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正反义人端粒酶RNA组分(hTR)逆转录病毒真核表达载体的构建 被引量:5
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作者 王丛笑 刘吉勇 +3 位作者 赵跃然 焦玉莲 马春燕 杨崇美 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2005年第1期51-51,共1页
端粒的功能是完成染色体末端的复制,防止染色体免遭融合、重组和降解,其长度的维持是细胞永生化及恶性转化的重要分子基础,而调控端粒长度的关键分子则是端粒酶.端粒酶的重新表达在细胞永生化及癌变过程中起着重要的作用.端粒酶RNA(hTR)... 端粒的功能是完成染色体末端的复制,防止染色体免遭融合、重组和降解,其长度的维持是细胞永生化及恶性转化的重要分子基础,而调控端粒长度的关键分子则是端粒酶.端粒酶的重新表达在细胞永生化及癌变过程中起着重要的作用.端粒酶RNA(hTR) 作为端粒酶的组成部分决定着端粒的重复序列并参与端粒酶的活化.本研究将反义端粒酶RNA基因插入到逆转录病毒质粒载体PLXSN中,构建真核表达重组质粒PLXSN-hTR,以期重组质粒表达反义端粒酶RNA,从复制、转录、及翻译三个水平发挥作用,调控肿瘤细胞的端粒长度和端粒酶的活性,抑制或逆转肿瘤细胞的恶性表型,为研究和探索基因治疗肿瘤奠定基础. 展开更多
关键词 反义人端粒酶rna组分 真核表达载体 逆转录病毒 细胞永生化 分子基础 恶性转化 端粒长度 癌变过程 重复序列 染色体
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端粒酶hTERT基因反义RNA表达载体的构建及其对肝癌细胞SMMC-7721的作用 被引量:4
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作者 丁朝建 刘琼 +1 位作者 曾金红 徐辉碧 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1532-1533,共2页
关键词 端粒 端粒酶 反义rna 肝癌细胞
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端粒酶RNA的反义cDNA对乳腺癌细胞凋亡的影响(英文) 被引量:3
3
作者 张晓伟 陈彦灵 童坦君 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期447-452,共6页
为了进一步探讨端粒酶RNA(hTR)的反义cDNA对乳腺癌MCF 7细胞凋亡可诱导性的影响 ,构建了能将外源基因整合至细胞基因组的整合型腺病毒载体vAd AAV ,并将hTR全长cDNA反向连接至此载体上 ,获得反义重组腺病毒vAdT AAV .vAd AAV和vAdT AAV... 为了进一步探讨端粒酶RNA(hTR)的反义cDNA对乳腺癌MCF 7细胞凋亡可诱导性的影响 ,构建了能将外源基因整合至细胞基因组的整合型腺病毒载体vAd AAV ,并将hTR全长cDNA反向连接至此载体上 ,获得反义重组腺病毒vAdT AAV .vAd AAV和vAdT AAV分别感染MCF 7细胞后 ,获得两个细胞株MCF 7 vAd AAV和MCF 7 vAdT AAV ,其中MCF 7 vAdT AAV细胞基因组内整合有hTR反义cDNA并能稳定表达 .利用生存曲线、细胞形态学观察、DNA片段分析和流式细胞分析来测定NaBu和无血清DMEM诱导后细胞凋亡的反应性 .通过生存曲线 ,发现NaBu诱导的MCF 7 vAdT AAV细胞比对照组MCF 7和MCF 7 vAd AAV细胞更早出现凋亡 .电镜下 ,NaBu或去血清诱导的MCF 7 vAdT AAV细胞更早出现凋亡形态学指标 .流式细胞分析和DNA片段凝胶电泳实验均显示MCF 7 vAdT AAV细胞对凋亡的抵抗力下降 .研究结果表明 ,端粒酶RNA的反义cDNA使乳腺癌MCF 展开更多
关键词 端粒酶rna 反义核酸技术 乳腺癌 癌细胞凋亡
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反义端粒酶RNA基因对肝癌细胞的抑制作用 被引量:2
