,评价放化疗敏感性及判断预后主要依赖影像学的检查。寻找鼻咽癌早期诊断及预后相关的特异性分子标志物对鼻咽癌的早期诊断及个体化治疗具有重要意义。本研究通过检测血清巨噬细... 背景与目的:目前,检测鼻咽癌的病灶残留、复发、远处转移,评价放化疗敏感性及判断预后主要依赖影像学的检查。寻找鼻咽癌早期诊断及预后相关的特异性分子标志物对鼻咽癌的早期诊断及个体化治疗具有重要意义。本研究通过检测血清巨噬细胞炎性蛋白-3α(macrophage inflammatory protein-3α,MIP-3α)和cystatin A蛋白在鼻咽癌患者治疗前、后及健康人中的表达情况,探讨其在鼻咽癌诊断、与临床病理特征关系以及疗效评价中的作用。方法:应用定量酶联免疫吸附法检测140例初治无远处转移的鼻咽癌患者治疗前、治疗结束后血清中MIP-3α和cystatin A的表达情况,并以100名健康体检者为对照。结果:以血清MIP-3α水平为31 pg/mL及cystatin A水平为16 ng/mL诊断鼻咽癌的敏感度分别为92.1%及42.1%,特异度分别为86.0%及85.0%。140例鼻咽癌患者经过治疗后均达到完全缓解或者部分缓解。鼻咽癌患者治疗前血清MIP-3α和cystatin A水平显著高于治疗后和健康对照者。MIP-3α和cystatin A均与鼻咽癌临床分期相关,MIP-3α还与T分期有关。治疗后完全缓解患者的血清MIP-3α降至健康对照者水平。部分缓解患者仍高于健康对照者水平,而完全缓解与部分缓解患者的血清cystatin A均降至健康对照者水平。在1年内发生远处转移的患者治疗后血清MIP-3α和cystatin A水平均明显高于未发生远处转移患者和健康对照者。MIP-3α和cystatin A表达之间存在相关性。结论:血清MIP-3α水平作为辅助诊断鼻咽癌的指标有一定的临床意义。血清MIP-3α与cystatin A检测有助于判断鼻咽癌分期和治疗后的近期疗效。 展开更多
关键词 鼻咽癌 巨噬细胞炎性蛋白-3α cystatin A 临床疗效
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cathepsin B与cystatin C在青年及老年人胃癌发生、发展中的意义 被引量：6
7
作者 何琳莉 蹇顺海 文彬 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期380-383,共4页
目的观察青年及老年人胃癌组织中cathepsin B和cystatin C的表达差异,探讨二者在胃癌侵袭和转移过程中的作用。方法采用免疫组化SP法检测52例青年人及65例老年人胃癌、48例高级别上皮内瘤变、53例正常胃黏膜组织中cathepsin B和cystati... 目的观察青年及老年人胃癌组织中cathepsin B和cystatin C的表达差异,探讨二者在胃癌侵袭和转移过程中的作用。方法采用免疫组化SP法检测52例青年人及65例老年人胃癌、48例高级别上皮内瘤变、53例正常胃黏膜组织中cathepsin B和cystatin C的表达。结果青年人胃癌组cathespin B的表达水平明显高于老年人胃癌组(P<0.05),两组中cystatin C的表达差异无显著性;cathespin B在胃癌中的表达水平明显高于高级别上皮内瘤变(P<0.01)和正常胃黏膜(P<0.01),且在有淋巴结转移及远处转移组中表达明显增高(P<0.05);cystatin C表达水平在正常胃黏膜中最高,其次为高级别上皮内瘤变,与胃癌组相比差异有显著性(P<0.01);Ⅲ+Ⅳ期胃癌组中cystatin C表达明显低于Ⅰ+Ⅱ期胃癌组(P<0.05);cystatin C与cathespin B表达呈负相关(rs=-0.648,P<0.01)。结论 cathepsin B、cystatin C的表达水平与胃癌的生物学行为密切相关。cathespin B高表达可能是青年人胃癌进展更为迅速的原因之一,对评估患者的预后有一定参考价值。 展开更多
关键词 胃肿瘤 青年人 老年人 cathespin B cystatin C
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鲢鱼重组Cystatin及其酶解产物对草鱼冷藏肉片优势腐败菌的抑制作用 被引量：3
8
作者 杨娟 钟海霞 +5 位作者 李树红 白稚子 林灵 李美良 刘明宇 林昊 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期53-59,共7页
