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毛竹苯丙氨酸解氨酶基因的克隆及组织特异性表达分析 被引量:15
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作者 高志民 彭镇华 +2 位作者 李雪平 牟少华 马艳军 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2009年第3期449-453,共5页
As a critical enzyme in secondary metabolism of plant,Phenylanlanine ammonialyase(PAL) has significant meaning to its development and strong tolerance ability against hard.A full-length cDNA of PAL gene was isolated f... As a critical enzyme in secondary metabolism of plant,Phenylanlanine ammonialyase(PAL) has significant meaning to its development and strong tolerance ability against hard.A full-length cDNA of PAL gene was isolated from Phyllostachys edulis through RT-PCR and RACE methods,and named as PePAL1(GenBank accession number:FJ195650).PePAL1 is 2 436 bp,which contains an open reading frame encoding 701 amino acids.The results of amino acid sequence analysis showed that PePAL1 had high identities with other gramineous PAL in Oryza sativa,Zea mays,Saccharum officinarum,Bambusa ventricosa,Bambusa oldhamii and Triticum aestivum,especially with PAL from O.sativa up to 93.0%.Phylogenetic analysis showed that PePAL1 and LLB1 were on different branch sites.Tissue specific expression showed that PePAL1 expressed in leaf,sheath,stem and root,much higher in stem. 展开更多
关键词 毛竹 苯丙氨酸解氨酶 克隆 组织特异性表达
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花粉管通道法验证花生Oleosin基因启动子的特异性表达 被引量:8
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作者 范乾程 谭玲玲 +3 位作者 王亚 乔利仙 王晶珊 隋炯明 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第12期52-56,共5页
油体蛋白(Oleosin)是一类覆盖在油体表面且仅在种子中特异表达的低分子质量蛋白,能维护油体的稳定性。研究利用花生Oleosin基因的启动子替换了pCAMBIA1301的35S启动子,构建了重组表达载体pCAMBIA1301-Oleosin-pro,并利用花粉管通道法导... 油体蛋白(Oleosin)是一类覆盖在油体表面且仅在种子中特异表达的低分子质量蛋白,能维护油体的稳定性。研究利用花生Oleosin基因的启动子替换了pCAMBIA1301的35S启动子,构建了重组表达载体pCAMBIA1301-Oleosin-pro,并利用花粉管通道法导入花生。对T0代转基因植株进行了PCR鉴定和GUS组织化学染色,结果显示:50株转基因植株有9株能扩增出目的条带,阳性率为18%,9株阳性转基因植株中有5株的子叶能被GUS染色。对GUS染色成阳性的转基因植株的子叶进行切片观察,结果显示Oleosin基因启动子驱动的GUS基因在油体蛋白中能够表达。 展开更多
关键词 花生 Oleosin基因 特异性表达 花粉管通道法 遗传转化 GUS染色
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蔗糖合酶基因启动子克隆及其转基因水稻植物中特异性表达 被引量:13
3
作者 李永春 张宪银 薛庆中 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期586-590,共5页
