人突变K-ras基因修饰lewis肺癌细胞株的建立及其生物学特性 被引量：1

1

作者 李潞 喻璟瑞 +4 位作者 周清华 陆燕蓉 王艳萍 陈小禾 朱文 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期135-138,147,共5页

目的:探讨以K-ras基因为靶点,建立人K-ras(12位密码子点突变)基因修饰的lewis肺癌细胞株3LL-pcDNA3-K-ras/V12及其生物学特性。方法:应用脂质体法将人K-ras(12位密码子点突变)基因cDNA导入lewis肺癌细胞株3LL,应用流式细胞仪检测p21/V1... 目的:探讨以K-ras基因为靶点,建立人K-ras(12位密码子点突变)基因修饰的lewis肺癌细胞株3LL-pcDNA3-K-ras/V12及其生物学特性。方法:应用脂质体法将人K-ras(12位密码子点突变)基因cDNA导入lewis肺癌细胞株3LL,应用流式细胞仪检测p21/V12蛋白的表达,同时检测3LL细胞株转基因前后生长、克隆形成率和体内成瘤的变化。结果:成功的将人K-ras(12位密码子点突变)基因cDNA导入lewis肺癌细胞株3LL,p21/V12蛋白在3LL-pcDNA3-K-ras/V12中稳定表达,转基因细胞株的生长曲线和克隆形成率与原代细胞株3LL无显著差异;但转基因细胞株在C57BL/6小鼠体内的成瘤性显著高于原代细胞株3LL。结论:成功的建立了导入K-ras(12位密码子点突变)的lewis肺癌细胞株3LL-pcDNA3-K-ras/V12。 展开更多

关键词 人突变k—ras基因 肺癌细胞株 生物学特性

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tva受体基因起始密码子突变对清远麻鸡感染K亚群禽白血病病毒的影响

2

作者 徐慧娟 邝智祥 +4 位作者 左珂菁 吴承洋 郑泓昊 谢青梅 陈伟国 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第3期351-357,共7页

【目的】探究tva受体基因起始密码子突变tva c.3G>A对清远麻鸡感染K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)的影响。【方法】利用直接测序方法对清远麻鸡不同品系tva c.3G>A突变位点进行基因分型。利用流式细... 【目的】探究tva受体基因起始密码子突变tva c.3G>A对清远麻鸡感染K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)的影响。【方法】利用直接测序方法对清远麻鸡不同品系tva c.3G>A突变位点进行基因分型。利用流式细胞术和RT-qPCR检测RCASBP(K)-EGFP荧光报告病毒和ALV-K GD1601病毒感染清远麻鸡tva c.3G>A突变位点不同基因型鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEFs)的情况。利用RT-qPCR检测ALV-K GD1601病毒感染清远麻鸡tva c.3G>A突变位点不同基因型雏鸡的情况。【结果】tva c.3G>A突变位点的基因分型结果显示,杂合突变基因型tva c.3G/A和纯合突变基因型tva c.3A/A存在于清远麻鸡K、M品系,tva c.3G/A频率分别为0.183、0.133,tva c.3A/A频率分别为0.116、0.033。流式细胞术和RTqPCR检测结果显示,tva c.3G>A突变位点野生型tva c.3G/G CEFs对RCASBP(K)-EGFP和ALV-K GD1601病毒易感,而纯合突变基因型tva c.3A/A CEFs有效抗RCASBP(K)-EGFP和ALV-K GD1601病毒的感染,表明tva c.3G>A突变导致清远麻鸡体外抗ALV-K的感染。ALV-K攻毒试验结果表明,tva c.3G>A突变导致清远麻鸡体内抗ALV-K的感染。【结论】tva c.3G>A突变引起清远麻鸡体外、体内抗ALV-K的感染,该突变位点可作为清远麻鸡ALV-K抗性选育的遗传标记。 展开更多

