mok E基因过表达对红曲霉Monacolin K产量、菌丝及孢子形态的影响 被引量：13

1

作者 林琳 王昌禄 +3 位作者 李贞景 陈勉华 武淑芬 任志远 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第8期45-49,共5页

红曲霉中mok E基因是红曲霉次级代谢产物Monacolin K生物合成的一个相关基因,mok E基因表达量与Monacolin K产量呈正相关。以mok E基因为目的基因,构建红曲霉mok E基因过表达工程菌株,通过逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(reverse tra... 红曲霉中mok E基因是红曲霉次级代谢产物Monacolin K生物合成的一个相关基因,mok E基因表达量与Monacolin K产量呈正相关。以mok E基因为目的基因,构建红曲霉mok E基因过表达工程菌株,通过逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(reverse transcription-quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-q PCR)确定mok E基因过表达转化子,对转化子Monacolin K产量进行测定,同时利用扫描电镜,对野生型红曲霉M1及转化子菌丝、孢子进行观察。结果表明:以潮霉素抗性基因为筛选标记,成功得到240个转化子,对其中9个转化子进行mok E基因表达量测定,有3株转化子mok E基因表达量增加,分别为T2、T8、T9转化子,确定其为mok E基因过表达转化子;T2、T8、T9转化子内酯型Monacolin K产量分别为2 159.7、4 177.6、3 365.7μg/g,与野生型红曲霉Monacolin K产量(1 447.8μg/g)相比,分别提高了49.2%、188.5%及132.5%。扫描电镜结果显示,mok E基因过表达,对红曲霉的菌丝体、孢子形态及生殖方式均有影响。 展开更多

关键词 红曲霉 基因过表达 MONACOLINK 逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应 扫描电镜 孢子

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一氧化氮诱导食管癌细胞线粒体DNA编码基因过表达 被引量：2

2

作者 李恩民 许丽艳 +2 位作者 杨帆 袁兰 陈跃 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期378-384,共7页

以人食管癌细胞系EC10 9作为驱赶方 (driver) ,以被一氧化氮 (nitricoxid ,NO)诱导的EC10 9作为实验方 (tester) ,应用抑制消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)、反向mRNA斑点印迹和RNA印迹等技术手段研究了NO诱导的... 以人食管癌细胞系EC10 9作为驱赶方 (driver) ,以被一氧化氮 (nitricoxid ,NO)诱导的EC10 9作为实验方 (tester) ,应用抑制消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)、反向mRNA斑点印迹和RNA印迹等技术手段研究了NO诱导的食管癌细胞中基因的过表达情况 .然后对过表达基因的表达序列标签 (expressedsequencetag ,EST)实施序列测定 ,并与GenBank进行BLAST同源性比较和序列突变分析 .结果先后两次从 6 9个SSH阳性克隆中共鉴定出 6个线粒体DNA (mitochondrialDNA ,mtDNA)编码的基因 ,即ND 4L、ND 4、COX 2、Lys tRNA、ATP 8和ATP 6 .表明NO可以诱导食管癌细胞mtDNA编码的基因过表达 .另外 ,在ND 4L/ND 4基因的片段 (10 736～ 114 4 9)上发现了三处同型单核苷酸置换 (10 872T→C ,110 0 1A→G ,11346A→G) ,在COX 2 /Lys tRNA/ATP 8/ATP 6基因片段 (80 11～ 85 89)上发现了一处单核苷酸缺失(8380A) .氨基酸序列分析表明 ,在NO诱导的EC10 9中可能存在着一种结构异常的ATP 8肽链 (一条在N端被截短的只有 11个氨基酸残基的肽链 ,而正常的ATP 8肽链为 6 8个氨基酸残基 ) . 展开更多

关键词 一氧化氮 诱导 食管癌细胞 线粒体DNA编码基因 基因过表达 抑制消减杂交

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腺病毒介导的Apelin基因过表达对心力衰竭大鼠的保护作用 被引量：1

3

作者 安松涛 李凌 +1 位作者 齐艳艳 马旭 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第17期3109-3111,共3页

目的:应用腺病毒为载体在体内过表达Apelin基因,研究Apelin对于心力衰竭的保护作用。方法:SD大鼠随机分为4组,其中3组行冠状动脉结扎术:空白对照组control(心衰大鼠尾静脉注射生理盐水500μL);病毒对照组Ad-GFP(心衰大鼠尾静脉注射Ad-GF... 目的:应用腺病毒为载体在体内过表达Apelin基因,研究Apelin对于心力衰竭的保护作用。方法:SD大鼠随机分为4组,其中3组行冠状动脉结扎术:空白对照组control(心衰大鼠尾静脉注射生理盐水500μL);病毒对照组Ad-GFP(心衰大鼠尾静脉注射Ad-GFP500μL);治疗组Ad-Apelin(心衰大鼠尾静脉注射Ad-Apelin500μL);另外一组为假手术组sham。各组大鼠均于术后24h单次尾静脉注射给药,并于术后14d进行第二次尾静脉注射。于首次注射后第3天随机取出心、肾及主动脉组织,荧光显微镜下观察Ad-Apelin被组织吸收的情况。用Westernblot方法检测心肌组织Apelin的表达。用多普勒超声心动图、血流动力学测定和心肌梗死面积测定来评价心脏功能的变化。结果:心脏、主动脉、肾脏组织都可见大量绿色荧光表达,治疗组(Ad-Apelin)心肌、主动脉组织内Apelin蛋白表达显著增加,超声、血流动力学及心肌梗死面积测定结果均显示过表达Apelin的心衰大鼠心脏收缩功能明显改善,心肌形态得到一定的改善。结论:Apelin基因过表达对于心力衰竭大鼠有明显的心脏保护作用。 展开更多

