核定位信号在热休克蛋白70抑制氧化应激所致细胞核仁分离中的作用 被引量：4

1

作者 王慷慨 鄂顺梅 +4 位作者 蒋磊 张华莉 刘可 张玲莉 肖献忠 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第5期456-462,共7页

为探讨核定位信号在热休克蛋白70(HSP70)抑制H2O2所致核仁损伤中的作用,采用分子克隆技术分别构建了4个真核表达载体,pcDNA3.1(-)-HSP70WT(HSP70野生型),pcDNA3.1(-)-HSP70ΔNLS(核定位信号缺失突变体),pEGFP-N1-HSP70WT,pEGFP-N1-HSP70... 为探讨核定位信号在热休克蛋白70(HSP70)抑制H2O2所致核仁损伤中的作用,采用分子克隆技术分别构建了4个真核表达载体,pcDNA3.1(-)-HSP70WT(HSP70野生型),pcDNA3.1(-)-HSP70ΔNLS(核定位信号缺失突变体),pEGFP-N1-HSP70WT,pEGFP-N1-HSP70ΔNLS.向传代培养的C2C12肌源细胞培养液中加入终浓度为1.0mmol/L的H2O2模拟体外氧化应激.甲苯胺蓝染色细胞核仁发现,正常细胞仅有一个位于中央的、浓染致密的核仁颗粒.过氧化氢处理后3h,可见明显的核仁分离.热休克反应处理的细胞及转pcDNA3.1(-)-HSP70WT细胞则能明显抑制氧化应激所致的核仁分离.荧光蛋白示踪及核仁蛋白质免疫印迹分析显示,H2O2处理后1h,HSP70WT由正常时的细胞浆定位转为细胞核及核仁定位,而HSP70ΔNLS在H2O2处理后仍定位于细胞浆,同时丧失了抑制核仁分离的作用.上述结果提示,野生型HSP70能显著抑制氧化应激所致细胞核仁分离,核定位信号通过介导HSP70向细胞核及核仁移位而决定HSP70对核仁损伤的保护作用. 展开更多

关键词 热休克蛋白70 核定位信号 氧化应激 核仁 核仁分离

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新城疫病毒M蛋白核定位信号突变降低病毒的致病性 被引量：4

2

作者 段志强 邓珊珊 +4 位作者 袁超 高洪波 嵇辛勤 赵佳福 阮涌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2690-2697,共8页

本研究旨在探讨M蛋白核定位信号(NLS)突变对新城疫病毒(NDV)致病性的影响。将M蛋白NLS突变体病毒和亲本病毒分别感染4周龄SPF鸡,观察鸡的临床症状和病理变化,检测鸡喉头和泄殖腔排毒情况以及不同组织中的病毒含量,并对免疫器官进行显微... 本研究旨在探讨M蛋白核定位信号(NLS)突变对新城疫病毒(NDV)致病性的影响。将M蛋白NLS突变体病毒和亲本病毒分别感染4周龄SPF鸡,观察鸡的临床症状和病理变化,检测鸡喉头和泄殖腔排毒情况以及不同组织中的病毒含量,并对免疫器官进行显微病变观察,以及分析免疫器官中M蛋白的表达量和相关细胞因子的表达变化。结果表明,鸡感染亲本病毒后产生典型的新城疫临床症状和病理变化,喉头和泄殖腔持续排毒且排毒量高,试验鸡的存活率为0%;而鸡感染突变体病毒后的临床症状和病理变化轻微,喉头和泄殖腔排毒时间延迟且排毒量低,试验鸡的存活率为70%。组织病毒含量测定结果表明亲本病毒能在不同组织中复制,尤其以免疫器官(脾、胸腺和法氏囊)和气管中的病毒含量高;而突变体病毒仅在免疫器官和气管中复制,且病毒含量低。病理组织学观察和Western blotting检测结果表明,亲本病毒能造成严重的免疫器官损伤且M蛋白表达量高,而突变体病毒则未引起明显的病理变化且M蛋白表达量低。此外,突变体病毒感染引起的免疫器官中IL-1β、IL-6、IL-10、IFN-β和IFN-λ细胞因子的表达水平要明显低于亲本病毒,说明M蛋白NLS突变降低了NDV诱发的细胞免疫应答反应。本研究首次证实M蛋白NLS突变可显著降低NDV对鸡的致病力,这为深入研究M蛋白细胞核定位在NDV致病性中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 M蛋白 核定位信号 致病性

