人热休克蛋白90AB1基因克隆、原核表达、中试发酵及纯化

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作者 刘凯胜 王绍祥 +3 位作者 刘忠 张嘉萱 张庶民 王一飞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期120-125,134,共7页

通过克隆人热休克蛋白90AB1基因(Hsp90AB1),构建其原核表达载体pET28a(+)-hHsp90AB1,表达纯化获得目的蛋白,为hHsp90靶向药物筛选奠定基础。提取宫颈癌HeLa细胞总RNA,并经RT-PCR获得hHsp90AB1-cDNA。以hH-sp90AB1-cDNA为模板进行PCR体... 通过克隆人热休克蛋白90AB1基因(Hsp90AB1),构建其原核表达载体pET28a(+)-hHsp90AB1,表达纯化获得目的蛋白,为hHsp90靶向药物筛选奠定基础。提取宫颈癌HeLa细胞总RNA,并经RT-PCR获得hHsp90AB1-cDNA。以hH-sp90AB1-cDNA为模板进行PCR体外扩增,胶回收纯化hHsp90AB1。将hHsp90AB1及pET-28a(+)质粒经NdeⅠ和SalⅠ双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,使其定向重组,再将重组DNA转化DH5α,经复苏后,在含卡那霉素的LB固体养基上筛选出阳性克隆。挑取LB固体培养基上的单菌落经酶切及测序鉴定,证实为阳性克隆,即pET28a-hHsp90AB1体外重组成功,命名为pET28a(+)-hHsp90AB1。重组质粒转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG诱导表达,并对表达条件优化,以及通过SDSA-PAGE和Western blotting分析均表明Hsp90AB1蛋白得到了正确的表达,且表达产物以可溶性形式存在,优化条件下蛋白表达量约占菌体总蛋白13%。接种到18 L发酵罐中试发酵,表达产物经Ni-NTA凝胶亲和层析,蛋白纯度达到98%。 展开更多

关键词 热休克蛋白90AB1(Hsp90β) 克隆 原核表达 中试发酵 纯化

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核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员3炎症小体的活化调节与牙周疾病的关系 被引量：4

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作者 吴冷 王骏 +1 位作者 赵蕾 吴亚菲 《国际口腔医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第6期710-714,共5页

核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员(NLRP)3炎症小体是一种位于细胞质内的多蛋白质复合体,由其核心成分感知病原体和宿主危险信号后组装而成,通过激活半胱氨酸天冬酰胺特异蛋白酶-1致促炎因子白细胞介素(IL)-1β成熟... 核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员(NLRP)3炎症小体是一种位于细胞质内的多蛋白质复合体,由其核心成分感知病原体和宿主危险信号后组装而成,通过激活半胱氨酸天冬酰胺特异蛋白酶-1致促炎因子白细胞介素(IL)-1β成熟与分泌参与免疫炎症反应。牙周病是由宿主和微生物因素相互作用导致的局部炎症反应,而IL-1β又是牙周炎发病的关键因素之一。IL-1β的成熟和分泌与NLRP3炎症小体密切相关,且牙周致病菌可调节该炎症小体的表达及活化,因此NLRP3炎症小体对牙周疾病的发生发展和治疗具有重要意义。本文就NLRP3炎症小体的生物学功能、活化机制及其在牙周病学领域的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 炎症小体 核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员3 半胱氨酸天冬酰胺特异蛋白 酶-1 白细胞介素 牙周疾病 免疫炎症反应

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低氧胁迫与常氧条件下斑马鱼鳃中热休克蛋白基因家族的表达差异比较 被引量：9

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作者 狄治朝 周涛 许强华 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期690-695,共6页