关键词 心力衰竭 APELIN 基因过表达 大鼠

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与急性髓系白血病预后相关的基因过表达

4

作者 孙超 沈云峰 李建勇 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第16期2782-2783,共2页

细胞遗传学分析为急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）提供了进行靶向治疗的遗传学标志，同时也提供了不同AML亚型的预后信息。而近来发现的与预后相关的各种基因过表达使得对不同预后的AML的分析进入分子水平。本文就与AML... 细胞遗传学分析为急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）提供了进行靶向治疗的遗传学标志，同时也提供了不同AML亚型的预后信息。而近来发现的与预后相关的各种基因过表达使得对不同预后的AML的分析进入分子水平。本文就与AML预后相关的基因过表达做一综述。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 基因过表达 预后相关 细胞遗传学分析 遗传学标志 AML 靶向治疗 分子水平

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CHO细胞中通过基因过表达提高治疗性蛋白产量的策略 被引量：2

5

作者 周琴 韩倩倩 +5 位作者 张兰兰 吴朋飞 马冰冰 马腾飞 徐昌志 张部昌 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期92-96,共5页

中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞是重要的表达治疗性糖蛋白的工程细胞。CHO细胞能够生产高质量的生物制剂,与人类拥有相似的翻译后修饰功能。与细菌和酵母表达系统相比,CHO表达系统还存在细胞生长明显受限、产量相对低、... 中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞是重要的表达治疗性糖蛋白的工程细胞。CHO细胞能够生产高质量的生物制剂,与人类拥有相似的翻译后修饰功能。与细菌和酵母表达系统相比,CHO表达系统还存在细胞生长明显受限、产量相对低、抗压能力弱、成本昂贵等缺点。生产工艺优化已经是CHO细胞中治疗性重组蛋白表达量大幅提升的重要手段,此外,对特定基因进行过表达、敲除或者转录后沉默等基因工程方法也为CHO细胞工程提供了强有力的理论和实践基础。较全面地综述了近20年过表达手段与CHO细胞工程改造之间的关系,并以细胞的增殖和死亡、代谢和分泌、转录后翻译以及对蛋白的糖基化修饰为主要研究方向,讨论了最新过表达策略的研究进展和应用潜力。 展开更多

关键词 中国仓鼠卵巢细胞 细胞工程 基因过表达策略 治疗性蛋白

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拟南芥AtIDD4基因过表达植株构建及其对生长发育的影响

6

作者 于德嘉 张国斌 +5 位作者 陈健鑫 徐晓东 李林倩 董萍萍 郭丽红 杨红玉 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第12期2583-2590,共8页

【目的】构建拟南芥AtIDD4基因过量表达植物,以期探究拟南芥IDD基因家族中AtIDD4基因在调控植物生长发育与抗逆反应应答中的作用。【方法】提取拟南芥叶片总RNA反转成cDNA,利用特异性引物PCR法扩增出CDS片段。将目的片段与花椰菜花叶病... 【目的】构建拟南芥AtIDD4基因过量表达植物,以期探究拟南芥IDD基因家族中AtIDD4基因在调控植物生长发育与抗逆反应应答中的作用。【方法】提取拟南芥叶片总RNA反转成cDNA,利用特异性引物PCR法扩增出CDS片段。将目的片段与花椰菜花叶病毒的35S启动子连接得到重组质粒,将质粒转化到农杆菌中,构建35S-AtIDD4CDS农杆菌表达载体,利用花序浸染方法将其导入拟南芥野生型植株(WT)中。将收取的T0代种子播种于含有潮霉素的MS培养基上进行抗性筛选直到获得T3代植株,得到AtIDD4基因的超表达植株AtIDD4-OE。【结果】半定量和定量RT-PCR结果表明,相较于拟南芥野生型植株,AtIDD4-OE植株中AtIDD4基因的表达量显著提高,约为野生型植株的2倍。表型观察结果表明,在MS培养基中垂直培养14 d的AtIDD4-OE幼苗根长和鲜重等指标显著低于WT幼苗。土壤中生长14 d的AtIDD4-OE植株与WT植株比较,生长状态弱,植株矮小,莲座叶面积较小。【结论】拟南芥AtIDD4基因的过量表达会抑制拟南芥植株的生长,其在拟南芥生长发育过程中以负调控因子发挥作用。 展开更多