关键词 清远麻鸡 k亚群禽白血病病毒 tva受体基因 突变 遗传抗性

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卵巢癌中k-ras基因点突变及p53蛋白表达 被引量：15

3

作者 潘晓琳 高志斌 +2 位作者 陆天才 李洪安 郑兴征 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期66-69,72,共5页

目的　探讨k-ras基因点突变和p53蛋白表达在卵巢癌发生中的作用及致癌机制。方法　采用显微切割技术、半巢 式PCR RFLP技术和免疫组化染色检测55例卵巢癌及其交界性病变中的k-ras基因点突变和p53蛋白表达。结果　k ras基 因点突变率在... 目的　探讨k-ras基因点突变和p53蛋白表达在卵巢癌发生中的作用及致癌机制。方法　采用显微切割技术、半巢 式PCR RFLP技术和免疫组化染色检测55例卵巢癌及其交界性病变中的k-ras基因点突变和p53蛋白表达。结果　k ras基 因点突变率在黏液性腺癌(61.9%)明显高于浆液性腺癌(14.2%),在黏液性交界性腺瘤(61.5%)明显高于浆液性交界性腺 瘤(12.5%)。p53蛋白表达率在浆液性腺癌(80%)明显高于黏液性腺癌(52%),并随组织学分级而增高。结论　黏液性腺 癌主要通过腺瘤-交界性腺瘤-腺癌途径致癌,k-ras基因点突变是黏液性腺癌的早期事件,黏液性交界性腺瘤是黏液性腺癌 的癌前病变。浆液性腺癌主要通过生发上皮直接恶性转化形成,p53蛋白表达在浆液性腺癌的发生中起重要作用,是浆液性 腺癌的晚期事件。 展开更多

关键词 腺癌 P53蛋白表达 点突变 k—ras基因 浆液性 性腺 卵巢癌 显微切割 上皮 巢式PCR

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非小细胞肺癌患者K-RAS基因突变的研究 被引量：7

4

作者 张阳 潘振奎 +2 位作者 张星 徐菲 张力 《中国肺癌杂志》 CAS 2010年第6期602-606,共5页

背景与目的最近研究显示存在K-RAS基因突变的非小细胞肺癌患者难以从辅助化疗中获益,并且对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase Inhibitors,TKIs)耐药。这些发现提示K-RAS基因... 背景与目的最近研究显示存在K-RAS基因突变的非小细胞肺癌患者难以从辅助化疗中获益,并且对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase Inhibitors,TKIs)耐药。这些发现提示K-RAS基因突变情况可作为EGFR TKIs疗效的预测指标。本研究中分析了中山大学肿瘤防治中心非小细胞肺癌患者肺癌组织中K-RAS基因突变情况。方法收集52例非小细胞肺癌患者的新鲜组织标本,采用PCR技术扩增K-RAS基因,然后进行DNA测序并进行相应分析。结果在52例患者中,2例患者肿瘤组织中的K-RAS基因的12号密码子存在突变(2/52,3.8%)。统计学分析未发现K-RAS基因突变与性别、病理类型、吸烟情况以及肿瘤分化程度和分期间存在相互关系。结论非小细胞肺癌患者K-RAS基因突变率较低,与亚裔患者相近,而低于白种人患者。 展开更多

关键词 肺肿瘤 ras基因 突变

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突变k-ras基因重组腺病毒的构建 被引量：7

5

作者 赵峰 周清华 +2 位作者 覃扬 孙芝琳 孙泽芳 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第1期14-17,共4页