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猪圆环病毒3型去核定位信号的Cap蛋白原核表达 被引量：7

3

作者 陈如敬 吴学敏 +4 位作者 陈秋勇 严山 车勇良 王晨燕 周伦江 《动物医学进展》 北大核心 2020年第11期24-28,共5页

为探讨猪圆环病毒3型(PCV3)去核定位信号结构蛋白(Cap)的生物学功能及其在血清学检测中的作用,应用Oligo 7.0软件设计特异性引物序列,采用PCR方法从PCV3福建株阳性核酸中扩增获得其去核定位信号的Cap基因片段。将目的片段克隆到原核表... 为探讨猪圆环病毒3型(PCV3)去核定位信号结构蛋白(Cap)的生物学功能及其在血清学检测中的作用,应用Oligo 7.0软件设计特异性引物序列,采用PCR方法从PCV3福建株阳性核酸中扩增获得其去核定位信号的Cap基因片段。将目的片段克隆到原核表达载体pET28a(+)上获得阳性重组表达质粒pET28a-Cap,进行原核表达条件优化。经SDS-PAGE分析其最优表达条件为IPTG浓度为0.4 mmol/L、37℃诱导表达4 h,目的蛋白大小约为25 ku。表达的去核定位信号Cap蛋白经Western blot和ELISA分析,具有良好的生物学活性。研究结果为开展PCV3去核定位信号基因功能研究和储备血清学诊断试剂盒奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒3型 去核定位信号 结构蛋白 原核表达

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新城疫病毒M蛋白通过自身核定位信号介导进入宿主细胞核 被引量：4

4

作者 段云兵 汪军卿 +3 位作者 仇旭升 谭磊 丁铲 张源淑 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期105-110,共6页

通过生物信息学方法预测了新城疫病毒(NDV)基质蛋白(M)的细胞核定位信号(NLS),用Overlap-PCR方法缺失NLS基因,分别构建M和M-ΔNLS EGFP重组质粒,转染单层鸡胚成纤维细胞(DF-1),激光共聚焦观察了M蛋白亚细胞定位。结果表明:M蛋白能进入... 通过生物信息学方法预测了新城疫病毒(NDV)基质蛋白(M)的细胞核定位信号(NLS),用Overlap-PCR方法缺失NLS基因,分别构建M和M-ΔNLS EGFP重组质粒,转染单层鸡胚成纤维细胞(DF-1),激光共聚焦观察了M蛋白亚细胞定位。结果表明:M蛋白能进入宿主细胞核中,缺失NLS基因序列之后M蛋白只分布于细胞质中。结论:新城疫病毒M蛋白可以通过其核定位信号进入宿主细胞核。 展开更多

关键词 新城疫病毒 M蛋白 亚细胞定位 核定位信号

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核糖体蛋白L6/Taxreb107的核定位信号的分析 被引量：2

5

作者 王冀姝 杨曦 +3 位作者 李荣 周鹏 张淼丽 韩骅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第1期144-148,共5页

核糖体蛋白L6 (RpL6 ,Taxreb10 7)含有三个具有核定位信号特征的基序 .用作者构建的核定位信号捕获系统分析了这些核定位信号是否具有介导蛋白质进行核转位的功能 .将RpL6 /Taxreb10 7分段插入核定位信号捕获载体的克隆位点后转化宿主酵... 核糖体蛋白L6 (RpL6 ,Taxreb10 7)含有三个具有核定位信号特征的基序 .用作者构建的核定位信号捕获系统分析了这些核定位信号是否具有介导蛋白质进行核转位的功能 .将RpL6 /Taxreb10 7分段插入核定位信号捕获载体的克隆位点后转化宿主酵母 ,发现其前两个核定位信号可以介导融合蛋白进入细胞核 ,而第三个核定位信号无此作用 .将RpL6 /Taxreb10 7分段与绿色荧光蛋白融合后转染培养的哺乳类细胞 ,证实了以上在酵母中所得的结果 .进一步发现RpL6 /Taxreb10 7的前两个核定位信号同时具有核仁定位的功能 .当在细胞中表达的早期 ,进入核内的融合蛋白优先定位于核仁 .这些结果一方面有助于理解RpL6 /Taxreb10 7核转位的机理 ,同时说明作者构建的核定位信号捕获系统也可用在蛋白质中寻找核定位信号 . 展开更多