为研究斑马鱼热休克蛋白(HSP)应对低氧胁迫的生物学功能,对低氧胁迫与常氧条件下斑马鱼Danio rerio鳃组织进行转录组测序,利用实时荧光定量RT-PCR技术检测了低氧胁迫与常氧条件下斑马鱼鳃中热休克蛋白家族基因的表达差异。结果表明:在... 为研究斑马鱼热休克蛋白(HSP)应对低氧胁迫的生物学功能,对低氧胁迫与常氧条件下斑马鱼Danio rerio鳃组织进行转录组测序,利用实时荧光定量RT-PCR技术检测了低氧胁迫与常氧条件下斑马鱼鳃中热休克蛋白家族基因的表达差异。结果表明:在参与比较的斑马鱼鳃转录组测序中,共找到80个热休克蛋白家族基因成员;在低氧与常氧条件下鳃中热休克蛋白家族中有28个基因表达呈明显变化,其中16个基因表达量显著上调(P<0. 05),12个基因表达量显著下调(P<0. 05); Hsp47基因是低氧胁迫下表达量增加最明显的热休克蛋白基因,Hsp90ab1基因是低氧胁迫下唯一表达量升高的大分子热休克蛋白基因;低氧胁迫下Hsp47在鳃、肌肉中的表达极显著升高(P<0. 01),Hsp90ab1在鳃、皮肤和肌肉中的表达显著或极显著升高(P<0. 05或P<0. 01);不同低氧浓度胁迫下斑马鱼鳃中HSP47和HSP90ab1蛋白表达均呈现显著增加(P<0. 05)。研究表明,HSP47和HSP90ab1可能是斑马鱼低氧应激中最重要的热休克蛋白成员,具有重要的适应功能。 展开更多

关键词 斑马鱼 低氧 转录组分析 热休克蛋白 Hsp47基因 Hsp90ab1基因

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热休克蛋白90a通过增强钙库操作性钙离子内流活性促进肝癌细胞转移 被引量：8

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作者 梁永红 冯超 周忠信 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第23期3859-3864,共6页

目的探讨细胞外热休克蛋白90α(eHsp90α)对肝癌细胞转移的影响及机制。方法 Westernblot检测细胞培养基上清中eHsp90α的水平和细胞中基质相互作用分子1(STIM1)蛋白表达,Confocal检测钙库操作性钙离子内流(SOCE)活性,免疫荧光双染检测S... 目的探讨细胞外热休克蛋白90α(eHsp90α)对肝癌细胞转移的影响及机制。方法 Westernblot检测细胞培养基上清中eHsp90α的水平和细胞中基质相互作用分子1(STIM1)蛋白表达,Confocal检测钙库操作性钙离子内流(SOCE)活性,免疫荧光双染检测STIM1和ORAI1的相互作用水平,Transwell和划痕实验检测细胞转移能力。结果肝癌细胞系中e Hsp90α较正常肝细胞系LO-2显著增加;高度转移能力的MHCC87H和HCCLM3细胞中e Hsp90α水平、STIM1蛋白表达和SOCE活性较低转移能力的HepG2、HL-7702和SNU-449显著升高。hrHsp90α可以显著增加HepG2的转移能力、STIM1蛋白变化和SOCE活性。敲低STIM1蛋白表达或抑制SOCE活性,可以抑制MHCC87H的转移能力和hrHsp90α诱导的HepG2转移能力增加。结论eHsp90α可促进肝癌细胞的转移,其机制是通过诱导STIM1蛋白表达,进而增加SOCE活性。 展开更多

关键词 肝癌细胞 细胞外热休克蛋白90a 转移 钙库操作性钙离子内流 基质相互作用分子1

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血清HSP90α和癌组织基因HSP90AA1在肺癌中的高表达及预后价值 被引量：17

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作者 董晓玉 钟涛 +2 位作者 叶元滋 郑美娟 沈继龙 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第7期1034-1040,共7页