关键词 拟南芥 AtIDD4 基因过表达植株构建 生长

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过表达VIM基因的LMH细胞系构建及对GAstV增殖效率的影响

7

作者 唐铮 向勇 +7 位作者 孙敏华 冯赛祥 廖明 黄瑜 万春和 刘荣昌 傅光华 罗开健 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第3期342-350,共9页

【目的】构建稳定过表达波形蛋白(Vimentin,VIM)基因的鸡肝癌(Leghorn male hepatoma,LMH)细胞系以提高鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)增殖效率。【方法】从鹅源细胞中通过PCR扩增VIM基因,结合同源重组的方法将其连接至慢病毒基因... 【目的】构建稳定过表达波形蛋白(Vimentin,VIM)基因的鸡肝癌(Leghorn male hepatoma,LMH)细胞系以提高鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)增殖效率。【方法】从鹅源细胞中通过PCR扩增VIM基因,结合同源重组的方法将其连接至慢病毒基因过表达系统载体pLV-sfGFP(2A)Puro,获得重组慢病毒质粒pLV-sfGFP(2A)Puro-VIM-Flag(pLV-VIM);利用293T细胞包装重组慢病毒颗粒,随后感染LMH细胞,并利用嘌呤霉素进行筛选以获得目标细胞;通过Western blot、RT-qPCR、间接免疫荧光试验和TCID50测定等方法评估VIM对GAstV增殖效率的影响;最后通过抗体阻断试验分析细胞表面VIM对GAstV侵入的影响。【结果】经测序和酶切鉴定,成功构建了重组慢病毒载体pLV-VIM;经筛选后获得了过表达VIM基因的LMH细胞系(LMHVIM)及其对照组细胞系(LMH-NC)。Western blot结果显示,LMH-VIM细胞中波形蛋白的表达水平显著高于LMH-NC。接种病毒后发现,过表达VIM显著上调LMH-VIM细胞中GAstV的mRNA和蛋白表达水平,以及细胞上清液中的病毒滴度。抗体阻断试验表明,细胞表面VIM可促进GAstV侵入细胞。【结论】本研究为提高GAstV在体外细胞培养的增殖滴度提供了新的见解和思路,对GAstV感染引起的雏鹅痛风疾病的疫苗研发、生产和该疾病的防控具有重要意义。 展开更多

关键词 波形蛋白基因 鸡肝癌细胞系 基因过表达 鹅星状病毒 增殖效率

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过表达SdC2'H基因对防风毛状根香豆素含量的影响

8

作者 苏文慧 齐迎春 +6 位作者 张利超 崔祎 杜瑞云 崔晶晶 王云贺 杨利民 韩忠明 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第5期759-766,共8页

【目的】建立过表达对香豆酰辅酶A 2'-羟化酶(p-Coumaroyl CoA 2'-hydroxylase,C2'H)基因的防风Saposhnikovia divaricata (Turcz.) Schischk.毛状根培养体系,解析SdC2'H基因对香豆素生物合成的调控作用。【方法】克隆S... 【目的】建立过表达对香豆酰辅酶A 2'-羟化酶(p-Coumaroyl CoA 2'-hydroxylase,C2'H)基因的防风Saposhnikovia divaricata (Turcz.) Schischk.毛状根培养体系,解析SdC2'H基因对香豆素生物合成的调控作用。【方法】克隆SdC2'H基因;采用基因融合法构建过表达SdC2'H基因的植物双元表达载体;通过发根农杆菌K599转化法诱导防风毛状根;利用RT-qPCR分析SdC2'H基因的表达水平;采用HPLC测定防风毛状根系中的香豆素含量。【结果】防风SdC2'H基因(GenBank登录号:PV169361)的开放阅读框长度为813 bp,编码蛋白含270个氨基酸。SdC2'H蛋白具有亲水性,属于不稳定蛋白,无信号肽,且跨膜位于膜外。系统进化树显示SdC2'H蛋白与伞形科植物紫花前胡Angelica decursiva亲缘关系最近。过表达SdC2'H基因的防风毛状根系中,SdC2'H基因的表达水平显著高于空白对照(P<0.000 1),香豆素含量显著高于空白对照(P<0.001)和空载体阴性对照(P<0.01),表明过表达SdC2'H基因可以提高防风毛状根中香豆素的含量。【结论】本研究证实了SdC2'H基因对防风中香豆素生物合成的促进作用,为解析SdC2'H基因在防风香豆素类化合物代谢过程中的作用提供了理论依据,也为探究香豆素生物合成的分子调控网络奠定了研究基础。 展开更多

关键词 防风 对香豆酰辅酶A 2'-羟化酶基因 基因过表达 毛状根 香豆素

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细胞周期蛋白E2基因的过度表达与胃腺癌细胞迁徙的关系 被引量：5