首先通过三羟甲基甘氨酸-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)和滤纸片法分别鉴定木瓜蛋白酶液(Papain)对鲢鱼重组半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)酶解程度及酶解产物对草鱼冷藏肉片中分离的3种优势腐败菌,即草莓假单胞菌(Pseudomonas... 首先通过三羟甲基甘氨酸-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)和滤纸片法分别鉴定木瓜蛋白酶液(Papain)对鲢鱼重组半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)酶解程度及酶解产物对草鱼冷藏肉片中分离的3种优势腐败菌,即草莓假单胞菌(Pseudomonas fragi)、腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)和中间气单胞菌(Aeromonas media)的抑菌活性。结果表明,酶解6 h后的产物,即9.5 ku以下的片段对3种菌的抑菌效果均最好。再利用凝胶过滤高效液相色谱(TSK-GEL G2000SWXLHPLC)和双向电泳对6 h酶解产物进行分离纯化分析。发现仅峰T-2对3种菌均具有明显的抑制活性,峰T-2在TSK-GEL G2000SWXLHPLC上呈现单一峰,电泳得到单一蛋白点,其分子质量为8.6 ku,p I值为6.5。最后通过RPLC-MS/MS串联质谱鉴定该蛋白点,得到3个肽片段(31QSNDAFVR38、46VQQQVAAGMKY56和81NPSIEQVIQ89)且含有Cystatin特征序列QVAAG。结果提示,Cystatin蛋白(完整序列分子质量12~14 ku)内部,存在能够发挥抑菌作用的肽片段。 展开更多
关键词 鲢鱼重组cystatin 酶解 抑菌作用 双向电泳分析 质谱鉴定
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中华鲟cystatin酵母工程菌的发酵条件和表达产物的纯化 被引量：2
9
作者 马冬梅 白俊杰 +3 位作者 简清 劳海华 叶星 罗建仁 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期584-587,共4页
为进一步开展重组中华鲟(Acipenser sinensis)半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatin功能分析和应用研究,进行了诱导方式、诱导时间和培养基pH值对该重组菌的表达量的影响研究。结果表明,用直接诱导法,在诱导72 h、pH值为6.5、甲醇终浓度为0.5... 为进一步开展重组中华鲟(Acipenser sinensis)半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatin功能分析和应用研究,进行了诱导方式、诱导时间和培养基pH值对该重组菌的表达量的影响研究。结果表明,用直接诱导法,在诱导72 h、pH值为6.5、甲醇终浓度为0.5％的条件下,对重组酵母进行诱导最为合适,重组cystatin表达量可达每升培养基215 mg,约占培养基上清总蛋白量的76.3％。经离子交换层析法纯化,重组cystatin的纯度可达94.2％。生物活性检测试验表明。该方法提取的重组cystatin对木瓜蛋白酶的活性具有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 中华鲟 cystatin酵母工程菌 发酵条件 表达产物 产物纯化
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Cystatin F在中枢神经系统脱髓鞘动物模型中的表达 被引量：2
10
作者 李菲菲 范凯 +2 位作者 张艳丽 宋大为 马坚妹 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期159-162,共4页
神经脱髓鞘疾病是中枢神经系统难治性疾病,髓鞘脱失后伴有各种基因表达的异常。明确这些基因的表达形式对脱髓鞘疾病的治疗具有重要意义。本研究利用0.2%cuprizone饲育C57BL/6小鼠6周制备中枢神经脱髓鞘模型,采用原位杂交技术对组织蛋... 神经脱髓鞘疾病是中枢神经系统难治性疾病,髓鞘脱失后伴有各种基因表达的异常。明确这些基因的表达形式对脱髓鞘疾病的治疗具有重要意义。本研究利用0.2%cuprizone饲育C57BL/6小鼠6周制备中枢神经脱髓鞘模型,采用原位杂交技术对组织蛋白酶抑制剂cystatin F的mRNA表达进行研究。结果发现,正常野生型小鼠中枢神经系统中未见cystatin F mRNA的表达,而大量表达于脱髓鞘模型小鼠白质内。通过小胶质细胞标志物Iba1抗体免疫组化和c-fms的原位杂交研究发现,脱髓鞘模型小鼠白质内有大量激活的小胶质细胞。为进一步确定表达cystatin F的细胞类型,通过cystatin F原位杂交后Iba1免疫双染技术,确定cystatin F在中枢神经主要由激活的小胶质细胞表达,提示其表达与小胶质细胞活化和崩解髓鞘残骸清除有关。 展开更多
关键词 脱髓鞘 cystatin F 小胶质细胞
