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病毒诱导的精氨琥珀酸合成酶基因沉默对棉花氮代谢的影响 被引量：2
1
作者 王慧飞 刘琳琳 +7 位作者 甄军波 刘迪 欧阳艳飞 迟吉娜 冯雪 张一名 孙艳香 陈光 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期72-78,共7页
以棉花为研究对象,利用转录后基因沉默技术(VIGS)将棉花精氨琥珀酸合成酶(GhASS1)基因沉默,研究沉默后植物的氨基酸、多胺、一氧化氮(NO)等含氮化合物的代谢变化。结果表明:盐胁迫可以诱导棉花精氨琥珀酸合成酶(GhASS1)瞬时上调表达,GhA... 以棉花为研究对象,利用转录后基因沉默技术(VIGS)将棉花精氨琥珀酸合成酶(GhASS1)基因沉默,研究沉默后植物的氨基酸、多胺、一氧化氮(NO)等含氮化合物的代谢变化。结果表明:盐胁迫可以诱导棉花精氨琥珀酸合成酶(GhASS1)瞬时上调表达,GhASS1沉默严重影响氨基酸的合成,除天门冬氨酰(Ans)外,其他蛋白质组成型氨基酸质量分数显著降低,NO质量摩尔浓度和多胺(PAs)质量分数下降,棉花植株生长发育迟缓。GhASS1沉默对棉花精氨酸脱羧酶基因(GhADC)、棉花鸟氨酸脱羧酶基因(GhODC)表现出强烈的抑制作用,进而影响植物多胺的代谢和耐盐能力。高浓度盐环境下,沉默体系精氨酸(Arg)和NO质量摩尔浓度上升,GhARG1表达上调。GhASS1沉默对于植物是致命的,GhASS1是尿素循环和氨基酸代谢的关键环节,GhASS1沉默使GhARG1、GhADC和GhODC表达下调,严重影响整个氨基酸代谢,NO质量摩尔浓度,腐胺(Put)和精胺(Spm)质量分数显著降低,N代谢受阻,植株发育不良,生长迟滞,棉花中存在Arg-NO通路。 展开更多
关键词 精氨琥珀酸合成酶 棉花 VIGS NO
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沉默精氨酸琥珀酸合成酶对SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响
2
作者 李越 何玉婷 +5 位作者 李晶晶 陈洁 余炎 胡秋月 阚全程 余祖江 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2018年第1期53-56,共4页
目的:探讨shRNA靶向沉默精氨酸琥珀酸合成酶(ASS1)基因后对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响。方法:应用RT-PCR及Western blot检测5种肝癌细胞系中ASS1的表达情况;将shRNA-ASS1转染入SMMC-7721细胞(shRNA-ASS1组),同时设空白... 目的:探讨shRNA靶向沉默精氨酸琥珀酸合成酶(ASS1)基因后对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响。方法:应用RT-PCR及Western blot检测5种肝癌细胞系中ASS1的表达情况;将shRNA-ASS1转染入SMMC-7721细胞(shRNA-ASS1组),同时设空白对照组和阴性对照组,观察转染后细胞的生长变化,运用Western blot鉴定其对ASS1基因的沉默效果;采用CCK-8法检测各组转染3 d后的细胞增殖情况;流式细胞术检测各组转染24 h后细胞凋亡的情况。结果:ASS1 mRNA和蛋白在Changliver、SMMC-7721、QGY-7703、HepG2和Hep G3B细胞中的表达差异有统计学意义(F_(mRNA)=1 129.140,F_(蛋白)=1 114.240,P均<0.001),ASS1在SMMC-7721和Hep G3B肝癌细胞系中呈高表达。CCK-8实验显示,与阴性对照组及空白对照组相比,shRNA-ASS1组细胞增殖率降低(F=7.176,P=0.007)。细胞凋亡实验显示,shRNA-ASS1组细胞凋亡率高于阴性对照组和空白对照组(F=88.120,P<0.001)。结论:沉默ASS1基因可抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 原发性肝癌 精氨酸琥珀酸合成酶 RNA干扰 细胞凋亡
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精氨酸代琥珀酸合成酶-1对胰岛β细胞增殖与凋亡的影响
3
作者 夏芷晴 张紫晨 +3 位作者 付麒 何云强 杨涛 孙敏 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第6期764-771,共8页
