腐败希瓦氏菌卵黄抗体活性片段的制备及抑菌效果的分析 被引量：3

1

作者 张茜 林洪 +2 位作者 党昕 隋建新 曹立民 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第13期75-78,82,共5页

为探讨卵黄抗体活性片段的制备方法,利用胃蛋白酶对腐败希瓦氏菌卵黄抗体进行酶解,通过高效液相色谱法动态分析酶解过程,建立了一套有效的纯化方法,并对活性片段抑菌效果进行鉴定分析。结果表明,经胃蛋白酶作用6h后,卵黄抗体被酶解为430... 为探讨卵黄抗体活性片段的制备方法,利用胃蛋白酶对腐败希瓦氏菌卵黄抗体进行酶解,通过高效液相色谱法动态分析酶解过程,建立了一套有效的纯化方法,并对活性片段抑菌效果进行鉴定分析。结果表明,经胃蛋白酶作用6h后,卵黄抗体被酶解为43000u左右及其他更小分子量的蛋白片段,且组分不再随时间发生变化。酶解混合液经Sephacryl S-100层析纯化后,即得纯度大于90%的活性蛋白片段。此蛋白片段保留了较高的抗原结合能力,且抑菌效果明显。研究为制备高纯度的卵黄抗体活性片段提供有效方法,为进一步扩大腐败希瓦氏菌卵黄抗体应用范围奠定理论基础。 展开更多

关键词 卵黄抗体 胃蛋白酶酶解 活性片段

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胸腺肽α_1活性片段和其自旋标记衍生物的合成及免疫活性研究 被引量：6

2

作者 王勤 杨金波 +2 位作者 沈剑敏 文永均 胡晓愚 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第2期214-218,共5页

报道了胸腺肽α_１活性片段Ｔｈｙｍｏｓｉｎα_１［Ｌｙｓ（２３）］（２３－２７）ＯＨ和其自旋标记衍生物的合成及对实验动物免疫功能的影响。其氨基酸序列分别为Ｈ_２Ｎ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－ＯＨ，用Ｔｈｙα... 报道了胸腺肽α_１活性片段Ｔｈｙｍｏｓｉｎα_１［Ｌｙｓ（２３）］（２３－２７）ＯＨ和其自旋标记衍生物的合成及对实验动物免疫功能的影响。其氨基酸序列分别为Ｈ_２Ｎ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－ＯＨ，用Ｔｈｙα_１［Ｌｙｓ^（２３）］表示，修饰物为Ｇｌｕ－ＯＨ），用Ｔｈｙα_１［Ｌｙｓ^（２３）］·Ｒ表示。ＨＰＬＣ测得该肽的纯度在９０％以上，ＥＳＲ谱测定自旋标记衍生物给出氮氧自由基信号，氨基酸组成与预期值相符。实验小鼠腹腔连续注射剂量为０．１、１、１０、１００和１０００μｇ／ｋｇ的该肽１０天后，发现腹腔巨噬细胞吞噬功能、ＥＲＦＣ阳性率及血清溶血素含量明显升高，且最佳剂量在０．１－１０μｇ／ｋｇ范围。实验结果表明人工合成胸腺肽α_１活性片段及其自旋标记衍生物具有显著的免疫促进活性。 展开更多

关键词 胸腺肽Α 活性片段 自旋标记 免疫活性 合成

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人sCR1活性片段原核表达载体的构建与蛋白表达及生物活性鉴定 被引量：1

3

作者 汪正清 罗雪 谭兵 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期103-103,共1页

关键词 原核表达载体 活性鉴定 蛋白表达 生物活性片段 再灌注损伤 补体系统

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含环丙甲酸类活性片段的新型二酰胺衍生物的设计、合成及生物活性 被引量：3

4

作者 陈睿嘉 冯婷婷 +2 位作者 王港澳 徐晓勇 李忠 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期248-259,共12页

