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实时荧光定量聚合酶链式反应检测百日咳鲍特菌的效能研究 被引量：6
1
作者 王青 刘莹 +2 位作者 袁林 孟庆红 姚开虎 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2019年第23期2815-2819,共5页
背景百白破疫苗效价不足事件引发公众对百日咳的关注,但目前各种百日咳实验室检测方法均具有一定的局限性,无法满足快速进行病原学诊断的临床需求。目的评价一种商品化的实时荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)试剂盒对百日咳鲍特菌(BP)感... 背景百白破疫苗效价不足事件引发公众对百日咳的关注,但目前各种百日咳实验室检测方法均具有一定的局限性,无法满足快速进行病原学诊断的临床需求。目的评价一种商品化的实时荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)试剂盒对百日咳鲍特菌(BP)感染的临床检测效果。方法2016年11月-2017年4月在首都医科大学附属北京儿童医院采集无热咳嗽患儿鼻咽拭子302例,以及临床诊断为百日咳患儿鼻咽拭子50例。采用Q-PCR与细菌培养方法筛查302例无热咳嗽患儿是否存在BP感染,并比较两种方法检测50例临床诊断百日咳病例的阳性率,综合评估Q-PCR的临床应用价值。结果302例无热咳嗽患儿中,以细菌培养为金标准时,Q-PCR检测的灵敏度为78.6%(11/14),特异度为95.8%(276/288),阳性预测值为47.8%(11/23),阴性预测值为98.9%(276/279)。在50例临床诊断百日咳病例的鼻咽拭子标本中,Q-PCR检测的阳性率为34.0%(17/50),细菌培养的阳性率为22.0%(11/50),两者比较,差异无统计学意义(χ^2=3.125,P=0.077)。结论以细菌培养结果为金标准,Q-PCR筛查百日咳的灵敏度及特异度较高;在为临床诊断百日咳患儿提供病原学证据中,Q-PCR与细菌培养方法检测阳性率相当。 展开更多
关键词 百日咳 百日咳鲍特菌 实时聚合酶链反应 细菌学技术 灵敏度 特异度
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亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与分支动脉粥样硬化疾病早期神经恶化相关性研究 被引量：3
2
作者 于善花 陈皆春 +3 位作者 庄爱霞 葛中林 张浩江 曾庆宏 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2019年第12期1301-1304,共4页
目的探讨血浆同型半胱氨酸及亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性与分支动脉粥样硬化疾病早期神经恶化(END)的相关性。方法分支动脉粥样硬化疾病患者168例,根据诊断分为END组88例,非END组80例。采用美国国立卫生研究院卒中量表(... 目的探讨血浆同型半胱氨酸及亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性与分支动脉粥样硬化疾病早期神经恶化(END)的相关性。方法分支动脉粥样硬化疾病患者168例,根据诊断分为END组88例,非END组80例。采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分评估患者神经功能。采用多变量logistic回归分析确定END的危险因素。通过PCR荧光定量进行基因分型,分析基因型的分布情况。结果END组糖化血红蛋白、同型半胱氨酸和入院时NIHSS评分明显高于非END组(P<0.05,P<0.01)。多因素logistic回归分析显示,糖化血红蛋白(OR=1.531,95%CI:1.143~1.982,P=0.024)、同型半胱氨酸(OR=2.786,95%CI:1.193~6.943,P=0.036)和入院时NIHSS评分(OR=1.668,95%CI:1.175~2.342,P=0.004)为END的危险因素。MTHFR C677T基因T/T型同型半胱氨酸(18.33±0.74)μmol/L最高,其次C/T型同型半胱氨酸(16.11±0.79)μmol/L,C/C型同型半胱氨酸(13.29±0.53)μmol/L最低(P=0.024)。结论血浆同型半胱氨酸水平是分支动脉粥样硬化疾病患者END的独立危险因素。MTHFR C677T基因T/T型血浆同型半胱氨酸水平最高。 展开更多
关键词 亚甲基四氢叶酸还原酶(NADPH) 动脉粥样硬化 高半胱氨酸 基因型 聚合酶链反应
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甲基化特异性PCR检测肺癌p16基因甲基化及其临床意义 被引量：1
3
作者 杨丽萍 刘旺根 +1 位作者 王雪萍 张舒林 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期441-443,共3页
