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PCR(聚合酶链式反应)仪温度特性的实验研究与分析 被引量:4
1
作者 程远霞 魏燕 +3 位作者 刘宝林 华泽钊 陈颖 鲍彩丽 《仪表技术与传感器》 CSCD 北大核心 2009年第1期31-34,共4页
该文的目的是测量PCR温度的精确性和PCR仪上孔间以及不同循环和不同次测量的温度均一性。PCR程序:95℃(变性),30 s;55℃(退火),40 s;72℃(延伸),50 s;6个循环。孔和管内的温度重复性都很好;变性阶段,孔和管内液体温度与程序温度偏差较大... 该文的目的是测量PCR温度的精确性和PCR仪上孔间以及不同循环和不同次测量的温度均一性。PCR程序:95℃(变性),30 s;55℃(退火),40 s;72℃(延伸),50 s;6个循环。孔和管内的温度重复性都很好;变性阶段,孔和管内液体温度与程序温度偏差较大,孔及管内的温度均一性和重复性均很好;孔内温度不能达到通常所需的温度(90℃以上)的比例为22.2%。退火和延伸阶段孔和管内的温差较小;有2个孔不能达到通常需要的温度。实际温度在各阶段停留的时间分别占设定时间的90%的比例较低。这些缺陷可能导致扩增结果假阳性或假阴性。 展开更多
关键词 聚合链式反应 pcr 临床检验 温度偏差 温度均一性
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常用聚合酶链式反应(PCR)技术概述 被引量:3
2
作者 谢德平 廖宇静 《生物学教学》 北大核心 2009年第2期8-10,共3页
聚合酶链式反应(PCR)技术在过去20多年中,经过不断改良以及与其他研究手段相结合,如今已发展为有数十种之多研究方法的一套技术手段。本文对较常用的几种PCR技术手段的原理、优点、缺点和应用等作了概述。
关键词 聚合链式反应 pcr技术 生物学 扩增
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聚合酶链式反应(PCR)技术在植物病害诊断中的应用 被引量:2
3
作者 邓晓东 刘志昕 郑学勤 《热带农业科学》 1998年第4期48-53,共6页
PCR技术是一项崭新的体外扩增基因的技术 ,已广泛应用于与生命相关的学科的研究。本文从植物病害检测的角度 ,探讨如何应用PCR技术来进行植物病害的检测。
关键词 植物病害 检测 pcr技术 聚合链式反应
全文增补中
聚合酶链式反应(PCR)技术鉴定啤酒腐败菌的最新进展 被引量:9
4
作者 徐岩 张丽苹 顾国贤 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期71-74,共4页
综述了PCR技术在啤酒腐败细菌鉴定方面的应用及最新进展 ;介绍了 3种PCR技术 ,特别讲述了利用这些技术对啤酒中乳酸菌的鉴定 ;并分析了PCR技术的局限性 ,对其应用前景进行了展望。
关键词 聚合 链式反应技术 腐败菌 鉴定 啤酒 pcr技术
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聚合酶链式反应(PCR)的原理和应用 被引量:3
5
作者 林炳辉 吕婷云 《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第5期1-5,共5页
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是最近几年在分子生物学领域中一项具有革命性的技术突破.这项新兴的生物技术非常迅速地形成常规的标准程序,为科学家提供了从微量的生物材料中快速得到大量特定遗传物质的实验手段,因而... 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是最近几年在分子生物学领域中一项具有革命性的技术突破.这项新兴的生物技术非常迅速地形成常规的标准程序,为科学家提供了从微量的生物材料中快速得到大量特定遗传物质的实验手段,因而PCR技术在基础研究、医学、生物工程学和法医学等许多领域都有着重要的实际应用价值,并对原先建立的分子杂交、序列分析、基因克隆等现代分子生物学技术的发展给以巨大的推动作用。 展开更多
关键词 聚合链式反应 pcr DNA POLYMERASE 生物工程学 基因分析 生物材料 基因克隆 实验手段 拷贝数
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易错PCR技术提高中性内切葡聚糖酶活性 被引量:6
6
作者 唐自钟 刘姗 +6 位作者 韩学易 姚友旭 刘默洋 陈惠 晋海军 吴琦 单志 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期754-761,共8页