以水稻品种“明恢 6 3”基因组 DNA为模板 ,用 PCR方法克隆出水稻蔗糖合酶基因起始密码子以前 (包括第一内含子 )的上游序列 RSP1及其不包括第一内含子的上游调控序列 RSP2。测序结果显示 ,在重要的功能区段上 ,克隆的序列与 Wang(1992 ... 以水稻品种“明恢 6 3”基因组 DNA为模板 ,用 PCR方法克隆出水稻蔗糖合酶基因起始密码子以前 (包括第一内含子 )的上游序列 RSP1及其不包括第一内含子的上游调控序列 RSP2。测序结果显示 ,在重要的功能区段上 ,克隆的序列与 Wang(1992 )等的报道基本一致。构建了由 RSP1和 RSP2驱动报告基因 Gus的植物表达载体 ,并用于农杆菌介导法水稻遗传转化。对水稻品种“秀水 11”转基因植株各部位的 GUS组织化学分析表明 :RSP1和 RSP2都可以驱动Gus基因在根、茎、叶及颖壳中高效特异表达 ,但在胚和胚乳中不表达。作者认为 。 展开更多
关键词 蔗糖合酶基因 启动子 克隆 转基因 水稻 植物 特异性表达
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成骨细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立 被引量:5
4
作者 程萱 翁土军 +5 位作者 谭晓红 侯宁 王健 林福玉 黄培堂 杨晓 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1237-1242,共6页
构建了含有骨钙素基因启动子、Cre重组酶基因和人生长激素基因polyA的转基因载体pOC-Cre,以显微注射的方法将4.6 kb的转基因片段OC-Cre导入小鼠受精卵。16只子代小鼠中经PCR和Southern杂交鉴定,有2只小鼠携带外源基因,整合率为12.5%。... 构建了含有骨钙素基因启动子、Cre重组酶基因和人生长激素基因polyA的转基因载体pOC-Cre,以显微注射的方法将4.6 kb的转基因片段OC-Cre导入小鼠受精卵。16只子代小鼠中经PCR和Southern杂交鉴定,有2只小鼠携带外源基因,整合率为12.5%。为了检测OC-Cre在转基因小鼠中表达的组织特异性,将转基因首建者小鼠与基因组上携带有LoxP位点的条件性Smad4基因敲除小鼠交配,PCR结果显示,仅在子代纯合型小鼠骨组织基因组中扩增出了Cre介导重组后的片段。将OC-Cre转基因小鼠与ROSA26报告小鼠交配,利用LacZ染色对双转基因阳性子代小鼠进行检测,结果显示Cre重组酶在成骨细胞中特异性表达并介导ROSA基因座LoxP位点间的重组。所有这些结果说明:所建立的OC-Cre转基因小鼠在成骨细胞中特异性表达Cre重组酶,并能在体内介导成骨细胞基因组上LoxP位点间的重组,是一种理想的研制成骨细胞特异性基因敲除小鼠的工具小鼠。 展开更多
关键词 CRE 转基因小鼠 成骨细胞 显微注射 特异性表达
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棉花甲基化酶基因COMT和CCoAOMT的组织特异性表达分析 被引量:11
5
作者 吕萌 倪志勇 +3 位作者 王娟 李波 罗淑萍 范玲 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期713-719,共7页
本研究利用半定量RT-PCR分析方法探索了陆地棉(Gossypium hirsutum L.)木质素合成途径中甲基化酶基因家族COMT和CCoAOMT在不同组织和不同发育时期纤维中的表达情况。结果表明COMT1,COMT2,COMT3和CCoAOMT1,CCoAOMT2在棉花的7个组织器官(... 本研究利用半定量RT-PCR分析方法探索了陆地棉(Gossypium hirsutum L.)木质素合成途径中甲基化酶基因家族COMT和CCoAOMT在不同组织和不同发育时期纤维中的表达情况。结果表明COMT1,COMT2,COMT3和CCoAOMT1,CCoAOMT2在棉花的7个组织器官(根、茎、叶、子叶、花瓣、雄蕊、胚珠)中都有表达,其中COMT1和CCoAOMT1在各组织中的表达趋势类似,COMT2,COMT3和CCoAOMT2表达趋势各异。在5~25d的棉纤维发育过程中,COMT1和COMT3表达稳定,COMT2表达量逐渐增加。而CCoAOMT基因家族的2个基因的表达量变化相对明显,CCoAOMT1在25d出现表达高峰,CCoAOMT2则在10d和15d呈现高表达量。本研究表明甲基化酶基因家族COMT和CCoAOMT在棉花的根,茎等维管组织中具有相对一致的高表达量,而在其他组织和发育纤维中则呈现出明显的组织特异性和纤维发育时期特异性。 展开更多
关键词 陆地棉 咖啡酸-O-甲基转移酶(COMT) 咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCoAOMT) 反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 组织特异性表达
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小麦AGPase4个亚基的克隆及其组织特异性表达 被引量:6