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用分子动力学方法对Cystatin蛋白的研究 被引量：2
11
作者 张慧丽 刘元 +2 位作者 于媛媛 胡冰洁 宋有涛 《辽宁工程技术大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2008年第3期472-474,共3页
通过动力学模拟研究野生型和I66Q突变型cC的动力学特性,为设计和筛选治疗Cystatin C引起的脑淀粉样血管病药物提供重要的理论依据。通过分子动力学模拟的方法,选择可引起脑淀粉样血管病的Cystatin蛋白为模型,探讨了在形成致病状纤维过... 通过动力学模拟研究野生型和I66Q突变型cC的动力学特性,为设计和筛选治疗Cystatin C引起的脑淀粉样血管病药物提供重要的理论依据。通过分子动力学模拟的方法,选择可引起脑淀粉样血管病的Cystatin蛋白为模型,探讨了在形成致病状纤维过程中起到关键作用的蛋白质结构位点。研究分子动力学模拟显示,突变型cC较野生型更易形成淀粉样纤维,突变型蛋白的L1部位较野生型具有更高的柔性,更易通过结构域交换形成二聚体进而引发淀粉样纤维沉淀。该研究结果对于设计治疗相关疾病如疯牛病等的药物也有一定的借鉴意义。 展开更多
关键词 分子动力学模拟 脑淀粉样血管病 淀粉样纤维cystatin 结构域交换
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橡胶树cystatin基因HbCYS1的克隆及割胶应答 被引量：2
12
作者 戚继艳 李和平 +1 位作者 阳江华 唐朝荣 《热带作物学报》 CSCD 2011年第5期833-839,共7页
在植物中,半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)广泛参与逆境胁迫应答和发育调控。在已建立的胶乳EST序列数据库中,鉴定了一个注释为cystatin的序列重叠群(Contig)。利用RACE和RT-PCR进一步获得1个长度为947 bp、包含完整读码框(741 bp)的cD... 在植物中,半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)广泛参与逆境胁迫应答和发育调控。在已建立的胶乳EST序列数据库中,鉴定了一个注释为cystatin的序列重叠群(Contig)。利用RACE和RT-PCR进一步获得1个长度为947 bp、包含完整读码框(741 bp)的cDNA,命名为HbCYS1;去除N端27个aa的信号肽后,HbCYS1蛋白生成1个包含219个aa的成熟蛋白(24.2 ku),具有cystatin反应位点的保守序列基序GG、QXVXG和A/PW,同时具有植物cystatin所特有的LARFAV基序;推测HbCYS1是一种分泌性蛋白,与同样来自大戟科的1个蓖麻cystatin蛋白(CAA89697)的亲缘关系最近,氨基酸序列的一致性达79%;在胶乳中,割胶明显促进HbCYS1基因的上调表达。割胶是一种典型的非生物胁迫,橡胶树对割胶胁迫的适应能力是决定其持续生产力的一个重要因素,推测HbCYS1基因可能参与橡胶树的胁迫应答与胶乳再生。 展开更多
关键词 橡胶树 cystatin CDNA克隆 HbCYS1 序列分析 割胶应答
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定量检测血和尿中Cystatin C含量在肾移植患者肾功能评价中的应用 被引量：1
13
作者 马樱 许晓光 +4 位作者 黄海燕 李琦 宋朝君 石炳毅 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1140-1142,共3页
目的:建立定量检测半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cysC)水平的夹心ELISA方法,对肾移植患者的肾功进行监测,以期作为术后急性排斥反应(AR)及肾功能延迟恢复(DGF)发生的一项新的预警指标。方法:建立分泌抗人cys C单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株,... 目的:建立定量检测半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cysC)水平的夹心ELISA方法,对肾移植患者的肾功进行监测,以期作为术后急性排斥反应(AR)及肾功能延迟恢复(DGF)发生的一项新的预警指标。方法:建立分泌抗人cys C单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株,制备腹水纯化mAbs并进行辣根过氧化物酶标记,建立检测cys C的夹心ELISA方法;应用此方法检测正常人及23例肾移植患者移植手术前后的血清(Scys C)及尿(Ucys C)标本中cys C的含量并分析其与血清肌酐(SCR)的相关性。