肝癌细胞株HepG2的G1期细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立

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作者 白瑞霞 王文礼 +2 位作者 李丽梅 刘婷 叶纪诚 《科学技术与工程》 2008年第1期161-163,共3页

采用双向电泳分离肝癌细胞株HepG2的G1期细胞的蛋白质,经考马斯亮蓝染色及图像扫描与分析显示:在pH3—10,13cm的IPG胶条上,可分离到227个重复性及分辨率均较好的蛋白斑点,蛋白斑点的匹配率为84%。建立了HepG2的G1期细胞蛋白质组双向电... 采用双向电泳分离肝癌细胞株HepG2的G1期细胞的蛋白质,经考马斯亮蓝染色及图像扫描与分析显示:在pH3—10,13cm的IPG胶条上,可分离到227个重复性及分辨率均较好的蛋白斑点,蛋白斑点的匹配率为84%。建立了HepG2的G1期细胞蛋白质组双向电泳图谱,为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 双向电泳 HEPG2细胞 蛋白质组

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适用于黄麻根部蛋白质组学分析的双向电泳技术 被引量：10

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作者 马洪雨 王占奎 +3 位作者 俞阗 杨立明 王显生 麻浩 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期195-202,共8页

以黄麻品种‘9511’幼苗为试验材料,研究其根部蛋白提取方法的得率及不同的蛋白样品溶解方法、电泳上样量和IPG胶条pH范围对双向电泳图谱的影响。结果表明：采用三氯乙酸（TCA）/丙酮沉淀法提取黄麻根部蛋白质,蛋白得率为80 mg/g;蛋白... 以黄麻品种‘9511’幼苗为试验材料,研究其根部蛋白提取方法的得率及不同的蛋白样品溶解方法、电泳上样量和IPG胶条pH范围对双向电泳图谱的影响。结果表明：采用三氯乙酸（TCA）/丙酮沉淀法提取黄麻根部蛋白质,蛋白得率为80 mg/g;蛋白粉末溶解采用两次水化法,裂解液中含有7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4%CHAPS、65 mmol/L DTT、0.2%载体两性电解质和1 mmol/L PMSF,能够较充分地溶解蛋白质,且制备的样品浓度能够满足双向电泳上样要求;上样量为400μg时得到的图谱分辨率高、蛋白斑点分布均匀、清晰;等电聚焦（Iso-electrofocusing,IEF）采用pH 4-7、17 cm的IPG胶条时所得图谱质量最佳。研究表明,样品的制备及IEF有效除盐对获得理想的2-DE图谱非常关键;取材、染色等细节对2-DE的重复性影响很大。 展开更多

关键词 黄麻 根 蛋白质 双向电泳(2-de)

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应用优化的双向电泳技术建立纤维堆囊菌So0157-2蛋白质组数据库(英文)

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作者 张鹏翼 李越中 +3 位作者 吴志红 刘红 徐培培 熊娟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第1期86-94,共9页

堆囊菌丰富的次级代谢产物是新药的重要来源,而蛋白质组学分析是研究代谢调控的有效方法.然而堆囊菌含有大量的胞外多糖以及黏液,干扰了蛋白质组学分析中蛋白质的溶解度、分辨率及重现性.为了高通量地筛选Sorangium cellulosumSo0157-2... 堆囊菌丰富的次级代谢产物是新药的重要来源,而蛋白质组学分析是研究代谢调控的有效方法.然而堆囊菌含有大量的胞外多糖以及黏液,干扰了蛋白质组学分析中蛋白质的溶解度、分辨率及重现性.为了高通量地筛选Sorangium cellulosumSo0157-2表达的特异性蛋白,实验优化了S.cellulosum So0157-2双向电泳方法.首先,S.cellulosum So0157-2蛋白在裂解液中有更好的溶解度.pH 3～10非线性胶条和1 mg的蛋白上样量适用于第一向等电聚焦,分别提高了蛋白质点的分辨率和低丰度蛋白质的表达.15%SDS-PAGE改善了S.cellulosum So0157-2蛋白分离的分辨率和重现性.最终,通过优化的双向电泳方法获得了S.cellulosum So0157-2在M26培养基中培养3天的全蛋白质表达谱,并检测到552个蛋白质点.进而对表达蛋白通过MALDI-TOF-MS进行质谱鉴定,其中474个蛋白质得到鉴定,鉴定率85.9%.得到鉴定的蛋白质包括细胞结构和功能组分,以及细胞代谢合成酶类,其中8个蛋白质与糖类的转化和代谢相关,这有助于糖基化埃博霉素A的深入研究.该优化方法为进一步建立纤维堆囊菌So0157-2在各种培养条件下的蛋白质组表达数据库打下基础. 展开更多