9

作者 王建华 于丽莉 陈诗书 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期137-143,共7页

从基因芯片筛选出差异表达的基因中一个细胞周期蛋白 (cyclin)E2基因 ,深入研究周期蛋白E2在高转移性胃腺癌细胞系RF 4 8细胞中的生物学作用 .首先通过合成硫代磷酸化修饰的反义、正义和错配寡核苷酸片段 ,使用半定量RT PCR和Western印... 从基因芯片筛选出差异表达的基因中一个细胞周期蛋白 (cyclin)E2基因 ,深入研究周期蛋白E2在高转移性胃腺癌细胞系RF 4 8细胞中的生物学作用 .首先通过合成硫代磷酸化修饰的反义、正义和错配寡核苷酸片段 ,使用半定量RT PCR和Western印迹方法分别检测被 3种寡核苷酸转染的RF 4 8细胞在 1～ 5d内周期蛋白E2基因及它可能调控下游靶基因之一FGFR基因和蛋白质的表达 ,检测寡核苷酸转染的RF 4 8细胞周期和凋亡细胞 ,观察寡核苷酸转染RF 4 8细胞的软琼脂集落形成、运动能力和体外侵袭能力 .结果表明 ,修饰的反义寡核苷酸在有效地抑制RF 4 8细胞中周期蛋白E2表达上调后 ,RF 4 8细胞的迁徙能力被显著降低 ,其增殖、运动能力没有变化 .周期蛋白E2基因的主要作用并不是促细胞分裂 ,也与细胞的增殖、运动能力无关 ,周期蛋白E2基因的过度表达与胃腺癌的迁徙性存在相关性 ,其触发肿瘤的侵袭性可能通过某种机制调控其下游靶基因之一成纤维细胞生长因子受体 (FGFR) 展开更多

关键词 细胞周期 周期蛋白 E2基因 基因过表达 胃腺癌细胞 细胞迁徒 基因芯片 相关性

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小鼠NMNAT1基因的过表达和RNAi重组慢病毒的构建包装和检测

10

作者 赵虹 杨子超 张惊宇 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期622-629,共8页

目的:针对小鼠烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1(NMNAT1)基因构建质粒并进行慢病毒包装,同时检测其表达水平和干扰效率,为进一步探讨该基因的功能提供研究工具和实验基础。方法:根据NMNAT1基因信息,用慢病毒载体pLenti6构建三种重组质粒,分... 目的:针对小鼠烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1(NMNAT1)基因构建质粒并进行慢病毒包装,同时检测其表达水平和干扰效率,为进一步探讨该基因的功能提供研究工具和实验基础。方法:根据NMNAT1基因信息,用慢病毒载体pLenti6构建三种重组质粒,分别包含NMNAT1 cDNA全长、一个针对NMNAT1的小干扰序列和一个用于干扰对照的阴性序列。把这些质粒包装进慢病毒载体,并检测病毒滴度,再用慢病毒感染Hela细胞检测NMNAT1表达量和RNA干扰效率。结果:测序结果证明目的序列正确地插入到载体内。通过qPCR方法鉴定慢病毒包装成功,病毒滴度均为2×108 TU/ml以上。表达NMNAT1的重组慢病毒感染Hela细胞,该细胞能够高水平表达NMNAT1蛋白,而携带RNAi序列的慢病毒能够显著抑制其表达,干扰效率在70%以上。结论:针对NMNAT1的过表达和RNAi重组慢病毒制备成功,为进一步研究NMNAT1基因的功能和用慢病毒进行基因治疗提供了良好的研究工具。 展开更多

关键词 慢病毒属 重组 遗传 质粒 遗传载体 烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1 RNA干扰 基因过表达

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初治多发性骨髓瘤患者的基因突变及表达异常 被引量：4

11

作者 范熠 王树娟 +13 位作者 刘延方 王冲 李亚飞 王伟琼 郝倩倩 张丹凤 李英梅 孙慧 郭荣 陈绍倩 谢新生 李涛 万鼎铭 姜中兴 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期166-169,共4页

目的:分析初治多发性骨髓瘤(NDMM)患者常见基因的突变及表达异常。方法:取208例NDMM患者的骨髓细胞,用DNA测序法检测6种基因的表达水平及28种基因的突变状态。应用FISH法检测多发性骨髓瘤常见的细胞遗传学异常。结果:61例(29.33%)NDMM... 目的:分析初治多发性骨髓瘤(NDMM)患者常见基因的突变及表达异常。方法:取208例NDMM患者的骨髓细胞,用DNA测序法检测6种基因的表达水平及28种基因的突变状态。应用FISH法检测多发性骨髓瘤常见的细胞遗传学异常。结果:61例(29.33%)NDMM患者检测到基因突变,≥5例患者发生突变的基因包括NRAS、PRDM1、FAM46C、MYC、CCND1、LTB、DIS3、KRAS和CRBN。83例(39.90%)患者检测到6种基因的过表达,以细胞周期调节基因的过表达为主,分别是CCND1、CCND3、BCL-2、CCND2 FGFR3和MYC。169例(81.25%)患者检测到基因单核苷酸多态性改变,主要为TP53基因P72R多态性(70.17%)。染色体结构异常与基因表达异常有一定相关性,与染色体结构正常者相比较,14q32缺失患者中CCND1基因过表达比例更高,13q14缺失患者中FGFR3过表达比例更高,而1q21扩增患者中CCND2、BCL-2、FGFR3基因过表达比例更高。结论:NDMM患者存在多种基因突变和表达异常,但是缺乏主要的单个基因突变或表达异常。累及RAS/MAPK通路的基因突变及细胞周期蛋白CCND的过表达是常见的基因异常。 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 基因突变 基因过表达 DNA测序