结果:获得7株可稳定分泌抗cys CmAb的杂交瘤细胞。应用建立的ELISA方法检测cys C含量敏感度可达0.1μg/L。肾移植正常恢复(NC)组患者Scys C及Ucys C含量与SCR下降趋势一致。术后发生AR的患者Ucys C水平持续较高,直到术后21 d才出现下降。而发生DGF的患者同NC组患者相比术后4周内Scys C及Ucys C与SCR维持在较高水平,Ucys C的水平有逐渐升高的趋势,直到术后60 d才下降到与NC相近的水平。结论:建立了敏感稳定的检测cys C含量的ELISA方法,可用于检测Ucys C水平。而Scys C及Ucys C的持续升高可能提示肾移植患者术后AR或DGF的发生。 展开更多
关键词 cystatin C 肾移植 夹心ELISA 肾功能
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重组Cystatin对冷藏鲢鱼的抑菌效果 被引量：1
14
作者 钟海霞 李冉 +6 位作者 李树红 杨娟 胡强 柯勤勤 林灵 白稚子 李美良 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期111-118,共8页
分离鉴定4℃有氧冷藏鲢鱼去皮肉片货架期终点腐败相关优势假单胞菌,并研究鲢鱼重组Cystatin(家族Ⅱ)对优势腐败假单胞菌的抑菌效果。首先利用CFC培养基从4℃有氧冷藏鲢鱼去皮肉片货架期终点,分离筛选出腐败相关假单胞菌,并采用生理生化... 分离鉴定4℃有氧冷藏鲢鱼去皮肉片货架期终点腐败相关优势假单胞菌,并研究鲢鱼重组Cystatin(家族Ⅱ)对优势腐败假单胞菌的抑菌效果。首先利用CFC培养基从4℃有氧冷藏鲢鱼去皮肉片货架期终点,分离筛选出腐败相关假单胞菌,并采用生理生化和16 SrDNA法对其进行鉴定,其次将腐败菌株进行回接试验,通过测定各腐败菌回接组的挥发性盐基氮(TVB-N)值、菌落数、感官评分判断其致腐能力。最后,采用滤纸片扩散法和营养肉汤法鉴定重组鲢鱼Cystatin(家族Ⅱ)对优势腐败假单胞菌的抑菌效果。结果表明,荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)和草莓假单胞菌(Pseudomonas fragi)为主要致腐菌,所占比例分别为63.3%、26.7%,且荧光假单胞菌致腐能力强于草莓假单胞菌。重组Cystatin对两种菌均有明显的抑菌效果,且呈剂量依赖关系。 展开更多
关键词 鲢鱼 4℃有氧冷藏 优势假单胞菌 分离鉴定 cystatin 抑菌作用
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食管癌组织中cystatin B基因、D10-86 cDNA片段的表达 被引量：1
15
作者 郭长青 王明荣 +6 位作者 李继昌 徐峰 陈宝生 徐昕 蔡岩 韩亚玲 吴旻 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第2期235-238,共4页
目的:研究食管癌组织中cystatin B基因、D10-86 cDNA片段的表达及相关性。方法:采用RT-PCR方法检测了41对食管癌组织及配对食管癌旁正常黏膜cystatin B基因、D10-86 cDNA片段的表达。结果:cystatin B基因、D10-86 cDNA片段各在82.9％(34... 目的:研究食管癌组织中cystatin B基因、D10-86 cDNA片段的表达及相关性。方法:采用RT-PCR方法检测了41对食管癌组织及配对食管癌旁正常黏膜cystatin B基因、D10-86 cDNA片段的表达。结果:cystatin B基因、D10-86 cDNA片段各在82.9％(34/41)、41.5％(17/41)食管癌组织中的表达水平低于配对的食管癌旁正常黏膜,cystatin B基因的表达下调情况显著高于D10-86 cDNA片段(P<0.05),但2者的表达无相关性(JD>0.05)。结论:cystatin B基因、D10-86 cDNA片段在食管癌中表达下调,可能源于不同的机制。2者可能分别是由不同的机制而导致在食管癌组织中表达下调。 展开更多
关键词 cystatin B基因 D10—86 CDNA片段 食管肿瘤 基因表达 逆转录聚合酶链反应
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人cystatinB基因在哺乳动物细胞株中的定位与表达 被引量：2
16
作者 耿慧武 刘君 +3 位作者 陈应炉 杨军 刘晓颖 范礼斌 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第4期361-364,共4页