目的:探讨精氨酸代琥珀酸合成酶⁃1(argininosuccinate synthetase 1,ASS1)对胰岛β细胞增殖与凋亡的影响及机制。方法:利用siRNA和慢病毒载体在胰岛β⁃TC6细胞中分别敲低和过表达ASS1;5⁃乙炔基⁃2′⁃脱氧尿嘧啶核苷(5⁃ethynyl⁃2′⁃deoxyu... 目的:探讨精氨酸代琥珀酸合成酶⁃1(argininosuccinate synthetase 1,ASS1)对胰岛β细胞增殖与凋亡的影响及机制。方法:利用siRNA和慢病毒载体在胰岛β⁃TC6细胞中分别敲低和过表达ASS1;5⁃乙炔基⁃2′⁃脱氧尿嘧啶核苷(5⁃ethynyl⁃2′⁃deoxyuridine,EdU)和CCK⁃8检测细胞增殖能力;Annexin V⁃PI流式细胞术和原位末端转移酶标记技术(terminal dUTP nick⁃end labeling assay,TUNEL)检测细胞凋亡水平;Western blot检测B细胞淋巴瘤⁃2(B⁃cell leukaemia⁃2,Bcl⁃2)蛋白、Bcl⁃2相关X蛋白(Bcl⁃2 associated X protein,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase3)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶⁃3(cleaved Caspase⁃3)、凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)、细胞核增殖抗原(Ki67)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian rapamycin target protein,mTOR)的表达水平;RT⁃qPCR检测AIF、Ki67和mTOR mRNA水平。结果:①与对照相比,敲低ASS1后,胰岛β细胞EdU阳性率和CCK⁃8细胞增殖活力降低,TUNEL阳性细胞数和AV/PI检测的细胞凋亡率升高。胰岛β细胞内AIF表达量明显升高,Bax/Bcl⁃2比值下降,Caspase⁃3活性降低。②过表达ASS1后,TUNEL阳性细胞数和AV/PI检测的细胞凋亡率均较对照组降低,伴随胰岛β细胞内Ki67和mTOR表达量升高。但胰岛β细胞EdU阳性率和CCK⁃8细胞增殖活力无明显变化。结论:ASS1过表达可能激活mTOR信号通路促进胰岛β细胞增殖;ASS1表达降低时,胰岛β细胞可通过AIF途径启动细胞凋亡。ASS1可能在胰岛β细胞的增殖和凋亡中发挥一定调控作用。 展开更多
关键词 精氨酸代琥珀酸合成酶 胰岛Β细胞 增殖 凋亡
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精氨酰琥珀酸尿症导致新生儿死亡1例报告 被引量：9
4
作者 丁圆 马艳艳 +4 位作者 吴桐菲 李溪远 刘玉鹏 王峤 杨艳玲 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1112-1115,共4页
目的报道1例早发型精氨酰琥珀酸尿症病例。方法女性患儿,于出生第2天发病,入院后经临床及实验室检查、基因检测获得诊断。结果患儿血氨显著增高,肝功能异常,伴代谢性酸中毒,血钾、血钙降低。血液瓜氨酸显著增高(1 098.12μmol/L)、精氨... 目的报道1例早发型精氨酰琥珀酸尿症病例。方法女性患儿,于出生第2天发病,入院后经临床及实验室检查、基因检测获得诊断。结果患儿血氨显著增高,肝功能异常,伴代谢性酸中毒,血钾、血钙降低。血液瓜氨酸显著增高(1 098.12μmol/L)、精氨酸降低,尿乳清酸、尿嘧啶、精氨酰琥珀酸显著增高。经精氨酸支持、低蛋白饮食治疗无效,病情进行性加重,于生后23 d死亡。基因分析证实精氨酰琥珀酸裂解酶ASL基因存在c.544C>T(p.R182X)和c.706C>T(p.R236W)复合杂合突变,父母各携带1个杂合突变。结论此例为国内首次报道的早发型精氨酰琥珀酸尿症,死亡后获得确诊。精氨酰琥珀酸尿症是严重的遗传代谢疾病,临床诊断困难,生化特点为血瓜氨酸及尿精氨酰琥珀酸显著增高,ASL基因检测是诊断的关键。 展开更多
关键词 精氨酰琥珀酸尿症 精氨酰琥珀酸裂解酶 ASL基因 新生儿
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大别山野生油茶中茶氨酸检测与茶氨酸合成酶基因克隆 被引量：5
5
作者 马林龙 顾辰辰 +2 位作者 邓威威 金阳 宛晓春 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期92-98,共7页
