miR-1180-5p通过激活CDKN1A基因表达抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭 被引量：4

1

作者 王勇 郭永连 +3 位作者 陈琳 李国灏 应诚诚 程薇 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期698-703,共6页

目的:研究微小RNA-1180-5p(miR-1180-5p)对前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP恶性生物行为的影响及可能的作用机制。方法:合成ds Control(ds Control组)和miR-1180-5p(miR-1180-5p组),分别转染至两个前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP。采用qPCR和West... 目的:研究微小RNA-1180-5p(miR-1180-5p)对前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP恶性生物行为的影响及可能的作用机制。方法:合成ds Control(ds Control组)和miR-1180-5p(miR-1180-5p组),分别转染至两个前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP。采用qPCR和Western blotting分析转染后各组细胞CDKN1A、Cyclin D1和CDK6 mRNA及蛋白的表达变化,采用流式细胞术、MTT法、平板克隆实验和Transwell实验分别检测细胞周期分布、增殖活力、克隆形成能力、细胞迁移和侵袭能力。结果:qPCR结果显示,相比ds Control,转染miR-1180-5p后VCAP和LNCaP细胞中CDKN1A mRNA表达明显上调(P<0.01);Cyclin D1和CDK6 mRNA表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。Western blotting与qPCR结果相符。转染miR-1180-5p后VCAP和LNCaP位于G0/G1期的细胞比例增加(P<0.01),而位于S期和G2/M期的细胞比例减少(P<0.05),细胞周期被阻滞在G0/G1期。转染miR-1180-5p后,两种前列腺癌细胞增殖活力较ds Control组明显降低(P<0.05),miR-1180-5p组两种细胞的克隆数量明显较少(P<0.01),同时miR-1180-5p组两组细胞迁移和侵袭能力均下降(P<0.01)。结论:miR-1180-5p能显著激活前列腺癌细胞中CDKN1A基因的表达,从而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物行为。 展开更多

关键词 miR-1180-5p cdkn1a基因 前列腺癌 增殖 迁移 侵袭

在线阅读 下载PDF 职称材料

CDKN1A、CDKN1B基因在蛋鸡等级前卵泡组织中的时空表达模式研究 被引量：3

2

作者 陈晓霞 《中国家禽》 北大核心 2019年第4期12-16,共5页

为了探讨CDKN1A、CDKN1B在蛋鸡卵泡中的表达规律和模式,采用半定量RT-PCR和免疫组织化学的方法分别检测CDKN1A、CDKN1B mRNA及其蛋白在蛋鸡卵泡中的表达模式分析。结果表明:CDKN1A、CDKN1B基因在等级前卵泡中mRNA整体表达水平显著高于... 为了探讨CDKN1A、CDKN1B在蛋鸡卵泡中的表达规律和模式,采用半定量RT-PCR和免疫组织化学的方法分别检测CDKN1A、CDKN1B mRNA及其蛋白在蛋鸡卵泡中的表达模式分析。结果表明:CDKN1A、CDKN1B基因在等级前卵泡中mRNA整体表达水平显著高于等级卵泡表达水平。CDKN1A、CDKN1B蛋白主要在等级前卵泡的颗粒细胞和卵母细胞中表达。研究结果揭示了CDKN1A和CDKN1B基因有可能参与蛋鸡卵泡的发育调控过程。 展开更多

关键词 蛋鸡 cdkn1a CDKN1B 等级前卵泡

在线阅读 下载PDF 职称材料

益气补肾调脂方通过调控CDKN1A改善非酒精性脂肪性肝炎的研究 被引量：7

3

作者 严峻彬 聂云梦 +2 位作者 张婷婷 徐素美 陈芝芸 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期311-318,共8页

目的网络药理学筛选益气补肾调脂方(Yiqi-Bushen-Tiaozhi formula,YBTF)治疗非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的机制;体内实验完成验证。方法TCMSP数据库、HPLC-MS明确YBTF成分、靶点;GSE89632数据集,筛选NASH... 目的网络药理学筛选益气补肾调脂方(Yiqi-Bushen-Tiaozhi formula,YBTF)治疗非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的机制;体内实验完成验证。方法TCMSP数据库、HPLC-MS明确YBTF成分、靶点;GSE89632数据集,筛选NASH与正常组差异基因;GeneCards、Disgenet数据库筛选疾病基因。交集为YBTF治疗NASH的靶基因。基因本体论(Gene Ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、疾病本体论(Disease Ontology,DO)富集分析,蛋白互作网络(protein-protein interaction,PPI)、拓扑分析,明确治疗NASH关键基因。分子对接(molecular docking)预测活性成分、靶点能否结合,发挥疗效;油红O、HE染色检测肝脏脂肪变、炎症;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)检测肝细胞衰老;荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR),蛋白质免疫印迹法验证靶基因mRNA、蛋白表达。结果YBTF可调控周期依赖性激酶抑制剂1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A)改善细胞衰老,治疗NASH。结论网络药理学结合实验可为研究YBTF治疗NASH的机制提供新的思路。 展开更多

关键词 益气补肾调脂方 非酒精性脂肪性肝炎 网络药理学 cdkn1a 细胞衰老 Β-半乳糖苷酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

