富含亮氨酸重复激酶2在神经病理性疼痛大鼠痛敏中的作用及机制研究 被引量：3

1

作者 高雄 肖胜昔 +2 位作者 郝泉水 李秀芳 吴耀华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第7期1231-1237,共7页

目的研究富含亮氨酸重复激酶2(LRRK2)对神经病理性疼痛(NP)大鼠痛觉敏感性的影响,并探讨其可能的机制。方法将48只SD大鼠随机分成4组:假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、LRRK2抑制剂组(MLi-2组)和LRRK2抑制剂+p38丝裂原活化蛋白激酶(M... 目的研究富含亮氨酸重复激酶2(LRRK2)对神经病理性疼痛(NP)大鼠痛觉敏感性的影响,并探讨其可能的机制。方法将48只SD大鼠随机分成4组:假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、LRRK2抑制剂组(MLi-2组)和LRRK2抑制剂+p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激动剂组(MLi-2+Anisomycin组),每组12只。采用坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)诱导NP大鼠模型,术后第8天开始鞘内注射MLi-2(1 mg/kg,10μl)或Anisomycin(20μmol/L,10μl),每天1次,连续7 d。分别于术前(第0天)及术后第7、14天进行痛觉敏感性检测,分析各组大鼠机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(PWTL)变化;ELISA检测大鼠脊髓背角中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;尼氏染色观察大鼠脊髓组织神经元病理变化;免疫荧光染色观察大鼠脊髓中小胶质细胞标志物离子化钙结合适配分子-1(Iba-1)表达水平;Western blot检测大鼠脊髓背角中LRRK2、p-p38 MAPK、p38 MAPK和Iba-1蛋白表达水平。结果与Sham组比较,Model组大鼠右侧后肢MWT和PWTL均明显降低(P<0.01),脊髓背角组织中IL-1β、IL-6和TNF-α含量及LRRK2、Iba-1蛋白和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白比值水平均明显升高(P<0.01),脊髓组织中Iba-1阳性细胞比例明显升高(P<0.01),而尼氏小体明显减少(P<0.01)。与Model组比较,MLi-2组大鼠右侧后肢MWT和PWTL明显升高(P<0.01),尼氏小体明显增多(P<0.01),脊髓组织中Iba-1阳性细胞比例明显降低(P<0.01),脊髓背角组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平及LRRK2、Iba-1蛋白和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白比值水平明显降低(P<0.01)。然而,Anisomycin干预可激活p38 MAPK信号通路,并部分逆转MLi-2对NP大鼠痛敏、神经炎症的改善作用。结论抑制LRRK2表达可减轻由小胶质细胞活化介导神经炎症引起的NP大鼠痛觉敏感性,其作用机制可能与调控p38 MAPK信号通路有关。 展开更多

关键词 神经病理性疼痛 富含亮氨酸重复激酶2 小胶质细胞 神经炎症 P38丝裂原活化蛋白激酶

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富亮氨酸重复超家族新成员LRRC4的克隆与在脑瘤中的表达分析 被引量：19

2

作者 王洁如 钱骏 +6 位作者 董利 李小玲 谭琛 李江 张必成 周洁 李桂源 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第2期233-239,共7页

在染色体 7q31 32多种肿瘤杂合性丢失 (lossofheterozygosity ,LOH)高频区 ,采用表达序列标签(expressedsequencetag ,EST)介导的定位候选克隆策略获得了一个定位于人染色体 7q31 32的新基因 (GenBank登录号 :AF196 976 ) .该基因编码 6... 在染色体 7q31 32多种肿瘤杂合性丢失 (lossofheterozygosity ,LOH)高频区 ,采用表达序列标签(expressedsequencetag ,EST)介导的定位候选克隆策略获得了一个定位于人染色体 7q31 32的新基因 (GenBank登录号 :AF196 976 ) .该基因编码 6 5 3个氨基酸 ,蛋白质理论pI m :6 5 8 72 7ku .它包含七个典型的LRR、一个IgC2样结构域 .此外 ,它还包含一个N端信号肽、一个C端跨膜区 .其结构特征表明它是富亮氨酸重复(leucine richrepeat,LRR)超家族的新成员 .经过人类基因组命名委员会的同意 ,将该基因命名为LRRC4.此外 ,通过序列相似性匹配还获得了定位于小鼠 6号染色体的LRRC4的同源基因 (GenBank登录号 :AF2 90 5 42 ) .RNA印迹和RT PCR检测发现LRRC4在正常人脑组织相对特异表达 ,而在多种原发性脑瘤表达明显下调或缺失 .综合考虑LRRC4基因的序列特征及表达谱 。 展开更多

关键词 富亮氨酸重复 超家族新成员 lrrC4 脑瘤 基因表达

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敲低富含亮氨酸的三角状五肽重复结构蛋白(LRPPRC)促进激素抵抗性前列腺癌细胞凋亡 被引量：4