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作者 赵淑磊 刘吉勇 +1 位作者 马进财 刘娜 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第2期143-147,共5页
目的:研究逆转录病毒载体介导的反义端粒酶RNA基因对肝癌细胞的抑制作用,探讨通过抑制端粒酶活性治疗肝细胞癌的有效途径。方法:采用电穿孔法将携带正反义端粒酶RNA基因的逆转录病毒载体导入PT67包装细胞,G418筛选获得稳定产病毒细胞株... 目的:研究逆转录病毒载体介导的反义端粒酶RNA基因对肝癌细胞的抑制作用,探讨通过抑制端粒酶活性治疗肝细胞癌的有效途径。方法:采用电穿孔法将携带正反义端粒酶RNA基因的逆转录病毒载体导入PT67包装细胞,G418筛选获得稳定产病毒细胞株,收集逆转录病毒上清并感染人肝癌HepG2细胞,G418筛选获得稳定转染细胞克隆并扩增培养,经PCR鉴定后,通过MTT法分别检测转染正反义端粒酶RNA基因组肝癌细胞(HepG2-hTR-EcoRⅠ和HepG2-hTR-BamHⅠ)以及未转染端粒酶RNA基因组细胞(HepG2)的生长,免疫荧光化学检测肝癌细胞增殖,TRAP-PCR-ELISA法检测细胞的端粒酶活性,流式细胞术检测各组细胞所处的细胞周期及凋亡率。结果:基因转染后经PCR扩增可于约500bp处检测到目的基因的表达。转染反义端粒酶RNA基因的HepG2-hTR-BamHⅠ组细胞生长受到明显抑制;抗中性粒细胞核增殖抗原(PCNA)表达减少;实验组端粒酶活性为(2.31±0.16),较HepG2-hTR-EcoRⅠ组(3.24±0.20)及HepG2组细胞(3.22±0.17)明显下降(P<0.01);流式细胞术检测显示实验组细胞的凋亡率为(9.58±1.38)%,与对照组相比差别具有显著性(P<0.01);实验组细胞出现G2/M期阻滞。结论:端粒酶RNA是端粒酶活性表达的一个重要组成部分,通过反义技术下调其表达能够抑制肝癌细胞生长增殖,并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 端粒酶 逆转录病毒载体 反义rna 肝细胞癌
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反义端粒酶RNA基因对裸鼠肝癌移植瘤的抑制作用 被引量:2
5
作者 裴庆山 刘吉勇 孙欣欣 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期63-66,共4页
目的:研究反义人端粒酶RNA基因(human telomerase RNA,hTR)在裸鼠体内对肝癌移植瘤的抑制作用。方法:BALB/c裸鼠前肢腋窝皮下注射HepG2肝癌细胞构建移植瘤模型,以携反义hTR逆转录病毒质粒PLXSN-hTR-BamHⅠ瘤体内注射治疗(每次0.2 ml,共5... 目的:研究反义人端粒酶RNA基因(human telomerase RNA,hTR)在裸鼠体内对肝癌移植瘤的抑制作用。方法:BALB/c裸鼠前肢腋窝皮下注射HepG2肝癌细胞构建移植瘤模型,以携反义hTR逆转录病毒质粒PLXSN-hTR-BamHⅠ瘤体内注射治疗(每次0.2 ml,共5次),以注射正义hTR逆转录病毒质粒PLXSN-hTR-EcoRⅠ和生理盐水为对照,测量肿瘤体积,计算抑瘤率;H-E染色观察瘤组织病理变化;TUNEL法检测肿瘤组织细胞的凋亡。结果:反义hTR治疗组肿瘤生长较正义hTR治疗组及生理盐水组明显减慢,反义hTR组抑瘤率为26.78%,明显高于正义hTR组的1.93%(P<0.01)。反义hTR治疗组较正义hTR治疗组及生理盐水组瘤组织坏死面积、肿瘤细胞凋亡率均明显增加(均P<0.01)。结论:反义hTR在裸鼠体内能够显著抑制肝癌移植瘤的生长,促进肿瘤细胞的凋亡。 展开更多
关键词 反义端粒酶rna 肝癌移植瘤 增殖 凋亡
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端粒酶RNA反义寡核苷酸对白血病细胞K562增殖的影响 被引量:3
6
作者 张莉萍 曹前 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期622-624,共3页