关键词 双向电泳 纤维堆囊菌So0157-2 优化 蛋白质组

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烟草叶片蛋白质双向电泳技术体系的建立 被引量：4

4

作者 尤垂淮 唐莉娜 +6 位作者 王海斌 吴林坤 陈冬梅 黄锦文 田卫霞 陈岚凤 林文雄 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第5期96-102,共7页

以烟草品种K326旺长后期叶片为材料,用IEF/SDS-PAGE双向凝胶电泳技术对5种蛋白质提取方法(TCA/丙酮沉淀法、Mg/NP-40法、苯酚法、TCA-苯酚法和可溶性蛋白质提取法)进行比较,并对自制管胶pH范围进行探索。结果表明:苯酚法图谱中蛋白质条... 以烟草品种K326旺长后期叶片为材料,用IEF/SDS-PAGE双向凝胶电泳技术对5种蛋白质提取方法(TCA/丙酮沉淀法、Mg/NP-40法、苯酚法、TCA-苯酚法和可溶性蛋白质提取法)进行比较,并对自制管胶pH范围进行探索。结果表明:苯酚法图谱中蛋白质条带最多、最清晰,并可获得较高纯蛋白质得率,为0.0420%,且图谱中蛋白质条带数最多、最清晰。自制管胶pH范围优化试验结果表明,以两性电解质pH 3-10与pH 5-8比例为1:3的2-DE图谱质量最佳,蛋白质可得到较好的分离。 展开更多

关键词 烟草 蛋白质组学 双向电泳 2-de图谱 苯酚法

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石榴果实成熟期不同品种果皮蛋白质表达的双向电泳分析 被引量：7

5

作者 曹尚银 牛娟 +5 位作者 曹达 李好先 薛辉 陈利娜 张富红 赵弟广 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1062-1069,共8页

【目的】石榴果实色泽是影响果品商品价值的重要因素之一,但石榴果皮颜色形成的分子机制还不清楚。应用差异蛋白组学技术,从蛋白水平上探究石榴果实发育成熟期果皮的代谢进程。【方法】运用双向电泳和MALDI-TOFTOF MS质谱鉴定技术研究... 【目的】石榴果实色泽是影响果品商品价值的重要因素之一,但石榴果皮颜色形成的分子机制还不清楚。应用差异蛋白组学技术,从蛋白水平上探究石榴果实发育成熟期果皮的代谢进程。【方法】运用双向电泳和MALDI-TOFTOF MS质谱鉴定技术研究‘三白’石榴和‘中农红’石榴果实成熟时果皮蛋白质组学差异。【结果】分别对‘三白’、‘中农红’石榴进行2-DE和质谱鉴定,在‘三白’和‘中农红’石榴果皮的电泳图谱中发现每一张重复胶上分别可以检测到892个蛋白点和890个蛋白点,与‘中农红’相比,在‘三白’果皮图谱中共检测到36个表达量相差2倍以上的蛋白质点,相对于‘中农红’,‘三白’有13个蛋白质点上调表达,19个蛋白质点下调表达。通过质谱鉴定和数据库检索注释了4个蛋白质点。分别为半胱氨酸合酶1(sport 1402)、细胞色素b6-f复合体(sport 0013)、叶绿素a/b结合蛋白(sport 5108)及果糖激酶2-like(sport 0503)。【结论】细胞色素b6-f复合体(sport 0013)、叶绿素a/b结合蛋白(sport 5108)和果糖激酶2-like(sport 0503)可能与果皮颜色变化相关;半胱氨酸合酶1(sport 1402)可能对提高石榴的抗氧化胁迫能力起到了重要作用。为研究石榴果实发育蛋白质组学及改善石榴果实品质提供一定的理论依据。 展开更多