关键词 核定位信号 核糖体蛋白L6 核转位 绿色荧光蛋白

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带核定位信号的RARα与谷氨酸氨连接酶蛋白相互作用的胞内外验证 被引量：4

6

作者 吴燕 刘北忠 +4 位作者 王翀 钟梁 朱丹 王春光 金丹婷 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期468-471,共4页

目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活... 目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活细胞内的相互作用;通过构建GLUL及NLS-RARα蛋白标签融合表达载体,共转染至人胚肾HEK293细胞,利用免疫共沉淀技术在细胞外验证它们之间的相互作用。结果 GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色的阳性克隆;GLUL蛋白及NLS-RARα标签融合表达载体构建成功,共同转染至HEK293细胞,采用抗HA多克隆抗体免疫沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,抗c-Myc单克隆抗体免疫印迹检测,检测到GLUL-cMyc蛋白。结论采用酵母双杂交和免疫共沉淀技术成功地在胞内外验证了GLUL与NLS-RARα之间存在特异性的相互作用。 展开更多

关键词 维甲酸受体Α 核定位信号 谷氨酸氨连接酶 蛋白质相互作用 双杂交系统技术 免疫共沉淀

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猪圆环病毒I型ORF2蛋白序列与其核定位功能的相关性 被引量：2

7

作者 陈美玲 陈焕春 +1 位作者 宋云峰 黄红亮 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期459-461,共3页

软件分析PCV1-ORF2的核苷酸序列发现其N端的氨基酸序列中包含一段核定位序列,将具有核定位序列特征的区域删除,构建缺失核定位序列的PCV1-ORF2基因与绿色荧光蛋白的真核融合表达载体,同时构建PCV1-ORF2全基因与绿色荧光蛋白的真核融合... 软件分析PCV1-ORF2的核苷酸序列发现其N端的氨基酸序列中包含一段核定位序列,将具有核定位序列特征的区域删除,构建缺失核定位序列的PCV1-ORF2基因与绿色荧光蛋白的真核融合表达载体,同时构建PCV1-ORF2全基因与绿色荧光蛋白的真核融合表达载体,分别转染Hela细胞,可观察到后者绿色荧光聚集在细胞核区域;而前者转染Hela细胞结果显示核定位现象消失,从而可以推断这一区域是CPV1-ORF2蛋白核定位的功能区。 展开更多

关键词 猪圆环病毒Ⅰ型 ORF2蛋白 HELA细胞 绿荧光蛋白 核定位序列

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RNA病毒核定位蛋白功能研究进展 被引量：1

8

作者 韩焘 徐琦 +1 位作者 原霖 翟新验 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第7期59-61,共3页

真核细胞的细胞核由核膜包裹为封闭的细胞器,核酸及蛋白质等的转移通过嵌在核膜上的核孔复合体（NPS）进行。一些小分子物质,如代谢产物通过核孔复合体被动扩散进出细胞核,而大分子的运输通常由特异性的信号转导途经通过核孔复合体,核... 真核细胞的细胞核由核膜包裹为封闭的细胞器,核酸及蛋白质等的转移通过嵌在核膜上的核孔复合体（NPS）进行。一些小分子物质,如代谢产物通过核孔复合体被动扩散进出细胞核,而大分子的运输通常由特异性的信号转导途经通过核孔复合体,核质穿梭蛋白通常存在核定位信号（NLS）或者核输出信号（NES），可以通过可溶性运输因子karyopherinβ（importinβ）家族介导高效的核质运输。 展开更多