近年来随着纤维素酶在食品加工工业中具有广阔应用前景,而纤维素酶的工业应用一直受酶活性低,成本高的限制。为了提高中性内切葡聚糖酶的活性,作者利用易错PCR技术对来自枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)C-36的内切葡聚糖酶基因进行... 近年来随着纤维素酶在食品加工工业中具有广阔应用前景,而纤维素酶的工业应用一直受酶活性低,成本高的限制。为了提高中性内切葡聚糖酶的活性,作者利用易错PCR技术对来自枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)C-36的内切葡聚糖酶基因进行定向进化研究,构建了在大肠杆菌中的突变体库。通过刚果红平板筛选,获得了酶活性提高的突变株F-10,活力比亲本酶提高4.2倍。序列分析表明:F-10有5个碱基发生突变,两个氨基酸突变:D212V和T307S。SDSPAGE条带,表明基因表达正确,而表达量较原始菌株显著增加。酶学性质分析,表明该酶的最适反应pH为5.6,最适反应温度为45℃,在pH 4.5~10.0范围内50℃保温30 min可保持80%的剩余酶活,在60~75℃酶活力相对稳定,可保持在最高酶活的80%以上,当温度高于75℃时,酶开始变性失活,酶活力迅速下降。研究获得了酶活性提高的内切葡聚糖酶菌株,为进一步在分子水平研究内切葡聚糖酶的功能和其应用打下了基础,也为高酶活酶分子在其他高表达系统的表达提供了基础材料。 展开更多
关键词 枯草芽胞杆菌 内切葡聚糖 易错pcr 学性质
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微流控实时荧光聚合酶链式反应成像非均匀性的校正 被引量:5
7
作者 刘勇 钱鸿鹄 +2 位作者 朱灵 赵树弥 张龙 《光学精密工程》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第8期2161-2168,共8页
综合参考标样法和定标校正法的思想,提出了一种用于校正微流控实时荧光聚合酶链式反应(PCR)系统荧光成像非均匀性的"多目标像素区域定标线性校正"算法,以提高其检测结果的准确性。以与PCR荧光标记物SYBR Green光谱特性相似的... 综合参考标样法和定标校正法的思想,提出了一种用于校正微流控实时荧光聚合酶链式反应(PCR)系统荧光成像非均匀性的"多目标像素区域定标线性校正"算法,以提高其检测结果的准确性。以与PCR荧光标记物SYBR Green光谱特性相似的荧光素钠溶液为样本,检测了11种不同浓度的均匀荧光素钠溶液受激发射荧光信号的强度,分析了各个目标像素区域荧光强度和荧光素钠溶液浓度之间的线性响应关系,采用两点定标校正方法计算了CCD各个目标像素区域的校正系数矩阵。实验表明,3种浓度荧光素钠溶液的成像均匀度分别从校正前的71.28%、72.01%、70.73%提高到校正后的77.49%、80.07%、90.64%;微流控四腔芯片中相同浓度的DNA样品在PCR扩增阶段的Ct值相对标准偏差由校正前的4.38%、1.94%、3.31%减小到校正后的2.44%、0.79%、1.31%,显著提高了微流控实时荧光PCR检测结果的准确性。 展开更多
关键词 微流控 聚合链式反应pcr 成像非均匀 非均匀性校正 荧光检测
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聚合酶链式反应技术的研究进展 被引量:4
8
作者 王文君 任军 +2 位作者 陈克飞 丁能水 黄路生 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 2000年第4期599-604,共6页
聚合酶链式反应技术自诞生以来 ,已在生物学及相关学科中得到了广泛应用 ,并得以不断的深入和发展。本文就近年来研究和发展出现的一些特殊PCR技术 ,如 :逆转录PCR、反向PCR、定量PCR、锚定PCR、重组PCR、长PCR、热起动PCR、免疫PCR、复... 聚合酶链式反应技术自诞生以来 ,已在生物学及相关学科中得到了广泛应用 ,并得以不断的深入和发展。本文就近年来研究和发展出现的一些特殊PCR技术 ,如 :逆转录PCR、反向PCR、定量PCR、锚定PCR、重组PCR、长PCR、热起动PCR、免疫PCR、复合PCR、差向显示PCR等作一简述 ,以供参考。 展开更多
关键词 pcr 聚合链式反应技术 研究进展
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硅-玻璃聚合酶链式反应微芯片对β-葡糖苷酸酶基因的扩增 被引量:6
9
作者 邹志青 周天 +1 位作者 赵建龙 徐元森 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第1期41-46,共6页
聚合酶链式反应 (PCR)微芯片是基于微机电系统 (MEMS)制作 ,在微芯片上进行PCR反应 ,实现生物样品扩增的一项新技术 .介绍了硅 玻璃PCR微芯片的设计和制作、微反应腔的清洗和表面处理、借助外置温度控制系统进行PCR扩增反应以及扩增产... 聚合酶链式反应 (PCR)微芯片是基于微机电系统 (MEMS)制作 ,在微芯片上进行PCR反应 ,实现生物样品扩增的一项新技术 .介绍了硅 玻璃PCR微芯片的设计和制作、微反应腔的清洗和表面处理、借助外置温度控制系统进行PCR扩增反应以及扩增产物在琼脂糖凝胶电泳下的检测分析 ,实现了对 β 葡糖苷酸酶 (GUS)基因的有效扩增 ,扩增时间由原来的 90min缩短到现在的 37min . 展开更多