茶氨酸是茶树叶片中最丰富的游离氨基酸,具有重要的生理药理功能,但迄今仅在蘑菇、蕈和一些山茶科(属)植物中检测到茶氨酸。茶氨酸因有一种独特的风味特色"umami鲜爽味"而被人类营养学广泛研究,并发现合成茶氨酸的植物不仅在... 茶氨酸是茶树叶片中最丰富的游离氨基酸,具有重要的生理药理功能,但迄今仅在蘑菇、蕈和一些山茶科(属)植物中检测到茶氨酸。茶氨酸因有一种独特的风味特色"umami鲜爽味"而被人类营养学广泛研究,并发现合成茶氨酸的植物不仅在植物分类上具有积极意义,而且对于植物资源的有效发掘有巨大经济价值;同时还可以间接去研究茶树中茶氨酸的代谢机理以及茶氨酸合成酶的分离纯化和TS基因的克隆表达。该文运用HPLC、LC-TOF/MS对大别山地区野生幼年与成年油茶根、叶中茶氨酸进行检测,并结合分子生物学手段对油茶中茶氨酸合成酶(theanine synthetase,TS)基因进行克隆与生物信息学分析。结果表明:在幼年的油茶根中检测到茶氨酸,含量为0.08mg·g-1(鲜重),而在幼年的油茶叶片和成年油茶根、叶中均未检测到茶氨酸;在幼年油茶根中克隆出一条长为1 071bp油茶TS基因开放阅读框,其基因序列与茶树谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS,AB117934)基因和TS(DD410896)序列的同源性达到98%,氨基酸序列与茶树中GS(AB117934)和TS(DD410896)的相似性高达99%。经生物信息学分析,该序列编码的TS蛋白具有20个磷酸化位点,不存在信号肽序列与跨膜结构,含有卷曲螺旋结构的亲水性细胞质蛋白。该研究将为油茶新经济价值的发掘,为茶氨酸在油茶中合成代谢途径的研究提供一定的理论基础,同时也为进一步研究茶氨酸在茶树中代谢机理提供了新的研究思路。 展开更多
关键词 油茶 茶氨酸 茶氨酸合成酶 基因克隆
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一株精氨酸支原体的分离培养及分子生物学鉴定
6
作者 杨康 马春江 +6 位作者 李海利 杨夷平 段进刚 古丽巴哈尔·卡德尔 陈建豪 张国新 杨帆 《草食家畜》 2025年第2期20-27,共8页
【目的】旨在探究新疆哈密市伊州区某养殖户羊发病死亡的原因。【方法】采集病死羊的肺组织,进行分离培养、实时荧光定量PCR鉴定、普通PCR扩增以及基因测序分析。【结果】在改良的PPLO固体培养基上培养出了支原体;实时荧光定量PCR检测... 【目的】旨在探究新疆哈密市伊州区某养殖户羊发病死亡的原因。【方法】采集病死羊的肺组织,进行分离培养、实时荧光定量PCR鉴定、普通PCR扩增以及基因测序分析。【结果】在改良的PPLO固体培养基上培养出了支原体;实时荧光定量PCR检测结果为支原体感染阳性;普通PCR扩增及基因测序,分离菌株与GenBank数据库中的精氨酸支原体同源性高达100%。【结论】研究结果表明,该养殖户羊发病死亡是由精氨酸支原体感染导致。 展开更多
关键词 精氨酸支原体 分离培养 PCR 16SrRNA 基因测序
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冠心病和深静脉血栓患者蛋氨酸合成酶基因A2756G多态性检测 被引量：6
7
作者 齐华 贺颖 +4 位作者 于海东 焦昆立 连建华 赵洛沙 郑红 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第3期438-440,共3页
目的检测冠心病(CHD)及深静脉血栓(DVT)形成患者蛋氨酸合成酶(MS)基因A2756G的多态性。方法运用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)对103例DVT患者、208例CHD患者和250例健康对照进行MS基因A2756G多态性分析。结果DVT组A/G+G/G型频率为10.... 目的检测冠心病(CHD)及深静脉血栓(DVT)形成患者蛋氨酸合成酶(MS)基因A2756G的多态性。方法运用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)对103例DVT患者、208例CHD患者和250例健康对照进行MS基因A2756G多态性分析。结果DVT组A/G+G/G型频率为10.7%,低于对照组的19.6%(χ2=4.114,P<0.05),但2组等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论A/G+G/G型可能对静脉血栓的形成具有保护性作用,该型的分布存在种族和地域差异。MS基因A2756G多态可能不是河南汉族人群CHD发生的遗传危险因素。 展开更多