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家蚕BmVNCP基因表达与BmNPV感染增殖相关性的鉴定分析 被引量：1

12

作者 邵露璐 何小柏 +6 位作者 高娟 宋秋云 张业顺 方瑷 武康晖 王学杨 张国政 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期293-301,共9页

为解析家蚕AN品系高抗BmNPV的分子机制,采用家蚕抗性品系AN与易感品种C108杂交及多代回交,结合累代BmNPV攻毒选择,构建了高抗BmNPV的近等基因系C108_AN;在5龄起蚕经口添食BmNPV多角体1×10^(8) mL^(-1)悬浊液浸渍桑叶对C108及C108_A... 为解析家蚕AN品系高抗BmNPV的分子机制,采用家蚕抗性品系AN与易感品种C108杂交及多代回交,结合累代BmNPV攻毒选择,构建了高抗BmNPV的近等基因系C108_AN;在5龄起蚕经口添食BmNPV多角体1×10^(8) mL^(-1)悬浊液浸渍桑叶对C108及C108_AN攻毒,对感染后12、24、36、48、60 h的中肠组织进行转录组测序发现,C108_AN样本中检出BmNPV基因个数与表达量均大幅减少,病毒虽然能够侵染但不能完成复制;转录组中编码230 aa的家蚕病毒核衣壳蛋白基因(命名为BmVNCP)在C108_AN样本中显著高表达,表明与BmNPV抗性可能具有关联性。在BmN细胞中过表达BmVNCP基因可以抑制BmNPV的增殖,在BmN细胞中进行靶向BmVNCP的CRISPR/Cas9基因编辑,未能观察到BmNPV增殖和vp39基因表达的稳定增加;BmN细胞内过表达BmVNCP基因可以明显提高宿主IMD信号通路中Dredd基因的表达水平,对FADD基因转录水平无影响,PGRP-LB和PGRP-LF基因表达量极低以致qRT-PCR无法检出。综合分析上述结果认为,家蚕细胞或组织中BmVNCP基因高水平表达不能够阻止BmNPV侵染,但能够降低BmNPV侵染后病毒基因的表达以及病毒增殖,BmVNCP基因产物可能是通过IMD信号通路触发免疫机制。 展开更多

关键词 家蚕 家蚕核型多角体病毒 家蚕病毒核衣壳蛋白基因 基因过表达 病毒感染 病毒增殖

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杉木紫色酸性磷酸酶基因ClPAP18b的克隆及表达分析 被引量：2

13

作者 周梦岩 赵铭臻 +4 位作者 李亚超 裴志阳 张健 马祥庆 李明 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1234-1246,共13页

【目的】以速生丰产型杉木无性系洋023、洋036、洋6421和拟南芥为材料,研究杉木中紫色酸性磷酸酶(PAPs)的功能作用,以筛选具有磷素高效利用特性的杉木无性系。【方法】采用PCR技术克隆PAP18b基因,分析其序列特征和同源性,并对杉木无性系... 【目的】以速生丰产型杉木无性系洋023、洋036、洋6421和拟南芥为材料,研究杉木中紫色酸性磷酸酶(PAPs)的功能作用,以筛选具有磷素高效利用特性的杉木无性系。【方法】采用PCR技术克隆PAP18b基因,分析其序列特征和同源性,并对杉木无性系洋023、洋036、洋6421进行正常供磷(1.0 mmol/L KH2PO4)和低磷胁迫(0.1 mmol/L KH_(2)PO_(4),0.9 mmol/L KCl)砂培盆栽处理0、10、15、30和60天,测定酸性磷酸酶活性及全磷含量,定量分析根和叶中ClPAP18b基因表达量、磷含量及酸性磷酸酶活性的关系,并将ClPAP18b基因过表达至拟南芥,进行该基因的功能验证。【结果】成功克隆获得杉木PAP18b基因CDS序列(1212 bp),命名为ClPAP18b,该基因编码404个氨基酸,亚细胞定位于胞间区,这表明ClPAP18b基因可能发挥调控酸性磷酸酶分泌至胞外的功能。酸性磷酸酶活性测定结果表明,30天磷处理后,正常供磷和低磷处理下,杉木洋036和洋6421无性系根中的酸性磷酸酶活性均高于叶,而根中酸性磷酸酶活性低磷处理下高于正常供磷处理;洋023的根和叶中酸性磷酸酶活性在低磷胁迫诱导下多高于正常供磷条件下根和叶中酸性磷酸酶活性。磷含量分析结果表明,杉木洋023、洋036和洋6421无性系的地上部磷含量高于地下部,不同水平供磷处理后,不同杉木无性系或同一杉木不同组织磷含量存在差异。RT-qPCR结果显示,低磷胁迫诱导杉木ClPAP18b基因表达。低磷条件下,ClPAP18b过表达拟南芥植株长势优于对照组,且过表达植株中的酸性磷酸酶活性叶高于对照组,但花青素积累量低于对照组。此外,相比于正常供磷处理植株,过表达ClPAP18b拟南芥中PHT1;2、PHT1;8和AtPAP26等与磷胁迫相关的基因表达量显著高于对照组,而AtPAP12和AtPAP17基因表达量明显降低。【结论】低磷胁迫诱导杉木ClPAP18b基因表达和酸性磷酸酶活性增强,但不同杉木无性系对磷缺乏的适应性存在明显差异,过表达ClPAP18b基因可促进拟南芥植株耐低磷胁迫,ClPAP18b基因可能在杉木低磷胁迫调节机制中发挥调控作用,可作为改良杉木耐低磷的重要候选基因。 展开更多