3

作者 张鸿毅 肖克兵 +2 位作者 赵刚刚 李华锋 崔洁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期419-424,共6页

目的研究富含亮氨酸的三角状五肽重复结构蛋白(LRPPRC)对激素抵抗性前列腺癌细胞凋亡的影响。方法Western blot法检测前列腺癌DU145细胞和LNCaP细胞LRPPRC和雄激素受体(AR)蛋白水平;在DU145细胞中瞬转LRPPRC小干涉RNA(siLRPPRC);反转录... 目的研究富含亮氨酸的三角状五肽重复结构蛋白(LRPPRC)对激素抵抗性前列腺癌细胞凋亡的影响。方法Western blot法检测前列腺癌DU145细胞和LNCaP细胞LRPPRC和雄激素受体(AR)蛋白水平;在DU145细胞中瞬转LRPPRC小干涉RNA(siLRPPRC);反转录PCR检测转染细胞LRPPRC mRNA水平;Western blot法检测LRPPRC蛋白水平;噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;Hoechst33258法和流式细胞术检测细胞凋亡率;荧光素酶法检测细胞ATP水平;Western blot法检测Bcl2、BAX和胱天蛋白酶3(caspase-3)蛋白水平。结果 LRPPRC在DU145细胞和LNCaP细胞均高表达,但DU145细胞不表达AR。敲低DU145细胞LRPPRC水平后,细胞存活率显著降低、细胞凋亡增加、 ATP水平下降、活化的caspase-3蛋白水平增高、Bcl2蛋白水平降低。结论敲低激素抵抗性前列腺癌DU145细胞LRPPRC促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 前列腺癌 富含亮氨酸的三角状五肽重复结构蛋白(LRPPRC) 激素抵抗 线粒体 细胞凋亡

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NALP3富含亮氨酸重复序列结构域识别人细胞周期蛋白H和禽冠状病毒蛋白

4

作者 颜亮 罗滔 +2 位作者 蔡军伟 毕志斐 胡巢凤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期121-127,共7页

目的:寻找与NALP3富含亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat,LRR)结构域相互作用的蛋白质分子。方法:克隆NALP3富含亮氨酸重复序列(NALP3-LRR)结构域的DNA序列并经测序检验。应用酵母双杂交技术,构建以NALP3-LRR结构域为诱饵基因的酵母... 目的:寻找与NALP3富含亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat,LRR)结构域相互作用的蛋白质分子。方法:克隆NALP3富含亮氨酸重复序列(NALP3-LRR)结构域的DNA序列并经测序检验。应用酵母双杂交技术,构建以NALP3-LRR结构域为诱饵基因的酵母双杂交载体,对人胚肺cDNA文库进行杂交筛选,经酵母回交实验验证蛋白质在酵母细胞内的相互作用并对阳性克隆的DNA进行序列测定和生物信息学分析。将筛选到的阳性克隆进一步用免疫共沉淀实验验证NALP3-LRR结构域与阳性蛋白之间相互作用的可靠性。结果:成功克隆NALP3-LRR结构域的DNA序列并经测序检验正确。用酵母双杂交技术对人胚肺cDNA文库进行酵母杂交筛选共获得4个阳性克隆。免疫共沉淀实验证实能与NALP3-LRR结构域发生相互作用的阳性蛋白是人细胞周期蛋白H和禽传染性支气管炎病毒株Cal99的ORF1a。结论:NALP3的富含亮氨酸重复序列结构域能与人细胞周期蛋白H和禽冠状病毒蛋白发生相互作用。 展开更多

关键词 NALP3蛋白 富含亮氨酸重复序列 人细胞周期蛋白H 禽传染性支气管炎病毒 酵母双杂交系统

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富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)增强顺铂诱导的人垂体瘤细胞凋亡

5

作者 周林裕 包春燕 +2 位作者 胡骁 代永庆 包志军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期9-15,共7页

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白结构域1(LRIG1)在人垂体瘤组织中表达情况,并观察过表达LRIG1后对顺铂(DDP)诱导的垂体瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法采用免疫组织化学染色法检测45例垂体瘤患者肿瘤组织及瘤旁组织中的LRIG1... 目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白结构域1(LRIG1)在人垂体瘤组织中表达情况,并观察过表达LRIG1后对顺铂(DDP)诱导的垂体瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法采用免疫组织化学染色法检测45例垂体瘤患者肿瘤组织及瘤旁组织中的LRIG1表达,分析LRIG1阳性表达与患者临床病理指标的相关性。选取原代分离培养的人垂体瘤细胞,采用脂质体介导的基因转染技术将LRIG1基因过表达质粒p EGFP-N1-LRIG1转染进细胞中,筛选LRIG1过表达的细胞,同时选取转染空质粒p EGFP-N1的细胞作为对照组。两组细胞均经20μg/m L DDP诱导48 h,流式细胞术检测细胞凋亡情况,平板克隆实验检测细胞的增殖能力,Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白BAX、胱天蛋白酶3(caspase-3)和Bcl2的相对表达量。结果垂体瘤患者肿瘤组织中LRIG1阳性率显著低于瘤旁组织,且LRIG1在侵袭性肿瘤表达显著降低。与对照组相比,过表达LRIG1后,DDP诱导的细胞凋亡率显著增加、细胞增殖显著降低、BAX、caspase-3的水平显著增加,而Bcl2水平显著降低。结论过表达LRIG1增加DDP诱导的人垂体瘤细胞凋亡并抑制其增殖。 展开更多