关键词 蛋氨酸合成酶 深静脉血栓 基因多态性 冠心病
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缺血性脑血管病患者蛋氨酸合成酶基因A2756G多态性检测 被引量：5
8
作者 宋波 李艾帆 +6 位作者 郑红 连建华 张世峰 贺颖 齐华 王茜 许予明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第3期436-438,共3页
目的检测缺血性脑血管病患者蛋氨酸合成酶(MS)基因A2756G多态性。方法运用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)技术对512例缺血性脑血管病患者及500例健康对照者进行MS基因多态性检测。结果缺血性脑血管病患者组MSA2756GA/A、A/G、G/G基因... 目的检测缺血性脑血管病患者蛋氨酸合成酶(MS)基因A2756G多态性。方法运用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)技术对512例缺血性脑血管病患者及500例健康对照者进行MS基因多态性检测。结果缺血性脑血管病患者组MSA2756GA/A、A/G、G/G基因型频率分别为88.9%、10.7%和0.4%,A和G等位基因频率分别为94.2%和5.8%。对照组A/A、A/G、G/G基因型频率分别为84.6%、15.0%和0.4%,A和G等位基因频率分别为92.1%和7.9%。2组基因型及等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论MS基因A2756G多态可能不足以构成河南汉族人群缺血性脑血管病发病中的一个独立的遗传危险因子。 展开更多
关键词 缺血性脑血管病 蛋氨酸合成酶 基因多态性
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人γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位基因E-box元件功能初步分析 被引量：2
9
作者 罗伶俐 邹国民 +1 位作者 李冰 冉丕鑫 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1428-1430,共3页
目的:探讨人支气管上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)基因上游调控序列E-box元件的功能。方法:利用PCR法克隆人GCLC基因上游调控序列,PCR重叠延伸法对2个E-box元件分别和同时进行定点突变。扩增获得的突变体片段克隆入PM... 目的:探讨人支气管上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)基因上游调控序列E-box元件的功能。方法:利用PCR法克隆人GCLC基因上游调控序列,PCR重叠延伸法对2个E-box元件分别和同时进行定点突变。扩增获得的突变体片段克隆入PMD18-T载体,DNA测序鉴定后,亚克隆入野生型GCLC-Luc荧光素酶报道载体。将3个突变体质粒和野生型质粒转染人肺泡上皮细胞A549和人支气管上皮细胞16HBE,检测转染后细胞荧光素酶活性值。结果:测序结果证实,成功将E-box1CACGGG突变为AGCGGG;E-box2CACGTG突变为CACGGA。GCLC-Luc、GCLC-mEbox1-Luc(突变E-box1)、GCLC-mEbox2-Luc(突变E-box2)、GCLC-mEbox12-Luc(突变E-box1和E-box2)转染A549细胞后荧光素酶活性值分别为(5197852±132206)U、(5455692±127431)U、(5315722±244197)U、(5174303±183179)U,转染16HBE细胞后荧光素酶活性值分别为(141157±18907)U、(126454±23724)U、(137315±22179)U、(132441±28970)U。经过统计学分析,各组荧光酶活性没有显著差别,均P>0.05。结论:E-box元件不参与基础状态下A549细胞和16HBE细胞GCLC基因转录调控。 展开更多
关键词 16HBE细胞 A549细胞 基因 GCLC Γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶
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条斑紫菜半胱氨酸合成酶基因表达对重金属铅胁迫的响应 被引量：1