目的探讨肺癌患者血清热休克蛋白90α(HSP90α)和癌组织基因HSP90AA1在肺癌中的高表达及其预后价值。方法收集109例肺癌患者为实验组;36例肺部炎症患者为参照组;以及30例健康体检者为对照组,比较三组间血清HSP90α水平的差异;分析HSP90... 目的探讨肺癌患者血清热休克蛋白90α(HSP90α)和癌组织基因HSP90AA1在肺癌中的高表达及其预后价值。方法收集109例肺癌患者为实验组;36例肺部炎症患者为参照组;以及30例健康体检者为对照组,比较三组间血清HSP90α水平的差异;分析HSP90α与临床参数的关系;从癌症基因图谱(TCGA)数据库下载数据分析HSP90AA1在癌组织中的表达,同时探讨HSP90AA1与患者临床病理资料的相关性及对预后的影响。结果实验组血清HSP90α水平高于参照组和对照组(P<0.05);HSP90α诊断肺癌的ROC曲线下面积是0.898(P<0.05);肺鳞癌组、小细胞癌组HSP90α表达高于腺癌组(P<0.05);肺癌患者治疗缓解期HSP90α表达降低,病情进展期HSP90α表达显著升高(P<0.05);TCGA数据分析显示HSP90AA1表达癌组织高于癌旁组织,且肺鳞癌癌组织HSP90AA1表达高于肺腺癌(P<0.05);HSP90AA1表达与肺癌患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤残余均无关;K-M生存分析单因素、多因素Cox回归分析显示HSP90AA1高表达降低肺癌患者的整体生存率(OS),HSP90AA1表达水平是肺癌患者的独立预后因素。结论肺癌患者血清HSP90α及癌组织HSP90AA1水平升高,癌组织高表达HSP90AA1是患者的独立预后因素;HSP90α和HSP90AA1可作为肺癌的一种辅助诊断指标;其表达水平对肺癌患者疗效观察及生存状态预测具有临床应用价值。 展开更多

关键词 肺癌 热休克蛋白90a HSP90AA1 腺癌 鳞癌

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HSP90依赖的Akt线粒体转位参与IGF-1对低温保存心脏的保护作用 被引量：4

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作者 余国伟 陈洁 +2 位作者 陈莹莹 郑鸣之 沈岳良 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1773-1778,共6页

目的:观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)是否可对抗低温保存诱导的心肌损伤,并探讨其可能的机制。方法:观察SD大鼠心脏低温保存9 h后,再灌注期左心室发展压(LVDP)和细胞凋亡指数的变化。Westernblotting法检测蛋白激酶B(Akt)蛋白表达。结果:... 目的:观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)是否可对抗低温保存诱导的心肌损伤,并探讨其可能的机制。方法:观察SD大鼠心脏低温保存9 h后,再灌注期左心室发展压(LVDP)和细胞凋亡指数的变化。Westernblotting法检测蛋白激酶B(Akt)蛋白表达。结果:(1)Celsior保存液中加入10 nmol/L IGF-1可促进低温保存9 h后心脏收缩功能的恢复、减少心肌细胞凋亡的发生、抑制线粒体渗透性转换孔开放。(2)IGF-1可上调心脏Akt蛋白磷酸化水平。磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002不仅可降低IGF-1诱导的Akt磷酸化水平,且可逆转IGF-1促进低温保存心脏心功能的恢复和抗凋亡作用。(3)抑制热休克蛋白90(HSP90)可降低IGF-1诱导的Akt磷酸化和线粒体转位,阻断IGF-1的心肌保护作用。结论:IGF-1可明显减少低温保存心脏心肌细胞凋亡的发生,促进再灌注期心功能的恢复,其机制可能与HSP90依赖性Akt的激活和线粒体转位有关。 展开更多

关键词 心脏保存 胰岛素样生长因子1 AKT 热休克蛋白质90 线粒体

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HSP90抑制剂对缺氧诱导的RPE细胞SDF-1表达的影响 被引量：4

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作者 王业青 张晓梅 +1 位作者 穆华 王巍 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2009年第10期748-751,共4页

目的研究热休克蛋白(heat shock protein90,HSP90)抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG)对缺氧诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞基质细胞衍生因子-1(stro... 目的研究热休克蛋白(heat shock protein90,HSP90)抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG)对缺氧诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞基质细胞衍生因子-1(stro-malcell-derivedfactor-1,SDF-1)表达的影响。方法将培养的第3代RPE细胞分为缺氧对照组、DMSO对照组和17-AAG预处理组。其中17-AAG预处理组根据浓度不同又分为6组:0.01μmol.L-1、0.10μmol.L-1、0.50μmol.L-1、1.0μmol.L-1、5.0μmol.L-1、10.0μmol.L-1。利用氯化钴建立体外RPE细胞的化学缺氧模型,不同浓度的HSP90抑制剂17-AAG预处理RPE细胞1h后给予12h缺氧处理,RT-PCR和Westernblotting方法检测SDF-1表达变化情况。结果缺氧对照组、DMSO对照组和不同浓度17-AAG预处理组SDF-1mRNA与内参β-actinmRNA光密度比值分别为0.89±0.04、0.93±0.07、0.62±0.06、0.52±0.06、0.43±0.06、0.28±0.04、0.21±0.04、0.17±0.03;SDF-1蛋白与内参β-actin蛋白光密度比值分别为0.76±0.04、0.80±0.06、0.65±0.04、0.34±0.03、0.20±0.02、0.16±0.02、0.07±0.02、0.05±0.01。与缺氧对照组比较,DMSO对照组SDF-1mRNA和蛋白的表达无明显变化,而不同浓度17-AAG预处理组SDF-1mRNA和蛋白的表达明显降低(P均<0.05),呈浓度依赖性。结论HSP90的特异抑制剂17-AAG能有效抑制缺氧条件下RPE细胞SDF-1表达。 展开更多