关键词 石榴 果皮 成熟期 蛋白质组学 2-de

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大豆种子萌发中蛋白质组成的双向电泳分析 被引量：4

6

作者 徐晓燕 郑蕊 +1 位作者 李春梅 喻德跃 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期355-359,共5页

采用双向电泳技术分析了大豆种子萌发时期蛋白质的差异表达。研究发现,在考染胶上,通过PDQuest分析,在成熟干种子和萌发种子的2-DE图谱上分别获得341和376个蛋白斑点,两个时期的2-DE图谱非常相近,说明绝大部分大豆种子贮藏蛋白在萌发期... 采用双向电泳技术分析了大豆种子萌发时期蛋白质的差异表达。研究发现,在考染胶上,通过PDQuest分析,在成熟干种子和萌发种子的2-DE图谱上分别获得341和376个蛋白斑点,两个时期的2-DE图谱非常相近,说明绝大部分大豆种子贮藏蛋白在萌发期尚未开始降解。有21个蛋白点在萌发的大豆种子中表达量上调,9个表达量下调。对这些蛋白的进一步鉴定将有助于深入理解大豆种子萌发过程的生理及分子机制。 展开更多

关键词 大豆 双向电泳(2-de) 萌发

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适于番茄叶片蛋白质组分析的双向电泳优化体系的建立 被引量：2

7

作者 王强 王娟 +6 位作者 李宁 唐亚萍 杨涛 王柏柯 杨生保 帕提古丽 余庆辉 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期610-616,共7页

【目的】建立适于番茄叶片蛋白质组分析的双向电泳（2-DE）技术,为开展番茄蛋白质组学研究奠定技术基础。【方法】对番茄叶片蛋白质提取方法、蛋白质裂解液、上样量、胶条p H范围等关键步骤进行优化。【结果】采用三氯乙酸/丙酮法提取... 【目的】建立适于番茄叶片蛋白质组分析的双向电泳（2-DE）技术,为开展番茄蛋白质组学研究奠定技术基础。【方法】对番茄叶片蛋白质提取方法、蛋白质裂解液、上样量、胶条p H范围等关键步骤进行优化。【结果】采用三氯乙酸/丙酮法提取番茄叶片总蛋白质,含有7 mol/L尿素,2 mol/L硫脲,4%CHAPS,30 mmol/L Tris-HCl（p H 8.0）裂解缓冲液,上样量为100 mg,以p H 4~7、18 cm的IPG胶条在12%SDS-PAGE凝胶浓度下进行双向电泳,得到了蛋白点均匀分布、低峰度蛋白点较为清晰,蛋白点数目多且分辨率高的2-DE图谱。【结论】建立了一套适于番茄叶片蛋白质分析的双向电泳技术体系,为下一步在蛋白组学水平上分析番茄逆境胁迫等相关蛋白提供了技术支持。 展开更多

关键词 番茄叶片 蛋白质组 双向电泳(2-de)

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双向电泳和肽质量指纹谱技术鉴定支气管上皮细胞恶性转化相关蛋白质ANX1-human 被引量：21

8

作者 谢玲 应万涛 +4 位作者 张开泰 项小琼 钱小红 王玉芝 吴德昌 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第5期569-573,共5页