HLA-A2限制性CDKN1A编码突变肽的预测及其在膀胱癌中的应答性分析

4

作者 王晨 刘源涌 +5 位作者 夏维敏 季萍 余奇文 曹志伟 王颖 沈海波 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1246-1251,共6页

目的:利用TCGA数据库筛选和分析膀胱癌肿瘤抑制基因CDKN1A的突变特征,筛选具有肿瘤新抗原特征的CDKN1A抗原突变肽并分析其在人群中的免疫反应性。方法:利用TCGA公共数据库中413例膀胱癌全外显子测序数据,根据亲和力预测和基因表达量,筛... 目的:利用TCGA数据库筛选和分析膀胱癌肿瘤抑制基因CDKN1A的突变特征,筛选具有肿瘤新抗原特征的CDKN1A抗原突变肽并分析其在人群中的免疫反应性。方法:利用TCGA公共数据库中413例膀胱癌全外显子测序数据,根据亲和力预测和基因表达量,筛选出人类白细胞抗原(HLA)-A2限制的CDKN1A突变型肽段与野生型肽段。利用T2细胞实验检测配对肽段的结合力。采用酶联免疫斑点试验检测HLA-A2基因型膀胱癌患者外周血单个核细胞对配对抗原肽的免疫反应。结果:根据预测的突变型肽段高亲和力而野生型肽段低亲和力的原则,筛选获得HLA-A2限制性野生型和突变型抗原肽段。体外T2亲和力结合实验结果显示,来自CDKN1A基因编码的突变型肽段亲和力(Kd=3.724 mg/ml)显著高于野生型肽段。40例HLA-A2阳性膀胱癌患者突变型肽段刺激产生的抗原肽特异性IFN-γ平均点数明显高于野生型(P=0.045),同时突变型肽段在40例患者中的阳性反应率达到25%(10/40)。结论:利用TCGA数据筛选获得膀胱癌抑癌基因CDKN1A的突变型肽段能够在膀胱癌患者中诱导高于野生型肽段的特异性免疫反应性,具有膀胱癌肿瘤新抗原的免疫学特征,为其应用于膀胱癌的免疫治疗提供了理论依据。 展开更多

关键词 膀胱癌 TCGA数据库 cdkn1a突变抗原肽 肿瘤新抗原

在线阅读 下载PDF 职称材料

kshv-mir-k12-1-5p靶向调控CDKN1A影响卡波西肉瘤的细胞周期

5

作者 张静 彭靖淇 +1 位作者 吴秀娟 普雄明 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第12期1923-1927,共5页

目的研究kshv-mirT12VTp通过靶向调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1 A(CDKN1A)影响卡波西肉瘤(KS)的细胞周期&方法生物信息学软件预测kshwmu-kl2NVp是否有CDKNlA的结合位点;双荧光素酶实验检测kshv-mir-k12-1-5p是否靶向结合CDKN... 目的研究kshv-mirT12VTp通过靶向调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1 A(CDKN1A)影响卡波西肉瘤(KS)的细胞周期&方法生物信息学软件预测kshwmu-kl2NVp是否有CDKNlA的结合位点;双荧光素酶实验检测kshv-mir-k12-1-5p是否靶向结合CDKNlA;将kshv-mir-k12-1 Vp模拟物(mimic//抑制物(inhibitor)分别转染到卡波西肉瘤细胞株(SLK)中,Western blot和qRTTCR方法检测kshv-mir-k12-1-5p对CDKNlA的调控作用;PI法检测kshe-mU-k12-1-5p对KS细胞周期的影响&结果MiOee靶基因预测软件分析显示:kshwmiRkl2VTp与CDKNlA的3,非翻译区(3PTR)有结合位点;荧光素酶活性结果分析证实kshe-mi e-k12-1-5p的作用合位点(P<0.01);Western blot和qRTTCR结果显示:在蛋白水平和mRNA水平上,kshwmiRkl2NTp可显著降低CDKNlA的表达水平(P<0.01);PI实验结果显示:与其余各组比较,k/wmio kl2NTp mimics组PI值(51.43土0.75%)最高(P<0.01),能加速KS细胞周期进程;与其余各组比较,kshwmiRkl2N-5p inhibitor组PI值(3274±1.28)%最低#P<0.01),能减慢KS细胞周期进程&结论CDKNlA是kWiwmiRkl2NTp的靶基因,kshe-mi e-k12-1-5p通过靶CDKN1A的表达影响卡波西肉瘤的细胞周期. 展开更多

关键词 卡波西肉瘤相关病毒编码的微小核糖核酸T12N 5p 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A 卡波西肉瘤 细胞周

在线阅读 下载PDF 职称材料

BCCIP通过调节DNA损伤修复途径增强胃癌对顺铂的耐药性

6

作者 贾哲 曾广言 +8 位作者 邹鹏 付宗立 周楚洲 饶雄辉 周宇航 江超 靳兴汉 翁诺卿 罗辉兴 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第5期871-881,共11页