10
作者 周向红 李信书 +2 位作者 阎斌伦 易乐飞 王萍 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第10期111-114,共4页
为了研究条斑紫菜的重金属解毒机制,分别采用Pb2＋1、4、7、10 mg/L对条斑紫菜叶状体进行短期铅胁迫,同时,用10 mg/L的Pb2＋对叶状体进行持续铅胁迫,胁迫处理后提取总RNA并采用实时荧光定量PCR技术检测条斑紫菜半胱氨酸合成酶基因（PyCS... 为了研究条斑紫菜的重金属解毒机制,分别采用Pb2＋1、4、7、10 mg/L对条斑紫菜叶状体进行短期铅胁迫,同时,用10 mg/L的Pb2＋对叶状体进行持续铅胁迫,胁迫处理后提取总RNA并采用实时荧光定量PCR技术检测条斑紫菜半胱氨酸合成酶基因（PyCSase-B）的表达变化。结果显示,铅胁迫能迅速且显著诱导PyCSase-B的表达。短期铅胁迫试验中,随着Pb2＋质量浓度的升高,PyCSase-B的表达量呈先上升而后下降的趋势,在7 mg/L Pb2＋胁迫下,PyCSase-B的表达量最高,是未处理样品的2.73倍。持续铅胁迫试验中,在前6 h内随着处理时间的增加,PyCSase-B的表达逐步上升,在6 h时PyCSase-B的表达量最高,是未处理样品的3.71倍;在8~12 h内PyCSase-B的表达量一直在较高水平波动。铅胁迫诱导PyCSase-B表达,说明PyCSase-B参与了条斑紫菜叶状体的重金属解毒过程。 展开更多
关键词 条斑紫菜 半胱氨酸合成酶 基因表达 铅胁迫
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钝齿棒杆菌精氨酸生物合成相关基因簇argCJBDFR的扩增及序列分析 被引量：1
11
作者 陈雪岚 许正宏 +1 位作者 陶文沂 王正祥 《中国生态农业学报》 CAS CSCD 2006年第2期32-36,共5页
采用PCR方法扩增钝齿棒杆菌精氨酸生物合成基因簇argCJBDFR,其序列长为6080bp,其中含有argJ、argB、argD、argF和argR5个完整的开放阅读框。序列和结构分析表明这5个结构基因编码的氨基酸序列与谷氨酸棒杆菌的相应基因编码的氨基酸高度... 采用PCR方法扩增钝齿棒杆菌精氨酸生物合成基因簇argCJBDFR,其序列长为6080bp,其中含有argJ、argB、argD、argF和argR5个完整的开放阅读框。序列和结构分析表明这5个结构基因编码的氨基酸序列与谷氨酸棒杆菌的相应基因编码的氨基酸高度同源,同源性分别为92%、95%、96%、97.5%和100%。 展开更多
关键词 钝齿棒杆菌 精氨酸 基因簇 序列分析
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γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和多药耐药相关蛋白基因在膀胱癌中的表达及相关性分析 被引量：1
12
作者 曾晓勇 杨为民 +3 位作者 叶章群 刘继红 张旭 周惜才 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期649-652,共4页
为探讨 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 (γ- GCS)及多药耐药相关蛋白 (MRPs)与膀胱癌化疗耐药的关系 ,应用逆转录多聚酶链式反应 (Rt- PCR)技术检测了 32例膀胱癌及其癌周正常膀胱粘膜上 γ- GCS亚单位 γ- GCSh、γ- GCSl以及 MRPs家族成员 ... 为探讨 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 (γ- GCS)及多药耐药相关蛋白 (MRPs)与膀胱癌化疗耐药的关系 ,应用逆转录多聚酶链式反应 (Rt- PCR)技术检测了 32例膀胱癌及其癌周正常膀胱粘膜上 γ- GCS亚单位 γ- GCSh、γ- GCSl以及 MRPs家族成员 MRP1 和 MRP2 的 m RNA的表达 ,并以 β- actin m RNA为内对照半定量进行相关分析。结果显示 :γ-GCSh、γ- GCSl、MRP1 和 MRP2 m RNA在癌组织的平均相对表达水平均高于其在正常粘膜的表达 ;γ- GCSh和 MRP1 在化疗复发病例的癌组织的平均表达水平明显高于在未接受过任何化疗的初发病例 ,同时显示两者在癌组织的表达具有较强的相关性 (r=0 .786 ,P<0 .0 1)。提示 :正常细胞的恶性化可上调 γ- GCS和 MRPs的表达 ;膀胱癌临床化疗耐药的形成与 γ- GCSh和 MRP1 的过表达密切相关 。 展开更多