采用 2 - D PAGE及质谱技术对α粒子照射诱发人支气管上皮恶性转化细胞的不同阶段进行了比较蛋白组分析与鉴定 .2 - D电泳后在分子量 1 4.4～ 94k D,等电点 3～ 1 0范围内分离出约 1 1 0 0个不同蛋白质斑点 .对等电点约 7,分子量约 40 ... 采用 2 - D PAGE及质谱技术对α粒子照射诱发人支气管上皮恶性转化细胞的不同阶段进行了比较蛋白组分析与鉴定 .2 - D电泳后在分子量 1 4.4～ 94k D,等电点 3～ 1 0范围内分离出约 1 1 0 0个不同蛋白质斑点 .对等电点约 7,分子量约 40 k D的蛋白质点进行了质谱分析 .鉴定出分子量为38.58k D、等电点 6.64的蛋白质 ANX1 - human(脂皮质蛋白 ,lipocortin ) ,并且发现该蛋白质在BEP2 D细胞恶性转化过程的不同时期存在差异表达 .提示蛋白质 ANX1 - human参与了支气管上皮细胞恶性转化过程 ,与细胞恶性转化相关 . 展开更多

关键词 双向电泳 肽质量指纹谱 BEP2D细胞 蛋白质 肺癌

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镉胁迫下三个萝卜栽培种蛋白质变化的双向电泳比较研究(英文) 被引量：4

9

作者 范宝莉 王振英 彭永康 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期298-303,共6页

在0.5mmol·L-1Cd2+处理时,小五缨(XWY)的发芽率下降至92%,并且随着Cd2+浓度的增加,发芽率逐渐降低,在1和5mmol·L-1Cd2+浓度处理时,发芽率分别降至83%和67%。象牙白(XYB)则在5mmol·L-1Cd2+浓度时,发芽率下降。卫青(WQ)在0... 在0.5mmol·L-1Cd2+处理时,小五缨(XWY)的发芽率下降至92%,并且随着Cd2+浓度的增加,发芽率逐渐降低,在1和5mmol·L-1Cd2+浓度处理时,发芽率分别降至83%和67%。象牙白(XYB)则在5mmol·L-1Cd2+浓度时,发芽率下降。卫青(WQ)在0.05mmol·L-1Cd2+浓度时,发芽率已降至83%,1和5mmol·L-1时则下降至58%。幼苗生长也明显受Cd2+处理影响,在0.05mmol·L-1Cd2+处理时,3种栽培萝卜的幼苗生长均受到明显影响,并且随Cd2+浓度的增加,生长受抑加重。从发芽率和幼苗生长两种实验结果看,卫青对Cd2+最为敏感。双向电泳结果表明,Cd2+处理后3种栽培萝卜幼苗中蛋白质组分有明显变化。小五缨中,0.1mmol·L-1Cd2+处理后,有5个蛋白质点消失,15个新的蛋白质点被诱导产生。象牙白中,2个蛋白质点消失,1个蛋白质点含量减少,13个新的蛋白质点被诱导产生。卫青中,12个新的蛋白质点诱导产生,但没有发现蛋白质点消失现象。Cd2+处理后,3种栽培萝卜中,蛋白质合成的变化与幼苗生长受抑存在明显相关性,这一实验结果对于探讨萝卜Cd2+害的生化机理是有重要意义的。 展开更多

关键词 发芽率 双向电泳 蛋白质斑点 镉 萝卜 蛋白质变化 栽培种 Cd^2+处理 比较研究 镉胁迫

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豌豆白化苗蛋白质双向电泳技术的建立 被引量：2

10

作者 赵鑫 刘红霞 +1 位作者 陈佰鸿 毕阳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期100-103,共4页

以豌豆白化苗为试验材料,分析了不同的蛋白质提取时间(4 h、8 h及过夜)和蛋白质上样量(500、1 000、2 000μg)对双向电泳蛋白质得率和等电聚焦效果的影响。结果表明,不同的蛋白提取时间和蛋白上样量对等电聚焦效果影响较大。适宜的豌豆... 以豌豆白化苗为试验材料,分析了不同的蛋白质提取时间(4 h、8 h及过夜)和蛋白质上样量(500、1 000、2 000μg)对双向电泳蛋白质得率和等电聚焦效果的影响。结果表明,不同的蛋白提取时间和蛋白上样量对等电聚焦效果影响较大。适宜的豌豆白化苗提取时间应至少长于8 h,最好提取过夜,能裂解得到大量蛋白质;适宜的豌豆白化苗蛋白上样量为1 000μg,此条件下,双向电泳的分辨率最高,分离出的蛋白大多为小分子量功能性蛋白。 展开更多