目的:探讨BRCA2和CDKN1A相互作用蛋白(BRCA2 and CDKN1A interacting protein,BCCIP)在胃癌中的功能及其在顺铂耐药中的作用及机制。方法:基于癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库,分析胃癌组织(n=415)和正常组织(n=34)... 目的:探讨BRCA2和CDKN1A相互作用蛋白(BRCA2 and CDKN1A interacting protein,BCCIP)在胃癌中的功能及其在顺铂耐药中的作用及机制。方法:基于癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库,分析胃癌组织(n=415)和正常组织(n=34)中BCCIP的mRNA表达水平;RT-qPCR、Western blot和免疫组化实验检测内部队列中胃癌及其配对癌旁组织中BCCIP的mRNA和蛋白表达水平(n=36、5或30);用顺铂以剂量(0、2、4、6、8和10μmol/L)和时间(0、6、24和48 h)依赖的方式梯度处理胃癌细胞系AGS和HGC27,Western blot检测BCCIP蛋白表达水平的变化;构建BCCIP稳定敲减的胃癌细胞系为实验组(shRNA#1和shRNA#2组),以空载质粒转染的细胞为对照组(vector组),流式细胞术和集落形成实验检测BCCIP对顺铂处理下胃癌细胞凋亡和集落形成能力的影响;Western blot检测顺铂(2.5和1.0μmol/L)处理后胃癌细胞胞质和胞核中BCCIP蛋白表达水平的变化,检测顺铂(2.5和1.0μmol/L)处理下BCCIP对DNA损伤标志物γ-H2AX表达水平、凋亡相关蛋白cleaved caspase-9和cleaved caspase-3表达水平及检查点激酶1(checkpoint kinase 1,CHK1)活化水平的影响;免疫荧光染色观察顺铂(2.5和1.0μmol/L)处理下BCCIP对胃癌细胞中γ-H2AX表达的影响。结果:相比于正常组织,BCCIP在胃癌组织中的表达水平显著上调(P<0.01)。顺铂以时间和剂量依赖的方式诱导胃癌细胞中BCCIP表达上调。BCCIP敲减促进顺铂处理下胃癌细胞凋亡(P<0.01),并抑制集落形成(P<0.05)。BCCIP敲减促进顺铂处理下γ-H2AX的表达,抑制CHK1的激活,并提高cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白水平(P<0.01)。结论:顺铂促进胃癌细胞中BCCIP的表达;BCCIP通过调节DNA损伤修复途径抑制顺铂诱导的胃癌细胞凋亡。 展开更多

关键词 BRCA2和cdkn1a相互作用蛋白 胃癌 顺铂 化疗耐药 DNA损伤反应 细胞凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

^(60)Coγ射线照射人血淋巴细胞诱导p53相关基因mRNA表达水平的变化 被引量：3

7

作者 潘艳 李玉文 +3 位作者 封江彬 陆雪 刘青杰 苏旭 《辐射防护》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期8-12,共5页

采用不同剂量(0~10 Gy)60Coγ射线照射人外周血淋巴细胞,通过抽提mRNA,采用real-timePCR检测不同剂量照射后淋巴细胞中GADD45和CDKN1A基因mRNA表达水平的变化。筛选出最佳照射剂量(5 Gy)后,用该最佳照射剂量照射淋巴细胞,检测不同时间点... 采用不同剂量(0~10 Gy)60Coγ射线照射人外周血淋巴细胞,通过抽提mRNA,采用real-timePCR检测不同剂量照射后淋巴细胞中GADD45和CDKN1A基因mRNA表达水平的变化。筛选出最佳照射剂量(5 Gy)后,用该最佳照射剂量照射淋巴细胞,检测不同时间点(0~72 h)淋巴细胞中GADD45和CDKN1A基因mRNA表达水平的变化。结果表明,淋巴细胞中GADD45和CDKN1A基因mRNA的表达水平随照射剂量的增加而增加,并呈现出剂量效应关系。在5 Gy最佳剂量照射后,淋巴细胞GADD45基因mRNA表达水平随时间的推移不断增高,在8 h时达到最高,随后开始逐渐降低;淋巴细胞CDKN1A基因mRNA表达水平随时间的推移未见明显变化趋势。淋巴细胞系中GADD45和CDKN1A基因mRNA的表达水平与照射剂量均有较好的剂量效应关系,两者均有可能作为电离辐射的生物剂量计来估算受照剂量水平。 展开更多

关键词 ^60Coγ射线 淋巴细胞 GADD45 cdkn1a

在线阅读 下载PDF 职称材料

辐射诱导细胞周期调控和DNA损伤反应相关基因表达变化的实验研究 被引量：3

8

作者 金顺子 武宁 +4 位作者 刘丽波 张萱 倪冠英 刘宇光 刘树铮 《辐射防护》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期70-79,共10页