目的用基因克隆方法构建带FLAG-tag的人cystatinB真核表达载体,用其转染COS-7和HEK 293 T细胞观察cystatin B在增殖细胞内的定位;转染HEK 293 T细胞检测其表达。方法设计带FLAG-tag的引物,以人cystatin B全长cDNA序列的质粒为模板,PCR... 目的用基因克隆方法构建带FLAG-tag的人cystatinB真核表达载体,用其转染COS-7和HEK 293 T细胞观察cystatin B在增殖细胞内的定位;转染HEK 293 T细胞检测其表达。方法设计带FLAG-tag的引物,以人cystatin B全长cDNA序列的质粒为模板,PCR法扩增cystatin B全长序列,然后插入pCDNA 3中构建pCDNA 3-cystatin B-FLAG(CSTBF)质粒;脂质体法转染至COS-7、HEK 293 T细胞,荧光显微镜下观察其在细胞内定位;转染至HEK 293 T细胞,提取细胞总蛋白进行Western blot。结果正确构建了pCD-NA 3-cystatin B-FLAG质粒;定位实验表明在COS-7和HEK293 T细胞中,cystatin B主要分布在细胞核内,核膜处更集中,胞浆内也有广泛分布;Western blot结果表明该质粒能在细胞中有效表达。结论该研究结果为了解cystatin B在细胞内与其他蛋白质相互作用及功能提供了一定的基础。 展开更多
关键词 cystatinB 细胞定位 转染 免疫荧光
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玉米自交系B73全基因组cystatin抗虫基因家族分析 被引量：1
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作者 于金海 《黑龙江农业科学》 2010年第8期10-13,共4页
半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)基因具有cystatin结构特征的蛋白结构域,广泛存在于植物或动物体内。此类基因在植物或动物蛋白质组中具有多个功能各异的家族成员,并在抗虫中扮演重要角色。通过利用玉米B73全基因组的基因表达序列数据,... 半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)基因具有cystatin结构特征的蛋白结构域,广泛存在于植物或动物体内。此类基因在植物或动物蛋白质组中具有多个功能各异的家族成员,并在抗虫中扮演重要角色。通过利用玉米B73全基因组的基因表达序列数据,对12个cystatin基因的结构组成、染色体分布、系统进化等进行了分析。鉴定了该基因家族在蛋白序列间3个高度保守基序,构建了基因家族系统进化树,为该重要基因家族的进化提供了依据的同时也为克隆和分离该类抗虫基因提供参考。 展开更多
关键词 玉米 cystatin基因 全基因组 抗虫 基因家族
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鲢鱼重组cystatin C的抑菌活性及抑菌机理初探 被引量：4
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作者 徐小烽 李树红 +7 位作者 钱邓帆 郭淇羽 李冉 李龙飞 岑永好 段志豪 韩学艳 米辰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第24期125-131,共7页
cystatins是一类天然抗菌蛋白,广泛分布于鱼类加工废弃组织。采用滤纸片扩散法和二倍稀释法,评价了鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)重组cystatin C(HmCystatin C)对6株常见的水产品腐败菌的抑菌活性;并以铜绿假单胞菌和腐生葡萄球菌... cystatins是一类天然抗菌蛋白,广泛分布于鱼类加工废弃组织。采用滤纸片扩散法和二倍稀释法,评价了鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)重组cystatin C(HmCystatin C)对6株常见的水产品腐败菌的抑菌活性;并以铜绿假单胞菌和腐生葡萄球菌为典型受试菌,测定HmCystatin C与菌体及其细胞壁成分脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)和肽聚糖(peptidoglycan,PGN)的结合情况,及对受试菌生长曲线、细胞壁、细胞质膜通透性的影响,初步探讨其抑菌机制。结果表明,HmCystatin C对除枯草芽孢杆菌外的5株腐败菌均具抑制作用,对典型受试菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)及最低杀菌浓度(minimal bactericide concentration,MBC)均为3.5 mg/mL;HmCystatin C能与典型受试菌结合,并且对LPS和PGN表现出亲和性。此外典型受试菌的细胞壁和细胞质膜被破坏,胞内物质渗出。因此推测HmCystatin C可能首先吸附到菌体表面并与细胞壁成分结合,进而破坏细胞完整性,导致内容物外泄后菌体死亡。该结果为阐明鱼类cystatins抑菌机制奠定实验基础,也为综合利用鱼源cystatins提供理论参考。 展开更多