关键词 蛋白质组学 豌豆 2-de

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蛋白质组学研究中双向电泳技术的应用 被引量：3

11

作者 程丽萍 《农业与技术》 2011年第2期25-28,共4页

双向电泳技术(2-DE)是蛋白质组研究的核心技术。本文重点介绍了双向电泳的原理、实验操作过程中的具体步骤以及近年来在实验过程中发展的一些新方法和进展,并从一些方法的局限性和相关技术改进等方面做了简要综述,为进一步开发利用该技... 双向电泳技术(2-DE)是蛋白质组研究的核心技术。本文重点介绍了双向电泳的原理、实验操作过程中的具体步骤以及近年来在实验过程中发展的一些新方法和进展,并从一些方法的局限性和相关技术改进等方面做了简要综述,为进一步开发利用该技术提供参考依据。 展开更多

关键词 双向电泳 2-de 蛋白质组

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基于双向电泳技术研究湖羊初乳和常乳乳蛋白质组差异 被引量：3

12

作者 翁秀秀 刘欣欣 +2 位作者 乐祥鹏 李万宏 李发弟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第3期865-872,共8页

试验旨在分析绵羊初乳和常乳乳蛋白质组的差异,揭示绵羊不同泌乳阶段的乳蛋白质组特征。选用6只胎次相同、预产期相近的湖羊母羊,分别采集分娩后第1、3、7天的初乳和第14、28、56天的常乳,每个时间点采集6份奶样并等体积混合,离心弃去... 试验旨在分析绵羊初乳和常乳乳蛋白质组的差异,揭示绵羊不同泌乳阶段的乳蛋白质组特征。选用6只胎次相同、预产期相近的湖羊母羊,分别采集分娩后第1、3、7天的初乳和第14、28、56天的常乳,每个时间点采集6份奶样并等体积混合,离心弃去乳脂肪,采用双向电泳(2-DE)技术对初乳和常乳的脱脂乳蛋白进行比较分析。结果发现,初乳中乳蛋白含量较高,且随着泌乳期的延伸,乳蛋白含量降低。以第1天乳蛋白2-DE图谱为参照,第3天检测到38个差异蛋白点,其中有20个蛋白点仅存在于第1天图谱中,有1个蛋白点仅存在于第3天图谱中,其余17个蛋白点呈现表达量的差异;第7天检测到35个差异蛋白点,其中有19个蛋白点仅存在于第1天图谱中,有1个蛋白点仅存在于第7天图谱中,其余15个蛋白点呈现表达量的差异;第14天检测到34个差异蛋白点,其中有11个蛋白点仅存在于第1天图谱中,有1个蛋白点仅存在于第14天图谱中,其余22个蛋白点呈现表达量的差异;第28天检测到38个差异蛋白点,其中有28个蛋白点仅存在于第1天图谱中,有1个蛋白点仅存在于第28天图谱中,其余9个蛋白点呈现表达量的差异;第56天检测到36个差异蛋白点,其中有26个蛋白点仅存在于第1天图谱中,有1个蛋白点仅存在于第56天图谱中,其余9个蛋白点呈现表达量的差异。综上,共检测出44个差异表达的蛋白点,其中有8个蛋白点仅存在于第1天图谱中,而这些蛋白主要涉及免疫活性功能。 展开更多

关键词 双向电泳(2-de) 湖羊 初乳 常乳 蛋白质组学

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小麦小花细胞核蛋白质双向电泳体系的优化 被引量：3

13

作者 宋归华 张迎新 +5 位作者 侯泽豪 孙坤坤 方正武 马东方 张改生 王书平 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期686-692,共7页