关键词 核孔复合体 穿梭蛋白 病毒基因组 RNA病毒 被动扩散 核定位信号 信号转导 蛋白功能 核质 抗病毒药物

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新城疫病毒M蛋白细胞核定位的机制与功能研究进展 被引量：1

9

作者 段志强 谢玲玲 +3 位作者 周迪 王燕碧 赵采芹 唐宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期891-898,共8页

新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)M蛋白一种非糖基化膜相关蛋白,主要位于病毒囊膜内表面,构成了病毒囊膜和核衣壳连接的支架。研究表明,M蛋白是一种细胞核-细胞质穿梭蛋白。在NDV感染早期,M蛋白可通过自身携带的核定位信号进... 新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)M蛋白一种非糖基化膜相关蛋白,主要位于病毒囊膜内表面,构成了病毒囊膜和核衣壳连接的支架。研究表明,M蛋白是一种细胞核-细胞质穿梭蛋白。在NDV感染早期,M蛋白可通过自身携带的核定位信号进入细胞核。根据已报道的相关RNA病毒M蛋白功能的研究结果,推测NDV M蛋白早期的细胞核定位有利于细胞质中病毒基因组的复制和转录,并且可能会抑制细胞基因的转录和蛋白质合成。目前,国内外对M蛋白的研究主要集中在M蛋白与NDV毒力和复制的关系以及以M蛋白为核心的病毒样颗粒形成机制和利用方面,而对M蛋白细胞核定位的机制和功能研究相对较少。鉴于M蛋白细胞核定位在NDV复制和致病过程中的重要作用,本文主要从NDV M蛋白的细胞定位特征、M蛋白细胞核定位的分子机制和功能方面进行阐述,以期为NDV M蛋白细胞核定位的功能及其作用机制研究提供理论参考。 展开更多

关键词 新城疫病毒 M蛋白 细胞核定位 核定位信号 基因转录

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鸡贫血病毒VP3蛋白序列与其核定位功能的相关性 被引量：3

10

作者 陶冶 张靖溥 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第1期100-104,共5页

鸡贫血病毒 (chickenanemiavirus ,CAV)编码一种小蛋白VP3.通过构建vp3基因与绿色荧光蛋白基因的真核融合表达载体 ,转染 5种肿瘤 /转化细胞株 ,观察绿色荧光在亚细胞区域的定位 ,证实VP3具有核定位的功能 ;分析VP3的氨基酸序列 ,将其... 鸡贫血病毒 (chickenanemiavirus ,CAV)编码一种小蛋白VP3.通过构建vp3基因与绿色荧光蛋白基因的真核融合表达载体 ,转染 5种肿瘤 /转化细胞株 ,观察绿色荧光在亚细胞区域的定位 ,证实VP3具有核定位的功能 ;分析VP3的氨基酸序列 ,将其具核定位序列 (nuclearlocalizationsequence ,NLS)特征的区域删除 ,再构建此缺失的VP3的基因与绿色荧光蛋白基因的真核融合表达载体、转染实验显示核定位现象消失 ;进一步将具核定位序列特征的区域亚克隆到绿色荧光蛋白真核表达载体上 ,核定位功能再现 .从而推断这一区域是VP3蛋白核定位的功能区 .此区域位于VP3的C端 ,且富含碱性氨基酸 ,二级结构预测发现这一区域形成特定的 β折叠结构 .用碘丙锭 (propidiumiodide,PI)染色的方法还得到了VP3促进肿瘤细胞凋亡的初步证据 . 展开更多

关键词 VP3蛋白 肝癌细胞系 绿色荧光蛋白 脂质体转染 核定位序列 细胞凋亡 鸡贫血病毒 相关性

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鸡基质蛋白3核定位信号的预测与鉴定 被引量：1

11

作者 邓珊珊 高洪波 +4 位作者 袁超 赵佳福 倪萌萌 段志强 嵇辛勤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2486-2495,共10页