目的:探讨人类端粒酶RNA的反义寡核苷酸对K562细胞增殖的影响。方法:采用MTT试验和平板集落形成实验观察反义寡核苷酸作用后K562细胞的生长情况,采用流式细胞仪分析细胞周期的改变,采用电镜观察细胞超微结构的改变,用PCR-ELISA分析细胞... 目的:探讨人类端粒酶RNA的反义寡核苷酸对K562细胞增殖的影响。方法:采用MTT试验和平板集落形成实验观察反义寡核苷酸作用后K562细胞的生长情况,采用流式细胞仪分析细胞周期的改变,采用电镜观察细胞超微结构的改变,用PCR-ELISA分析细胞端粒酶活性的改变。结果:端粒酶RNA的反义寡核苷酸作用K562细胞后,细胞超微结构和细胞周期发生明显改变,端粒酶活性受到明显抑制,细胞增殖受到明显抑制。结论:靶向于端粒酶RNA的反义寡核苷酸能抑制白血病细胞K562的增殖。 展开更多
关键词 端粒酶rna 反义寡核苷酸 白血病 细胞增殖 K562细胞 PCR-ELISA
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反义RNA抑制肝癌细胞株端粒酶活性与p16、p21表达的关系 被引量:1
7
作者 张传山 王文亮 +3 位作者 刘利 胡沛臻 张衍国 马福成 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2000年第5期403-405,共3页
目的 :观察反义端粒酶RNA对SMMC772 1细胞的作用 ,并检测 p16、p2 1的表达情况 ,探讨端粒酶在肝癌发生过程中的可能作用及反义端粒酶RNA在肝癌治疗中的意义。方法 :经脂质体介导的方法将 pBBS2 12 hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体 )导入... 目的 :观察反义端粒酶RNA对SMMC772 1细胞的作用 ,并检测 p16、p2 1的表达情况 ,探讨端粒酶在肝癌发生过程中的可能作用及反义端粒酶RNA在肝癌治疗中的意义。方法 :经脂质体介导的方法将 pBBS2 12 hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体 )导入SMMC772 1细胞中 ,细胞克隆转移扩大培养后 ,采用流式细胞仪、TRAP PCR ELISA、电镜、免疫组化技术结合图像分析 ,在检测SMMC772 1/ pBBS2 12 hTR细胞的端粒酶活性、凋亡的同时 ,检测p16、p2 1表达情况。 结果 :与对照组比较 ,反义端粒酶RNA在抑制SMMC772 1细胞端粒酶活性、诱发细胞发生凋亡的同时 ,p16、p2 1蛋白表达水平显著增高。结论 :转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒酶活性表达、促进SMMC772 1细胞凋亡的同时 ,伴发 p2 1与p16表达水平增高。 展开更多
关键词 肝肿瘤 端粒酶 P16 p21 细胞凋亡 反义rna
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人反义端粒酶RNA转染SGC-7901细胞后细胞周期调控基因表达的改变
8
作者 杨金亮 房殿春 +1 位作者 杨仕明 罗元辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期1027-1029,共3页
目的 :观察反义人端粒酶RNA(HumantelomeraseRNAcomponents ,hTR)转染的SGC 790 1胃癌细胞 ( 790 1 ahTR)细胞周期调控基因表达的变化。方法 采用RT PCR、Western印迹和免疫组化方法检测SGC 790 1和 790 1 ahTR细胞p2 1、p2 7、p16、c ... 目的 :观察反义人端粒酶RNA(HumantelomeraseRNAcomponents ,hTR)转染的SGC 790 1胃癌细胞 ( 790 1 ahTR)细胞周期调控基因表达的变化。方法 采用RT PCR、Western印迹和免疫组化方法检测SGC 790 1和 790 1 ahTR细胞p2 1、p2 7、p16、c myc等基因mRNA和蛋白的表达。结果 反义hTR转染的 790 1细胞p2 1和p2 7表达增加 ,PCNA和c myc表达下调 ,而cyclinD1和p16mRNA表达无明显变化。结论 抑制端粒酶活性能调节多种细胞周期调控基因的表达 ,从而抑制肿瘤细胞的增殖和诱导分化。 展开更多