目的　利用细菌内同源重组法构建含 1 2密码子点突变的k ras基因重组腺病毒。方法　用限制性内切酶kpnⅠ +xhoⅠ从载体pcDNA3 k ras1 2 (Val)中切出 1 2密码子点突变的k ras基因片断 ,亚克隆至经同样酶切的腺病毒穿梭质粒pAdTrack CMV... 目的　利用细菌内同源重组法构建含 1 2密码子点突变的k ras基因重组腺病毒。方法　用限制性内切酶kpnⅠ +xhoⅠ从载体pcDNA3 k ras1 2 (Val)中切出 1 2密码子点突变的k ras基因片断 ,亚克隆至经同样酶切的腺病毒穿梭质粒pAdTrack CMV中 ,形成转移质粒pAdTrack CMV/k ras 1 2 (Val) ,将之PmeⅠ酶切线性化后与腺病毒基因重组质粒pAdEasy 1共转化大肠杆菌BJ51 83 ,抽提经鉴定含目的基因的重组体质粒 ,PacⅠ酶切后用脂质体转染 2 93细胞 ,包装成重组体腺病毒Ad k ras1 2 (Val)。采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定 ,利用穿梭质粒pAdTrack CMV中带有GFP报告基因 ,对病毒滴度和感染效率进行监测。结果　利用CaCl2 法由pAdTrack CMV/k ras 1 2 (Val)和pAdEasy 1共转化大肠杆菌BJ51 83 ,可获得 2 5%左右的阳性重组体细菌克隆。PCR检测表明重组腺病毒已含有目的基因 ,滴度为 1 .2× 1 0 1 2 pfu/ml。结论　细菌内同源重组法构建腺病毒相比于传统的细胞内同源重组法 ,具有成功率高、方法简便、快捷、实验周期短的优点 。 展开更多

关键词 腺病毒 突变ras基因 同源重组 肿瘤免疫治疗

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突变K-ras基因siRNA腺病毒载体的构建及其对人肺腺癌细胞株H441的影响 被引量：2

6

作者 张志平 姜冠潮 +2 位作者 杨帆 周足力 王俊 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期481-484,共4页

目的:构建含12密码子点突变的K-ras基因siRNA腺病毒载体,并研究其对人肺腺癌细胞株H441中突变K-ras基因表达的影响。方法:首先构建含有K-rasV12 siRNA的人H1启动子真核表达载体pSilencerH1/siK-rasV12;利用EcoRⅠ与HindⅢ双酶切将人H1... 目的:构建含12密码子点突变的K-ras基因siRNA腺病毒载体,并研究其对人肺腺癌细胞株H441中突变K-ras基因表达的影响。方法:首先构建含有K-rasV12 siRNA的人H1启动子真核表达载体pSilencerH1/siK-rasV12;利用EcoRⅠ与HindⅢ双酶切将人H1载体启动子和K-rasV12 siRNA序列亚克隆至经相同酶切的腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,形成转移质粒pAdTrack-H1/siK-rasV12,然后与腺病毒骨架质粒pAd/PL共转染至大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,酶切、序列鉴定。提取含目的基因的腺病毒重组体质粒,经PacⅠ酶切线性化后用脂质体转染293细胞,包装成重组腺病毒AdH1/siK-rasV12,扩增、纯化,并对病毒滴度进行检测。利用得到的重组腺病毒感染人肺腺癌H441细胞株,采用Westernblot检测感染前后K-rasV12蛋白表达水平的变化,观察AdH1/siK-rasV12对人肺腺癌细胞K-rasV12表达的影响。结果:成功构建K-rasV12s iRNA腺病毒载体,该载体可明显抑制H441细胞中K-rasV12蛋白的表达。结论:构建的AdH1/siK-rasV12腺病毒能有效抑制突变K-ras基因在人肺腺癌细胞株H441中的表达,为肺癌的基因治疗提供了新的方法和材料。 展开更多

关键词 SIRNA 突变k—ras基因 腺病毒H441细胞

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小分子干扰RNA特异性抑制人胰腺癌细胞株PANC-1突变型K-ras基因表达的探讨 被引量：5

7

作者 张志平 姜冠潮 王俊 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第19期1081-1084,共4页