目的:探讨甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specificPCR,MSPCR)在肺癌临床诊断中的应用价值。方法:选取56例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液(BALF)及痰标本,其中32例为肺癌,24例为良性肺部疾病。... 目的:探讨甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specificPCR,MSPCR)在肺癌临床诊断中的应用价值。方法:选取56例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液(BALF)及痰标本,其中32例为肺癌,24例为良性肺部疾病。标本经一般处理,PCR扩增后,产物经电泳EB染色,紫外灯下观察。结果:32例肺癌组织标本中,14例(43.8%)在p16基因启动子区域呈现异常甲基化,其中9例(64.3%)在相应的BALF中检测出甲基化存在,5例(35.8%)在相应的痰标本中也检测出甲基化存在。24例良性肺部疾病,其中肺囊肿10例,肺结核14例,手术切除标本和BALF及痰标本中均未检测出p16基因甲基化存在。结论:MSPCR技术对肺癌患者BALF及痰标本中的异常甲基化检测具有高度特异性,是一项有潜力的肺癌早期诊断新技术。 展开更多
关键词 肺癌 P16基因 甲基化特异性 聚合酶链反应
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肺炎克雷伯菌16S rRNA甲基化酶耐药基因研究 被引量：2
4
作者 叶春枚 刘文恩 《中国感染控制杂志》 CAS 2014年第7期389-392,共4页
目的了解肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素的敏感性及16S rRNA甲基化酶检出情况。方法收集中南大学湘雅医院2009年1—7月非重复肺炎克雷伯菌96株,采用琼脂稀释法对庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素的最低抑菌浓度(MIC)进行检测;聚合酶链反应... 目的了解肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素的敏感性及16S rRNA甲基化酶检出情况。方法收集中南大学湘雅医院2009年1—7月非重复肺炎克雷伯菌96株,采用琼脂稀释法对庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素的最低抑菌浓度(MIC)进行检测;聚合酶链反应(PCR)扩增16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA。结果肺炎克雷伯菌对阿米卡星、庆大霉素及妥布霉素的MIC50分别为256μg/mL、512μg/mL和512μg/mL;MIC90均为>512μg/mL;耐药率分别为21.88%、63.54%、41.67%。68株(70.83%)菌至少对1种药物耐药,21株(21.88%)菌对3种药物均耐药。22株(22.92%)菌armA基因扩增阳性,未扩增到rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA基因;22株armA阳性菌株中,17株(77.27%)对3种氨基糖苷类抗生素均耐药。armA阳性株与armA(FJ410928.1)基因序列同源性为100%。结论携带armA型16S rRNA甲基化酶基因是肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的主要机制之一。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 16S rRNA甲基化酶 聚合酶链反应 抗药性 微生物
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骨髓增生异常综合征中FANCF蛋白及甲基化研究 被引量：1
5
作者 娄晔 于艺冰 +3 位作者 詹立辉 邓娜 李巍巍 樊华 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期595-598,652,共5页
目的研究骨髓增生异常综合征(MDS)中FANCF基因甲基化状态及其蛋白表达,探讨FANCF基因甲基化及蛋白表达与MDS发病的相关性。方法以MDS患者骨髓提取的单个核细胞为研究对象,采用免疫组织化学染色法、Western blot检测FANCF蛋白表达、甲基... 目的研究骨髓增生异常综合征(MDS)中FANCF基因甲基化状态及其蛋白表达,探讨FANCF基因甲基化及蛋白表达与MDS发病的相关性。方法以MDS患者骨髓提取的单个核细胞为研究对象,采用免疫组织化学染色法、Western blot检测FANCF蛋白表达、甲基化特异聚合酶链反应(MSP)检测FANCF基因的甲基化状态。结果 FANCF蛋白在MDS-RA组低表达,MDS-RAEB/T组更低表达,对照组正常表达;MDS组与对照组比较表达明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)。MDS组有明显甲基化,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FANCF蛋白在MDS组中表达下调,FA通路不能形成,可能与MDS发病有相关性。FANCF基因在MDS患者中呈现高甲基化状态,提示FANCF基因的高甲基化状态可能在MDS的疾病发生过程中起到一定的作用;MDS-RAEB/T组甲基化状态高于MDS-RA组,提示FANCF基因的甲基化可能与MDS的预后相关。 展开更多