关键词 基质细胞衍生因子-1 视网膜色素上皮 缺氧 热休克蛋白90

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Hsp90AB1在狂犬病病毒复制过程中的功能初探 被引量：2

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作者 许运斌 孙玉章 +4 位作者 刘娟 颜焰 高兴红 罗果 王欢 《动物医学进展》 北大核心 2018年第6期1-5,共5页

为了探究宿主蛋白Hsp90AB1在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)复制过程中的功能,以RABV疫苗毒株HEP-Flury感染鼠神经瘤母细胞N2a为模型,分析Hsp90AB1对RABV复制的影响。采用RNA干扰的方式,发现Hsp90AB1基因敲降后可影响病毒基因的转录及... 为了探究宿主蛋白Hsp90AB1在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)复制过程中的功能,以RABV疫苗毒株HEP-Flury感染鼠神经瘤母细胞N2a为模型,分析Hsp90AB1对RABV复制的影响。采用RNA干扰的方式,发现Hsp90AB1基因敲降后可影响病毒基因的转录及其表达,而未影响病毒的反基因组水平以及病毒感染力,表明Hsp90AB1在转录或蛋白表达水平上影响RABV的复制。由此初步发现Hsp90AB1在RABV复制过程中的作用方式,为继续深入研究Hsp90AB1在RABV感染过程中的作用机制提供了基础数据。 展开更多

关键词 热休克蛋白90AB1 狂犬病病毒 复制 功能

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肾脏移植后慢性移植物肾病相关基因C-H-ras、TGF-β_1、HSP70和HSP90的表达 被引量：1

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作者 宫念樵 叶启发 +3 位作者 李国逊 张伟杰 郭晖 夏穗生 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期617-619,622,共4页

目的探讨肾脏移植后慢性移植物肾病（CAN）相关基因C-H-ras、TGF-β1、HSP70及HSP90的表达及其意义。方法实验分为3组：正常对照组10例，为正常肾脏标本；术中穿刺组10例，为肾脏移植术中复流40～60min后的移植肾穿刺标本；CAN组8例，... 目的探讨肾脏移植后慢性移植物肾病（CAN）相关基因C-H-ras、TGF-β1、HSP70及HSP90的表达及其意义。方法实验分为3组：正常对照组10例，为正常肾脏标本；术中穿刺组10例，为肾脏移植术中复流40～60min后的移植肾穿刺标本；CAN组8例，为木后1～7年CAN患者肾组织穿刺标本。采用免疫组织化学及原位杂交法对每例标本行C—H—ras、TGF-β1、HSP70及HSP90蛋白和mRNA表达水平检测。结果术中穿刺组HSP70表达水平最高，CAN组C—H—ras、TGF-β1及HSP90表达水平最高。结论c—H—ras和TGF-β1两种基因的共同高表达与CAN的发生发展关系密切。调控相关基因的表达可能有助于延缓和治疗CAN。 展开更多

关键词 肾脏移植 慢性移植物肾病 C—H—ras基因 转化生长因子β1 热休克蛋白70 热休克蛋白90

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HIF-1α、HSP90在胰腺癌组织芯片中的表达及其临床意义 被引量：2

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作者 干文娟 冯一中 李峰 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期604-609,共6页