关键词 紫色酸性磷酸酶 杉木 磷胁迫 ClPAP18b基因过表达 RT-QPCR

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过表达INO1基因提高酿酒酵母乙醇耐受性 被引量：1

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作者 黄贞杰 陈由强 薛婷 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期87-92,共6页

为获得燃料乙醇生产菌株,通过基因工程改造,构建能够利用能源甘蔗汁发酵、乙醇产率高的酿酒酵母工程菌株。即过表达肌醇-3-磷酸合成酶基因ino1,敲除kanMX抗性基因,获得重组菌。对过表达菌株的乙醇耐受性进行分析。利用甘蔗汁进行发酵培... 为获得燃料乙醇生产菌株,通过基因工程改造,构建能够利用能源甘蔗汁发酵、乙醇产率高的酿酒酵母工程菌株。即过表达肌醇-3-磷酸合成酶基因ino1,敲除kanMX抗性基因,获得重组菌。对过表达菌株的乙醇耐受性进行分析。利用甘蔗汁进行发酵培养,采用气相色谱(GC)对发酵产物乙醇进行检测。结果显示过表达菌株YI2-1能够耐19%(V/V)的乙醇,利用20oBx甘蔗汁厌氧发酵乙醇积累量为13.10%(V/V),较出发菌提高了8.55%。而过表达菌株YI2-1△KP的最大乙醇积累量为13.17%(V/V),较出发菌提高了9.16%。研究表明通过过表达酿酒酵母ino1基因能够有效提高菌株细胞活力、乙醇耐受性。构建的工程菌可利用甘蔗汁发酵,具有较高的乙醇产量。 展开更多

关键词 酿酒酵母 ino1基因过表达 燃料乙醇 乙醇耐受性

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MSMEG_0372基因敲除、回补及过表达耻垢分枝杆菌的构建与鉴定

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作者 刘仪 牛宏红 +2 位作者 杨赛丽 曹旭东 袁俐 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2022年第5期620-626,共7页

目的为研究MSMEG_0372基因的功能,构建该基因敲除、回补及过表达耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,M.smegmatis)并鉴定。方法聚合酶链反应(PCR)扩增MSMEG_0372基因的左、右臂(即等位基因互换底物,allele exchange substrates,AES)... 目的为研究MSMEG_0372基因的功能,构建该基因敲除、回补及过表达耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,M.smegmatis)并鉴定。方法聚合酶链反应(PCR)扩增MSMEG_0372基因的左、右臂(即等位基因互换底物,allele exchange substrates,AES)。AES与p0004s经过酶切并连接,构建p0004s-AES质粒。p0004s-AES与phAE159经过酶切并连接,构建phAE159-AES噬菌粒。噬菌粒转化至M.smegmatis,30℃培养,扩增重组噬菌体。用重组噬菌体侵染M.smegmatis,37℃培养,发生基因同源重组,形成MSMEG_0372基因敲除菌株。筛选阳性菌落,PCR鉴定。PCR扩增MSMEG_0372基因,构建pMV361-MSMEG_0372质粒。将pMV361-MSMEG_0372质粒分别导入MSMEG_0372基因敲除菌株和野生型M.smegmatis,构建MSMEG_0372基因回补菌株和MSMEG_0372基因过表达菌株。筛选阳性菌落,PCR鉴定。结果PCR扩增出MSMEG_0372的左、右臂(AES),构建了p0004s-AES质粒和phAE159-AES噬菌粒,制备了高滴度的重组噬菌体并侵染M.smegmatis,从而成功构建了MSMEG_0372基因敲除菌株。构建了pMV361-MSMEG_0372质粒,成功构建了MSMEG_0372基因回补和过表达菌株。结论成功构建并鉴定了MSMEG_0372基因敲除、回补及过表达M.smegmatis,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 耻垢分枝杆菌 MSMEG_0372基因 基因敲除 基因回补 基因过表达

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MSN4基因的过表达对酿酒酵母耐受性的影响研究 被引量：2

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作者 董胜胜 李潇 +3 位作者 王鹏飞 付肖蒙 肖冬光 董健 《中国酿造》 CAS 北大核心 2018年第10期135-140,共6页