关键词 范可尼贫血 FANCF 骨髓增生异常综合征 免疫组织化学染色 Western BLOT 甲基化特异聚合酶链反应
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巢式MSP法检测恶性血液病细胞株p16基因启动子甲基化状态的研究 被引量：13
6
作者 周华蓉 沈建箴 +3 位作者 付海英 叶宝国 范丽萍 林福安 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期375-378,共4页
本研究应用改进的甲基化特异性PCR(MSP)法,即巢式甲基化特异性PCR法检测6种肿瘤细胞株p16基因启动子的甲基化状态效率,探讨其在筛选p16基因启动子高甲基化的肿瘤细胞株,及将其作为研究基因甲基化与表达关系的理想细胞模型中的应用。6种... 本研究应用改进的甲基化特异性PCR(MSP)法,即巢式甲基化特异性PCR法检测6种肿瘤细胞株p16基因启动子的甲基化状态效率,探讨其在筛选p16基因启动子高甲基化的肿瘤细胞株,及将其作为研究基因甲基化与表达关系的理想细胞模型中的应用。6种肿瘤细胞株基因组DNA经碱变性后以亚硫酸盐修饰,再用巢式甲基化特异性聚合酶链反应扩增,分析检测其p16启动子区CpG岛的甲基化状态。结果表明:CA46、U266都有不同程度的p16基因启动子区甲基化,而Molt4、K562、HL-60、Jurkat的p16基因启动子区均未甲基化。结论:用巢式甲基化特异性PCR可以准确的检测出恶性血液病细胞株p16基因的甲基化状态,方法简单,灵敏且重复性强,可以广泛用于筛选各种p16基因启动子区甲基化的恶性血液病细胞株以及恶性血液病诊断。 展开更多
关键词 巢式甲基化特异性聚合酶链反应 恶性血液病细胞株 P16基因 基因甲基化
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类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞IL-10基因启动子甲基化状态研究 被引量：12
7
作者 付丽红 丛斌 +6 位作者 甄艳凤 李淑瑾 马春玲 倪志宇 张国忠 左敏 姚玉霞 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1357-1361,共5页
白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)是在类风湿性关节炎中发挥重要免疫调节作用的细胞因子,其基因失活与已分化的Th1和Th2细胞染色质结构重塑有关。为了探讨IL-10基因启动子甲基化及基因失活在类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA... 白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)是在类风湿性关节炎中发挥重要免疫调节作用的细胞因子,其基因失活与已分化的Th1和Th2细胞染色质结构重塑有关。为了探讨IL-10基因启动子甲基化及基因失活在类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)发病和进展中的作用,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)及甲基化特异性聚合酶链反应(MSP),分别检测34例类风湿性关节炎患者和30例健康人外周血单个核细胞IL-10mRNA、蛋白表达水平及基因启动子甲基化状态。结果显示,病例组IL-10mRNA及蛋白表达均低于健康对照组,无统计学差异(P>0.05)。病例组甲基化率(85.29%)高于健康对照组(43.33%),具有统计学差异(χ2=12.439,P=0.000)。IL-10基因启动子甲基化状态与其mRNA表达呈显著负相关(r=?0.579,P=0.001),与所累关节数显著相关,但与血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、年龄均无相关性(P>0.05)。IL-10mRNA表达与年龄、所累关节数、ESR、CRP及RF均无相关性(P>0.05)。上述结果提示,启动子甲基化可能是IL-10基因失活的重要机制,IL-10基因异常高甲基化状态可能参与了RA的发生发展。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 白细胞介素-10 甲基化特异性聚合酶链反应
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LRP15基因启动子区甲基化与其表达的关系 被引量：5
8
作者 徐周敏 于力 +6 位作者 楼方定 卢学春 窦立平 杨龙 陈焱 吕鸣 崔杰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期188-191,共4页