关键词 富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白结构域1(LRIG1) 顺铂 垂体瘤 表达 细胞增殖 细胞凋亡

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神经系统中富亮氨酸重复序列跨膜蛋白的功能研究进展 被引量：3

6

作者 徐刚 武明花 李桂源 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第4期314-318,共5页

富亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat,LRR)是一种常见的蛋白质结构域.含有富亮氨酸重复序列的蛋白质简称LRR蛋白.LRR蛋白在真核生物和原核生物的细胞和组织中广泛分布,其定位的特异性以及与之相互作用蛋白质的复杂性,决定了LRR蛋白功... 富亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat,LRR)是一种常见的蛋白质结构域.含有富亮氨酸重复序列的蛋白质简称LRR蛋白.LRR蛋白在真核生物和原核生物的细胞和组织中广泛分布,其定位的特异性以及与之相互作用蛋白质的复杂性,决定了LRR蛋白功能的多样性.许多LRR蛋白相对特异性表达于神经系统,绝大多数在神经系统中高表达的LRR蛋白属于跨膜蛋白,它们主要作为细胞黏附分子或配体结合蛋白参与突触的形成、神经突起的生长发育、神经递质的转移和释放等神经系统正常生理活动.LRR蛋白的异常表达将会导致神经、精神系统疾病的发生. 展开更多

关键词 富亮氨酸重复序列 跨膜蛋白 神经系统 结构 功能

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抗富含亮氨酸胶质瘤失活蛋白1和抗接触蛋白相关蛋白2双抗体阳性疾病的临床特点 被引量：3

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作者 董立羚 关鸿志 +13 位作者 黄颜 郝红琳 牛婧雯 柳青 卢强 徐丹 张君怡 周立新 金丽日 任海涛 朱以诚 彭斌 崔丽英 周祥琴 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期344-350,共7页

目的探讨血清抗富含亮氨酸胶质瘤失活蛋白1(LGI1)和抗接触蛋白相关蛋白2(Capsr2)双抗体阳性的自身免疫性疾病的临床特点。方法回顾性分析2014年7月至2017年12月在北京协和医院神经内科收治的7例血清抗LGI1和抗Caspr2双抗体阳性患者的临... 目的探讨血清抗富含亮氨酸胶质瘤失活蛋白1(LGI1)和抗接触蛋白相关蛋白2(Capsr2)双抗体阳性的自身免疫性疾病的临床特点。方法回顾性分析2014年7月至2017年12月在北京协和医院神经内科收治的7例血清抗LGI1和抗Caspr2双抗体阳性患者的临床资料,总结抗LGI1和抗Capsr2双抗体阳性疾病的临床特点。结果7例患者均存在中枢、周围和自主神经受累。在临床症状中,出现率最高的是失眠、肌肉颤搐、疼痛和多汗(100%);71%(5/7)伴有记忆下降或精神行为异常,57%(4/7)伴有尿便障碍,43%(3/7)伴有癫痫发作。在实验室检查中,100%(6//6)肌电图显示M波后发放电位和/或安静状态下异常自发放电;71%(5/7)脑电图显示慢波增多或基本节律变慢;71%(5/7)心电图显示窦性心动过速、电轴偏转、QT间期延长。1例在免疫治疗前因心律失常死亡,1例在治疗后因肺部感染死亡;5例临床症状明显改善,随诊1~2年,均未复发。结论抗LGI1和抗Caspr2双抗体阳性疾病的神经系统受累广泛,全面累及中枢、周围和自主神经。对于急性或亚急性起病的神经精神症状,尤其是伴有失眠、肌肉颤搐和多汗者,需要考虑本病可能。 展开更多

关键词 抗电压门控性钾离子通道抗体 抗富含亮氨酸胶质瘤失活蛋白1抗体 抗接触蛋白相关蛋白2抗体

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水稻富亮氨酸重复类受体蛋白激酶OsRPK1响应外源生长素的作用研究 被引量：2

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作者 邹禹 刘园园 +2 位作者 张培江 钱宝云 张炜 《江苏农业科学》 2019年第8期46-51,共6页