为建立适用于小麦小花细胞核的分离及其蛋白质双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)体系,以小麦品种西农1376三核期小花为供试材料,采用叶绿素含量测定、荧光显微镜观察和组蛋白免疫印迹检测等方法对分离和富集到的细胞核进... 为建立适用于小麦小花细胞核的分离及其蛋白质双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)体系,以小麦品种西农1376三核期小花为供试材料,采用叶绿素含量测定、荧光显微镜观察和组蛋白免疫印迹检测等方法对分离和富集到的细胞核进行了纯度评价,并在SDS-PAGE胶浓度和蛋白质上样量等方面对细胞核蛋白质双向电泳体系进行了探索和优化,确立了一套适用于小麦小花细胞核的分离及其蛋白质双向电泳的技术方法。结果表明,获得的细胞核完整且纯度较高;经TCA/丙酮法提取其蛋白质,采用17cm、pH 4~7IPG胶条和12%SDS-PAGE分离胶,上样量为230μg的双向电泳体系,更适合于小麦小花细胞核蛋白质组分离,经PDQuest 2DE 8.0.1软件统计分析,可在2-DE图谱上分辨出约264个蛋白点,蛋白点清晰呈圆形,无横条纹干扰。 展开更多

关键词 小麦 小花 细胞核 蛋白质组 2-de

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桃树枝条皮层响应低温的特异蛋白质2-DE分析 被引量：3

14

作者 李永红 周语潮 +4 位作者 田启航 常瑞丰 刘国俭 陈湖 王召元 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第S01期102-108,共7页

低温是限制桃树生长、发育、繁殖以及地理分布的一个重要环境因子。明确桃响应低温胁迫的分子调控机制有可能为培育和筛选出相对抗寒的桃品系提供研究基础。以抗寒性较强的秋燕桃为试材,将一年生休眠枝条置于-5(CK),-15,-25℃低温处理48... 低温是限制桃树生长、发育、繁殖以及地理分布的一个重要环境因子。明确桃响应低温胁迫的分子调控机制有可能为培育和筛选出相对抗寒的桃品系提供研究基础。以抗寒性较强的秋燕桃为试材,将一年生休眠枝条置于-5(CK),-15,-25℃低温处理48 h,应用双向电泳技术(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)测定枝条皮层蛋白质表达变化情况。结果显示:通过质谱鉴定发现,有150个蛋白质点的表达丰度在低温胁迫后发生明显变化,丰度显著上调的有97个,丰度显著下调的有53个,通过蛋白质组数据检索成功地鉴定了其中的20个蛋白,发现这些蛋白质主要参与氨基糖和核苷酸糖代谢、蔗糖和淀粉代谢、氨基酸代谢、MAPK信号通路、苯丙氨酸代谢和DNA的复制等代谢过程。利用RT-PCR验证了Alpha淀粉酶(M5VVU6)、叶绿素a/b结合蛋白(M5WUQ0)和环氧化物水解酶(D8L7V9)蛋白编码的基因,随着低温胁迫的增加而上调表达。研究结果暗示了这些代谢途径和3个特异蛋白可能在桃的抗寒机制中起重要作用。 展开更多

关键词 桃 双向电泳(2-de) 特异蛋白 抗寒性

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纳米铜对大鼠肝脏毒性的蛋白质组2-DE图谱分析 被引量：2

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作者 高昭辉 董书伟 +2 位作者 薛慧文 申小云 荔霞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第11期22-26,共5页

为获取纳米铜对大鼠肝脏毒性的蛋白质组表达图谱,试验通过构建大鼠纳米铜中毒模型,采用双向凝胶电泳技术获取了大鼠纳米铜中毒组和对照组肝脏的蛋白质2-DE图谱,结合PDQuest 8.0软件分析发现200mg/kg纳米铜组大鼠肝脏2-DE图谱中有27个蛋... 为获取纳米铜对大鼠肝脏毒性的蛋白质组表达图谱,试验通过构建大鼠纳米铜中毒模型,采用双向凝胶电泳技术获取了大鼠纳米铜中毒组和对照组肝脏的蛋白质2-DE图谱,结合PDQuest 8.0软件分析发现200mg/kg纳米铜组大鼠肝脏2-DE图谱中有27个蛋白质斑点表达上调,16个蛋白质斑点表达下调,共有43个差异蛋白质点。试验利用蛋白质组学技术研究大鼠纳米铜肝脏蛋白质组学,为在蛋白质水平阐明纳米铜的毒性作用机制奠定基础。 展开更多