关键词 胃癌细胞 端粒酶 反义人端粒酶rna HTR 细胞周期 p21 p27 p16 c-myc PCNA
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反义端粒酶RNA对肝癌细胞黏附和侵袭的影响 被引量:1
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作者 文廷玉 刘吉勇 +1 位作者 韩翠萍 姜雅堃 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期275-279,共5页
目的:探讨人反义端粒酶RNA(human telomerase RNA,hTR)对肝癌细胞系BEL-7402黏附和侵袭的影响及其机制。方法:利用前期实验成功转染端粒酶正、反义RNA基因的肝癌细胞,分为正义转染组(BEL-7402-hTR-EcoRⅠ细胞)、反义转染组(BEL-7402-hTR... 目的:探讨人反义端粒酶RNA(human telomerase RNA,hTR)对肝癌细胞系BEL-7402黏附和侵袭的影响及其机制。方法:利用前期实验成功转染端粒酶正、反义RNA基因的肝癌细胞,分为正义转染组(BEL-7402-hTR-EcoRⅠ细胞)、反义转染组(BEL-7402-hTR-BamHⅠ细胞),空白对照组(BEL-7402细胞)。黏附实验和侵袭实验检测反义hTR转染后BEL-7402细胞的黏附和侵袭能力,免疫细胞化学检测整合素β1(integrinβ1,INTβ1)、上皮钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cad)的表达水平,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、-9的活性变化。结果:与空白对照组和正义hTR转染组相比,反义hTR转染组BEL-7402-hTR-BamHⅠ细胞的黏附、侵袭能力明显减低(0.204±0.029vs0.505±0.037、0.465±0.029,34.80±3.19vs71.47±5.15、69.87±3.11,均P<0.05),INTβ1表达降低(0.153±0.016vs0.385±0.008、0.375±0.014,P<0.05),E-cad表达增强(0.209±0.020vs0.124±0.018、0.134±0.016,P<0.05),MMP-2和MMP-9的活性受到明显抑制(2 054.22±138.52vs3 105.56±329.60、2 923.22±269.08,846.33±104.66vs1 538.89±122.85、1 453.33±126.35,均P<0.05)。结论:人反义端粒酶RNA能明显减低肝癌BEL-7402细胞的黏附、侵袭能力,其机制可能与上调E-cad的表达、下调INTβ1的表达,并抑制MMP-2和MMP-9的活性有关。 展开更多
关键词 反义端粒酶rna 逆转录病毒载体 肝细胞癌 黏附 侵袭
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hTR反义寡核苷酸对食管癌细胞端粒酶活性、细胞凋亡及凋亡诱导因子表达的影响 被引量:2
10
作者 张蕾 温洪涛 +2 位作者 张岚 高冬玲 张云汉 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第6期1041-1043,共3页
目的:探讨封闭端粒酶RNA功能区的反义寡核苷酸(hTR ASODN)对食管癌EC9706细胞端粒酶活性、细胞凋亡及凋亡诱导因子(AIF)表达的影响。方法:应用hTR ASODN1次/d、连续7d转染EC9706细胞,以未加ASODN的脂质体对照组为空白对照,分别于转染后1... 目的:探讨封闭端粒酶RNA功能区的反义寡核苷酸(hTR ASODN)对食管癌EC9706细胞端粒酶活性、细胞凋亡及凋亡诱导因子(AIF)表达的影响。方法:应用hTR ASODN1次/d、连续7d转染EC9706细胞,以未加ASODN的脂质体对照组为空白对照,分别于转染后1d、3d、5d、7d采用TRAP-银染法检测EC9706细胞的端粒酶活性,原位末端转移酶标记法及吖啶橙荧光染色法检测EC9706细胞的凋亡及免疫细胞化学法检测AIF蛋白的表达。结果:与空白对照比较,hTR ASODN转染后EC9706细胞端粒酶活性受到抑制,细胞凋亡率及凋亡指数明显升高,AIF蛋白阳性表达率升高(P<0.05)。结论:hTR ASODN可有效抑制EC9706细胞的端粒酶活性,诱导肿瘤细胞凋亡,在此凋亡过程中,AIF可能发挥着重要作用。 展开更多