背景与目的:胰腺癌是预后最差的恶性肿瘤之一,因此胰腺癌的基础研究对指导临床诊治具有重要意义。本研究旨在探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)与热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)在胰腺癌中的表... 背景与目的:胰腺癌是预后最差的恶性肿瘤之一,因此胰腺癌的基础研究对指导临床诊治具有重要意义。本研究旨在探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)与热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌临床病理参数的相关性,并探讨其作为预后指标的意义。方法:应用高通量的组织芯片技术和免疫组织化学方法检测88例无术前放化疗史的胰腺癌手术标本和11例非肿瘤性胰腺组织中HIF-1α和HSP90蛋白的表达情况,运用Spearman秩相关分析两者的相关性,并对随访2个月～6年的53例患者进行生存分析。结果:88例胰腺癌组织中,HIF-1α和HSP90高表达率分别为76.1%(67例)、73.9%(65例)。HIF-1α高表达与肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05),而与部位、病理分级无关(P>0.05)。HSP90高表达和胰腺癌的临床TNM分期、淋巴结转移存在相关性(P<0.01),而与肿瘤病理分级、部位和大小无相关性(P>0.05)。经Spearman秩相关分析显示,HIF-1α、HSP90在胰腺癌组织中协同表达(P<0.05)。经单因素Cox分析显示,在53例随访患者中,只有HIF-1α表达具有预后意义(P<0.05)。结论:HIF-1α、HSP90的表达与胰腺癌临床病理参数存在相关性,并且HIF-1α可作为胰腺癌的预后指标。 展开更多

关键词 胰腺癌 缺氧诱导因子-1Α 热休克蛋白90 组织芯片 免疫组织化学

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PD-L1、HSP90及HSP90α在急性白血病患者中表达及其意义 被引量：8

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作者 马新建 张付华 孙莉 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1384-1389,共6页

目的:探讨PD-L1、热休克蛋白90(HSP90)和热休克蛋白α(HSP90α)在急性白血病(AL)患者不同类型及不同疾病阶段表达情况及其临床意义。方法:选取2013年1月至2016年10月医院收治的84例急性白血病患者和选择体检健康者20例作为对照组,收集... 目的:探讨PD-L1、热休克蛋白90(HSP90)和热休克蛋白α(HSP90α)在急性白血病(AL)患者不同类型及不同疾病阶段表达情况及其临床意义。方法:选取2013年1月至2016年10月医院收治的84例急性白血病患者和选择体检健康者20例作为对照组,收集他们的血清及骨髓样本,应用ELISA法测定HSP90、HSP90α蛋白水平,流式细胞术检测PD-L1表达,分析患者临床转归与PD-L1、HSP 90和HSP90α表达的关系。结果:各组AL患者PD-L1阳性率、HSP90和HSP90α蛋白表达水平均显著高于对照组(P<0.05),缓解期患者的PD-L1阳性率、HSP90和HSP90α蛋白水平均低于初治期患者(P<0.05),复发患者的PD-L1阳性率和HSP90及HSP90α蛋白水平均高于初治及缓解期患者(P<0.05),初治AML与初治ALL患者的PD-L1阳性率、HSP90蛋白水平无显著性差异(P>0.05),初治AM L患者HSP90α蛋白水平低于初治ALL患者(P<0.05);患者经治疗后,未缓解患者PD-L1阳性率、HSP90及HSP90α蛋白水平显著高于完全缓解患者(P<0.05);未复发患者化疗过程中HSP90α蛋白表达逐渐降低,造血干细胞移植术后患者HSP90α蛋白表达最低,复发前HSP90α蛋白表达增加,复发后水平达高峰。结论:PD-L1、HSP90和HSP90α在急性白血病发展过程中发挥重要作用,可作为评估患者临床疗效及预后的参考指标。 展开更多

关键词 急性白血病 PD-L1 热休克蛋白90 热休克蛋白90Α

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生地黄提取物对膝骨关节炎兔软骨细胞凋亡的影响

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作者 杨彬 王上增 +2 位作者 杨顺 许俊杰 陶广义 《中国医学科学院学报》 北大核心 2025年第2期198-206,共9页