关键词 相关性 膀胱肿瘤 Γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 多药耐药相关蛋白 基因表达 逆转录多聚酶链式反应
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缺氧耐受形成中脑内一氧化氮合成酶及L-精氨酸的变化 被引量：3
13
作者 刘宏雁 赵虹 +1 位作者 吕国蔚 王维忠 《白求恩医科大学学报》 CSCD 2000年第2期118-120,共3页
目的 :探讨缺氧耐受形成中脑内一氧化氮 ( NO)减少的机理。方法 :采用高压液相 Acc Q·Tag柱前衍生法测定缺氧耐受形成中小鼠脑内 L-精氨酸含量 ,双波长分光光度法测定缺氧耐受形成中小鼠脑内一氧化氮合成酶 ( NOS)活性。结果 :L-... 目的 :探讨缺氧耐受形成中脑内一氧化氮 ( NO)减少的机理。方法 :采用高压液相 Acc Q·Tag柱前衍生法测定缺氧耐受形成中小鼠脑内 L-精氨酸含量 ,双波长分光光度法测定缺氧耐受形成中小鼠脑内一氧化氮合成酶 ( NOS)活性。结果 :L-精氨酸 :1次缺氧组与正常对照组比有升高的趋势 ,但无统计学意义 ( P>0 .0 5) ;2 ,3,4次缺氧组比 1次缺氧组明显下降 ( P<0 .0 5) ;2 ,3,4次缺氧组比正常对照组有下降的趋势 ,但无统计学意义 ( P>0 .0 5) ;1次缺氧组与正常对照组比NOS活性显著升高 ;4次缺氧组与 1次缺氧组比有下降趋势 ,但无统计学意义 ( P>0 .0 5)。结论 :脑内 L-精氨酸含量减少及 NOS活性增加的抑制 ,导致脑内 NO合成减少 ,促进了缺氧耐受性的形成。 展开更多
关键词 缺氧耐受性 L-精氨酸 一氧化氮合成酶
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中国山西地区人群亚甲基四氢叶酸脱氢酶1和蛋氨酸合成酶基因多态性与非综合征性唇腭裂 被引量：2
14
作者 李瑞芳 马雪芳 南欣荣 《国际口腔医学杂志》 CAS 2013年第2期144-147,共4页
目的研究亚甲基四氢叶酸脱氢酶(MTHFD)1和蛋氨酸合成酶(MTR)基因多态性与非综合征性唇腭裂(NSCL/P)发生的相关性。方法取187例NSCL/P患者裂隙处的黏膜组织为试验组,157例对照组的正常的口腔黏膜组织为对照组,检测MTHFD1基因(rs2236225位... 目的研究亚甲基四氢叶酸脱氢酶(MTHFD)1和蛋氨酸合成酶(MTR)基因多态性与非综合征性唇腭裂(NSCL/P)发生的相关性。方法取187例NSCL/P患者裂隙处的黏膜组织为试验组,157例对照组的正常的口腔黏膜组织为对照组,检测MTHFD1基因(rs2236225位点)和MTR(rs1805087位点)基因型,比较两组的基因型和等位基因频率,分析基因型分布频率、两个基因的共同作用及其与NSCL/P的发生是否相关。结果 MTR、MTHFD1在两组间的基因型和等位基因分布上的差异无统计学意义(P>0.05);MTR的AG、GG基因型相对于AA基因型的比值比分别为:0.308、0.501。MTHFD1的GA、AA基因型相对于GG基因型的比值比分别为:0.812、0.196。AG-AA型、GG-GA型、GG-AA型相对于AA-GG型的比值比分别是2.078、4.508、6.497。结论 MTHFD1和MTR的基因多态性均与NSCL/P的发生之间没有相关性,但是,它们之间相互作用是NSCL/P发生的危险因素。 展开更多
关键词 非综合征性唇腭裂 蛋氨酸合成酶 亚甲基四氢叶酸脱氢酶1 基因多态性
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大肠杆菌JM83精氨酰－tRNA合成酶基因的克隆、测序及表达 被引量：3
15
作者 王恩多 陆身楠 王应睐 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第2期141-145,共5页
用聚合酶链反应（ＰＣＲ）以大肠杆菌ＪＭ８３基因组ＤＮＡ为模板，扩增了精氨酰－ｔＲＮＡ合成酶（ＡｒｇＲＳ）基因。将该基因重组到载体ｐＵＣ１８上转化到大肠杆菌ＴＧ１中，得到在转化子中ＡｒｇＲＳ的高表达。粗抽液中ＡｒｇＲＳ... 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）以大肠杆菌ＪＭ８３基因组ＤＮＡ为模板，扩增了精氨酰－ｔＲＮＡ合成酶（ＡｒｇＲＳ）基因。将该基因重组到载体ｐＵＣ１８上转化到大肠杆菌ＴＧ１中，得到在转化子中ＡｒｇＲＳ的高表达。粗抽液中ＡｒｇＲＳ的氨酰化活力，ＴＧ１和ＴＧ１转化子分别为１．６５Ｕ／ｍｇ和２１０Ｕ／ｍｇ，后者为前者的１２７倍。ＤＮＡ顺序测定表明，与从大肠杆菌ＪＡ２００中克隆到的ＡｒｇＲＳ基因相比９１３位碱基为Ａ而不为Ｃ，这种变化使ＡｒｇＲＳ的３０５位氨基酸残基由Ｇｌｎ变为Ｌｙｓ，但这种改变不影响酶的活力。 展开更多