为探索具有新颖结构的杀虫剂先导,将多种含环丙甲酸的活性片段引入二酰胺类杀虫剂,设计并合成了21个新型的二酰胺类衍生物,其结构均经过核磁共振波谱(NMR)及高分辨质谱(HRMS)表征。测试了所有目标衍生物对苜蓿蚜Aphis craccivora、东方... 为探索具有新颖结构的杀虫剂先导,将多种含环丙甲酸的活性片段引入二酰胺类杀虫剂,设计并合成了21个新型的二酰胺类衍生物,其结构均经过核磁共振波谱(NMR)及高分辨质谱(HRMS)表征。测试了所有目标衍生物对苜蓿蚜Aphis craccivora、东方黏虫Mythimna separate、小麦赤霉病菌Fusarium graminearum及小麦白粉病菌Blumeria graminis的生物活性。结果显示:大部分邻位二酰胺类衍生物的对两种供试病原菌的杀菌活性不够理想,而对两种害虫靶标均有良好的杀虫活性。在500 mg/L质量浓度下,衍生物10h对苜蓿蚜的致死率为90%,10k对东方黏虫的致死率达100%,这两个衍生物均可作为潜在的杀虫先导衍生物加以进一步研究。 展开更多

关键词 环丙甲酸 活性片段 二酰胺 杀虫活性

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口蹄疫病毒免疫活性串联片段FB的表达及免疫原性测定(英文) 被引量：3

5

作者 马静云 曹永长 毕英佐 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期438-442,共5页

将口蹄疫病毒 (FMDV)免疫串联片段FB克隆至原核表达载体pBAD/TOPO中 ,经鉴定后得到重组质粒pBAD FB ,将此重组质粒转化到受体菌TOP10中 ,用诱导剂阿拉伯醛糖分别以不同的浓度进行诱导 ,并在不同诱导时间进行采样 ,经处理后做SDS 聚丙烯... 将口蹄疫病毒 (FMDV)免疫串联片段FB克隆至原核表达载体pBAD/TOPO中 ,经鉴定后得到重组质粒pBAD FB ,将此重组质粒转化到受体菌TOP10中 ,用诱导剂阿拉伯醛糖分别以不同的浓度进行诱导 ,并在不同诱导时间进行采样 ,经处理后做SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)、蛋白质印迹分析 .结果发现以终浓度为 0 0 0 2 %的阿拉伯醛糖进行诱导 ,4h后表达可达到高峰 ,其大小约为 2 6ku ,软件扫描结果显示 ,FB融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的 2 8 9% ,能与抗FMDV抗体发生特异性反应 ,融合蛋白以包涵体和可溶形式存在 .将融合蛋白的可溶性组分用 5 0 %Ni NTA树脂过柱纯化并抽提融合蛋白的包涵体 ,经过洗涤后分别制成油乳剂疫苗 ,经皮下注射免疫豚鼠 ,用乳鼠中和试验测定豚鼠血清中和指数 ,并用口蹄疫病毒对豚鼠进行攻毒 .结果表明 ,用此融合蛋白的纯化产物和包涵体免疫豚鼠能诱导产生高滴度的中和抗体 ,对病毒的攻击提供 10 0 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 免疫活性串联片段 表达 免疫原性

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FMDV免疫活性串联片段FA的表达及免疫原性测定

6

作者 马静云 曹永长 +2 位作者 毕英佐 刘铀 马现永 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期298-300,306,共4页

将口蹄疫病毒免疫串联片段FA克隆至原核表达载体pBAD/TOPO中 ,经鉴定后得到重组质粒pBAD_FA ,将此重组质粒转化到受体菌TOP10中 ,用诱导剂阿拉伯醛糖分别以不同的浓度进行诱导 ,并在不同诱导时间进行采样 ,经处理后做SDS_PAGE、Westernb... 将口蹄疫病毒免疫串联片段FA克隆至原核表达载体pBAD/TOPO中 ,经鉴定后得到重组质粒pBAD_FA ,将此重组质粒转化到受体菌TOP10中 ,用诱导剂阿拉伯醛糖分别以不同的浓度进行诱导 ,并在不同诱导时间进行采样 ,经处理后做SDS_PAGE、Westernblot分析。结果发现以终浓度为 0 0 0 2 %的阿拉伯醛糖进行诱导 ,4h后表达可达到高峰 ,其大小约为 2 3kD ,软件扫描结果显示 ,FB融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的 2 9 3% ,能与抗FMDV抗体发生特异性反应 ,融合蛋白以包涵体和可溶形式存在。将融合蛋白的可溶性组分用 5 0 %Ni_NTA树脂过柱纯化并抽提融合蛋白的包涵体 ,经过洗涤后分别制成油乳剂疫苗 ,经皮下注射免疫豚鼠 ,用乳鼠中和试验测定豚鼠血清中和指数 ,并用口蹄疫病毒对豚鼠进行攻毒。结果表明 ,用此融合蛋白可溶部分的纯化产物和包涵体免疫豚鼠能诱导产生高滴度的中和抗体 ,对病毒的攻击分别提供 10 0 %和 75 展开更多