关键词 食管肿瘤 反义寡核苷酸 端粒酶rna 凋亡诱导因子
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端粒酶的研究进展 被引量:5
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作者 马永红 党荣理 +2 位作者 任立松 张建江 张玉静 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第1期75-78,共4页
端粒酶(Telomerase)是一种反转录酶,由RNA和蛋白质组成。对端粒酶的研究已成为一大研究热点,尤其是端粒酶与癌症及衰老的关系倍受科学家们的关注。就端粒酶的研究进展作一综述。
关键词 端粒酶 rna组分 肿瘤
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贵州部分地区少数民族与当地汉族妇女宫颈癌中端粒酶基因扩增和表达与HPV感染的相关性分析与比较 被引量:2
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作者 任春霞 张锚链 +3 位作者 林远箭 李国富 杨恭 孙丽君 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期166-172,共7页
背景与目的:用FISH检测人端粒酶RNA组分(human telomerase RNA component,hTERC)扩增是筛查宫颈组织早期癌变的有效方法,但是其检测结果的准确率尚不清楚。本研究旨在分析贵州省部分地区少数民族与当地汉族妇女宫颈癌中端粒酶基因扩增... 背景与目的:用FISH检测人端粒酶RNA组分(human telomerase RNA component,hTERC)扩增是筛查宫颈组织早期癌变的有效方法,但是其检测结果的准确率尚不清楚。本研究旨在分析贵州省部分地区少数民族与当地汉族妇女宫颈癌中端粒酶基因扩增和表达与HPV感染的相关性。方法:用FISH检测hTERC基因的扩增,结合免疫组化检测端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、HPV16/18 E6抗原和HPV16 E7抗原的表达,分析和比较了贵州省部分地区少数民族(苗族、侗族和土家族)与汉族宫颈癌患者之间的扩增或表达的差异。结果:少数民族与汉族之间在hTERC扩增,hTERT、E6和E7表达上差异无统计学意义(P>0.05);在少数民族和汉族中,hTERC基因的扩增与hTERT表达差异无统计学意义(P>0.05),但HPV16/18感染与hTERC扩增或与hTERT表达之间具有显著相关性(P<0.01)。说明宫颈癌中,HPV感染可能是导致hTERC扩增与hTERT高表达的主要原因之一。结论:检测HPV16/18 E6和hTERT表达,并结合测定hTERC扩增可提高贵州省部分地区少数民族以及汉族妇女宫颈癌筛查的准确率。 展开更多
关键词 宫颈癌 端粒酶rna组分 端粒酶反转录酶 HPV 扩增 表达
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WD40编码的P53 RNA反义转录子基因和蛋白及其功能 被引量:2
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作者 陆文昕 葛奕辰 +1 位作者 肖丽英 李燕 《国际口腔医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第2期244-248,共5页