目的:研究小分子干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)对人胰腺癌细胞株PANC-1中突变型K-ras基因表达的抑制作用。方法:构建真核表达载体pSilencer3.1-K-rasv12,转染PANC-1细胞后应用RT-PCR及Westernblot检测突变型K-ras基因mRNA及蛋白... 目的:研究小分子干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)对人胰腺癌细胞株PANC-1中突变型K-ras基因表达的抑制作用。方法:构建真核表达载体pSilencer3.1-K-rasv12,转染PANC-1细胞后应用RT-PCR及Westernblot检测突变型K-ras基因mRNA及蛋白质表达变化;噻唑蓝(MTT)测定细胞生长曲线;流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:测序证实siRNA真核表达载体构建成功。RT-PCR光密度比值结果空载体组、阴性对照组、实验组分别为:95.3%±2.5%、97.6%±2.8%、40.1%±3.1%,差异有统计学意义(P<0.05);Westernblot灰度比值结果空载体组、阴性对照组、实验组分别为:96.1%±2.2%、98.5%±2.0%、36.5%±3.2%,差异有统计学意义(P<0.05);实验组细胞生长受到明显抑制,凋亡率较对照组明显升高(P<0.05)。结论:pSilencer3.1-K-rasv12能有效抑制突变型K-ras基因在人胰腺癌细胞株PANC-1中的表达,抑制细胞生长,诱导细胞凋亡,为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法。 展开更多

关键词 siRNA k—ras基因 PANC-1细胞

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K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸对人胰腺癌靶基因表达的抑制作用 被引量：1

8

作者 陈熹 王永向 +2 位作者 纪宗正 高亮 南克俊 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期147-149,共3页

目的　观察针对于胰腺癌K ras基因点突变的反义寡核苷酸对靶基因表达的抑制作用。方法　脂质体将人工合成的针对于K ras基因第 12位密码子点突变的反义寡核苷酸转染体外培养的人胰腺癌细胞株PC 2 ,用免疫组化和原位杂交技术检测靶基因... 目的　观察针对于胰腺癌K ras基因点突变的反义寡核苷酸对靶基因表达的抑制作用。方法　脂质体将人工合成的针对于K ras基因第 12位密码子点突变的反义寡核苷酸转染体外培养的人胰腺癌细胞株PC 2 ,用免疫组化和原位杂交技术检测靶基因的表达。结果　转染 4 8h后 ,反义寡核苷酸作用组胰腺癌细胞株PC 2的ras蛋白和K rasmRNA的表达程度较正义组和对照组均明显降低 (P <0 .0 5 )。结论　针对于K ras基因点突变的反义寡核苷酸作用于体外培养的胰腺癌细胞 。 展开更多

关键词 k—ras基因 反义寡脱氧核苷酸 胰腺癌 靶基因表达 抑制作用 基因突变

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子宫内膜癌与K-ras基因突变的研究 被引量：3

9

作者 黄小琪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期701-702,共2页

目的：分析子宫内膜癌组织中K-ras基因突变状况及其与Ras蛋白表达的相关性，从基因水平探讨K-ras基因在子宫内膜癌发病中的作用机制。方法：诊断明确的子宫内膜癌手术切除标本108例及同期因其他病因行刮宫术的正常子宫内膜。应用免疫组... 目的：分析子宫内膜癌组织中K-ras基因突变状况及其与Ras蛋白表达的相关性，从基因水平探讨K-ras基因在子宫内膜癌发病中的作用机制。方法：诊断明确的子宫内膜癌手术切除标本108例及同期因其他病因行刮宫术的正常子宫内膜。应用免疫组织化学染色法检测K-ras的表达，PCR扩增一直接测序法检测K-ras基因第2外显子12、13密码子突变，分析K-ras基因突变对Ras蛋白表达的影响及临床意义。结果：K—ras蛋白阳性表达率在子宫内膜癌明显高于正常子宫内膜；子宫内膜癌中K-ras基因突变率为33．3％；其中第12位密码子突变占75．0％，突变位点均位于K-ras基因第12位密码子第2位碱基上；第13位密码子突变率为25％，突变位点位于K-ras基因第13位密码子第1、2位碱基上。K-ras基因突变与Ras蛋白表达成正相关。结论：K—ras蛋白的阳性表达率可能是预示子宫内膜癌预后的一个因素，K—ras基因12密码子G—T和G—A突变是主要的突变方式。12密码子的突变可能为Ras蛋白增多的原因。 展开更多