关键词 FMDV 免疫活性串联片段 表达 免疫原性

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FMDV免疫活性串联片段FB与T4噬菌体SOC基因的融合表达

7

作者 马静云 刘忆云 +3 位作者 曹永长 陈晓春 谢青梅 毕英佐 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2006年第5期3-6,共4页

将FM DV免疫活性串联片段FB的cDNA片段插入表达质粒pSOC的E coRⅠ位点,获得重组质粒pSOC-FB。用pSOC-FB转化E.coli BL 21(DE 3),获得表达FB蛋白的工程菌BL-SOC-FB。在1μg/m l IPTG诱导之下,BL-SOC-FB表达了融合蛋白SOC-FB,其分子量为19... 将FM DV免疫活性串联片段FB的cDNA片段插入表达质粒pSOC的E coRⅠ位点,获得重组质粒pSOC-FB。用pSOC-FB转化E.coli BL 21(DE 3),获得表达FB蛋白的工程菌BL-SOC-FB。在1μg/m l IPTG诱导之下,BL-SOC-FB表达了融合蛋白SOC-FB,其分子量为19 ku。SDS-PAGE检测表明,融合蛋白SOC-FB的最大表达量为细菌总量的24.5%。W estern b lot分析表明,大肠杆菌表达的SOC-FB能与FM DV阳性血清发生特异性反应。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 免疫活性串联片段 SOC基因 融合表达

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嗜麦芽单胞菌AT18的染色体DNA高活性启动子的克隆

8

作者 刘变芳 阿萨斯 郭蔼光 《西北农业学报》 CAS CSCD 2004年第1期18-23,共6页

将从嗜麦芽单胞菌AT18的染色体DNA获得一段约1.4kb的DNA片段克隆进启动子探针载体pKK232-8,转化大肠杆菌HB101获得重组质粒PAS1(具有很强启动活性),可抗Cm达1000μg/mL。实验采用亚克隆技术,经过提取质粒、酶切、电泳、回收、连接等步... 将从嗜麦芽单胞菌AT18的染色体DNA获得一段约1.4kb的DNA片段克隆进启动子探针载体pKK232-8,转化大肠杆菌HB101获得重组质粒PAS1(具有很强启动活性),可抗Cm达1000μg/mL。实验采用亚克隆技术,经过提取质粒、酶切、电泳、回收、连接等步骤将该有启动活性的插入片段缩小,欲获得一段有强的启动功能的最小活性片段。首先通过单酶切图谱发现该插入片段上有3个单酶切位点即kpnI、Bgl 和PstI;再将双酶切所得各DNA片段设计为不同的方案,或直接连接,或末端补平连接,或亚克隆处理,以启动子探针质粒pKK232-8为载体,转化大肠杆菌HB101,利用氯霉素平板筛选重组质粒。结果表明,该插入片段的活性功能存在于Kpn1和Hind 双酶切所得的一段约300bp的DNA片段,将该小片段进行亚克隆所得重组质粒PAS1-3仍有很强的Cm抗性。 展开更多

关键词 嗜麦芽假单胞菌AT18 启动子 高活性片段 亚克隆技术

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细胞外基质磷酸糖蛋白及其重要的结构片段 被引量：1

9

作者 周晓燕 韦曦 《国际口腔医学杂志》 CAS 2009年第3期326-328,331,共4页

细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)是一种细胞外基质的非胶原性磷酸化糖蛋白,主要表达于骨组织、牙组织和肾近球小管中,在骨形成矿化以及调节磷吸收方面发挥重要作用。酸性丝氨酸-天冬氨酸-富集细胞外基质磷酸糖蛋白相关性基序与细胞外基质磷... 细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)是一种细胞外基质的非胶原性磷酸化糖蛋白,主要表达于骨组织、牙组织和肾近球小管中,在骨形成矿化以及调节磷吸收方面发挥重要作用。酸性丝氨酸-天冬氨酸-富集细胞外基质磷酸糖蛋白相关性基序与细胞外基质磷酸糖蛋白活性片段/AC-100多肽是MEPE的重要结构域,其生物学功能是近来研究的热点。 展开更多