本研究旨在预测和鉴定鸡基质蛋白3(matrin 3,MATR3)的核定位信号(nuclear localization signal,NLS)。通过核定位信号在线预测软件预测鸡MATR3蛋白中存在的假定NLS(putative NLS,pNLS),根据预测结果构建鸡MATR3蛋白pNLS缺失的重组真核... 本研究旨在预测和鉴定鸡基质蛋白3(matrin 3,MATR3)的核定位信号(nuclear localization signal,NLS)。通过核定位信号在线预测软件预测鸡MATR3蛋白中存在的假定NLS(putative NLS,pNLS),根据预测结果构建鸡MATR3蛋白pNLS缺失的重组真核表达载体,转染细胞后通过观察缺失体重组蛋白的亚细胞定位来确定其NLS。根据鸡MATR3蛋白NLS邻近碱性氨基酸序列特征,构建NLS邻近氨基酸缺失的重组真核表达载体,转染细胞后通过荧光观察和亚细胞定位分析来确定NLS邻近碱性氨基酸是否参与鸡MATR3蛋白的细胞核定位。另外,对鸡MATR3蛋白NLS在不同物种间的保守性以及对外源蛋白的核输入能力进行分析和检测。结果表明,鸡MATR3蛋白中存在4个pNLS,其中pNLS2(^(596)PSDKKSK^(602))缺失导致鸡MATR3蛋白丧失细胞核定位特征。将构建的鸡MATR3蛋白NLS邻近碱性氨基酸缺失的重组真核表达载体转染细胞,通过荧光观察和亚细胞定位分析,发现鸡MATR3蛋白NLS邻近的碱性氨基酸不参与NLS介导的MATR3蛋白细胞核定位。此外,笔者发现该NLS基序在不同物种的MATR3蛋白中均保守,并且与SV40大T抗原NLS具有相同的核输入能力。鸡MATR3蛋白中存在一个高度保守的NLS(^(596)PSDKKSK^(602)),其邻近的碱性氨基酸位点不参与MATR3蛋白的细胞核定位。 展开更多

关键词 鸡 基质蛋白3 核定位信号 细胞核定位

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胰岛素样生长因子结合蛋白-6的核定位 被引量：1

12

作者 韩建军 黄秉仁 +2 位作者 王欣 马晓骊 陈虹 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期735-739,801,共6页

目的研究胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6)在细胞中的定位。方法用重叠PCR法构建IGFBP-6的核定位序列缺失体(pEGFP-C1-BP6ΔNLS)及突变体(pEGFP-C1-BP6-Mut)质粒,与野生型IGFBP-6质粒分别转染PC-3M细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察绿... 目的研究胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6)在细胞中的定位。方法用重叠PCR法构建IGFBP-6的核定位序列缺失体(pEGFP-C1-BP6ΔNLS)及突变体(pEGFP-C1-BP6-Mut)质粒,与野生型IGFBP-6质粒分别转染PC-3M细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察绿色荧光融合蛋白在细胞中的分布,并计算这些转染阳性细胞中绿色荧光强度的核质比(Fn/c)。结果激光扫描共聚焦显微镜观察显示,野生型IGFBP-6绿色荧光信号在细胞核内聚集分布,与转染EGFP空载体的对照组相比,Fn/c差异具有显著性(P<0.05)。过表达pEGFP-C1-BP6ΔNLS的细胞中,绿色荧光信号在细胞核内聚集的现象消失,在整个细胞呈均匀分布;过表达pEGFP-C1-BP6-Mut的细胞中,细胞核内绿色荧光信号也有所减弱;两者的Fn/c与转染野生型IGFBP-6的细胞相比差异均具有显著性(P<0.05)。结论IGFBP-6可以定位于细胞核内,它在细胞核内的分布与其核定位序列相关,为进一步研究IGFBP-6不依赖于胰岛素样生长因子的生物学活性提供了新的实验依据。 展开更多

关键词 胰岛素样生长因子结合蛋白-6 核定位 核定位顺序 非胰岛素样生长因子依赖的生物学活性

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匍匐翦股颖GIGANTEA基因克隆、亚细胞定位及表达分析