为了研究LRP15基因启动子区的甲基化状况及其与基因表达的关系,探讨LRP15基因的甲基化调控机 制,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测LRP15基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂5-杂 氮-2'-脱氧胞嘧啶(CdR)及去乙酰化... 为了研究LRP15基因启动子区的甲基化状况及其与基因表达的关系,探讨LRP15基因的甲基化调控机 制,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测LRP15基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂5-杂 氮-2'-脱氧胞嘧啶(CdR)及去乙酰化酶抑制刑曲古抑菌素(TSA)诱导CpG岛去甲基化及组蛋白乙酰化,观察启动 子区CpG岛甲基化与基因表达的关系。结果显示:白血病细胞系K562中LRP15基因启动子区呈高甲基化状态, 并抑制了该基因的表达。单独应用或联合TSA应用CdR均可去除该基因启动子区的高甲基化状态.并诱导该基 因的表达。这表明LRP15基因的表达受到启动子区甲基化的调控;该基因在K562细胞系中不表达与其启动子区 高甲基化及组蛋白去乙酰化密切相关。结论:甲基转移酶抑制剂与去乙酰化酶抑制剂在白血病治疗中可能具有一 定的价值。 展开更多
关键词 LRP15基因 启动子 甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应
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NSCLC患者血清中p16、DAP基因甲基化的研究 被引量：4
9
作者 伍俊 梁标 +2 位作者 何建猷 张海涛 王志刚 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第3期188-190,共3页
目的　探讨p16、死亡相关蛋白激酶 (death associatedproteinkinase ,DAP)基因的异常甲基化作为非小细胞肺癌 (NSCLC)患者诊断的基因标志物的可行性。方法　采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测 3 0例NSCLC患者肿瘤组织及对应血清中p16、DA... 目的　探讨p16、死亡相关蛋白激酶 (death associatedproteinkinase ,DAP)基因的异常甲基化作为非小细胞肺癌 (NSCLC)患者诊断的基因标志物的可行性。方法　采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测 3 0例NSCLC患者肿瘤组织及对应血清中p16、DAP基因的异常甲基化。结果　NCSLC肿瘤组织中 60 .0 % (18/3 0 )检测出至少一个基因启动子呈甲基化改变 ,在 18例肿瘤组织检测到异常甲基化的患者中 ,5 0 .0 %的患者 (9/18)在血清中检测到相应的改变 ,所有的癌旁组织、健康对照组的血清中及正常肺组织均未检测到p16、DAP的甲基化。结论　检测NCSLC患者血清中p16。 展开更多
关键词 P16基因 DAP基因 甲基化 NSCLC 非小细胞肺癌 甲基化特异性聚合酶链反应 诊断 肿瘤标志物
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恶性血液病患者mdr1基因启动子区甲基化状态及其与表达的关系 被引量：6
10
作者 朱燕 武淑兰 +3 位作者 卜定方 李渊 朱强 曹香红 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期6-10,共5页
为了探讨多药耐药 (mdr1)基因启动子区的甲基化状态及其与表达的关系 ,采用甲基化敏感的HpaⅡ酶切结合竞争性定量PCR检测 5 4例急性白血病 (AL)和 9例多发性骨髓瘤 (MM)患者mdr1基因启动子区位于转录起始点上游 - 110和 - 5 0bp处两个C... 为了探讨多药耐药 (mdr1)基因启动子区的甲基化状态及其与表达的关系 ,采用甲基化敏感的HpaⅡ酶切结合竞争性定量PCR检测 5 4例急性白血病 (AL)和 9例多发性骨髓瘤 (MM)患者mdr1基因启动子区位于转录起始点上游 - 110和 - 5 0bp处两个CCGG位点 (I区和Ⅱ区 )的甲基化率 ;半定量RT PCR检测mdr1基因的表达水平。结果显示I区、Ⅱ区及总甲基化率均与表达呈负相关 ,I区比Ⅱ区相关密切 (r分别为 - 0 .6 4和 - 0 .4 0 )。低甲基化组(n=36 )mdr1高表达率显著增高 (P <0 .0 0 1)。与化疗敏感组 (n =8)相比 ,耐药组 (n=16 )I区 (P =0 0 5 )、Ⅱ区 (P <0 .0 5 )和总甲基化率 (P <0 .0 5 )均减低。与未化疗组 (n =36 )相比 ,化疗后组 (n =14 )I区和总甲基化率均减低 (P <0 .0 5 ) ,Ⅱ区甲基化率也减低 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 )。化疗后组随甲基化率减低 ,mdr1表达升高 ,但尚无统计学意义 (P =0 .0 6 )。结论 :AL和MM患者骨髓mdr1基因表达水平与基因转录起始点上游 - 110和- 5 0处两个CCGG位点的甲基化程度呈负相关 ,且与 - 110处关系更密切。化疗后及耐药病人mdr1基因甲基化水平相对降低。化疗后mdr1基因表达增高与其甲基化水平降低有关。 展开更多
关键词 急性白血病 多发性骨髓瘤 多药耐药基因 甲基化 竞争性聚合酶链反应