关键词 鲢鱼重组cystatin C 抗菌蛋白 水产品腐败菌 抑菌活性 抑菌机理
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Cystatin C敲除诱导的长爪沙鼠抑郁模型 被引量：1
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作者 伍颖 王诗媛 +8 位作者 胡彩姣 朱筱 郭萌 吕建祎 刘欣 李长龙 霍学云 陈振文 杜小燕 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2022年第5期907-916,共10页
目的内源半胱氨酸蛋白酶抑制剂Cystatin C(CysC)由CST3基因编码,在脑中高表达,在多种神经病理过程中具有保护作用。本文旨在观察敲除(knock out,KO)长爪沙鼠CysC基因能否诱导动物的抑郁模型,并探讨模拟病理条件下CysC对内皮细胞和神经... 目的内源半胱氨酸蛋白酶抑制剂Cystatin C(CysC)由CST3基因编码,在脑中高表达,在多种神经病理过程中具有保护作用。本文旨在观察敲除(knock out,KO)长爪沙鼠CysC基因能否诱导动物的抑郁模型,并探讨模拟病理条件下CysC对内皮细胞和神经细胞的保护作用。方法使用qPCR验证CysC敲除(CysC-KO)沙鼠不同组织中CysC的转录水平;通过糖水偏好、社会互交、新物体识别、明暗箱和旷场实验,评估CysC-KO对长爪沙鼠行为的影响;分别在缺氧和饥饿(H&S)、氧糖剥夺/复氧(OGD/R)或炎症因子刺激(TNF-α/LPS)模拟的病理条件下,利用MTT法检测CysC或其抑制剂对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a)活力的影响。结果在CysC-KO长爪沙鼠的各种组织中CysC表达显著降低,尤其是大脑。长爪沙鼠的CysC缺失,可通过年龄依赖的方式诱导沙鼠的抑郁样行为,但其运动和探索行为未见异常。CysC在H&S、OGD/R和炎症条件下,能显著改善内皮细胞和神经细胞的增殖;而抑制CysC则具有相反作用。结论敲除CysC的长爪沙鼠表现出抑郁样行为,这可能是血管内皮细胞和神经元细胞失去CysC的保护作用引起。这些结果为研究CysC在抑郁发生中的作用机制提供了新的长爪沙鼠模型。 展开更多
关键词 cystatin C 长爪沙鼠 动物模型 抑郁行为 神经保护
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CystatinM抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和迁移 被引量：1
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作者 赵亚敏 何炜 +3 位作者 王峰 赵国强 叶延伟 樊青霞 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期375-379,共5页
目的 CST6基因编码cystatin M蛋白,体外构建CST6过表达载体,转染胃癌SGC-7901细胞株,观察cystatin M对其增殖和迁移能力的影响。方法实验分3组:pcDNA3.1(+)-CST6组、pcDNA3.1(+)组与未转染组;RTPCR验证稳转系SGC-7901/CST6细胞CST6RNA... 目的 CST6基因编码cystatin M蛋白,体外构建CST6过表达载体,转染胃癌SGC-7901细胞株,观察cystatin M对其增殖和迁移能力的影响。方法实验分3组:pcDNA3.1(+)-CST6组、pcDNA3.1(+)组与未转染组;RTPCR验证稳转系SGC-7901/CST6细胞CST6RNA水平的表达;Western blot验证稳转系SGC-7901/CST6细胞CST6蛋白水平的表达;MTT实验检测实验组与对照组细胞的增殖能力;划痕实验检测实验组与对照组细胞的迁移能力。结果稳转系SGC-7901/CST6细胞稳定表达CST6基因mRNA和cystatin M蛋白;pcDNA3.1(+)-CST6组细胞增殖能力和迁移能力均较pcDNA3.1(+)组和未转染组细胞降低(P<0.05)。结论 Cystatin M能够抑制胃癌SGC-7901细胞株增殖和迁移能力。 展开更多
关键词 CST6基因 cystatin M 胃癌 SGC一7901细胞 增殖 迁移
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