为明确水稻富亮氨酸重复类受体蛋白激酶OsRPK1响应外源生长素的作用机制,首先分析外源生长素2,4-D对OsRPK1转基因水稻根部表型的影响;其次,异源表达OsRPK1胞外富亮氨酸重复LRRs,检测H^3-IAA竞争结合融合蛋白GST-LRRs后的放射性活度以及... 为明确水稻富亮氨酸重复类受体蛋白激酶OsRPK1响应外源生长素的作用机制,首先分析外源生长素2,4-D对OsRPK1转基因水稻根部表型的影响;其次,异源表达OsRPK1胞外富亮氨酸重复LRRs,检测H^3-IAA竞争结合融合蛋白GST-LRRs后的放射性活度以及利用等温滴定量热(ITC)法分析IAA与融合蛋白GST-LRRs相互作用的微热量变化。结果表明,在正常生长条件下,OsRPK1过表达能够抑制水稻侧根的生长;0.01μmol/L 2,4-D处理4 d后发现,OsRPK1抑制表达植株侧根的数量比野生型多112%(P<0.01),而OsRPK1过表达植株侧根生长受到极显著抑制(P<0.001);0.1μmol/L 2,4-D处理10 d后,抑制表达植株不定根的数量相对于野生型多18.2%(P<0.05),而过表达植株不定根的生长受到显著抑制(P<0.01);大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达获得了包涵体形式的GST-LRRs融合蛋白,通过复性、纯化获得可溶性融合蛋白;H^3-IAA竞争结合融合蛋白GST-LRRs以及IAA溶液滴定融合蛋白的微热量分析都表明OsRPK1与外源生长素未发生直接作用。 展开更多

关键词 水稻富亮氨酸重复类受体蛋白激酶OsRPK1 原核表达 外源生长素 融合蛋白GST-lrrs

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小分子亮氨酸重复蛋白聚糖家族在维持角膜透明性中的作用 被引量：2

9

作者 韩涵(综述) 何宇茜 张妍(审校) 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期266-270,共5页

小分子亮氨酸重复蛋白聚糖(SLRPs)为角膜的重要结构成分,在角膜透明性的形成和维持方面发挥重要作用。SLRPs大量分布于角膜基质层中,主要分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。各成员之间存在补偿性和协同性作用,共同调控基质层胶原纤维的形成和装配,... 小分子亮氨酸重复蛋白聚糖(SLRPs)为角膜的重要结构成分,在角膜透明性的形成和维持方面发挥重要作用。SLRPs大量分布于角膜基质层中,主要分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。各成员之间存在补偿性和协同性作用,共同调控基质层胶原纤维的形成和装配,维持胶原纤维排列的高度有序性,奠定角膜透明性的基础。Decorin和lumican分别是Ⅰ型和Ⅱ型SLRPs的主要功能成分,二者基因表达改变或核心蛋白结构异常均会影响角膜基质层其他细胞外基质成分的正常含量和排列关系,导致胶原纤维的形成、装配和排列异常,造成角膜混浊。SLRPs可通过结合促纤维化细胞因子及其受体等调控角膜创伤修复和基质重塑,为治疗角膜疾病和研究角膜透明性的分子机制提供依据。本文就SLRPs家族成员生物学活性及其在角膜透明性中的作用研究进展进行综述。 展开更多

关键词 小分子亮氨酸重复蛋白聚糖 角膜混浊 角膜基质 胶原纤维 角膜创伤修复

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Wnt通路中亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5/6在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及意义

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作者 李宣 王文鹏 +2 位作者 周敏 徐晓蕊 高吉照 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期595-602,共8页