采用实时定量PCR技术检测小鼠胸腺和脾脏基因表达对X射线全身照射的反应,为探索可行的辐射生物标志物打下实验基础。研究中选用细胞周期调控和DNA损伤反应相关基因Cdkn1a、Ccnd1、Ccnb1、Gadd45a、Atm和Fdxr,以Gapdh为参考基因,观察0.5... 采用实时定量PCR技术检测小鼠胸腺和脾脏基因表达对X射线全身照射的反应,为探索可行的辐射生物标志物打下实验基础。研究中选用细胞周期调控和DNA损伤反应相关基因Cdkn1a、Ccnd1、Ccnb1、Gadd45a、Atm和Fdxr,以Gapdh为参考基因,观察0.5、1、2、4、6 Gy X射线全身照射后4和24小时上述基因在胸腺和脾脏的相对表达量的变化。同时计数骨髓细胞涂片嗜多染红细胞(PCE)的微核率进行对比。结果显示,上述6种基因对电离辐射全身作用都出现变化,但以Cdkn1a、Ccnd1和Ccnb1三者对全身照射的剂量效应关系较为明显,其中Cdkn1a和Ccnd1基因的表达随辐射剂量增加而升高,Ccnb1基因的表达随辐射剂量增加而下降。剂量效应曲线可拟合为线性-平方方程,其相关系数r为0.851～0.998,p<0.05～0.01。但与嗜多染红细胞微核率进行对比,Ccnd1和Ccnb1的表达只有部分结果与之具有显著的相关关系。Cdkn1a的表达量则不仅随辐射剂量增加而升高,而且与嗜多染红细胞微核率的剂量-效应曲线明显相关,在两器官和两时间点其相关系数为0.950～0.975,p<0.01。另一方面Cd-kn1a表达量变化的幅度较大,照射后4小时和24小时胸腺的最高表达量分别为11.2和11.3倍,脾脏的最高表达量分别为20.6和9.3倍。鉴于实时定量PCR技术适用于快速、高通量检测,通过进一步在人体观察验证,Cdkn1a基因表达变化有可能成为研制新的辐射生物剂量计的候选者。 展开更多

关键词 cdkn1a CCND1 Ccnb1 GADD45A Atm Fdxr 实时定量PCR 基因表达变化 骨髓嗜多染红细胞微核率 辐射生物剂量计

在线阅读 下载PDF 职称材料

长链非编码RNA PANDAR在非小细胞肺癌中的表达和临床意义 被引量：4

9

作者 聂军 周波 张郁林 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期569-574,共6页

背景与目的:长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在肿瘤的发生、发展过程中有重要作用。LncRNA CDKN1A反义链启动子DNA损伤激动RNA(promoter of CDKN1A antisense DNA damage activated RNA,PANDAR)与多种肿瘤的进展及预后相关... 背景与目的:长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在肿瘤的发生、发展过程中有重要作用。LncRNA CDKN1A反义链启动子DNA损伤激动RNA(promoter of CDKN1A antisense DNA damage activated RNA,PANDAR)与多种肿瘤的进展及预后相关。探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中lnc RNA PANDAR的表达及临床意义。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)方法检测94例新鲜NSCLC组织标本及相对应的癌旁组织标本中PANDAR的表达,分析其与NSCLC的临床病理特征、诊断价值和预后的关系。结果:PANDAR在NSCLC组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.001);PANDAR低表达和高表达组在肿瘤体积、淋巴结转移、疾病分期和分化程度方面差异均有统计学意义(χ~2=9.197,P=0.002;χ~2=7.1 2 6,P=0.0 0 8;χ~2=6.2 7 1,P=0.0 1 2;χ~2=8.1 4 7,P=0.0 0 4);受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线的曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.797(95%CI:0.614~0.849;P<0.001),灵敏度和特异度分别是49.8%和84.3%,Youden指数为0.402;PANDAR低表达和高表达组在总生存期(overall survival,OS)及无进展生存期(progression free survival,PFS)上的差异有统计学意义(χ~2=7.282,P=0.007;χ~2=6.777,P=0.009)。结论:PANDAR在NSCLC中低表达,可以作为NSCLC的新型生物标志物和诊断靶标。 展开更多

关键词 cdkn1a反义链启动子DNA损伤激动RNA 非小细胞肺癌 受试者工作特征曲线 临床病理特征 生物标志物

在线阅读 下载PDF 职称材料

MSCs上清可减轻雷公藤甲素对KGN细胞的损伤作用 被引量：2

10

作者 周雪 赵光锋 +1 位作者 陈士雯 侯亚义 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1641-1646,共6页

目的:探讨MSCs上清对雷公藤甲素损害卵巢颗粒细胞的缓解作用及机制。方法:用CCK-8法分析了雷公藤甲素对KGN活力的影响;用混合酶消化法分离脐带来源的MSCs,并用流式细胞术对其表型进行了鉴定;收集MSCs上清,用CCK-8法及PI法检测MSCs上清... 目的:探讨MSCs上清对雷公藤甲素损害卵巢颗粒细胞的缓解作用及机制。方法:用CCK-8法分析了雷公藤甲素对KGN活力的影响;用混合酶消化法分离脐带来源的MSCs,并用流式细胞术对其表型进行了鉴定;收集MSCs上清,用CCK-8法及PI法检测MSCs上清对雷公藤甲素损伤的KGN活力及周期的影响;用Real-time PCR法对周期调节相关基因CDKN1A的表达进行检测。结果:雷公藤甲素能够通过抑制KGN活力及阻滞KGN在S期抑制其生长;MSCs上清不影响正常KGN的增殖和周期,但可提高雷公藤甲素损伤的KGN细胞的活力,缓解雷公藤甲素引起的S期阻滞,抑制雷公藤甲素对KGN的CDKN1A表达的异常上调。结论:MSCs上清可能减轻雷公藤甲素对KGN细胞的损伤作用。 展开更多