关键词 蛋白质组学 2-de 纳米铜 大鼠

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2型猪链球菌强毒株与无毒株胞外蛋白的双向电泳图谱比较分析 被引量：3

16

作者 张爱玲 王兴龙 +3 位作者 李吉平 冯书章 张辉 卜昭阳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期250-254,共5页

利用双向电泳技术可以对体外培养的2型猪链球菌强毒株和无毒株进行胞外蛋白质组比较,寻找与毒力相关的蛋白质。2型猪链球菌强毒株和无毒株在无蛋白细菌培养液中37℃摇床培养16h,从培养物上清中获得胞外蛋白。第一向电泳用pH4-7线性IPG... 利用双向电泳技术可以对体外培养的2型猪链球菌强毒株和无毒株进行胞外蛋白质组比较,寻找与毒力相关的蛋白质。2型猪链球菌强毒株和无毒株在无蛋白细菌培养液中37℃摇床培养16h,从培养物上清中获得胞外蛋白。第一向电泳用pH4-7线性IPG胶条进行等电聚焦,第二向电泳用SDS-PAGE凝胶再分离蛋白,经过考马斯亮蓝R350染色,图像扫描后,利用软件分析处理图像。在2型猪链球菌强毒株和无毒株的胞外蛋白质图谱中都分别检测出180±10个蛋白质斑点,它们的蛋白质分子质量分布基本相似;在所检测到的差异蛋白质斑点中,其中有50个蛋白斑点只存在于无毒株中而强毒株中不存在,有52个蛋白斑点只存在于强毒株中而无毒株中不存在,有7个蛋白斑点的表达量相差达5倍以上。这为研究2型猪链球菌的致病机理提供了蛋白质组学方面的信息。 展开更多

关键词 2型猪链球菌 双向电泳 蛋白质组 胞外蛋白

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圆果种黄麻功能叶总蛋白提取方法及双向电泳体系的优化 被引量：7

17

作者 陈富成 祁建民 +6 位作者 徐建堂 陈涛 陶爱芬 林培清 陈美霞 郭英 李华丽 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期369-373,共5页

蛋白质提取方法和电泳条件是蛋白质组学研究中双向电泳的关键。本文初步建立起一套适合圆果种黄麻功能叶总蛋白双向电泳(2-DE)分析的高效提取方法及电泳条件,在双向电泳技术中,比较了TCA丙酮、Tris-base/丙酮、Tris-HCl的蛋白提取方法,... 蛋白质提取方法和电泳条件是蛋白质组学研究中双向电泳的关键。本文初步建立起一套适合圆果种黄麻功能叶总蛋白双向电泳(2-DE)分析的高效提取方法及电泳条件,在双向电泳技术中,比较了TCA丙酮、Tris-base/丙酮、Tris-HCl的蛋白提取方法,并优化了上样量和样品制备方法。结果表明,TCA丙酮法提取蛋白质产量高,达79.0mgg?1,比Tris-base/丙酮法和Tris-HCl的产量分别高出44.2%和114.1%。该法得到的2-DE图谱背景清晰,蛋白点数最多,约602个,较其他两种方法更适合用于黄麻功能叶总蛋白双向电泳分析;350μg为最佳上样量。这为黄麻蛋白质组学后续研究奠定了基础。 展开更多

关键词 黄麻功能叶 提取方法 蛋白质双向电泳(2-de) 优化上样量

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绵羊血浆蛋白质组2-DE图谱的初步建立分析与质谱检测 被引量：1

18

作者 于国庆 徐铁山 +2 位作者 孙陶 李亚男 吴增华 《现代畜牧兽医》 2013年第6期54-56,共3页

本研究通过使用热的SDS法制备绵羊血浆蛋白样品,通过双向电泳、硝酸银染色得到绵羊血浆蛋白质组的2-DE图谱,经PDQuest 8.0图像分析软件分析有661个蛋白点,质谱检测2个高丰度蛋白点分别为α-1抗胰蛋白酶和免疫球蛋白入链C区。