关键词 精氨酰-tRNA 合成酶 基因克隆 序列 表达
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精氨酰琥珀酸尿症致反复高氨血症1例报告
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作者 马昕 朱丹 +3 位作者 宫幼喆 王美娟 金萌 钟雪梅 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期530-533,共4页
目的 探讨精氨酰琥珀酸尿症致反复高氨血症的诊断和治疗。方法 回顾分析1例精氨酰琥珀酸尿症患儿的诊治及随访经过,并复习相关文献。结果 患儿,男,13个月,因呕吐、嗜睡、反应差入院,检查发现血氨升高(138.02μmol/L),肝功能异常,伴低钾... 目的 探讨精氨酰琥珀酸尿症致反复高氨血症的诊断和治疗。方法 回顾分析1例精氨酰琥珀酸尿症患儿的诊治及随访经过,并复习相关文献。结果 患儿,男,13个月,因呕吐、嗜睡、反应差入院,检查发现血氨升高(138.02μmol/L),肝功能异常,伴低钾血症,血瓜氨酸升高(65.64μmol/L);脑电图异常。完善高氨血症相关基因的二代基因测序,发现精氨酰琥珀酸裂解酶基因(ASL)复合杂合突变。予以限制蛋白饮食、补充精氨酸治疗,患儿高氨血症仍反复发作,肝脏进行性增大;确诊1年后行肝移植。移植后1年,患儿肝功能、血氨无异常,生长发育无异常。结论 精氨酰琥珀酸尿症临床表现复杂,高氨血症是其重要表现;基因检查有助确诊,肝移植治疗有效。 展开更多
关键词 高氨血症 精氨基琥珀酸裂合酶 精氨酰琥珀酸尿症 精氨酰琥珀酸裂解酶基因 肝移植
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半胱氨酸合成酶基因CPCSaseA植物表达载体的构建
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作者 向白菊 林俊 +3 位作者 眭顺照 皮伟 闫明旭 蒋安 《安徽农学通报》 2009年第13期27-29,共3页
半胱氨酸合成酶是植物硫代谢过程中催化O-乙酰丝氨酸和硫化氢合成半胱氨酸的关键酶。用全长cDNA文库EST随机测序的方法获得了蜡梅的半胱氨酸合成酶胞质异形体基因,构建了全长正义植物表达载体pB I121-CPOASTL。
关键词 半胱氨酸合成酶 CPCSaseA基因 植物表达载体
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类茶氨酸合成酶基因家族在番茄中的鉴定及表达研究 被引量：1
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作者 毛鹏 王丽鸳 +4 位作者 白培贤 韦康 阮丽 张亚真 成浩 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期173-183,共11页
茶树体内的茶氨酸合成酶(Theanine synthetase synthetase,TS)和部分谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase,GS)家族成员都具有催化乙胺和谷氨酸合成茶氨酸的活性。我们将植物中这类与茶树TS序列高度相似,且具有茶氨酸合成活性的酶,统称... 茶树体内的茶氨酸合成酶(Theanine synthetase synthetase,TS)和部分谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase,GS)家族成员都具有催化乙胺和谷氨酸合成茶氨酸的活性。我们将植物中这类与茶树TS序列高度相似,且具有茶氨酸合成活性的酶,统称为类茶氨酸合成酶(Analogue theanine synthase,ATS)。为了探究ATS在非茶植物中的分布,以及乙胺在茶氨酸合成中的作用,本研究以Mico-Tom番茄为试验材料,对水培番茄幼苗进行了外源添加乙胺处理。结果发现,仅在处理组叶片中检测到茶氨酸,并且处理组叶片中的谷氨酰胺(Glutamine,Gln)含量也极显著增加,而丙氨酸含量与对照相比无显著变化。利用生物信息学方法分别从茶树和番茄基因组中鉴定出12个和5个ATS家族成员,它们均含有谷氨酰胺合成酶催化功能的结构域Gln-synt_C;qRT-PCR检测发现,处理组叶片中有2个ATS(SlGS1.1和SlGS1)表达量极显著提高。上述结果表明,ATS广泛存在于植物中,而乙胺是合成茶氨酸的关键限制因子,能够提高ATS基因的表达,触发茶氨酸的合成。 展开更多