13

作者 夏青青 艾晔 +1 位作者 曾丽萍 晁跃辉 《草地学报》 北大核心 2025年第9期2777-2785,共9页

GIGANTEA(GI)是一种植物特有的核蛋白,在耐旱耐盐性等方面具有重要作用。为探究匍匐翦股颖(Agrostis stolonifera)GI基因响应逆境胁迫,本研究选取匍匐翦股颖作为材料,针对匍匐翦股颖GI基因的生物学作用进行了基因克隆,生物信息学分析和... GIGANTEA(GI)是一种植物特有的核蛋白,在耐旱耐盐性等方面具有重要作用。为探究匍匐翦股颖(Agrostis stolonifera)GI基因响应逆境胁迫,本研究选取匍匐翦股颖作为材料,针对匍匐翦股颖GI基因的生物学作用进行了基因克隆,生物信息学分析和亚细胞定位,同时也对其表达水平进行分析。结果表明,AsGI基因完整编码区全长3468 bp,编码1156个氨基酸。系统发育树表明GI基因编码的蛋白质与燕麦(Avena sativa)、黑麦草(Lolium perenne)等禾本科植物的同源蛋白质的进化联系十分相近。亚细胞定位结果显示该蛋白位于细胞核。GI基因在匍匐翦股颖的地上和地下部位均有表达。GI基因在幼嫩植株中表达水平最高,在衰老植株中表达水平最低。荧光定量分析不同激素处理和胁迫处理下的表达模式,IAA,6-BA,GA_(3)和ABA四种激素均能促进GI表达量的升高,盐和干旱胁迫处理也可诱导GI基因的表达。本研究为深入探究GIGANTEA基因的作用提供参考。 展开更多

关键词 GIGANTEA 匍匐翦股颖 表达分析 核定位蛋白质 干旱胁迫 盐胁迫

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杆状病毒蛋白入核转运的分子机制研究进展

14

作者 李佳乐 王星洋 吴小锋 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 北大核心 2025年第3期366-378,共13页

杆状病毒是一类具有双链、环状、超螺旋DNA结构的病毒,其复制、转录以及子代病毒的组装都发生在细胞核内,而由于细胞核膜这一天然屏障的存在,分子量大于40~60 kDa的大分子物质无法直接穿透核膜,因此,病毒进化出了不同的策略来实现病毒... 杆状病毒是一类具有双链、环状、超螺旋DNA结构的病毒,其复制、转录以及子代病毒的组装都发生在细胞核内,而由于细胞核膜这一天然屏障的存在,分子量大于40~60 kDa的大分子物质无法直接穿透核膜,因此,病毒进化出了不同的策略来实现病毒蛋白的跨核膜转运。本文综述了杆状病毒编码蛋白的核转运途径,主要有杆状病毒衍生出的依赖核定位信号(nuclear localization signal, NLS)的经典核转运途径和不依赖NLS的非经典核转运途径。此外,病毒还会通过蛋白质修饰、改变宿主结构等方式调控入核途径,从而实现病毒蛋白的核转运。 展开更多

关键词 杆状病毒 核定位信号 核转运受体 核孔复合体 蛋白质修饰

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甲状旁腺素相关蛋白核定位序列及C-末端缺失对幼年小鼠下颌切牙发育影响及机制研究

15

作者 刘洪 颜成东 蒋尚飞 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期30-34,共5页

目的:研究甲状旁腺素相关蛋白(PTHrP)对2周龄小鼠下颌切牙发育的影响及作用机制。方法:分别选取2周龄PTHrP KI小鼠及同窝WT小鼠各20只,对下颌切牙行影像学、组织学、细胞凋亡、RT-PCR检测。结果:PTHrP KI组小鼠下颌切牙长度、切缘厚度... 目的:研究甲状旁腺素相关蛋白(PTHrP)对2周龄小鼠下颌切牙发育的影响及作用机制。方法:分别选取2周龄PTHrP KI小鼠及同窝WT小鼠各20只,对下颌切牙行影像学、组织学、细胞凋亡、RT-PCR检测。结果:PTHrP KI组小鼠下颌切牙长度、切缘厚度、髓腔壁牙本质厚度、I型胶原阳性面积、ALP、OCN、SOD1、SOD2、CAT、GSH-Px的mRNA表达水平均明显低于WT组小鼠(P<0.01),前期牙本质比例、凋亡细胞比例均明显高于WT小鼠(P<0.01)。结论:PTHrP核定位序列和C-末端的缺失导致幼年小鼠下颌切牙细胞凋亡增加、胞外基质生成和矿化减少,导致了小鼠下颌切牙的发育异常。 展开更多