关键词 细胞外基质磷酸糖蛋白 酸性丝氨酸-天冬氨酸-富集细胞外基质磷酸糖蛋白相关性基序 细胞外基质磷酸糖蛋白活性片段/AC-100多肽 矿化

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含三氟甲基吡啶结构农药研究进展

10

作者 薄琳 叶非 +1 位作者 于清锋 付颖 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1037-1052,共16页

基于有效片段重组是新农药创制的重要策略之一。三氟甲基吡啶是农药中常见的结构片段,也是近年来被广泛关注的农药活性亚结构,其衍生物通常具有特殊的生物活性。本文总结了目前已商品化的含三氟甲基吡啶片段的农药,并综述了近三年国内... 基于有效片段重组是新农药创制的重要策略之一。三氟甲基吡啶是农药中常见的结构片段,也是近年来被广泛关注的农药活性亚结构,其衍生物通常具有特殊的生物活性。本文总结了目前已商品化的含三氟甲基吡啶片段的农药,并综述了近三年国内外具有生物活性的三氟甲基吡啶衍生物的研发情况,为新农药创制提供结构设计依据。 展开更多

关键词 活性片段 三氟甲基吡啶衍生物 新农药创制 分子设计 生物活性

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鸡恒定链协助抗原肽结合MHCⅡ类分子并进入细胞内吞体 被引量：5

11

作者 陈芳芳 张旭 +2 位作者 谭红黎 桂亚萍 余为一 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期398-405,共8页

为探明鸡恒定链(invariant chain,Ii)的胞质区/跨膜区[Ii(Cyt/Tra)]作为载体是否可携带抗原肽在细胞内结合MHCⅡ类分子和进入转运途径的细胞器(内吞体),构建4个基因目的片段[Ii、Ii(Cyt/Tra)、F2(新城疫病毒F蛋白片段)和Ii(Cyt/Tra)/F2]... 为探明鸡恒定链(invariant chain,Ii)的胞质区/跨膜区[Ii(Cyt/Tra)]作为载体是否可携带抗原肽在细胞内结合MHCⅡ类分子和进入转运途径的细胞器(内吞体),构建4个基因目的片段[Ii、Ii(Cyt/Tra)、F2(新城疫病毒F蛋白片段)和Ii(Cyt/Tra)/F2],分别将它们插入原核表达载体pET-32a和真核表达载体pmCherry-C1/N1中,构建8个重组质粒,再转入工程菌(E.coli)和人肾细胞系(293T),并应用拉下法(pull-down)检测目的蛋白与MHCⅡβ的结合,应用激光共聚焦确定它们在真核细胞与MHCⅡβ的共定位以及在内吞体的定位。结果表明,构建的重组质粒均能相应地原核或真核表达相应目的蛋白;Ii、Ii(Cyt/Tra)和Ii(Cyt/Tra)/F2不仅能够与MHCⅡβ结合,还能进入细胞内吞体;但是F2既不能与MHCⅡβ结合,也不能进入内吞体。Ii活性片段Cyt/Tra不仅本身具有结合MHCⅡβ的作用,而且还可以携带抗原肽与之结合并一起转入细胞内吞体而进入抗原递呈途径。该结果为进一步研究Ii载体转运抗原提供了理论依据。 展开更多

关键词 II 活性片段 免疫载体 内吞体 抗原递呈

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鱼类抗菌肽的研究进展 被引量：3

12

作者 王玉堂 《中国水产》 2016年第9期82-85,共4页

在治疗动物的细菌性、病毒性等疾病过程中,某些病原体会逐渐对药物产生较强的耐药性（抗药性）而无法有效治疗或控制。研发新型抗生素的周期长（一般为30年）、难度大、费用高,而且因水产养殖业中抗生素耐药菌株的出现速度远超过抗生素... 在治疗动物的细菌性、病毒性等疾病过程中,某些病原体会逐渐对药物产生较强的耐药性（抗药性）而无法有效治疗或控制。研发新型抗生素的周期长（一般为30年）、难度大、费用高,而且因水产养殖业中抗生素耐药菌株的出现速度远超过抗生素的研发速度,且现有的抗生素开发策略多局限于既有的抗生素类别,难以有实质性的突破。抗感染形势的严峻性迫切需要寻找出与现有的抗生素机理完全不同的新型抗菌物质。抗菌肽的发现, 展开更多