关键词 番茄 茶氨酸 乙胺 类茶氨酸合成酶 基因家族
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基因工程手段提高磷脂酰丝氨酸合成酶活性的研究
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作者 陈梦雪 卢欣睿 +5 位作者 马玉 孙明波 罗维佳 王培琪 章朦玥 张怡轩 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第5期44-48,共5页
为了提高目的蛋白磷脂酰丝氨酸合成酶(PSS)的表达,使用rTaq酶从E coli K12总DNA中PCR扩增获得磷脂酰丝氨酸合成酶基因片段,将其重组于高效表达载体pET28b质粒,转入相应表达菌株进行表达,收集菌体超声破碎获得含PSS的粗酶液,使用两相反... 为了提高目的蛋白磷脂酰丝氨酸合成酶(PSS)的表达,使用rTaq酶从E coli K12总DNA中PCR扩增获得磷脂酰丝氨酸合成酶基因片段,将其重组于高效表达载体pET28b质粒,转入相应表达菌株进行表达,收集菌体超声破碎获得含PSS的粗酶液,使用两相反应体系进行生物转化,HPLC-ELSD手段进行酶活检测。结果显示,重组菌株中PSS的酶活力比对照有所提高,同时获得酶活力提高的突变基因pssE210G。将突变基因重组于更高效的表达载体pBAD-MCS,转入相应宿主菌株表达。结果显示E.coli TOP10(pBAD-MCS-pss)表达的酶活性明显优于E.coli BL21(pET28b-pss)中表达的酶活性。以上实验结果表明,将目的基因重组于高效表达质粒有助于提高酶活力;组合到不同的表达质粒,酶活提高程度不同;磷脂酰丝氨酸合成酶基因第73位氨基酸发生突变,对其酶结构和酶活力有直接的影响。 展开更多
关键词 磷脂酰丝氨酸合成酶 基因重组 同源模建 突变
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钝齿棒杆菌异源表达乙酰辅酶A合成酶对L-精氨酸合成的影响
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作者 吴洁琴 石电 +4 位作者 徐华 张显 杨套伟 徐美娟 饶志明 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第21期9-16,共8页
L-精氨酸是一种人体必需氨基酸,在医疗保健、食品添加等制造行业中商业价值显著。针对1株产L-精氨酸的钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA5-5进行代谢改造,通过比较异源乙酰辅酶A合成酶(acetyl-CoA synthetases,ACS)的酶学性质,... L-精氨酸是一种人体必需氨基酸,在医疗保健、食品添加等制造行业中商业价值显著。针对1株产L-精氨酸的钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA5-5进行代谢改造,通过比较异源乙酰辅酶A合成酶(acetyl-CoA synthetases,ACS)的酶学性质,构建了过表达ACS的重组钝齿棒杆菌SYPA-ACS,能有效利用乙酸提高菌株产L-精氨酸能力。首先在大肠杆菌中分别克隆表达及纯化4种不同细菌来源的ACS,发现巴氏醋酸杆菌(Acetobacter pasteurianus)ATCC 33445来源的ApACS1酶活力最高,为784.59 U/mL,最适反应的pH为7.0,最适反应温度37℃,与其他3种ACS来源相比,ApACS1具有更好的pH和温度稳定性。然后通过pXMJ19载体,将A.pasteurianus来源的编码基因acs_(1)在C.crenatum中表达,有效提高了乙酰辅酶A含量。利用5 L发酵罐,将SYPA-ACS菌株培养96 h后,L-精氨酸的产量达53.43 g/L,产率为0.577 g/(L·h),相较于出发菌株SYPA5-5,产量提高了27.48%。该策略既可以利用乙酸,降低乙酸对菌株的危害作用,又能提高乙酰辅酶A的含量,促进L-精氨酸的积累。研究结果为L-精氨酸的制备提供了绿色、高效的合成策略,具有工业化应用潜力。 展开更多
关键词 L-精氨酸 钝齿棒杆菌 乙酰辅酶A合成酶 ApACS1 乙酸
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