6
作者 康国章 刘超 +2 位作者 沈丙权 肖向丽 郭天财 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期60-64,共5页
采用RT-PCR方法从小麦品种豫教2号发育籽粒中克隆出小麦淀粉合成关键酶—AGPase的胞质型小亚基(cytosolic small subunit,SSUⅠ)、质体型小亚基(plastidial small subunit,SSUⅡ)、胞质型大亚基(cy-tosolic large subunit,LSUⅠ)和质体... 采用RT-PCR方法从小麦品种豫教2号发育籽粒中克隆出小麦淀粉合成关键酶—AGPase的胞质型小亚基(cytosolic small subunit,SSUⅠ)、质体型小亚基(plastidial small subunit,SSUⅡ)、胞质型大亚基(cy-tosolic large subunit,LSUⅠ)和质体型大亚基(plastidial large subunit,LSUⅡ)的cDNA序列。所克隆的基因cDNA序列长度分别为1 4651、6311、941和535 bp。序列比对结果显示SSUⅠ、LSUⅠ和LSUⅡ与已往报道的大麦、小麦、玉米、水稻等相关基因的同源性较高,而SSUⅡ的cDNA序列为首次克隆,与大麦SSUⅡ相比,5'端缺失编码转移肽的一段序列,表明其可能对质体AGPase活性产生一定影响。通过半定量PCR法发现SSUⅠ与LSUⅠ在籽粒中表达量较高,而SSUⅡ和LSUⅡ在叶片中丰富表达。 展开更多
关键词 小麦 AGPase亚基 克隆 组织特异性表达
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烟夜蛾气味受体OR18基因克隆及组织特异性表达 被引量:4
7
作者 张元臣 范荫荫 +5 位作者 安世恒 李为争 乔奇 郭线茹 罗梅浩 原国辉 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期49-54,共6页
应用RT-PCR和实时荧光定量PCR技术,从烟夜蛾雄虫触角中克隆气味受体目的基因,分析鉴定了其在烟夜蛾不同组织的特异性表达情况.序列分析结果表明,目的基因为新的烟夜蛾气味受体基因,命名为HassOR18(GenBank登录号:HM750915).该基因阅读... 应用RT-PCR和实时荧光定量PCR技术,从烟夜蛾雄虫触角中克隆气味受体目的基因,分析鉴定了其在烟夜蛾不同组织的特异性表达情况.序列分析结果表明,目的基因为新的烟夜蛾气味受体基因,命名为HassOR18(GenBank登录号:HM750915).该基因阅读框架全长1 197 bp,编码398个氨基酸,推测编码蛋白质的相对分子质量为46.6 kD,等电点为5.82.氨基酸序列比对表明,烟夜蛾气味受体HassOR18与其他夜蛾科昆虫OR18的氨基酸序列一致性均达80%以上.实时荧光定量PCR结果显示,HassOR18仅在雌雄虫触角中和雌虫喙内表达,而且在雄虫触角内的表达量远高于在雌虫触角和喙内的表达量,推测该基因可能参与性信息素的识别. 展开更多
关键词 烟夜蛾 气味受体 基因克隆 序列分析 组织特异性表达
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鸡长链非编码RNA发掘及组织特异性表达分析 被引量:5
8
作者 李辉 张继扬 杜志强 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期40-47,共8页
长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lnc RNA)是一类长度大于200个核苷酸、缺少蛋白编码功能的RNA。lnc RNA可从多层面调控基因表达,影响表型性状。鸡作为重要经济动物和模式生物,lnc RNA研究相对滞后。为加快鸡lnc RNA研究进展,利用公... 长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lnc RNA)是一类长度大于200个核苷酸、缺少蛋白编码功能的RNA。lnc RNA可从多层面调控基因表达,影响表型性状。鸡作为重要经济动物和模式生物,lnc RNA研究相对滞后。为加快鸡lnc RNA研究进展,利用公共数据库(如NCBI-SRA等)中鸡高通量转录组测序(RNA-seq)数据,通过生物信息学方法发掘8 040条鸡lnc RNA,发现大量组织特异性表达lnc RNA,为鸡lnc RNA功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 RNA-SEQ lncRNA 组织特异性表达
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桔小实蝇CYP4D46的克隆及其组织特异性表达研究 被引量:3
9
作者 黄勇 申光茂 +3 位作者 刘丽 熊赛 蒋红波 王进军 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期180-187,共8页
从桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)成虫体内提取总RNA,利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术获得了一个新的细胞色素P450基因cDNA序列全长。该基因经细胞色素P450基因命名委员会命名为CYP4D46(GenBank登录号:GU292422),其cDNA全长为17... 从桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)成虫体内提取总RNA,利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术获得了一个新的细胞色素P450基因cDNA序列全长。该基因经细胞色素P450基因命名委员会命名为CYP4D46(GenBank登录号:GU292422),其cDNA全长为1717bp,包含1530bp的完整开放阅读框(ORF),编码510个氨基酸,理论分子量约为58.40kD,等电点为8.82。系统发育分析表明该基因与昆虫第4家族P450基因具有较高的同源性。实时定量PCR分析发现,CYP4D46基因在脂肪体中的相对表达量较高,分别是马氏管和中肠内的756倍和60倍,说明CYP4D46可能与脂肪体的重要生理功能相关。 展开更多
关键词 桔小实蝇 P450 基因克隆 组织特异性表达
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辐射诱导基因LRIGx的细胞周期特异性表达及编码产物同源性分析 被引量:4
10
作者 周平坤 隋建丽 +2 位作者 耿煜 Odile RIGAUD 吴德昌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期272-276,共5页
低剂量辐射诱导表达新基因LRIGx被克隆 .Northern印迹杂交结果表明 ,在 0 2Gyγ射线照射后 2~ 4h ,人A5 4 9细胞中该基因mRNA表达水平显著上调 .当照射剂量增加到 2Gy时 ,其诱导表达水平明显低于 0 2Gy照射 .通过细胞周期同步化 ,观... 低剂量辐射诱导表达新基因LRIGx被克隆 .Northern印迹杂交结果表明 ,在 0 2Gyγ射线照射后 2~ 4h ,人A5 4 9细胞中该基因mRNA表达水平显著上调 .当照射剂量增加到 2Gy时 ,其诱导表达水平明显低于 0 2Gy照射 .通过细胞周期同步化 ,观察到LRIGx基因表达高峰在G2 M期 .同源性比较和功能保守域分析结果显示 ,该基因编码产物与DNA修复和重组蛋白RAD5 4、ERCC 6 ,染色质重构和转录调节功能蛋白SWI2 SNF2等有同源性 ,其N端具有与染色质重构、基因转录调控和DNA修复有关的 3个功能结构域 ,即CHROMO。 展开更多
关键词 辐射诱导基因 LRIGx 细胞周期 特异性表达 编码产物 同源性分析 DNA修复
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花胫绿纹蝗和疣蝗配子发生时原癌基因c-kit特异性表达比较研究 被引量:2
11
作者 赵卓 张敏 +1 位作者 吕淑敏 奚耕思 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期441-447,共7页
应用免疫组织化学和生物统计分析相结合的方法,对花胫绿纹蝗Aiolopus tamulus(Fabricius)和疣蝗Trilophidia annulata(Thunberg)配子发生过程中原癌基因c-kit特异表达进行了比较研究。结果表明:(1)精子发生过程中,精原细胞、初... 应用免疫组织化学和生物统计分析相结合的方法,对花胫绿纹蝗Aiolopus tamulus(Fabricius)和疣蝗Trilophidia annulata(Thunberg)配子发生过程中原癌基因c-kit特异表达进行了比较研究。结果表明:(1)精子发生过程中,精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和成熟精子中均有不同程度的c-kit蛋白表达,精巢末端还有较粗大的阳性颗粒分布;(2)卵子发生过程中,第1-6阶段卵母细胞中有不同程度的c-kit蛋白特异性表达,但随着卵黄发生的开始逐渐消失;(3)2种蝗虫配子发生过程中c-kit表达存在种间差异。 展开更多
关键词 花胫绿纹蝗 疣蝗 配子发生 C-KIT蛋白 特异性表达
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泥鳅不同组织同工酶的特异性表达分析 被引量:5
12
作者 于淑池 邵杨勇 《水产科学》 CAS 北大核心 2012年第5期291-294,共4页