关键词 间充质干细胞 卵巢颗粒细胞 雷公藤甲素 cdkn1a

在线阅读 下载PDF 职称材料

长链非编码RNA PANDAR促进结直肠癌转移的作用和机制研究 被引量：10

11

作者 刘宁 成冬冬 姜金波 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期268-275,共8页

背景与目的:越来越多的研究表明,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)在肿瘤发生、发展过程中有重要作用。Lnc RNA CDKN1A反义链启动子DNA损伤激动RNA(promoter of CDKN1A antisense DNA damage activated RNA,PANDAR)与多种肿... 背景与目的:越来越多的研究表明,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)在肿瘤发生、发展过程中有重要作用。Lnc RNA CDKN1A反义链启动子DNA损伤激动RNA(promoter of CDKN1A antisense DNA damage activated RNA,PANDAR)与多种肿瘤的进展及预后相关,在结直肠癌转移中的作用尚未得到证实。该研究旨在探索lnc RNA PANDAR在结直肠癌中的功能,并对其作用机制进行初步探索。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测lnc RNA PANDAR在结直肠癌细胞及组织中的表达,并分析其表达水平与结直肠癌临床病理特征的关系。构建lnc RNA PANDAR沉默(HCT116-sh PANDAR)和高表达(DLD1-PANDAR)及其对照(HCT116-sh NC、DLD1-vector)稳定转染细胞系。通过Transwell和Matrigel实验检测lnc RNA PANDAR对细胞迁移和侵袭能力的影响。采用RTFQ-PCR检测lnc RNA PANDAR表达改变后介导细胞上皮-间质转化能力的主要调控基因表达情况,并对目的基因在介导lnc RNA PANDAR调控结直肠癌细胞转移中的作用进行验证。结果:Lnc RNA PANDAR在结直肠癌细胞中的表达明显高于结直肠正常上皮细胞;Lnc RNA PANDAR在结直肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织[(171.52±97.80)%vs(100.00±63.18)%,P<0.05],且其表达水平与结直肠癌的TNM分期、淋巴结转移和远处转移相关(P<0.05)。在Transwell及Matrigel实验中,lnc RNA PANDAR沉默能够明显减弱结直肠癌细胞的迁移[100.00%vs(42.08±4.77)%,P<0.05]和侵袭[100.00%vs(39.14±3.81)%,P<0.05]能力,lnc RNA PANDAR高表达能够明显促进结直肠癌细胞的迁移[100.00%vs(194.12±9.33)%,P<0.05]和侵袭[100.00%vs(204.08±12.27)%,P<0.05]能力。采用RTFQ-PCR检测lnc RNA PANDAR表达改变后介导结直肠癌细胞上皮-间质转化的基因表达情况发现,锌指E-盒结合同源异形盒(zinc-finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)表达与lnc RNA PANDAR表达呈显著正相关;在lnc RNA PANDAR高表达的细胞中干扰ZEB1表达能够明显逆转lnc RNA PANDAR高表达引起的细胞迁移和侵袭能力的增强。结论:Lnc RNA PANDAR能够通过调控ZEB1表达进而促进结直肠癌转移,lnc RNA PANDAR可能成为结直肠癌新的诊断指标及治疗靶点。 展开更多

关键词 长链非编码RNA cdkn1a反意义链启动子DNA损伤激动RNA 结直肠癌 转移

在线阅读 下载PDF 职称材料

MicroRNA-221通过抑制CDKN1C/p57表达促进结肠癌细胞增殖 被引量：11

12

作者 孙凯 王伟 +2 位作者 雷尚通 吴承堂 李国新 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1885-1889,共5页

目的探讨microRNA-221(MIR221)对结肠癌细胞中CDKN1C/p57表达调控及细胞增殖的影响。方法常规培养人结肠癌Caco2细胞系,预先给予或不给予CDKN1C/p57干扰性小RNA(anti-p57-siRNA)处理,再以脂质体分别转染MIR221前体(pre-MIR221)或MIR221... 目的探讨microRNA-221(MIR221)对结肠癌细胞中CDKN1C/p57表达调控及细胞增殖的影响。方法常规培养人结肠癌Caco2细胞系,预先给予或不给予CDKN1C/p57干扰性小RNA(anti-p57-siRNA)处理,再以脂质体分别转染MIR221前体(pre-MIR221)或MIR221特异性抑制剂(anti-MIR221)寡核苷酸,应用实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR)检测Caco2细胞中MIR221表达状况,运用半定量RT-PCR及Western-blot分析CDKN1C/p57 mRNA及蛋白表达状况,并通过噻唑蓝(MTT)比色法观察细胞的增殖状态;构建pGL3-p57荧光素酶报告载体并与pre-MIR221或anti-MIR221共转染Caco2细胞,检测转染细胞中荧光素酶活性变化。结果 Caco2细胞转染pre-MIR221后,CDKN1C/p57蛋白表达水平下降,细胞增殖显著(P<0.01);而anti-MIR221可上调CDKN1C/p57蛋白表达继而抑制细胞增殖,且此种抑制作用可被anti-p57-siRNA逆转,说明此种抑制效应确由CDKN1C/p57所介导;在转染重组有CDKN1C/p57基因3'-UTR片段的荧光素酶报告载体的Caco2细胞中,共转染pre-MIR221后荧光素酶活性下降,而共转染anti-MIR221后荧光素酶活性增高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 MIR221可通过与CDKN1C/p57 mRNA 3'-UTR区域结合使结肠癌细胞中CDKN1C/p57蛋白表达下降而促进肿瘤增殖;anti-MIR221则可通过上调CDKN1C/p57蛋白表达继而抑制细胞增殖而发挥抗瘤效应。 展开更多