目的研究富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体(LGR)5/6在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及意义。方法选取39例经诱导化疗后第33天骨髓达完全缓解的ALL患儿,诱导化疗前作为初发组,经诱导化疗第33天骨髓达完全缓解时作为缓解组,根据危... 目的研究富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体(LGR)5/6在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及意义。方法选取39例经诱导化疗后第33天骨髓达完全缓解的ALL患儿,诱导化疗前作为初发组,经诱导化疗第33天骨髓达完全缓解时作为缓解组,根据危险度分层再分为低危(n=16)、中危(n=9)和高危组(n=14)。30例免疫性血小板减少症的患儿为对照组。留取初发组、缓解组及对照组骨髓血3 ml,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测骨髓细胞中LGR5和LGR6 mRNA的相对表达,采用Western blot法检测骨髓细胞中LGR5和LGR6蛋白的相对表达。结果初发组LGR5 mRNA(0.850±0.279)及蛋白(0.083±0.027)的相对表达均低于缓解组(mRNA:1.418±0.324,蛋白:0.130±0.033)与对照组(mRNA:1.541±0.409,蛋白:0.138±0.041)(P_(mRNA)=0.000,P_(蛋白)=0.000),初发组LGR6 mRNA(2.444±1.160)及蛋白(0.298±0.088)的相对表达均高于缓解组(mRNA:0.886±0.390,蛋白:0.111±0.039)与对照组(mRNA:0.928±0.373,蛋白:0.094±0.037)(P_(mRNA)=0.000,P_(蛋白)=0.000)。在初发组中,低危患儿LGR5 mRNA(1.004±0.284)及蛋白(0.097±0.030)的相对表达均高于中危(mRNA:0.728±0.239,蛋白:0.071±0.022)和高危患儿(mRNA:0.752±0.222,蛋白:0.074±0.020)(P_(mRNA)=0.012,P_(蛋白)=0.016),低危患儿LGR6 mRNA(1.822±0.979)及蛋白(0.245±0.077)的相对表达均低于中危(mRNA:2.954±1.039,蛋白:0.338±0.081)和高危患儿(mRNA:2.827±1.165,蛋白:0.333±0.075)(P_(mRNA)=0.016,P_(蛋白)=0.004)。在缓解组中,低危患儿LGR5 mRNA(1.597±0.329)及蛋白(0.150±0.035)的相对表达均高于中危(mRNA:1.277±0.288,蛋白:0.117±0.029)和高危患儿(mRNA:1.305±0.253,蛋白:0.116±0.023)(P_(mRNA)=0.012,P_(蛋白)=0.006),低危患儿LGR6 mRNA(0.662±0.334)及蛋白(0.089±0.034)的相对表达均低于中危(mRNA:1.066±0.273,蛋白:0.130±0.033)和高危患儿(mRNA:1.027±0.405,蛋白:0.126±0.038)(P_(mRNA)=0.007,P_(蛋白)=0.007)。结论LGR5和LGR6的表达与儿童ALL的发生和危险度有关,其具体作用机制有待进一步研究。 展开更多

关键词 急性淋巴细胞白血病 WNT通路 亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体

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LRRK2基因R1067Q和GBA基因R202Q双变异致早发型帕金森病一例

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作者 刘晨 干静 +1 位作者 张煜 刘振国 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期177-181,共5页

患者男性,42岁。主因左手抖动18个月,左下肢抖动伴运动迟缓6个月,于2023年7月8日入院。患者18个月前(2022年1月)无明显诱因出现左上肢不自主抖动,静止时出现、持物及动作时消失,无动作迟缓、反应变慢等其他伴随症状。于2022年11月至外... 患者男性,42岁。主因左手抖动18个月,左下肢抖动伴运动迟缓6个月,于2023年7月8日入院。患者18个月前(2022年1月)无明显诱因出现左上肢不自主抖动,静止时出现、持物及动作时消失,无动作迟缓、反应变慢等其他伴随症状。于2022年11月至外院就诊,头部MRI检查无明显异常,结合临床症状,考虑帕金森病(PD),服用普拉克索0.375 mg/d并逐渐增量至0.375 mg/次、2次/d长期治疗,症状无明显改善。6个月前(2023年1月)出现左下肢不自主抖动,并逐渐出现动作迟缓,左侧肢体活动不灵活,体位变化或行走时偶有头晕,不伴视物旋转及恶心呕吐等,持续数分钟后头晕可自行好转,无嗅觉丧失、情绪低落,睡眠质量尚可,无多梦、呓语、乱喊乱叫、手舞足蹈等症状。 展开更多

关键词 帕金森病 富含亮氨酸重复丝氨酸‑苏氨酸蛋白激酶2 葡糖苷酰鞘氨醇酶 病例报告

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Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体诱导帕金森病样病理变化

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作者 田一鸣 秦驰 +8 位作者 刘晗 付雨 田海燕 张瑞 梁东晓 陈永康 祝清勇 滕军放 丁雪冰 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2024年第2期149-153,共5页

目的:探讨Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体能否诱导帕金森病(PD)样病理改变。方法:提取野生型(WT)和Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体,使用免疫印迹法检测尿液外泌体标记物TSG101和CD81,Y216位点磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pGSK-3β-2... 目的:探讨Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体能否诱导帕金森病(PD)样病理改变。方法:提取野生型(WT)和Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体,使用免疫印迹法检测尿液外泌体标记物TSG101和CD81,Y216位点磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pGSK-3β-216)表达水平。在C57小鼠纹状体中分别注射WT小鼠(C57-WT组,n=8)和Lrrk2 R1628P小鼠尿液外泌体(C57-Lrrk2组,n=8)。注射前3天,注射后1、3、6个月,利用平衡木、挂线、转棒和旷场实验对小鼠进行行为学分析,免疫组化法分析脑组织中磷酸化α-突触核蛋白(pα-syn)的沉积情况,免疫印迹法检测脑组织中pα-syn的表达。结果:Lrrk2 R1628P小鼠尿液外泌体TSG101和CD81表达水平与WT小鼠比较,差异无统计学意义(P>0.05),pGSK-3β-216表达水平高于WT小鼠(P<0.001)。C57-Lrrk2组小鼠出现PD样行为学表型(P<0.001),皮层、纹状体和黑质中有pα-syn沉积,脑组织中pα-syn表达水平为(0.44±0.06),C57-WT组则无表达(P<0.001)。结论:小鼠纹状体中注射Lrrk2 R1628P转基因小鼠的尿液外泌体能够诱导PD样病理改变。 展开更多