以实验室现有菌种AY12a为出发菌株,URA3基因作为筛选标记,利用胞内重组,在MSN4基因的N端加上强启动子PGK1_p以实现基因的过表达,最终通过多聚酶链式反应(PCR)验证,成功构建突变株AY12a-msn4。结果表明,该突变株具有一定的耐高温性能,在5... 以实验室现有菌种AY12a为出发菌株,URA3基因作为筛选标记,利用胞内重组,在MSN4基因的N端加上强启动子PGK1_p以实现基因的过表达,最终通过多聚酶链式反应(PCR)验证,成功构建突变株AY12a-msn4。结果表明,该突变株具有一定的耐高温性能,在55℃条件下热击后仍能正常生长。同时将突变株AY12a-msn4与出发菌株AY12a进行玉米高温浓醪发酵,并测定发酵完成后的酒精度、残糖、48 h细胞存活率、CO_2失重及发酵时间。结果表明,突变株AY12a-msn4发酵液酒精度提高3.85%,48 h细胞存活率上升,残糖含量下降14.5%。 展开更多

关键词 酿酒酵母 耐受性 基因过表达

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骨肉瘤组织中NOV基因表达量检测及与细胞增殖、迁移的相关性研究 被引量：1

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作者 高飚 《海南医学院学报》 CAS 2018年第1期105-108,共4页

目的:探讨骨肉瘤组织中肾母细胞瘤过表达基因(NOV)表达量检测及与细胞增殖、迁移的相关性。方法:2014年5月~2017年8月在孝感市中心医院接受手术治疗的骨肉瘤患者的病灶组织及瘤旁正常组织各97例,分别作为骨肉瘤组、正常对照组。采用荧... 目的:探讨骨肉瘤组织中肾母细胞瘤过表达基因(NOV)表达量检测及与细胞增殖、迁移的相关性。方法:2014年5月~2017年8月在孝感市中心医院接受手术治疗的骨肉瘤患者的病灶组织及瘤旁正常组织各97例,分别作为骨肉瘤组、正常对照组。采用荧光定量PCR检测不同组织标本中NOV基因、增殖相关基因、侵袭相关基因的表达量,采用Pearson检验评估骨肉瘤组织中NOV基因表达量及其与细胞增殖、迁移的相关性。结果:骨肉瘤组中NOV mRNA的表达量显著低于正常对照组(P<0.05);骨肉瘤组中KISS-1、TAp73 mRNA的表达量低于正常对照组(P<0.05),VCP、FoxM1、RIPK4、STIM1mRNA的表达量高于正常对照组(P<0.05);骨肉瘤组中DLX1、Sema6A mRNA的表达量低于正常对照组(P<0.05),EFEMP1、GPR56、SOX5、CRYAB mRNA的表达量高于正常对照组(P<0.05)。Pearson检验发现,骨肉瘤组织中NOV基因表达量与细胞增殖基因、侵袭基因的表达量直接相关。结论:骨肉瘤组织中NOV基因表达量低于瘤旁正常组织,且具体表达量与肿瘤细胞增殖、侵袭活性直接相关,可作为骨肉瘤恶性程度判断的可靠指标。 展开更多

关键词 骨肉瘤 肾母细胞瘤过表达基因(NOV) 增殖基因 侵袭基因

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肾母细胞瘤过表达基因(NOV)mRNA含量与骨肉瘤组织中细胞生长、迁移相关基因表达的相关性 被引量：1

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作者 梅平均 姜志强 +1 位作者 李颖 吕振京 《海南医学院学报》 CAS 2017年第9期1262-1264,1268,共4页

目的:探讨肾母细胞瘤过表达基因(NOV)mRNA含量与骨肉瘤组织中细胞生长、迁移相关基因表达的相关性。方法:收集在本院接受手术治疗的骨肉瘤患者78例,取骨肉瘤组织及癌旁组织。经荧光定量PCR法测定其中NOV及促增殖/抗增殖基因、侵袭基因的... 目的:探讨肾母细胞瘤过表达基因(NOV)mRNA含量与骨肉瘤组织中细胞生长、迁移相关基因表达的相关性。方法:收集在本院接受手术治疗的骨肉瘤患者78例,取骨肉瘤组织及癌旁组织。经荧光定量PCR法测定其中NOV及促增殖/抗增殖基因、侵袭基因的mRNA表达量,进一步经Pearson检验评估NOV mRNA表达量与骨肉瘤细胞生长、迁移活性的相关关系。结果:骨肉瘤组织中NOV mRNA的表达量显著低于癌旁组织,FoxM1、STIM1、Orai1的mRNA表达量显著高于癌旁组织,抗增殖基因RanBP9、Tap73、Caspase-3、PTEN、P53的mRNA表达量显著低于癌旁组织,侵袭基因EFEMP1、Notch1、Id1、Src的mRNA表达量显著高于癌旁组织(P<0.05)。经Pearson检验发现,骨肉瘤组织中NOV mRNA表达量与促增殖基因FoxM1、STIM1、Orai1的mRNA表达量呈负相关,与抗增殖基因RanBP9、Tap73、Caspase-3、PTEN、P53的mRNA表达量呈正相关,与侵袭基因EFEMP1、Notch1、Id1、Src的mRNA表达量呈负相关(P<0.05)。结论:骨肉瘤组织中NOV呈相对低表达,且NOV mRNA表达量与肿瘤细胞增殖、侵袭活性呈负相关。 展开更多