关键词 结肠癌 microRNA-221 CDKN1C/p57 增殖

在线阅读 下载PDF 职称材料

lncRNA CDKN2B-AS1对黑色素瘤B16-F10细胞恶性生物学行为的影响 被引量：5

13

作者 邓利丽 孙素姣 +2 位作者 刘艳 陈燕 陈星 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期25-30,共6页

目的:探讨长链非编码RNA CDKN2B反义RNA1(long non-coding RNA CDKN2B-antisense RNA 1,lncRNA CDKN2B-AS1)通过靶向miR-7-5p影响黑色素瘤B16-F10细胞的恶性生物学行为的影响。方法:选用黑色素瘤B16-F10细胞,构建shRNA CDKN2B-AS1载体... 目的:探讨长链非编码RNA CDKN2B反义RNA1(long non-coding RNA CDKN2B-antisense RNA 1,lncRNA CDKN2B-AS1)通过靶向miR-7-5p影响黑色素瘤B16-F10细胞的恶性生物学行为的影响。方法:选用黑色素瘤B16-F10细胞,构建shRNA CDKN2B-AS1载体并转染到B16-F10细胞,实验分为对照组、sh-CDKN2B-AS1组、miR-7-5p mimics组、miR-7-5p inhibitor组。用RT-PCR检测转染后B16-F10细胞中CDKN2B-AS1表达水平,用克隆形成实验和MTT法检测克隆形成数及细胞的增殖能力,用划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。用荧光素酶报告基因实验检证CDKN2B-AS1和miR-7-5p相互间靶向关系。用RT-PCR和Western blotting检测转染miR-7-5p mimics、inhibitor后B16-F10细胞中miR-7-5p和Ki67、cleaved caspase-3、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、Twist1蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,sh-CDKN2B-AS1组B16-F10细胞中CDKN2B-AS1表达水平显著下调(P<0.01),细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著下降(均P<0.01)。荧光素酶报告基因实验证明CDKN2B-AS1与miR-7-5p存在靶向作用关系。sh-CDKN2B-AS1组与miR-7-5p mimics组细胞中miR-7-5p和cleaved caspase-3、E-cadherin水平均明显上调(均P<0.05),Ki67、N-cadherin、Twist1水平明显下调(均P<0.05)。结论:CDKN2BAS1通过靶向miR-7-5p促进黑色素瘤发展,干扰CDKN2B-AS1可抑制黑色素瘤B16-F10细胞的恶性生物学行为。 展开更多

关键词 长链非编码RNA CDKN2B-AS1 miR-7-5p 黑色素瘤 B16-F10细胞 增殖 迁移 侵袭

在线阅读 下载PDF 职称材料

长链非编码RNA LINC01001在乳腺癌中的表达及其对MCF-7细胞增殖的影响 被引量：9

14

作者 梅虹 李常恩 +1 位作者 杨梁 高迎飞 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期158-162,共5页

目的:探讨长链非编码RNA LINC01001在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖能力的影响。方法:筛选2016年3月至2017年6月于湖北医药学院附属人民医院甲状腺乳腺外科行手术切除的乳腺癌患者癌及癌旁组织12例,qRTPCR检测乳腺癌组... 目的:探讨长链非编码RNA LINC01001在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖能力的影响。方法:筛选2016年3月至2017年6月于湖北医药学院附属人民医院甲状腺乳腺外科行手术切除的乳腺癌患者癌及癌旁组织12例,qRTPCR检测乳腺癌组织及癌旁组织LINC01001的相对表达量;通过重组质粒在人乳腺癌MCF-7细胞中过表达LINC01001,采用流式细胞术和MTT法检测过表达LINC01001后MCF-7细胞周期分布和增殖能力变化。qRT-PCR检测miR-485-5p和CDKN1A mRNA的表达变化,Western blotting检测CDKN1A、CDK4、CDK6和Cyclin D1蛋白表达变化。结果:LINC01001在乳腺癌组织中表达水平低于对应的癌旁组织(P<0.01)。LINC01001重组质粒转染MCF-7细胞后可显著抑制细胞周期进展(P<0.05),抑制细胞的增殖能力(P<0.05)。过表达LINC01001后,MCF-7细胞的miR-485-5p的表达水平降低(P<0.01),CDKN1A mRNA表达水平升高(P<0.01);可促进CDKN1A蛋白的表达和抑制CDK4、CDK6和Cyclin D1蛋白的表达。结论:LINC01001在乳腺癌组织中表达降低,其可能通过下调miR-485-5p的表达上调CDKN1A的表达来抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力,为lncRNA的临床应用提供实验基础。 展开更多