关键词 帕金森病 富含亮氨酸的重复激酶2 糖原合成酶激酶-3Β 尿液外泌体 小鼠

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莱茵衣藻LRR-1蛋白多克隆抗体的制备与鉴定

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作者 冯雳 卢静 +3 位作者 魏思雯 胡长峰 弋美霞 罗仕超 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期297-302,共6页

为深入研究富含亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat,LRR)在机体先天免疫过程中的作用机制,以莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)为模式生物,通过生物信息学预测分析CrLRR-1蛋白的二级结构、亲水性及免疫原性等理化性质,人工设计并合... 为深入研究富含亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat,LRR)在机体先天免疫过程中的作用机制,以莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)为模式生物,通过生物信息学预测分析CrLRR-1蛋白的二级结构、亲水性及免疫原性等理化性质,人工设计并合成特异性肽段,与钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联后免疫新西兰白兔。结果显示:采用间接ELISA法测定抗血清效价达到1∶512000,将抗血清依次经Protein A和抗原亲和纯化后得到CrLRR-1蛋白多克隆抗体;利用免疫印迹与免疫荧光检测制备的抗体,该抗体可特异性识别莱茵衣藻内源LRR-1蛋白,且CrLRR-1蛋白主要定位于细胞膜。结果表明,成功制备CrLRR-1蛋白多克隆抗体。 展开更多

关键词 莱茵衣藻 富亮氨酸重复序列 先天免疫 防御反应 多克隆抗体

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LRRC8A/VRAC离子通道抗肿瘤作用的研究进展

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作者 杨润泽 胡耀华 +2 位作者 秦靖 汪永锋 师长宏 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第11期91-99,共9页

体积调节阴离子通道(volume-regulated anion channels,VRAC)在脊椎动物细胞和各类型的肿瘤细胞中普遍表达。其由富含亮氨酸重复序列8A(leucine-rich repeat containing 8A,LRRC8A)及其4个同源家族成员(LRRC8B-E)组成,其中LRRC8A为必需... 体积调节阴离子通道(volume-regulated anion channels,VRAC)在脊椎动物细胞和各类型的肿瘤细胞中普遍表达。其由富含亮氨酸重复序列8A(leucine-rich repeat containing 8A,LRRC8A)及其4个同源家族成员(LRRC8B-E)组成,其中LRRC8A为必需亚基。已证实LRRC8A/VRAC通过各种信号途径参与肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及多药耐药,并调控免疫细胞功能。该离子转运蛋白在杀伤肿瘤细胞及预防肿瘤中显示出良好的应用潜力,可作为肿瘤治疗的新靶点。本文综述了LRRC8A/VRAC参与肿瘤发生发展的最新研究,包括LRRC8A/VRAC的分子结构、功能及其在肿瘤中的调控作用,重点总结了LRRC8A/VRAC在肿瘤诊断和免疫治疗中的应用,以期为探索LRRC8A/VRAC成为肿瘤治疗的新靶点提供借鉴。 展开更多

关键词 体积调节阴离子通道 富含亮氨酸重复序列8A 增殖 迁移 侵袭 多药耐药 肿瘤免疫

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刺芒柄花素对变应性鼻炎小鼠鼻黏膜组织铁死亡和NLRP3炎症小体活化的影响

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作者 丁虹 王雪可 +1 位作者 芦晓帆 许誉琦 《郑州大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期249-256,共8页