应用垂直平板不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳方法研究了泥鳅成体的心脏、肝胰脏、肾脏、鳃、肌肉5种组织中酯酶、过氧化物酶、过氧化氢酶同工酶的表达情况。试验结果表明,泥鳅3种同工酶在肝胰脏中表达活性较高。酯酶同工酶在5种组织中均大量... 应用垂直平板不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳方法研究了泥鳅成体的心脏、肝胰脏、肾脏、鳃、肌肉5种组织中酯酶、过氧化物酶、过氧化氢酶同工酶的表达情况。试验结果表明,泥鳅3种同工酶在肝胰脏中表达活性较高。酯酶同工酶在5种组织中均大量存在,且条带较多;过氧化物酶在肾脏中表达较强,肌肉中表达最弱;过氧化氢酶在鳃、肌肉组织中表达不强,且条带较少,不利于分析,但其表达差异性明显。 展开更多
关键词 泥鳅 组织 同工酶 特异性表达
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山羊β-酪蛋白基因启动子指导人血清白蛋白基因在小鼠组织中的特异性表达 被引量:5
13
作者 曹新 曾溢滔 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期518-520,共3页
对本所构建的pcDNA3.1- β6 .7hALBm表达载体行尾静脉注射直接转染哺乳期母鼠的活体组织。通过RT-PCR检测hALBm基因在小鼠几种组织中的表达来研究该构建体的组织特异性。结果 :构建体在受试鼠组织中的表达显示了较好的乳腺组织特异性。... 对本所构建的pcDNA3.1- β6 .7hALBm表达载体行尾静脉注射直接转染哺乳期母鼠的活体组织。通过RT-PCR检测hALBm基因在小鼠几种组织中的表达来研究该构建体的组织特异性。结果 :构建体在受试鼠组织中的表达显示了较好的乳腺组织特异性。说明构建具有较长 5′端上游乳蛋白调控区的乳腺特异性表达载体对组织特异性表达是必需的。 展开更多
关键词 启动子 表达载体 特异性表达 山羊β-酪蛋白基因 人血清白蛋白
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LIR1基因在水稻中的组织特异性表达 被引量:1
14
作者 岳彩黎 王贵学 +2 位作者 黄俊丽 胡锋 秦峰 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期146-150,共5页
水稻LIR1是LIR(light-induced rice)蛋白家族的一员,受光与生物钟的调节,在植物光反应及生物节律性调控方面有重要作用。为了研究水稻LIR1的生理功能,利用半定量RT-PCR技术对水稻‘珍汕97B’LIR1基因做了根、叶鞘、叶片及穗的组织特异... 水稻LIR1是LIR(light-induced rice)蛋白家族的一员,受光与生物钟的调节,在植物光反应及生物节律性调控方面有重要作用。为了研究水稻LIR1的生理功能,利用半定量RT-PCR技术对水稻‘珍汕97B’LIR1基因做了根、叶鞘、叶片及穗的组织特异性表达分析,同时构建了启动子的GUS基因融合表达载体LIR1∷GUS转化烟草,利用GUS组织化学染色检测GUS基因在烟草组织器官中的表达情况。研究结果表明:LIR1基因在水稻叶片中的表达量较高,而在叶鞘、穗与根中表达量较低;GUS染色主要集中在叶片组织及茎中,而在植株的根部不显色。 展开更多
关键词 LIR1基因 组织特异性表达 启动子 GUS
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运用差异展示分离特异性表达的基因 被引量:3
15
作者 孙涛 刘雪丰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1996年第4期316-318,共3页
在高等生物中含有约100000个不同的基因,其中仅有15%的基因在任何个体细胞中均表达.因此分离特异的目的基因便显得十分重要差异展示是通过部分扩增mRNA的逆转录产物、经测序胶电泳,分离到差异性表达的基因它与消减杂交... 在高等生物中含有约100000个不同的基因,其中仅有15%的基因在任何个体细胞中均表达.因此分离特异的目的基因便显得十分重要差异展示是通过部分扩增mRNA的逆转录产物、经测序胶电泳,分离到差异性表达的基因它与消减杂交相比是分离特异表达基因的更有效的手段.虽然这种方法在实际运用中存在着这样或那样的困难,但随着对这种技术的不断改进,它将会有越来越广泛的用途. 展开更多
关键词 差异展示 基因分离 特异性表达基因
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长翅素木蝗卵子发生过程中c-kit蛋白特异性表达动态 被引量:1
16
作者 郝锡联 赵卓 任炳忠 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期53-54,60,共3页
应用免疫组织化学和生物统计分析相结合的方法,对吉林省四平地区长翅素木蝗卵子发生过程中c-kit蛋白特异表达特点和动态进行研究。结果表明:卵子发生过程中,第1~6阶段卵母细胞中有不同程度的c-kit蛋白特异性表达,但随着卵黄发生的开始... 应用免疫组织化学和生物统计分析相结合的方法,对吉林省四平地区长翅素木蝗卵子发生过程中c-kit蛋白特异表达特点和动态进行研究。结果表明:卵子发生过程中,第1~6阶段卵母细胞中有不同程度的c-kit蛋白特异性表达,但随着卵黄发生的开始逐渐消失;滤泡细胞、输卵管和受精囊的腺细胞中有c-kit蛋白颗粒存在;c-kit蛋白表达季节动态显示,刚羽化的蝗虫卵巢管内有较强的表达,老熟成虫卵巢管内表达维持在较弱的水平。 展开更多