关键词 抗菌肽基因 抗生素类 成熟肽 抗生素耐药菌 新型抗生素 氨基酸残基 活性片段 信号肽 Β-防御素 硫键

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猪多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素亚单位蛋白的制备及免疫原性研究 被引量：1

13

作者 何海 郝成武 +3 位作者 凌晨 张飞 候凤 贺笋 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第11期3396-3403,共8页

为获得针对猪萎缩性鼻炎主要病原体——多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素的高免疫原性抗原,本试验构建、表达并验证该毒素的亚单位蛋白抗原,将猪多杀性巴氏杆菌毒素PMT基因与pMD19-T载体进行连接、转化,经序列分析鉴定后,分别使用Bam HⅠ、Hi... 为获得针对猪萎缩性鼻炎主要病原体——多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素的高免疫原性抗原,本试验构建、表达并验证该毒素的亚单位蛋白抗原,将猪多杀性巴氏杆菌毒素PMT基因与pMD19-T载体进行连接、转化,经序列分析鉴定后,分别使用Bam HⅠ、Hin dⅢ与BlpⅠ限制性内切酶将其酶切为3个基因片段。将片段1(Tox1)、片段2(Tox2)和片段3(Tox3)分别亚克隆至原核表达载体pET32-b、pET32-a和pET32-b中,构建3个重组表达载体。将重组表达载体转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,分别进行SDS-PAGE与Western blotting检测,并使用小鼠与豚鼠初步研究其免疫原性。结果显示,构建的3个基因片段长度分别为776、409与410 bp,与GenBank中相关序列具有高度同源性;3个蛋白片段表达正常,表达量分别达到379.95、447.62与459.82μg/mL,SDS-PAGE验证条带分别为75、77与53 ku;因3个片段位置不同,仅Tox3有Western blotting检测条带,与理论预测相符;使用3种表达蛋白免疫小鼠与豚鼠后,二免后14 d,血清经试剂盒检测阳性率达到100%,对二免后14 d小鼠攻毒保护率达到93%。本研究成功构建了PMT的3个亚单位活性片段,且具有较好的免疫原性。 展开更多

关键词 多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素 亚单位活性片段 免疫原性

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Intermedin是一种新发现的促血管生长因子

14

作者 赵蕾 齐永芬 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期247-247,共1页

Intermedin（IMD）是一种新发现的降钙素基因相关肽家系的活性肽。其前体由148个氨基酸残基组成，在体内可进一步剪切为含47个氨基酸的IMD1-47、含40个氨基酸的IMD8-47以及含53个氨基酸的IMD1-53活性片段。免疫组织化学研究表明，IMD在... Intermedin（IMD）是一种新发现的降钙素基因相关肽家系的活性肽。其前体由148个氨基酸残基组成，在体内可进一步剪切为含47个氨基酸的IMD1-47、含40个氨基酸的IMD8-47以及含53个氨基酸的IMD1-53活性片段。免疫组织化学研究表明，IMD在下丘脑、肾脏和胃肠道及心血管组织均有表达， 展开更多

关键词 血管生长因子 氨基酸残基 降钙素基因相关肽 心血管组织 活性片段 化学研究 免疫组织 活性肽

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酶工程

15

《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第6期64-75,共12页

绳状青霉(Penicillium runiculosum)NRRL 13033在麦秆上生长时产生卜葡糖普酶和刀一木糖昔酶.测定了向发酵培养基中加人诱导物(草酸、唬拍酸和柠檬酸,单独或相互组合)对酶生产的影响,在含有草酸的培养基中得到培养滤液中最高的蛋白质含量.

关键词 酶工程 培养滤液 绳状青霉 诱导物 活性片段 蛋白质含量 芽抱杆菌 基因克隆 酶固定化 催化抗体

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酶和发酵工程

16

《生物技术通报》 CAS CSCD 1989年第11期48-75,共28页

893417 大肠杆菌表达的人类3-羟基-3-甲基戊二酸单酰-CoA-还原酶催化域的提纯和特性[英]/Mayer,R.J.…//Arch.Biochem.Biophys.-1988,267(1).-110～118[译自 DBA,1989,8(7),89-04129]

关键词 大肠杆菌表达 葡聚糖酶 巴斯德毕赤酵母 木聚糖酶基因 酵母发酵 脱水酶 甲基营养酵母 活性片段 虫荧光素酶 发酵工程

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