目的:探讨刺芒柄花素对变应性鼻炎小鼠鼻黏膜组织铁死亡和核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)炎症小体活化的影响及其作用机制。方法:60只雄性Balb/c小鼠分为正常对照组,模型组,刺芒柄花素低、高剂量组,... 目的:探讨刺芒柄花素对变应性鼻炎小鼠鼻黏膜组织铁死亡和核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)炎症小体活化的影响及其作用机制。方法:60只雄性Balb/c小鼠分为正常对照组,模型组,刺芒柄花素低、高剂量组,刺芒柄花素+EX527组,每组12只。除正常对照组外,其余各组小鼠均以卵清蛋白(OVA)为致敏原构建变应性鼻炎模型。通过行为学观察小鼠鼻部症状(抓鼻、打喷嚏);ELISA法检测血清中OVA特异性IgE(OVA-sIgE)和组胺水平。观察小鼠鼻黏膜组织形态学变化并计数嗜酸性粒细胞、杯状细胞与肥大细胞。采用相应试剂盒检测鼻黏膜组织中活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和Fe^(2+)水平;qRT-PCR法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和溶质载体家族7成员11(SLC7A11)mRNA的表达;Western blot法检测沉默信息调节因子1(SIRT1)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、活化的半胱氨酸蛋白酶1(Cleaved Caspase-1)、活化的白细胞介素(IL)-1β(Cleaved IL-1β)、IL-18、GPX4和SLC7A11蛋白的表达;免疫共沉淀检测NLRP3乙酰化水平。结果:与模型组比较,刺芒柄花素低、高剂量组小鼠抓鼻和打喷嚏次数减少,血清OVA-sIgE和组胺含量降低,鼻黏膜受损程度减轻,嗜酸性粒细胞、肥大细胞和杯状细胞数减少(P<0.05);小鼠鼻黏膜组织中ROS、MDA和Fe^(2+)水平降低,GSH水平以及GPX4和SLC7A11 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05);小鼠鼻黏膜组织中SIRT1、NLRP3、ASC、Cleaved Caspase-1、Cleaved IL-1β、IL-18蛋白表达以及NLRP3乙酰化水平降低(P<0.05)。SIRT1抑制剂EX527减弱刺芒柄花素对变应性鼻炎小鼠鼻黏膜组织铁死亡和NLRP3炎症小体活化的抑制作用。结论:刺芒柄花素可能通过调控SIRT1蛋白抑制变应性鼻炎小鼠鼻黏膜组织铁死亡和NLRP3炎症小体活化。 展开更多

关键词 刺芒柄花素 变应性鼻炎 沉默信息调节因子1 核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3 铁死亡 小鼠

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小麦NBS-LRR类抗病基因同源cDNA序列的克隆与表达分析 被引量：8

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作者 任晓娣 刘彦慧 +4 位作者 李建嫄 张娜 彭巧慧 杨文香 刘大群 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期69-74,79,共7页

为获得小麦抗叶锈病相关基因,以小麦近等基因系TcLr19所构建的非亲和cDNA文库中获得的EST序列(Contig 914)为靶序列,用RT-PCR方法和cDNA末端快速扩增技术,分离克隆到片段为3 042bp的全长cDNA序列。序列分析表明该序列符合典型单子叶植物... 为获得小麦抗叶锈病相关基因,以小麦近等基因系TcLr19所构建的非亲和cDNA文库中获得的EST序列(Contig 914)为靶序列,用RT-PCR方法和cDNA末端快速扩增技术,分离克隆到片段为3 042bp的全长cDNA序列。序列分析表明该序列符合典型单子叶植物的CC-NBS-LRR结构模式,命名为TaNLR。该基因包含一个完整的2 739bp的开放阅读框(ORF),具有连续的Poly A尾和典型的加尾信号AATTAA。ProtParam程序预测表明该基因编码912个氨基酸。发育树分析显示该氨基酸序列与大麦的NBS-LRR类抗病基因蛋白同源性最高达89%。荧光定量PCR分析表明,在小麦与叶锈菌互作中,TaNLR基因受叶锈菌诱导下调表达。本研究在TcLr19小麦中成功获得了抗病同源基因,这为明确NBS-LRR在小麦抗叶锈病中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 小麦 核苷酸结合位点(NBS) 富含亮氨酸重复(lrr) 抗病基因同源序列(RGAs) cDNA末端快速扩增技术(RACE) 实时定量PCR(real-time PCR)

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心脏特异新基因Lrrc10的分子克隆与特性分析 被引量：3

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作者 陈祥贵 李勇 +4 位作者 赵如冰 裴新荣 臧明玺 高丽芳 成君 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期617-622,共6页

采用表达序列标签 (EST)介导的基因克隆和表达谱分析 ,从小鼠心脏克隆了一个心脏特异新基因Lrrc10(GenBankAccNo .AF5 2 7781) .该基因cDNA全长为 14 10bp ,定位于小鼠染色体 10D2 ,在基因组中无内含子 .Lrrc10的最大开放阅读框编码的... 采用表达序列标签 (EST)介导的基因克隆和表达谱分析 ,从小鼠心脏克隆了一个心脏特异新基因Lrrc10(GenBankAccNo .AF5 2 7781) .该基因cDNA全长为 14 10bp ,定位于小鼠染色体 10D2 ,在基因组中无内含子 .Lrrc10的最大开放阅读框编码的假想蛋白由 2 74个氨基酸组成 ,含有 7个亮氨酸重复基序 .同源性检索未发现有整体同源性的已知基因 .EST数据库中支持该基因cDNA序列的全部 18条EST均来自小鼠心脏组织 .对小鼠的不同组织cDNA的RT PCR检测证实该基因主要在心脏中强表达 ,在肺低表达 ,而在其他组织中不表达或表达很弱 . 展开更多

关键词 心脏 特异基因 lrrcl0 分子克隆 富亮氨酸重复 表达谱

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LRRC3B对食管癌细胞Eca109迁移、侵袭及PI3K/Akt信号通路的影响 被引量：4