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非小细胞肺癌患者血浆TIMP-3、p16基因甲基化的检测及其临床意义 被引量：4
11
作者 李超 宋超 +3 位作者 胡海亮 于在诚 金永堂 薛绍礼 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第9期1088-1091,共4页
目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织与血浆中组织金属蛋白酶抑制因子-3(TIMP-3)、p16基因甲基化状态,研究血浆中两种基因的检测及联合检测在NSCLC筛查和鉴别诊断中的意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术,检测110例NSCL... 目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织与血浆中组织金属蛋白酶抑制因子-3(TIMP-3)、p16基因甲基化状态,研究血浆中两种基因的检测及联合检测在NSCLC筛查和鉴别诊断中的意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术,检测110例NSCLC患者癌组织、癌旁组织和外周血血浆TIMP-3、p16基因的甲基化状态,并对110例正常对照组血浆样品进行同样检测,比较各组检测结果。结果患者癌组织中TIMP-3、p16、联合检测的基因甲基化率分别高于癌旁组织(P<0.01);外周血血浆中TIMP-3、p16、联合检测基因甲基化率分别高于正常对照组血浆(P<0.01);血浆中TIMP-3、p16和联合检测的基因甲基化检出率与NSCLC临床分期、临床分类以及病理类型的对比差异均无统计学意义。结论对患者外周血浆TIMP-3、p16基因甲基化的联合检测可提高肺癌的检出率,为肺癌的筛查和鉴别诊断提供有价值的参考信息。 展开更多
关键词 TIMP-3 P16 非小细胞肺癌 甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应
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细菌药物钝化酶基因分布及其表达诱导与抑制机制的研究 被引量：6
12
作者 吴亦斐 孙爱华 +2 位作者 赵金方 葛玉梅 严杰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期131-140,共10页
目的:了解临床常见病原菌药物钝化酶基因及其优势基因携带模式,抗生素诱导药物钝化酶基因表达上调的作用及其与细菌组氨酸激酶的关系。方法:采用PCR和测序法,了解金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌... 目的:了解临床常见病原菌药物钝化酶基因及其优势基因携带模式,抗生素诱导药物钝化酶基因表达上调的作用及其与细菌组氨酸激酶的关系。方法:采用PCR和测序法,了解金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌临床菌株携带的β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类钝化酶基因。采用实时荧光定量RT-PCR,了解抗生素诱导及组氨酸激酶阻断剂氯氰碘柳胺抑制药物钝化酶基因表达的作用。结果:63株大肠埃希菌中检出4种β-内酰胺类、2种氨基糖苷类和1种大环内酯类钝化酶基因,优势基因携带模式为[TEM+CTX-M]+aac(3)-Ⅱ+mphA 16株(25.4%)和[TEM+CTX-M]+aac(6')-Ⅰb 13株(20.6%)。24株金黄色葡萄球菌中检出2种β-内酰胺类、3种氨基糖苷类钝化酶基因,优势基因携带模式为aph(3')(41.7%)或aac(6)-Ⅰe-aph(2)-Ⅰa(25.0%)。28株肺炎克雷伯菌中检出4种β-内酰胺酶、2种氨基糖苷类钝化酶基因,优势基因携带模式为[TEM+SHV]+[aac(6')-Ⅰb+aac(3)-Ⅱ](28.6%)和[TEM+SHV]+[aac(6')-Ⅰb+aac(3)-Ⅱ]+mphA(17.8%)。鲍曼不动杆菌和阴沟肠杆菌也以携带两类或三类药物钝化酶基因为优势模式。1/4 MIC青霉素、头胞噻肟和链霉素,能诱导3种β-内酰胺类和4种氨基糖苷类钝化酶基因表达显著上调(P<0.05),该诱导作用可被氯氰碘柳胺所抑制(P<0.05)。结论:上述临床常见病原菌多携带多类药物钝化酶基因并存在不同的优势基因携带模式。低浓度抗生素可能诱导药物钝化酶基因表达上调,但可被组氨酸激酶阻断剂所抑制。 展开更多
关键词 抗药性 细菌 遗传学 药物耐受性 基因型 基因表达 聚合酶链反应 细菌 耐药基因 检测 药物钝化酶 表达 调控机制
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巢式PCR法检测不同类型标本中p16基因启动子过甲基化 被引量：2
13
作者 姚群峰 康新江 +2 位作者 郝巧玲 唐朝晖 周宜开 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期5-8,共4页