关键词 乳腺癌 长链非编码RNA 微小RNA cdkn1a 增殖

在线阅读 下载PDF 职称材料

绵羊Cdkn1c的DNA甲基化分析 被引量：1

15

作者 赵丽霞 赵高平 +2 位作者 郭荣启 王丙萍 周欢敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期85-88,共4页

为了探究绵羊Cdkn1c的甲基化状态,本研究对绵羊及其它3个物种的Cdkn1c mRNA序列进行了生物信息学分析,并通过亚硫酸氢盐测序法(BSP)对新生羔羊肾脏和肺脏Cdkn1c CpG岛上的CpG位点进行了甲基化分析。结果显示,整个编码区富含CG,为CpG岛;... 为了探究绵羊Cdkn1c的甲基化状态,本研究对绵羊及其它3个物种的Cdkn1c mRNA序列进行了生物信息学分析,并通过亚硫酸氢盐测序法(BSP)对新生羔羊肾脏和肺脏Cdkn1c CpG岛上的CpG位点进行了甲基化分析。结果显示,整个编码区富含CG,为CpG岛;绵羊Cdkn1c所有分析位点均非甲基化,暗示该区域并非差异甲基化区域(DMR)。 展开更多

关键词 Cdkn1c BSP DNA甲基化 印记

在线阅读 下载PDF 职称材料

INTS10对HCC细胞周期、凋亡、生长和迁移能力的影响

16

作者 王雪婷 齐欣 +2 位作者 魏小军 杨爱清 周钢桥 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第3期290-300,共11页

为了探究整合因子复合物亚基10(integrator complex subunits 10,INTS10)对人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞周期、凋亡、生长和迁移能力的影响及其潜在的分子作用机制,利用慢病毒感染法获得稳定过表达或敲低INTS10的HCC... 为了探究整合因子复合物亚基10(integrator complex subunits 10,INTS10)对人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞周期、凋亡、生长和迁移能力的影响及其潜在的分子作用机制,利用慢病毒感染法获得稳定过表达或敲低INTS10的HCC细胞系,采用qRT-PCR和Western blotting检测INTS10 mRNA和蛋白表达水平,接着采用CCK-8法、克隆形成和BrdU实验检测细胞生长情况,采用Transwell小室实验检测细胞迁移能力,采用流式分析术检测细胞的周期和凋亡.结果显示:过表达INTS10可显著抑制HCC细胞的凋亡、生长和迁移能力,促进G1期细胞数量的增加,而敲低INTS10则呈现相反的表型.通过通路富集分析发现,周期相关通路被显著富集,过表达INTS10后,CDC25A和CDK4的mRNA和蛋白质水平显著减少,而CDKN1A的水平显著增加,敲低INTS10则呈现相反趋势.综上,本研究初步揭示了INTS10在HCC细胞中可能通过影响G1/S期相关蛋白质的表达而发挥抑癌基因的功能,为下一步更为深入的功能和机制研究提供了基础. 展开更多

关键词 肝细胞癌(HCC) 整合因子复合物亚基10(INTS10) CDC25A cdkn1a CDK4

在线阅读 下载PDF 职称材料

Peg3,Cdkn1c和Gtl2基因在克隆绵羊和自然分娩绵羊中的DNA甲基化水平检测（英文）

17

作者 王峰 潘静 +6 位作者 赵丽霞 刘羿羿 张立 王申元 李璐 周欢敏 张东 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2016年第7期706-715,共10页

尽管研究证明很多克隆动物存在DNA甲基化异常的情况,却很少有研究比较克隆绵羊与自然分娩绵羊之间的甲基化情况,可能是由于克隆绵羊的获得、绵羊基因组、绵羊基因组印记等因素的限制.本研究中,为了证明克隆绵羊重编程的状况,克隆了Peg3... 尽管研究证明很多克隆动物存在DNA甲基化异常的情况,却很少有研究比较克隆绵羊与自然分娩绵羊之间的甲基化情况,可能是由于克隆绵羊的获得、绵羊基因组、绵羊基因组印记等因素的限制.本研究中,为了证明克隆绵羊重编程的状况,克隆了Peg3基因的差异甲基化区域(differential methylated region,DMR),并且分析了Peg3、Cdkn1c、Gtl2在克隆绵羊和自然分娩绵羊不同组织中的甲基化水平.研究发现,在克隆绵羊和自然分娩绵羊中Peg3呈现为超甲基化水平,在克隆绵羊的肾脏和肺脏中DNA甲基化水平为95.45%、81.18%,相对于正常分娩的绵羊组织中的98.18%、87.27%无显著性差异,而Cdkn1c在两组实验动物中的肾脏和肺脏中表现为非甲基化水平,分别为0%、0.53%、0.53%和0.53%,Gtl2则是低甲基化水平,并且克隆绵羊与正常分娩绵羊之间的DNA甲基化水平无显著性差异(r^2=0.77).这些结果表明,Peg3、Cdkn1c、Gtl2三个印记基因在克隆绵羊和自然分娩绵羊组织中呈现类似甲基化水平,无显著性差异. 展开更多