WD40编码的P53 RNA反义转录子(WRAP53)基因有1α、1β和1γ三个起始外显子,1α与P53的第一外显子反向互补,其表达产物能稳定P53 RNA水平,从而促进P53蛋白表达,最终参与调控肿瘤的生物学行为;1β转录翻译生成的WRAP53蛋白,涉及细胞程序... WD40编码的P53 RNA反义转录子(WRAP53)基因有1α、1β和1γ三个起始外显子,1α与P53的第一外显子反向互补,其表达产物能稳定P53 RNA水平,从而促进P53蛋白表达,最终参与调控肿瘤的生物学行为;1β转录翻译生成的WRAP53蛋白,涉及细胞程序性死亡、周期调控以及蛋白酶降解和RNA代谢等多个重要生化过程。WRAP53蛋白主要通过与端粒酶复合体等多种组分结合参与端粒酶卡侯体(CB)的形成、端粒酶全酶的组装定位、端粒酶的运输,指导运动神经元生存蛋白定位至CB等。WRAP53基因在肿瘤细胞系和临床肿瘤样本中普遍高表达,且表达越高,肿瘤的预后越差。沉默WRAP53基因,可明显抑制肿瘤细胞的生长和成瘤能力。先天性角化不良综合征与端粒长度的缩短有关,WRAP53基因表达降低最终会导致端粒的缩短。 展开更多
关键词 WD40编码的P53 rna反义转录子 端粒酶卡侯体蛋白 端粒 蛋白质
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反义hTR基因瘤内注射对荷瘤鼠肿瘤治疗作用的初步观察 被引量:1
14
作者 杨金亮 房殿春 +3 位作者 杨仕明 罗元辉 罗昆仑 鲁荣 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期1037-1038,共2页
目的 观察反义人端粒酶RNA(hTR)基因瘤内注射对荷瘤鼠肿瘤的治疗作用。方法 人胃癌细胞株SGC 790 1裸鼠背部皮下接种 ,成瘤后于瘤内多点注射FuGENETM6 /反义hTR表达质粒复合物 ,设FuGENETM6稀释液为对照 ,观察肿瘤生长情况和肿瘤组织... 目的 观察反义人端粒酶RNA(hTR)基因瘤内注射对荷瘤鼠肿瘤的治疗作用。方法 人胃癌细胞株SGC 790 1裸鼠背部皮下接种 ,成瘤后于瘤内多点注射FuGENETM6 /反义hTR表达质粒复合物 ,设FuGENETM6稀释液为对照 ,观察肿瘤生长情况和肿瘤组织学结构变化。结果 治疗组肿瘤生长速度明显减慢 ,治疗 1月后瘤体较对照组小 2 3% ,瘤组织中的瘤细胞排列较稀疏并形成较多的腺样结构 ,显示有分化倾向。结论 反义hTR基因瘤内注射对荷瘤鼠肿瘤有一定的治疗作用 ,值得进一步研究。 展开更多
关键词 胃癌 反义人端粒酶rna 基因治疗 HTR 瘤内注射
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HTR反义寡核苷酸抑制鼻咽癌细胞生长及对其致瘤能力的影响
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作者 曹前 骆文龙 吴家廉 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第8期835-838,共4页
目的:研究针对端粒酶RNA(Human telomerase RNA,HTR)的反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotide,AS-ODN)抑制鼻咽癌HNE-1细胞株生长及对其致瘤能力的影响。方法:PCR-ELISA法检测细胞内端粒酶活性。MTT法及平板集落形成实验评价细... 目的:研究针对端粒酶RNA(Human telomerase RNA,HTR)的反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotide,AS-ODN)抑制鼻咽癌HNE-1细胞株生长及对其致瘤能力的影响。方法:PCR-ELISA法检测细胞内端粒酶活性。MTT法及平板集落形成实验评价细胞增殖活性。电镜观察细胞超微结构的改变。将经AS-ODN处理的HNE-1细胞接种于裸鼠皮下,观察其致瘤情况。结果:HTR反义寡核苷酸作用HNE-1细胞后,细胞端粒酶活性受到明显抑制;细胞增殖受到明显抑制,此作用有剂量、时间依赖性和序列特异性;电镜发现少量细胞肿胀坏死,但未见细胞凋亡和大片坏死灶。AS-ODN降低了HNE-1细胞的致瘤能力,裸鼠成瘤时间延长,肿瘤生长速度变慢。结论:HTR反义寡核苷酸可通过抑制鼻咽癌HNE-1细胞端粒酶活性而抑制细胞的生长,并抑制其对裸鼠的致瘤能力。 展开更多
关键词 鼻咽癌 反义寡核苷酸 端粒酶rna 裸鼠
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