关键词 pcr微芯片 MEMS技术 表面处理 硅-玻璃聚合链式反应 生物芯片技术
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易错PCR定向进化大幅度提高极耐热β-葡聚糖酶的活性 被引量:5
10
作者 吴华伟 张展 +1 位作者 李相前 李迅 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1-4,共4页
采用易错PCR方法对来自于极耐热海栖热袍菌的内切葡聚糖酶Cel1B进行定向进化。携带有Cel12B基因的重组质粒pET-20b-Cel12B在固定Mn2+浓度下,通过使用不同浓度的Mg2+优化易错PCR条件,产物构建成pET-20b-Mu-Cel12B重组子,并建立突变体文库... 采用易错PCR方法对来自于极耐热海栖热袍菌的内切葡聚糖酶Cel1B进行定向进化。携带有Cel12B基因的重组质粒pET-20b-Cel12B在固定Mn2+浓度下,通过使用不同浓度的Mg2+优化易错PCR条件,产物构建成pET-20b-Mu-Cel12B重组子,并建立突变体文库,重组子经改进的刚果红平板法筛选,通过透明圈的大小获得了酶活性大幅度提高的突变体3个,突变基因经诱导后的酶活力分别是在同样条件下诱导获得的亲本酶的2.1倍、3.2倍和3.7倍。 展开更多
关键词 内切β-葡聚糖 易错pcr筛选
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动物园猫瘟热净化的新手段——聚合酶链式反应 被引量:3
11
作者 邱薇 夏咸柱 +7 位作者 范泉水 何洪彬 黄耕 余春 乔军 武银莲 范秀军 王春华 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第5期14-15,共2页
关键词 动物园 猫瘟病毒 热净化 聚合链式反应 pcr技术
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易错PCR技术提高嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL催化活性的研究 被引量:1
12
作者 曾静 郭建军 袁林 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第18期130-136,共7页
嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL在液化条件下可完全水解淀粉为淀粉糖,在“液化糖化一步法”的淀粉制糖工艺中具有巨大的应用潜力。本研究拟采用易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术提高TK-PUL的催化活性。经过两轮... 嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL在液化条件下可完全水解淀粉为淀粉糖,在“液化糖化一步法”的淀粉制糖工艺中具有巨大的应用潜力。本研究拟采用易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术提高TK-PUL的催化活性。经过两轮易错PCR及高通量筛选,获得了催化活性提高的突变体L538D。与TK-PUL相比,L538D以可溶性淀粉为底物的比酶活力提高了50%,以普鲁兰多糖为底物的比酶活力提高了21%;L538D以可溶性淀粉、普鲁兰多糖为底物的k/K值分别提高了44%、27%。即L538D的α-1,4-糖苷键水解活性和α-1,6-糖苷键水解活性均明显提高,并且其α-1,4-糖苷键水解活性的提高幅度更大。同源模建得到的蛋白质分子结构显示,将TK-PUL中Leu538替换为Asp,可能通过缩短氨基酸残基侧链的长度和减弱氨基酸残基的疏水性,提高了催化活性位点Glu538所在loop结构的柔性,从而提高酶的催化活性。本研究结果表明,TK-PUL中Leu538是影响其催化活性的重要氨基酸残基。 展开更多
关键词 Ⅲ型普鲁兰多糖水解 定向进化 易错聚合链式反应(易错pcr) 高通量筛选技术 催化活性本
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聚合酶链式反应检测猪细小病毒方法的研究 被引量:7
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作者 戎伟 杨润德 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期465-467,共3页