关键词 DNA甲基化 Peg3 Cdkn1c Gtl2 克隆绵羊

在线阅读 下载PDF 职称材料

野生型p27和核定位信号缺失型p27真核表达载体的构建及表达

18

作者 焦鑫艳 张英 +6 位作者 盛秋 张妙 杨泽健 高小倩 赵谦 王博 刘培军 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期516-521,共6页

目的构建人野生型p27(p27WT)和核定位信号缺失型p27(p27△NLS)的真核表达载体,并在HEK293T细胞中进行表达,为细胞中p27核浆定位的变化及其不同的生物学功能研究提供细胞基础。方法提取人乳腺癌细胞系MCF7总RNA,反转录cDNA后,分别进行p2... 目的构建人野生型p27(p27WT)和核定位信号缺失型p27(p27△NLS)的真核表达载体,并在HEK293T细胞中进行表达,为细胞中p27核浆定位的变化及其不同的生物学功能研究提供细胞基础。方法提取人乳腺癌细胞系MCF7总RNA,反转录cDNA后,分别进行p27全长和非NLS区片段的PCR扩增,获得p27WT全长(CDKN1B,NM_004064.5)和p27△NLS编码区序列,分别将其克隆至真核表达载体pCMV-Blank,经菌液PCR、双酶切和测序鉴定。电穿孔法转染HEK293T细胞,48 h时分别提取胞核蛋白和胞质蛋白,Western blotting检测p27在细胞质和细胞核中的蛋白表达。结果测序结果显示,真核表达载体pCMV-Blank中插入的p27WT序列和p27△NLS序列均与NM_004064.5序列相一致。pCMV-p27WT转染HEK293T细胞后,细胞总p27蛋白表达显著增加,核浆分离检测发现其在细胞质和细胞核中均表达;而pCMV-p27△NLS转染HEK293T细胞的总p27蛋白表达也显著增加,核浆分离检测发现其主要在细胞质中表达。结论成功构建人p27WT和p27△NLS的真核表达载体,并在HEK293T细胞中成功表达,为p27蛋白在肿瘤细胞周期中的功能研究提供了细胞基础。 展开更多

关键词 P27 CDKN1B 核定位信号序列 真核表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

藏猪CDKN1B基因克隆、生物信息学及表达分析 被引量：2

19

作者 韦明邦 边巴琼达 +3 位作者 肖青青 段梦琪 强巴央宗 商鹏 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2196-2206,共11页

【目的】探究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B(CDKN1B)基因在低氧适应中发挥的作用。【方法】对藏猪CDKN1B基因CDS区进行克隆并测序,并对其序列进行相似性比对及系统进化树构建。采用在线软件对CDKN1B蛋白进行生物信息学分析,利用实时... 【目的】探究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B(CDKN1B)基因在低氧适应中发挥的作用。【方法】对藏猪CDKN1B基因CDS区进行克隆并测序,并对其序列进行相似性比对及系统进化树构建。采用在线软件对CDKN1B蛋白进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR和Western blotting方法分别检测藏猪和大约克猪心脏、肾脏及肺脏组织中CDKN1B基因的mRNA和蛋白相对表达量。【结果】藏猪CDKN1B基因CDS区序列长597 bp,与野猪的相似性高达100%,且与野猪的亲缘性最近,与斑马鱼的亲缘性最远。CDKN1B蛋白由198个氨基酸组成,共有30个磷酸化位点:17个丝氨酸位点、9个苏氨酸位点、4个酪氨酸位点;氨基酸不稳定指数(Ⅱ)为66.53;该蛋白为亲水性蛋白,疏水性最大值为1.089,最小值为—2.867。藏猪CDKN1B蛋白二级结构由无规则卷曲(73.23%)、α-螺旋(15.66%)、延伸链(10.10%)及β-转角(1.01%)组成,三级结构预测结果与二级结构一致。该蛋白为非跨膜蛋白和非分泌蛋白,主要定位于细胞核中,占比约为82.6%,在细胞质中约占8.7%,在线粒体和细胞骨架中均占4.3%。CDKN1B蛋白与CDK2、CCND1和CDK4相关性高达99.9%。藏猪和大约克猪CDKN1B mRNA表达量与蛋白表达量一致,均为在心脏中表达量最高,其次是肾脏和肺脏;藏猪心脏、肾脏和肺脏组织中CDKN1B基因mRNA表达量极显著或显著高于大约克猪(P<0.01;P<0.05),蛋白表达量只在肾脏组织中显著高于大约克猪(P<0.05)。【结论】本试验成功克隆出藏猪CDKN1B基因CDS区序列,CDKN1B基因在心脏、肾脏及肺脏组织中均具有较高的表达量,且在藏猪心脏、肾脏及肺脏组织中表达量高于大约克猪。该结果为进一步研究藏猪CDKN1B基因及其编码蛋白在低氧适应性中的作用奠定基础。 展开更多

关键词 藏猪 CDKN1B基因 生物信息学 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料