目的探讨生地黄提取物(RRE)调控miR-485-5p/热休克蛋白90β家族成员1(Hsp90b1)轴对膝骨关节炎(KOA)兔软骨细胞凋亡的影响。方法将新西兰兔随机分为对照组、KOA组、RRE低剂量组、RRE中剂量组、RRE高剂量组、塞来昔布组、RRE高剂量+拮抗... 目的探讨生地黄提取物(RRE)调控miR-485-5p/热休克蛋白90β家族成员1(Hsp90b1)轴对膝骨关节炎(KOA)兔软骨细胞凋亡的影响。方法将新西兰兔随机分为对照组、KOA组、RRE低剂量组、RRE中剂量组、RRE高剂量组、塞来昔布组、RRE高剂量+拮抗剂对照组、RRE高剂量+miR-485-5p拮抗剂组,每组12只。除对照组外,其他组兔均按照改良Hulth法构建KOA兔模型,建模8周后持续给药处理4周。检测兔活动评分的变化,ELISA检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6水平,番红O-固绿染色检测软骨组织病理变化并进行Mankin评分,TUNEL染色检测软骨细胞凋亡,实时荧光定量PCR检测软骨组织中miR-485-5p表达,Western blot检测软骨组织中Hsp90b1、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-485-5p与Hsp90b1的关系。结果与对照组比较,KOA组miR-485-5p表达显著降低,血清中TNF-α、IL-6水平均显著升高,软骨组织表现出明显的软骨侵蚀和丢失,活动评分、Mankin评分、软骨细胞凋亡率及Hsp90b1、活化的Caspase-3、Bax蛋白表达均显著升高(P均<0.001)。与KOA组比较,RRE低剂量组、RRE中剂量组、RRE高剂量组、塞来昔布组miR-485-5p表达均显著升高,血清中TNF-α、IL-6水平均显著降低,软骨组织病理损伤减轻,活动评分、Mankin评分、软骨细胞凋亡率及Hsp90b1、活化的Caspase-3、Bax蛋白表达均显著降低(P均<0.05)。与RRE高剂量组、RRE高剂量+拮抗剂对照组比较,RRE高剂量+miR-485-5p拮抗剂组miR-485-5p表达均显著降低,血清中TNF-α、IL-6水平均显著升高,软骨组织病理损伤加剧,活动评分、Mankin评分、软骨细胞凋亡率及Hsp90b1、活化的Caspase-3、Bax蛋白表达均显著升高(P均<0.05),miR-485-5p与Hsp90b1存在靶向调控关系。结论RRE可能通过上调miR-485-5p抑制Hsp90b1表达,进而抑制KOA兔软骨细胞凋亡。 展开更多

关键词 生地黄提取物 miR-485-5p 热休克蛋白90β家族成员1 膝骨关节炎 软骨细胞 凋亡

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茯苓酸对人胰腺癌PANC-1细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的抑制作用 被引量：9

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作者 李锐 谭晓冬 胡耀元 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期315-323,共9页