本研究依据编码猪细小病毒结构蛋白VP2基因序列,合成了一对寡核苷酸引物,通过减少病毒核酸的提取时间、费用及优化聚合酶链式反应(PCR)的条件,成功地从猪细小病毒(PPV)感染的细胞中扩增出预期的158bp片段,经EcoRⅠ酶切鉴定,证实了该扩... 本研究依据编码猪细小病毒结构蛋白VP2基因序列,合成了一对寡核苷酸引物,通过减少病毒核酸的提取时间、费用及优化聚合酶链式反应(PCR)的条件,成功地从猪细小病毒(PPV)感染的细胞中扩增出预期的158bp片段,经EcoRⅠ酶切鉴定,证实了该扩增片段的特异性。经敏感性试验测定,PCR的最低检出量为0 008病毒血凝(HA)单位。这些结果表明本试验建立的PCR对PPV的检测人有快速、简便、经济、灵敏度高和特异性强的特点。 展开更多
关键词 聚合链式反应 特异性 pcr 病毒核酸 血凝 HA 感染 猪细小病毒 PPV 扩增片段
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应用聚合酶链式反应检测细胞培养物和细胞培养用小牛血清支原体污染 被引量:2
14
作者 郭玉广 南文龙 +6 位作者 张春艳 宫晓 李金积 张文学 李明义 范根成 杜元钊 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2005年第7期30-32,共3页
支原体污染是细胞培养中普遍存在的突出问题,直接影响细胞培养的成败以及以细胞培养为基础的科学实验结果的准确性。本试验用聚合酶链式反应(套式PCR)对实验室中生长不良的3种细胞系、11种细胞培养用小牛血清进行了检测。结果显示,3种... 支原体污染是细胞培养中普遍存在的突出问题,直接影响细胞培养的成败以及以细胞培养为基础的科学实验结果的准确性。本试验用聚合酶链式反应(套式PCR)对实验室中生长不良的3种细胞系、11种细胞培养用小牛血清进行了检测。结果显示,3种细胞系的第一次PCR扩增结果为全部为阳性,检出率为100%;11种细胞培养用小牛血清第一次PCR扩增后8种样品为阳性,对第一次PCR扩增为阴性的血清样品进行第二次PCR扩增结果全部为阳性,检出率100%。传统的支原体检测繁琐、费时、周期长而受到限制,本试验使用的套式PCR法为细胞培养工作中检测支原体污染提供了一种敏感、快速、特异的方法。 展开更多
关键词 聚合链式反应 支原体污染 牛血清 细胞培养物 检测 pcr扩增 应用 科学实验 直接影响 生长不良 血清样品 培养工作 pcr 细胞系 检出率 准确性 实验室 阳性 试验
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使用中的聚合酶链式反应仪的温度分布及维护 被引量:5
15
作者 娄沂春 《实验室研究与探索》 CAS 2001年第2期109-111,共3页
聚合酶链式反应仪 ( PCR仪 )是分子生物学的基本仪器。它通过设定不同温度变化条件对被扩增的 DNA片段进行变性、退火和聚合处理 ,以达到将 DNA片段的量成倍地扩增的目的。因此温度的分布和准确程度 ,尤其是各个温度的时间控制直接影响 ... 聚合酶链式反应仪 ( PCR仪 )是分子生物学的基本仪器。它通过设定不同温度变化条件对被扩增的 DNA片段进行变性、退火和聚合处理 ,以达到将 DNA片段的量成倍地扩增的目的。因此温度的分布和准确程度 ,尤其是各个温度的时间控制直接影响 DNA片段扩增的效率。通过定期对使用中的 PCR仪进行检测 ,可以了解仪器的工作状况 ,及时发现问题并加以维护、保养。 展开更多
关键词 聚合链式反应 温度分布 pcr 分子生物学 DNA 仪器维护 PE480型仪器
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聚合酶链式反应技术在生物学及医学中的应用
16
作者 王静波 胡长龙 徐宏发 《生物学教学》 北大核心 2001年第6期3-5,共3页
关键词 聚合链式反应技术 生物学 医学 DNA pcr技术 技术原理 组织器官移植 配型选择 传染病诊断
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易错PCR技术提高黑曲霉N25植酸酶活力的研究 被引量:6
17
作者 冯慧玲 李春梅 +1 位作者 吴振芳 陈惠 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期226-230,共5页
利用易错PCR技术对黑曲霉(Aspergillus niger)N25的植酸酶基因phyA进行定向进化研究,突变基因产物重组于表达载体pET32a(+)中,并导入大肠杆菌BL21(DE3)构建突变体文库,经筛选获得了最佳突变菌株pET32a-phyAep,其植酸酶活力比出发酶提高... 利用易错PCR技术对黑曲霉(Aspergillus niger)N25的植酸酶基因phyA进行定向进化研究,突变基因产物重组于表达载体pET32a(+)中,并导入大肠杆菌BL21(DE3)构建突变体文库,经筛选获得了最佳突变菌株pET32a-phyAep,其植酸酶活力比出发酶提高了41.8%。突变酶的酶学性质研究发现,与野生酶相比,它的热稳定性,最适温度和最适pH值无显著变化。 展开更多
关键词 植酸 定向进化 易错pcr 活力