目的 介绍一种高灵敏度的DNA甲基化分析方法,即巢式甲基化特异性PCR法(nested-MSP,nMSP),探讨该方法最佳应用条件,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化状态。方法 将基因组DNA变性成为单链,用... 目的 介绍一种高灵敏度的DNA甲基化分析方法,即巢式甲基化特异性PCR法(nested-MSP,nMSP),探讨该方法最佳应用条件,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化状态。方法 将基因组DNA变性成为单链,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA,所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化等位基因的特异引物,进行巢式PCR扩增,最后经凝胶电泳检测目的片段。结果 在3种类型的标本中都检测出了p16基因启动子的甲基化,比普通的甲基化特异性PCR法具有更高的灵敏度。结论 巢式甲基化特异性PCR是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化分析。 展开更多
关键词 巢式PCR法 检测 标本 P16 基因启动子 甲基化 聚合酶链反应
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快速检测DNA甲基化的新方法 被引量：2
14
作者 范钰 沈岩 +3 位作者 傅四东 林田 赵艳君 吴冠芸 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1993年第6期458-459,共2页
DNA甲基化对基因表达的调控作用日益受到重视.对原核及真核细胞的多数研究结果表明:DNA甲基化作用能引起基因表达的抑制,二者呈反相关;在细胞发育和分化过程中。
关键词 甲基化 聚合酶链反应 DNA
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hERR1在乳腺癌中的表达及其对芳香族化酶表达的调控 被引量：4
15
作者 陈健 陈敏 +5 位作者 陈彬 周长保 李渝萍 张艳 曹廷兵 周度金 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1233-1235,共3页
目的　了解hERR1在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况 ,以及它对芳香族化酶基因表达的调节作用。方法　收集乳腺癌患者的临床标本 ,应用RT PCR法 ,研究癌组织及相应的癌旁组织中hERR1的表达情况 ;采用瞬时转染和CAT活性分析的方法 ,研究hERR... 目的　了解hERR1在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况 ,以及它对芳香族化酶基因表达的调节作用。方法　收集乳腺癌患者的临床标本 ,应用RT PCR法 ,研究癌组织及相应的癌旁组织中hERR1的表达情况 ;采用瞬时转染和CAT活性分析的方法 ,研究hERR1对芳香族化酶基因表达的调节。结果　hERR1在癌组织中的表达明显高于相应的癌旁组织 (16 2 6例 ) ;hERR1以剂量依赖方式促进芳香族化酶启动子Ⅰ 3活性。结论　hERR1在体内可能起到促进乳腺癌生长的作用。 展开更多
关键词 芳香族化酶 hERR1 乳腺癌 基因表达调控 人雌激素受体相关受体1 逆转录-聚合酶链反应
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四甲基氯化铵在PCR扩增小麦基因中的关键作用 被引量：8
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作者 廖玉才 李和平 Rainer Fischer 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期1-4,共4页
利用高简并性引物，用ＰＣＲ法从小麦ＤＮＡ或ｃＤＮＡ中合成小麦几丁质酶基因、葡聚糖酶基因和苯丙氨酸解氨酶基因片段。在ＰＣＲ反应中添加四甲基氯化铵（ＴＭＡＣｌ）是合成这些特异基因片段的关键。合成的ＰＣＲ片段都经末端补齐和... 利用高简并性引物，用ＰＣＲ法从小麦ＤＮＡ或ｃＤＮＡ中合成小麦几丁质酶基因、葡聚糖酶基因和苯丙氨酸解氨酶基因片段。在ＰＣＲ反应中添加四甲基氯化铵（ＴＭＡＣｌ）是合成这些特异基因片段的关键。合成的ＰＣＲ片段都经末端补齐和磷酸化后用于克隆。核酸序列分析证实，这些ＰＣＲ产物分别与用于设计ＰＣＲ引物的基因具有高度的同源性。 展开更多
关键词 四甲基氯化铵 小麦 基因扩增 聚合酶链反应
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血浆p16基因甲基化在原发性肝细胞癌诊断中的作用 被引量：3
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作者 罗速 张逢春 +3 位作者 刘成柏 王潇 庄江兴 张今 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期298-301,共4页
用甲基化特异性-多聚酶链反应(MSP)方法,检测原发性肝细胞癌(HCC)、肝硬化、慢性肝炎病人及健康人各30例的血浆DNA甲基化的p16基因.结果显示,HCC病人血浆p16基因甲基化率为67%,慢性肝炎、肝硬化及健康者未发生甲基化.