关键词 甲状旁腺素相关蛋白 核定位序列 C-末端 切牙 发育 氧化应激

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核定位信号筛选系统的构建 被引量：7

16

作者 王冀姝 陈萍 +5 位作者 孙强 牛立国 周鹏 张浩 韩骅 苏成芝 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第3期301-305,共5页

建立了一酵母克隆系统用于克隆含核定位信号 (NLS)的蛋白质的基因 .用表达转录因子GAL4 DNA结合域 - p53(GAL4- DBD- p53)融合蛋白的质粒转化酵母 HF7c,使 GAL4- DBD- p53可结合于报告基因的启动子但因无转录激活域而不能激活转录 .构... 建立了一酵母克隆系统用于克隆含核定位信号 (NLS)的蛋白质的基因 .用表达转录因子GAL4 DNA结合域 - p53(GAL4- DBD- p53)融合蛋白的质粒转化酵母 HF7c,使 GAL4- DBD- p53可结合于报告基因的启动子但因无转录激活域而不能激活转录 .构建一酵母穿梭载体 ,可表达无NLS的 GAL4转录激活域 -大 T抗原 (GAL4- AD- LT)融合蛋白 .融合蛋白基因的下游插入一多克隆位点 .将 c DNA文库插入多克隆位点后 ,如果 c DNA片段可编码 NLS,则 GAL4- AD- LT分子可进入细胞核 ,并通过 LT与 p53的相互作用而使 GAL4- AD结合于启动子和激活报告基因的转录 .构建了这一克隆系统的各质粒 ,并用绿色荧光蛋白 (GFP)验证了其对核内蛋白和胞浆蛋白的甄别能力 .这一系统将有助于从 c DNA文库中筛选编码带有 展开更多

关键词 核定位信号 基因克隆 酵母表达系统 融合蛋白

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核定位信号及其分析策略 被引量：6

17

作者 赵元茵 王元忠 +2 位作者 曹念 周度金 李渝萍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期683-689,共7页

真核细胞核膜上的核孔复合体(nuclear pore complex,NPC)是细胞核内外进行物质交换的主要通道,分子量较小的化合物可自由通过NPC或采取被动扩散的方式进入细胞核,而分子量为50kD以上的蛋白质则只能通过主动转运进入细胞核.以这种方式进... 真核细胞核膜上的核孔复合体(nuclear pore complex,NPC)是细胞核内外进行物质交换的主要通道,分子量较小的化合物可自由通过NPC或采取被动扩散的方式进入细胞核,而分子量为50kD以上的蛋白质则只能通过主动转运进入细胞核.以这种方式进入细胞核的蛋白质必须在其氨基酸序列上拥有特殊的核定位信号(nuclear localization signal,NLS),以被相应的核转运蛋白(karyopherins)识别.核定位信号具有多样性,包括经典核定位信号(classical NLS,cNLS),内输蛋白β2识别的核定位信号(又称PY模体-NLS)和其它类型的NLS.每一类NLS具有相似的特征,但并不具有完全保守的氨基酸组成.不同的NLS,往往对应着各不相同的核输入机制.而对同一蛋白质来说,也可能同时拥有几个功能性的NLS.研究核定位信号一方面可以帮助揭示新的大分子物质核转运机制,另一方面也有助于发现一些蛋白质的新功能.本文对常见NLS的分类进行了总结,并介绍了两种常用的NLS预测软件及鉴定NLS的一般策略. 展开更多

关键词 核转运机制 核定位信号 内输蛋白

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PNRC1核定位信号序列的鉴定 被引量：2

18

作者 王元忠 李渝萍 +3 位作者 陈敏 陈彬 陈健 周度金 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期35-39,共5页