关键词 骨肉瘤 肾母细胞瘤过表达基因 增殖基因 侵袭基因

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杨树UGT198基因的生物信息学分析、基因克隆及功能初探 被引量：2

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作者 杨改霞 王春雨 +2 位作者 龙连香 王世杰 顾丽姣 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第1期14-22,共9页

【目的】研究UGT198基因是否参与调控烟草抗虫性,为未来探索其参与调控杨树抗虫性奠定基础。【方法】前期通过分析公共转录组数据发现PtrUGT198基因在杨树响应虫害的转录组中高调表达,对其进行生物信息学及进化分析。以107杨为材料,克隆... 【目的】研究UGT198基因是否参与调控烟草抗虫性,为未来探索其参与调控杨树抗虫性奠定基础。【方法】前期通过分析公共转录组数据发现PtrUGT198基因在杨树响应虫害的转录组中高调表达,对其进行生物信息学及进化分析。以107杨为材料,克隆UGT198基因,构建过量表达载体,利用农杆菌介导法转化烟草获得过量表达转基因株系。通过棉铃虫饲虫试验初步验证UGT198基因是否参与调控抗虫性,分析UGT198基因在调控抗虫性中发挥的功能。【结果】PtrUGT198基因完整的ORF区为1440 bp,编码479个氨基酸,理论分子量为53.14 kDa,等电点为5.92,编码不稳定疏水性蛋白。PtrUGT198蛋白的二级结构α⁃螺旋占41.75%,β⁃折叠占14.61%,β⁃转角占7.10%,无规卷曲占6.53%。PtrUGT198蛋白不存在跨膜区,预测其不属于膜蛋白,为非分泌性蛋白,该蛋白的磷酸化修饰以丝氨酸为主。同源序列对比结果显示PtrUGT198蛋白的C末端存在高度保守的植物次生产物糖基转移酶(Plant secondary product glycosyltransferase,PSPG)基序。系统进化树分析发现,PtrUGT198蛋白与同属植物毛白杨、银白杨和胡杨亲缘关系最近,其次和模式植物烟草有较近的亲缘关系。成功克隆杨树UGT198基因,构建pNC⁃UGT198基因过量表达载体,并转化烟草获得过量表达转基因株系,进行饲虫实验,得到高表达量烟草相对抗虫。【结论】首次成功克隆了UGT198基因,并初步解析其调控抗虫性的功能,为深入了解UGT198基因调控杨树抗虫机理提供参考价值。 展开更多

关键词 杨树 UGT198 生物信息学 基因克隆 过表达转基因株系

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整合蛋白α5,β1亚基的过表达对肝癌细胞粘附和迁移的影响 被引量：11

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作者 方新初 苏剑敏 +3 位作者 周国飞 王丽影 陈伉丽 查锡良 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2001年第1期1-4,共4页

目的 :研究整合蛋白α5 ,β1亚基的过表达与肝癌细胞粘附能力、迁移能力、集落形成能力、以及与肝癌细胞凋亡的关系。方法 :用已建立的单独转染α5 ,β1整合蛋白亚基的细胞株α5 3 772 1,β1 6 772 1和共转α5和 β1整合蛋白亚基的细... 目的 :研究整合蛋白α5 ,β1亚基的过表达与肝癌细胞粘附能力、迁移能力、集落形成能力、以及与肝癌细胞凋亡的关系。方法 :用已建立的单独转染α5 ,β1整合蛋白亚基的细胞株α5 3 772 1,β1 6 772 1和共转α5和 β1整合蛋白亚基的细胞株α5 β1 6 772 1;采用结晶紫染色法测定细胞的粘附能力、细胞的迁移能力 ;应用荧光染色法和流式细胞仪法测定细胞凋亡速度。结果 :转染后细胞与主要胞外基质蛋白 纤连蛋白的粘附分别为对照细胞的 1.39,1.34,1.7倍 ;与层粘连蛋白 (Ln)的粘附为对细胞的 1.3、2 .6、1.98倍 ;α5 ,β1整合蛋白转染株细胞在Fn上的迁移能力分别增加 1.2 2、0 .78、1.38倍。集落形成能力分别下降 38% ,35 %和 5 2 %。在无血清培养时 ,α5 ,β1整合蛋白转染株细胞的凋亡百分率分别提高 2 .4、0 .5 3、1.79倍。结论 :将α5 β1整合蛋白导入人肝癌细胞引起α5 β1整合蛋白过表达 ,可显著改变细胞的生长 ,粘附和迁移能力 ,从而导致体外集落形成能力明显下降 。 展开更多

关键词 整合蛋白 迁移 肝肿瘤 α5亚基 Β1亚基 基因过表达 细胞粘附 细胞凋亡

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