关键词 血浆 P16基因 原发性肝细胞癌 诊断 甲基化特异性-多聚酶链反应
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儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因多态性研究 被引量：5
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作者 高清玲 邵明 +1 位作者 李勇杰 陈彪 《首都医科大学学报》 CAS 2001年第2期113-115,共3页
为分析中国汉族人儿茶酚胺氧位甲基转移酶 (COMT)基因多态性 ,用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术分析了 53名正常中国汉族人COMT基因 1 94 7位点的多态性 ;并对NIaⅢ内切酶酶切后有异常带出现的标本PCR产物直接进行... 为分析中国汉族人儿茶酚胺氧位甲基转移酶 (COMT)基因多态性 ,用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术分析了 53名正常中国汉族人COMT基因 1 94 7位点的多态性 ;并对NIaⅢ内切酶酶切后有异常带出现的标本PCR产物直接进行序列分析。发现中国汉族人COMT基因的A 1 94 7位点的频率为 0 .2 8;基因型G/G、G/A与A/A的频率分别为 0 .51 ,0 .4 2和 0 .0 7;并发现了C1 883/G和G1 966/T 展开更多
关键词 儿茶酚胺氧位甲基转移酶 基因多态性 聚合酶链反应
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同源异形盒A10基因启动子区甲基化及蛋白表达与子宫内膜异位症的关系 被引量：6
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作者 邬俊 周秋明 吴元赭 《医学研究生学报》 CAS 2010年第1期25-29,共5页
目的DNA甲基化在子宫内膜异位症发病机制研究中倍受到学者们关注。文中检测子宫内膜异位症(endome-triosis,EM)患者在位和异位内膜组织中同源异形盒A10(homeobox-A10,HOXA10)基因启动子区CpG岛甲基化程度及HOXA10蛋白表达水平,探讨EM与H... 目的DNA甲基化在子宫内膜异位症发病机制研究中倍受到学者们关注。文中检测子宫内膜异位症(endome-triosis,EM)患者在位和异位内膜组织中同源异形盒A10(homeobox-A10,HOXA10)基因启动子区CpG岛甲基化程度及HOXA10蛋白表达水平,探讨EM与HOXA10基因异常甲基化和蛋白表达的关系及其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和免疫组织化学法(SP法)检测36例EM患者中异位内膜组织(异位内膜组)、在位内膜组织(在位内膜组)及12例正常对照者子宫内膜组织(对照组)中HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化状况和HOXA10蛋白表达情况。结果①36例EM患者的异位、在位内膜组织中HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化率分别为38.9%、25.0%;其甲基化均发生在临床Ⅲ、Ⅳ期;12例正常子宫内膜组织中HOXA10基因均未发生甲基化;三组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。②EM患者在位、异位内膜HOXA10的表达下降,无明显的分泌中、晚期峰;异位内膜基质HOXA10的表达显著降低,低于对照组正常内膜表达,其差异有统计学意义(P<0.05)。③异位内膜组织HOXA10的蛋白表达与HOXA10基因启动子甲基化呈负相关,相关系数rs=-0.368。结论EM患者异位内膜组织中存在HOXA10基因启动子区异常甲基化导致基因失活,在EM发生发展过程中起重要作用。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 同源异形盒A10基因 甲基化特异性聚合酶链反应 免疫组织化学
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非小细胞肺癌患者血清CDH13基因甲基化检测及意义 被引量：2
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作者 鲁德玕 刘伟 +1 位作者 姬晓青 刘姝梅 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期657-660,共4页
肺癌是全世界范围内首位肿瘤死因。由启动子异常甲基化造成的特定基因的沉默在肺癌发病机制中起重要作用。钙黏附素（cadherin）是调整上皮表型和肿瘤侵袭力的细胞黏附分子[1]。CDH13是cadherin家族的成员之一，是一个候选抑癌基因，在... 肺癌是全世界范围内首位肿瘤死因。由启动子异常甲基化造成的特定基因的沉默在肺癌发病机制中起重要作用。钙黏附素（cadherin）是调整上皮表型和肿瘤侵袭力的细胞黏附分子[1]。CDH13是cadherin家族的成员之一，是一个候选抑癌基因，在人类多种肿瘤中因启动子甲基化而沉默。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 CDH13基因 DNA甲基化 聚合酶链反应 血清
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