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作者 曹燕飞 任睿 +2 位作者 杨晔 罗向晖 王水利 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期345-352,共8页

背景与目的:先前的研究已经证实富含亮氨酸重复序列3B蛋白(leucine-rich repeatcontaining 3B,LRRC3B)在多种癌症中低表达,并且与癌细胞的迁移侵袭密切相关。该研究旨在探讨LRRC3B在食管癌发展中的作用机制。方法:免疫组织化学染色检测L... 背景与目的:先前的研究已经证实富含亮氨酸重复序列3B蛋白(leucine-rich repeatcontaining 3B,LRRC3B)在多种癌症中低表达,并且与癌细胞的迁移侵袭密切相关。该研究旨在探讨LRRC3B在食管癌发展中的作用机制。方法:免疫组织化学染色检测LRRC3B在60例食管癌组织及60例癌旁组织中的表达情况,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)分别检测食管癌细胞Eca109和食管正常上皮细胞系HEEC中LRRC3B的m RNA和蛋白表达。处理食管癌细胞Eca109并分3组:正常对照组、阴性对照组(转染对照空p CMV6质粒)和过表达LRRC3B组(转染p CMV6-LRRC3B过表达质粒)。采用Transwell法检测各组Eca109细胞迁移和侵袭的变化。采用Western blot检测各组细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表达以及p-Akt蛋白水平。结果:LRRC3B在食管癌组织和细胞中的表达明显低于癌旁组织和食管正常上皮细胞。过表达LRRC3B明显抑制Eca109细胞的迁移和侵袭能力,上调上皮因子E-cadherin表达,抑制间质标志物N-cadherin和Vimentin表达,同时降低细胞内p-Akt水平。结论:LRRC3B在食管癌中低表达,上调LRRC3B能够抑制食管癌细胞的EMT过程,可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。 展开更多

关键词 富含亮氨酸重复序列3B蛋白 食管癌 上皮间质转化 PI3K/AKT

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脑组织特异性基因/脑胶质瘤抑瘤基因LRRC4的功能研究进展 被引量：4

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作者 武明花 李小玲 李桂源 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1234-1239,共6页

LRRC4是一个脑组织相对特异性表达基因,是采用表达序列标签(EST)介导的定位-候选克隆策略结合5′-RACE技术从染色体7q31～32区域克隆出来的一个富亮氨酸重复(LRR)超家族的新成员.LRRC4是神经系统发育与轴突生长的功能基因.LRRC4的表达... LRRC4是一个脑组织相对特异性表达基因,是采用表达序列标签(EST)介导的定位-候选克隆策略结合5′-RACE技术从染色体7q31～32区域克隆出来的一个富亮氨酸重复(LRR)超家族的新成员.LRRC4是神经系统发育与轴突生长的功能基因.LRRC4的表达与胶质瘤的级别进展呈负相关,其表达缺失参与脑胶质瘤进展的晚期事件.LRRC4能够下调一系列神经生长因子或受体(如IGF,EGF,PDGF,CNTF,bFGF,GDNF和BDNF等)的表达,通过调控多种信号转导通路(K-Ras/c-Raf/ERK/MAPK,PI-3K/AKT/NF-κB,p70S6/PKC,STAT3以及JNK2/c-Jun/mp53等)将U251细胞阻滞在G1晚期,抑制脑胶质瘤细胞的增殖和侵袭,而且这种抑制作用依赖于它的LRR结构域.LRRC4不能诱导胶质瘤细胞的凋亡,而是诱导胶质瘤细胞向胶质样细胞分化. 展开更多

关键词 lrrC4 富亮氨酸重复超家族 脑胶质瘤 信号转导

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马铃薯基因组中3个番茄cf9的LRR区同源片段的克隆及序列分析 被引量：1

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作者 汪国平 卢婷 +1 位作者 乐素菊 林明宝 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期117-119,共3页

根据番茄Cf-9与Cf-9B抗病蛋白富亮氨酸重复区域(LRR)对应的核苷酸序列设计引物,用PCR方法从马铃薯基因组扩增出2个同源片段;用Cf-9序列在SGN网站中对马铃薯EST组装序列搜索获得第3个同源序列.分析表明马铃薯的3个序列与番茄的序列高度保... 根据番茄Cf-9与Cf-9B抗病蛋白富亮氨酸重复区域(LRR)对应的核苷酸序列设计引物,用PCR方法从马铃薯基因组扩增出2个同源片段;用Cf-9序列在SGN网站中对马铃薯EST组装序列搜索获得第3个同源序列.分析表明马铃薯的3个序列与番茄的序列高度保守,在核苷酸水平上相似度大于85%,在氨基酸水平上相似度大于75%,但依来源不同而明显分为2组,说明已发生了较大程度的分化. 展开更多

关键词 马铃薯 番茄 Cf-9 富亮氨酸重复

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