为鉴定富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1(PNRC1)分子的核定位信号序列(nuclear localization signal sequence ,NLS) ,在生物信息学方法预测的基础上,先构建野生型PNRC1及删除预测NLS的PNRC1突变体的绿色荧光蛋白(GFP)重组表达载体,转染细... 为鉴定富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1(PNRC1)分子的核定位信号序列(nuclear localization signal sequence ,NLS) ,在生物信息学方法预测的基础上,先构建野生型PNRC1及删除预测NLS的PNRC1突变体的绿色荧光蛋白(GFP)重组表达载体,转染细胞后通过激光共聚焦显微镜观察PNRC1分子在删除预测NLS后细胞内的定位变化.然后,将预测的NLS编码序列直接连到GFP表达载体上,以及将预测的NLS加到胞浆蛋白上构建其GFP重组表达载体,转染细胞,观察预测的NLS能否把构建的重组体都带到细胞核内.结果显示,删除PNRC1中预测的NLS后,其定位从细胞核中变为主要定位在细胞浆中,而预测的NLS能把GFP或胞浆中的蛋白带到细胞核中.研究表明,预测的NLS为PNRC1分子真正的NLS. 展开更多

关键词 富含脯氨酸核受体辅调节蛋白1 核定位信号序列 辅活化子 绿色荧光蛋白

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ZNF219基因核定位信号序列的确定

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作者 余少文 胡萍 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 2002年第2期19-21,共3页

ZNF2 19是新发现定位在人 14号染色体 q11带上的特异性锌指基因 .本实验对其核定位信号的识别说明其中有两组核定位序列存在 ,因此通过将ZNF2 19的核定位序列(NLS)与N -端增强绿色荧光蛋白载体 (pEGFP N1)构建成质粒 (pEGFP ZNF2 19NLS... ZNF2 19是新发现定位在人 14号染色体 q11带上的特异性锌指基因 .本实验对其核定位信号的识别说明其中有两组核定位序列存在 ,因此通过将ZNF2 19的核定位序列(NLS)与N -端增强绿色荧光蛋白载体 (pEGFP N1)构建成质粒 (pEGFP ZNF2 19NLS) ,然后瞬时转染到COS靶细胞 ,实验结果表明 :绿色荧光蛋白 (GFP) 展开更多

关键词 核定位信号 ZNF219 核定位序列 绿色荧光蛋白 人 睾丸 染色体 特异性锌指基因 细胞核

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不同亚细胞定位的alpha-突触核蛋白对SK-N-SH细胞的毒性影响 被引量：2

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作者 赵云 韩玉坤 +2 位作者 郑焱 杨慧 张建亮 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期164-170,共7页

在帕金森病中,alpha-突触核蛋白(α-synuclein)累积与聚集所产生的细胞毒性是发病的重要原因。本文目的是探求不同亚细胞定位的α-突触核蛋白对于细胞的毒性影响。分别在α-突触核蛋白前插入核输出序列(nuclear export sequence,NES)或... 在帕金森病中,alpha-突触核蛋白(α-synuclein)累积与聚集所产生的细胞毒性是发病的重要原因。本文目的是探求不同亚细胞定位的α-突触核蛋白对于细胞的毒性影响。分别在α-突触核蛋白前插入核输出序列(nuclear export sequence,NES)或核定位序列(nuclear localization sequence,NLS),使其特定地表达在细胞质或细胞核中。构建成功的质粒分别在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中表达,通过免疫荧光与Western印迹法检测蛋白质的表达情况。结果显示,NES-α-synuclein特异性地在细胞质中表达,NLS-α-synuclein特异性地在细胞核中表达。乳酸脱氢酶法检测结果表明,相较于WT-α-synuclein组,NES-α-synuclein组的乳酸脱氢酶的释放量减少26. 54%,NLS-α-synuclein组的乳酸脱氢酶释放量增加12. 85%。CCK8法检测细胞活性结果表明,相较于WT-α-synuclein组,NES-α-synuclein组的细胞活力提高35. 51%,NLS-α-synuclein组的细胞活力减少7. 93%。上述结果提示,胞质内表达α-synuclein对于细胞的毒性更小,而细胞核内表达的α-synuclein对细胞有更强的毒性作用。这些发现为研究帕金森病的分子机制提供了新的研究思路。 展开更多

关键词 alpha-突触核蛋白 核定位序列 核输出序列 细胞毒性

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