关键词 蛋白质组 绵羊 2-de 血浆

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蜕皮甾酮对胰岛素抵抗HepG_2细胞的蛋白质组学研究 被引量：5

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作者 宋敏 李耀军 +1 位作者 赖国旗 邱宗荫 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1640-1644,共5页

目的用比较蛋白质组学策略筛选蜕皮甾酮干预胰岛素抵抗HepG2细胞前后的差异表达蛋白,为寻找胰岛素增敏药物作用靶点提供新的实验依据。方法将HepG2细胞置于5×10-7mol.L-1胰岛素培养液中诱导16h,观察高胰岛素对HepG2细胞葡萄糖消耗... 目的用比较蛋白质组学策略筛选蜕皮甾酮干预胰岛素抵抗HepG2细胞前后的差异表达蛋白,为寻找胰岛素增敏药物作用靶点提供新的实验依据。方法将HepG2细胞置于5×10-7mol.L-1胰岛素培养液中诱导16h,观察高胰岛素对HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响,确定模型建立后,加入含蜕皮甾酮10-5mol.L-1培养液继续孵育24h,继续观察蜕皮甾酮对胰岛素抵抗模型细胞葡萄糖消耗量的影响;并用裂解液提取干预前后细胞的蛋白质,以双向电泳技术对干预前后差异表达蛋白进行筛选,差异表达蛋白再经MAL-DI-TOF-MS质谱分析,MS-Fit数据库鉴定。结果与模型组比较,蜕皮甾酮干预组找到53个差异蛋白点,其中35个蛋白点表达上调,18个蛋白点表达下调,鉴定了其中6个蛋白。结论蜕皮甾酮胰岛素增敏作用靶点涉及多种与胰岛素抵抗相关的蛋白质和激酶,为后续靶蛋白的筛选及其功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 蜕皮甾酮 胰岛素抵抗 蛋白质组 双向电泳 HEPG2细胞 质谱分析

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宫颈永生化细胞和癌细胞的胞质蛋白双向电泳图谱的建立及初步分析 被引量：3

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作者 宋大萍 赵涌 +1 位作者 巫静娴 贾世军 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第2期166-168,176,共4页

目的:建立HPV-16阳性的宫颈上皮永生化细胞(H8细胞株)和宫颈癌细胞(CaSKi细胞株)胞质蛋白双向电泳图谱,并初步分析找出特征性的差异蛋白点。方法:分别培养H8和CaSki细胞,用亚细胞结构蛋白质提取试剂盒提取胞质蛋白进行双向电泳,用ImageM... 目的:建立HPV-16阳性的宫颈上皮永生化细胞(H8细胞株)和宫颈癌细胞(CaSKi细胞株)胞质蛋白双向电泳图谱,并初步分析找出特征性的差异蛋白点。方法:分别培养H8和CaSki细胞,用亚细胞结构蛋白质提取试剂盒提取胞质蛋白进行双向电泳,用ImageMaster 2D V2002.1图像分析软件分析电泳图谱,筛选差异蛋白点。结果:获得了分辨率和重复性均较好的宫颈永生化细胞和癌细胞胞质蛋白2-DE图谱,并分析找出了显著的差异蛋白点8个,其中3种蛋白质在宫颈癌细胞株表达上调,1种蛋白质表达明显下调,2种蛋白质在宫颈癌细胞株表达缺失,2种蛋白质在永生化细胞株表达缺失。结论:应用亚细胞蛋白双向凝胶电泳技术对HPV-16阳性的宫颈癌前和癌变的胞质蛋白分析,能有效找出蛋白质表达差异点,为进一步确定宫颈癌前病变和癌细胞的关键性差异蛋白质的结构和功能奠定了基础。 展开更多

关键词 宫颈 永生化细胞 癌细胞 蛋白质组 2-de

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