目的:探讨茯苓酸(PA)通过上调活化转录因子3(ATF3)和热休克蛋白家族A成员6(HSPA6)表达对胰腺癌PANC-1细胞迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的作用,并阐明其可能的作用机制。方法:胰腺癌PANC-1细胞分为空白对照组和不同浓度(2、5、10、20... 目的:探讨茯苓酸(PA)通过上调活化转录因子3(ATF3)和热休克蛋白家族A成员6(HSPA6)表达对胰腺癌PANC-1细胞迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的作用,并阐明其可能的作用机制。方法:胰腺癌PANC-1细胞分为空白对照组和不同浓度(2、5、10、20、30、40和50μmol·L^(-1))PA处理组,采用CCK-8法检测各组PANC-1细胞的细胞活性。不同浓度(0、10、30和50μmol·L^(-1))PA作用于PANC-1细胞,采用Transwell小室实验检测PANC-1细胞迁移和侵袭能力,Western blotting法检测PANC-1细胞中EMT相关蛋白表达水平。将10只BALB/c nude裸鼠随机分为对照组和PA组,每组5只,裸鼠皮下注射PANC-1细胞,待肿瘤体积达到60 mm3时,PA组裸鼠腹腔注射25 mg·kg^(-1)PA,对照组裸鼠注射等量生理盐水,测量肿瘤体积和瘤质量,免疫组织化学法检测各组裸鼠移植瘤组织中Ki-67表达情况。通过GEO2R软件分析GSE64111数据集中PA处理及未处理胰腺癌细胞的差异表达基因。不同浓度(0和30μmol·L^(-1))PA作用于PANC-1细胞,采用Western blotting法检测PANC-1细胞中HSPA6和ATF3蛋白表达水平。将30μmol·L^(-1)PA处理的PANC-1细胞分为si-NC组和si-ATF3组,分别转染对照siRNA和ATF3siRNA,采用Western blotting法检测各组细胞中HSPA6和ATF3蛋白及EMT相关蛋白表达水平,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果:CCK-8法,与空白对照组比较,不同浓度PA处理组PANC-1细胞的细胞活性呈浓度依赖性降低(P<0.05)。Transwell小室实验,与空白对照组比较,不同浓度PA处理组PANC-1细胞迁移能力和侵袭能力呈浓度依赖性降低(P<0.05)。Western blotting法,与空白对照组比较,不同浓度PA组PANC-1细胞中上皮钙黏素蛋白表达水平升高(P<0.05),神经钙黏素和波形蛋白表达水平降低(P<0.05)。裸鼠成瘤实验,与对照组比较,PA组裸鼠移植瘤体积和瘤质量明显降低(P<0.05);免疫组织化学,与对照组比较,PA组裸鼠移植瘤Ki-67染色较浅。GEO2R软件分析和Western blotting法,与空白对照组比较,PA处理组PANC-1细胞中HSPA6和ATF3蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。Western blotting法,与si-NC组比较,si-ATF3组PANC-1细胞中HSPA6、ATF3和上皮钙黏素蛋白表达水平明显降低(P<0.05),神经钙黏素和波形蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。Transwell小室实验,与si-NC组比较,si-ATF3组PANC-1细胞迁移和侵袭能力明显增加(P<0.05)。结论:PA通过上调HSPA6和ATF3表达抑制胰腺癌细胞迁移、侵袭和EMT,从而发挥抗胰腺癌作用。 展开更多

关键词 茯苓酸 胰腺肿瘤 PANC-1细胞 上皮间质转化 细胞迁移 细胞侵袭 活化转录因子3 热休克蛋白家族A成员6

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角膜穿通伤后炎症因子的表达特征及其在房水中相对含量的动态变化 被引量：7

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作者 黄燕 宗海洋 +3 位作者 吴滢 肖寿华 张志坚 徐三荣 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第8期731-736,共6页

目的研究角膜穿通伤后炎症因子在眼球壁的分布特征及其在房水中相对含量的动态变化,初步探讨角膜穿通伤后眼内炎的发病机制。方法清洁级成年雌性SD(Sprague Dawley)大鼠50只,随机分为正常对照组和角膜穿通伤后6h、24h、48h、72h组,每组... 目的研究角膜穿通伤后炎症因子在眼球壁的分布特征及其在房水中相对含量的动态变化,初步探讨角膜穿通伤后眼内炎的发病机制。方法清洁级成年雌性SD(Sprague Dawley)大鼠50只,随机分为正常对照组和角膜穿通伤后6h、24h、48h、72h组,每组各10只。角膜穿通伤组大鼠制作角膜穿通伤模型,分别用免疫荧光染色法检测损伤后各时间点眼球壁组织中热休克蛋白90(heat shock protein90,HSP90)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-10的组织定位;并用免疫印迹法分别检测损伤后各时间点房水中上述因子相对含量的动态变化。结果 HSP90、IL-10、TNF-α和IL-1β在正常房水和眼球组织中含量较少。HSP90于损伤后6h在房水中含量达到高峰,与其他各组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05),随后逐渐减少,免疫荧光染色结果显示其主要表达于视网膜视锥和视杆细胞层;TNF-α、IL-1β于损伤后24h在房水中达到高峰,与其他各组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05),之后逐渐减少,主要表达于角膜、睫状体、视网膜;IL-10于损伤后72h在房水中含量达到高峰,与其他各组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05),主要表达于角膜和视网膜。结论角膜穿通伤后应激反应可促使眼球局部炎症因子的表达,导致继发性炎症损伤。角膜穿通伤后应早期局部使用免疫抑制剂抑制炎症反应,保护眼球壁组织细胞。 展开更多

关键词 热休克蛋白90 白细胞介素-1Β 肿瘤坏死因子-A 白细胞介素-10 角膜穿通伤

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