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食品中荧光假单胞菌聚合酶链式反应检测体系的建立和评价 被引量:2
18
作者 杨一林 周敏 +2 位作者 施春雷 杨捷琳 史贤明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第20期185-190,共6页
建立用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测食品中荧光假单胞菌的方法。分别针对16~23S rRNA基因间隔区序列、gyrB基因以及通过生物信息学方法发掘到的4个种特异性基因设计6对检测引物,通过初步特异性实验,筛选出一对... 建立用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测食品中荧光假单胞菌的方法。分别针对16~23S rRNA基因间隔区序列、gyrB基因以及通过生物信息学方法发掘到的4个种特异性基因设计6对检测引物,通过初步特异性实验,筛选出一对种特异性最佳的引物。最终建立以gyrB基因为检测靶点的PCR扩增体系,并对体系进行系统评价。结果表明:该方法可特异检测荧光假单胞菌的存在,纯DNA检测灵敏度为14.9fg/μL(2~3拷贝/μL),纯培养物检测灵敏度为2.8×102CFU/mL。豆奶样品经15h充分增菌可提高检测灵敏度至0.28CFU/25g。 展开更多
关键词 荧光假单胞菌 gyrB基因 聚合链式反应(pcr) 检测 食品
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普通聚合酶链式反应鉴定牛肉及其制品中的牛源性成分 被引量:3
19
作者 陈晓宇 陆利霞 +2 位作者 熊雄 刘元建 熊晓辉 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期215-222,共8页
依据牛种属的线粒体细胞色素b(cytochrome b,Cytb)基因上的保守序列设计牛源特异性引物对,建立一种特异性强、灵敏性高、耗时短的鉴定食品中牛源性成分的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法。选取牦牛、水牛、黄牛品种... 依据牛种属的线粒体细胞色素b(cytochrome b,Cytb)基因上的保守序列设计牛源特异性引物对,建立一种特异性强、灵敏性高、耗时短的鉴定食品中牛源性成分的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法。选取牦牛、水牛、黄牛品种及羊、猪、鸡、鸭、鹅、兔、马、驴、鱼、大豆、玉米等动植物源成分进行特异性试验。结果显示:所建立的方法高度特异于牛源性检测,其他非牛动植物源成分均无扩增条带。采用常见的牛品种进行灵敏性试验,结果显示所建立的方法可检测到的最低牛DNA量为0. 2 pg;将牛肉分别与猪肉、驴肉、羊肉、大豆组织混合进行PCR测定,结果表明最低检测限为鲜样品含0. 01%质量分数的牛源成分,高压121℃、0. 1MPa,20 min处理样品含0. 01%质量分数的牛源成分。对市售食品中牛源性成分检测结果与现行PCR牛源性成分检测标准方法的检测结果 100%一致。 展开更多
关键词 聚合链式反应(pcr) 细胞色素b(Cytb)基因 牛源性成分 鉴定
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硅对聚合酶链式反应抑制作用的实时定量实验研究 被引量:1
20
作者 雷银花 王玮 +1 位作者 王海滨 李志宏 《传感技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期203-206,共4页
采用实时定量PCR的方法研究了硅表面对乙肝病毒(HBV)DNA扩增过程的抑制作用。实验中采用HF处理的H终止硅和与自然氧化的硅片作为样品,按照1.0mm2/μL和5.2mm2/μL的面体比(硅片总表面积与PCR反应液的体积之比)与PCR反应液预混合(未加DN... 采用实时定量PCR的方法研究了硅表面对乙肝病毒(HBV)DNA扩增过程的抑制作用。实验中采用HF处理的H终止硅和与自然氧化的硅片作为样品,按照1.0mm2/μL和5.2mm2/μL的面体比(硅片总表面积与PCR反应液的体积之比)与PCR反应液预混合(未加DNA样品,同时,TaqDNA聚合酶的浓度分别为0.2U/35μL和1.0U/35μL),充分混合预设的时间后,取出硅片,汲取上清液与DNA样品混合后采用实时定量PCR仪SlanTM进行扩增。扩增结果的荧光曲线表明:自然氧化的硅样品对PCR抑制作用更强,其对Taq聚合酶的抑制效果大于4.4mU/mm2;高面体比条件下,即使在初始扩增阶段,也达不到理想的指数形式;缩短芯片反应时间有利于降低材料对扩增的抑制效应。 展开更多
关键词 硅抑制作用 聚合链式反应 实时定量pcr
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