关键词 长翅素木蝗 卵子发生 c—kit 特异性表达
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小麦HMW-GS1D×5基因时间特异性表达的研究 被引量:2
17
作者 卢一凡 刘广田 《生物技术通报》 CAS CSCD 1998年第1期25-28,共4页
利用小麦高分子量谷蛋白1D×5亚基探针,研究HMW-GS1D×5基因表达的规律。结果表明,HMW-GS1D×5基因从开花初期开始表达。这为从生理、营养、施肥等诸多方面人为地对HMW谷蛋白基因的表达加以调控... 利用小麦高分子量谷蛋白1D×5亚基探针,研究HMW-GS1D×5基因表达的规律。结果表明,HMW-GS1D×5基因从开花初期开始表达。这为从生理、营养、施肥等诸多方面人为地对HMW谷蛋白基因的表达加以调控,使之在特定时期能够充分表达该基因从而改善小麦品质打下基础。 展开更多
关键词 特异性表达 小麦 高分子量谷蛋白 5亚基 基因
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gus基因导入烟草获得转基因植株及其组织特异性表达 被引量:2
18
作者 邓晓梅 周根余 《上海农业学报》 CSCD 1996年第4期85-87,共3页
gus基因导入烟草获得转基因植株及其组织特异性表达邓晓梅;周根余(上海市农业科学院农业生物技术研究中心上海201106;上海师范大学生物系,上海200234)关键词烟草,共培养转化;gus基因;组织特异性表达烟草是我... gus基因导入烟草获得转基因植株及其组织特异性表达邓晓梅;周根余(上海市农业科学院农业生物技术研究中心上海201106;上海师范大学生物系,上海200234)关键词烟草,共培养转化;gus基因;组织特异性表达烟草是我国重要的经济作物之一,烟草花叶病毒... 展开更多
关键词 烟草 转化 基因 组织特异性表达
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奶牛溶菌酶基因(Lyz)乳腺特异性表达质粒构建与鉴定 被引量:1
19
作者 张志鹏 江静宜 +3 位作者 夏海磊 冀德君 李明勋 杨章平 《家畜生态学报》 北大核心 2019年第5期24-28,共5页
研究旨在构建具有高效抗菌、活性持久的奶牛乳腺特异性表达质粒,探索研制新型抗菌制剂,为利用基因工程技术防治奶牛乳房炎提供重要材料。根据GenBank中奶牛溶菌酶基因(lysozyme,Lyz)mRNA序列(GenBank号:NM_180999.1)设计引物,从奶牛乳... 研究旨在构建具有高效抗菌、活性持久的奶牛乳腺特异性表达质粒,探索研制新型抗菌制剂,为利用基因工程技术防治奶牛乳房炎提供重要材料。根据GenBank中奶牛溶菌酶基因(lysozyme,Lyz)mRNA序列(GenBank号:NM_180999.1)设计引物,从奶牛乳腺上皮细胞中RT-PCR扩增Lyz基因编码序列,将其克隆到携带增强型绿色荧光蛋白通用型表达载体pEGFP-N1中测序。重组质粒pEGFP-N1-Lyz经AseI+HindIII双酶切除CMV启动子,将奶牛乳腺特异性表达β-乳球蛋白基因(BLG)启动子同源重组替换到AseI和HindIII酶切位点,构建奶牛溶菌酶基因(Lyz)乳腺特异性表达质粒pBLG-EGFP-N1-Lyz,采用脂质体法转染奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)、人肾脏上皮细胞(HEK293T),荧光显微镜检测转染细胞中绿色荧光蛋白的表达情况。结果表明,重组表达质粒pBLG-EGFP-N1-Lyz测序结果与目的片段长度相符,转染至BMEC细胞和HEK293T细胞,在奶牛乳腺上皮细胞观察到绿色荧光,HEK293T细胞未观察到绿色荧光,奶牛Lyz基因乳腺特异性表达质粒构建成功。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 溶菌酶 乳腺特异性表达载体 基因治疗
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线粒体nad 6基因在油菜种子发育中的特异性表达 被引量:1
20
作者 陈喜文 陈德富 《华北农学报》 CSCD 北大核心 1999年第1期53-56,共4页
以油菜为材料,研究线粒体nad6基因在种子发育中的表达。结果表明,nad6基因在叶片中的表达很低,在种子发育过程中各阶段均有较高表达,并随种子发育进程而有加强的趋势。推测线粒体nad6基因可能除与呼吸作用有关外还有其... 以油菜为材料,研究线粒体nad6基因在种子发育中的表达。结果表明,nad6基因在叶片中的表达很低,在种子发育过程中各阶段均有较高表达,并随种子发育进程而有加强的趋势。推测线粒体nad6基因可能除与呼吸作用有关外还有其他功能。 展开更多
关键词 油菜 种子发育 线粒体 nad6基因 特异性表达
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