关键词 子宫内膜癌 k—ras基因突变 k—ras蛋白

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错配碱基PCR-RFLP检测K-ras癌基因点突变

10

作者 肖尚喜 吴琳 +4 位作者 王道斌 胡杰贵 刘华平 郑冰 张军 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1997年第4期375-378,共4页

错配碱基套式PCR RFLP检测K ras癌基因第 1 2位密码子点突变 ,并与一步法PCR RFLP作比较 .结果显示套式PCR RFLP可检测出 50 0细胞中的一个突变细胞 ,比一步法PCR RFLP分析的敏感性提高了 1 0 0倍 .利用该方法检测纤维支气管镜收集的标... 错配碱基套式PCR RFLP检测K ras癌基因第 1 2位密码子点突变 ,并与一步法PCR RFLP作比较 .结果显示套式PCR RFLP可检测出 50 0细胞中的一个突变细胞 ,比一步法PCR RFLP分析的敏感性提高了 1 0 0倍 .利用该方法检测纤维支气管镜收集的标本中的突变细胞 ,结果发现 9例肺腺癌中有 5例发生了K ras癌基因第 1 2位密码子点突变 .提示该方法可行 ,值得推广应用 . 展开更多

关键词 聚合酶链反应 ras基因 癌基因 点突变 肿瘤

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肾癌组织中ras基因产物p21表达和K－ras基因点突变分析

11

作者 丁强 张元芳 +1 位作者 施达仁 陆洪芬 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 1996年第1期20-23,共4页

目的研究ｒａｓ基因激活在肾癌发生中的意义。方法应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和免疫组织化学检测肾癌组织Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子突变及其基因产物ｐ２１蛋白的表达水平。结果４２例肾癌中６例Ｋ... 目的研究ｒａｓ基因激活在肾癌发生中的意义。方法应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和免疫组织化学检测肾癌组织Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子突变及其基因产物ｐ２１蛋白的表达水平。结果４２例肾癌中６例Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变，１９例ｐ２１蛋白阳性表达，正常肾组织和癌旁组织均阴性。ｐ２１表达与肿瘤分期和分级有关。ｐ２１阳性患者的手术后生存率明显低于ｐ２１阴性患者。结论肾癌Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变并不常见，ｐ２１表达可能成为肾癌恶性程度和预后评价的指标。 展开更多

关键词 肾肿瘤 癌基因 突变 基因表达 免疫组织化学 聚合酶链反应 癌基因蛋白p21(ras)

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改良法对NSCLC患者癌组织及外周血K-ras基因常见突变位点的检测

12

作者 李学琴 张露萍 +3 位作者 徐燕梅 彭丽娜 孙建国 陈正堂 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期202-205,共4页

目的建立改良的酶切富集PCR-焦磷酸测序技术,检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织与血浆中K-ras基因的突变情况。方法配对提取43例NSCLC患者的癌组织和血浆DNA,采用酶切富集PCR-焦磷酸测序技术检测K-ras基因第2外显子12及13密码子点突变... 目的建立改良的酶切富集PCR-焦磷酸测序技术,检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织与血浆中K-ras基因的突变情况。方法配对提取43例NSCLC患者的癌组织和血浆DNA,采用酶切富集PCR-焦磷酸测序技术检测K-ras基因第2外显子12及13密码子点突变,利用混合突变/野生型K-ras基因的细胞系(A549/HCC827)测定该方法的灵敏度。结果 NSCLC患者癌组织中K-ras突变率为9.3%(4/43),血浆中K-ras突变率为7.0%(3/43),均为12密码子突变,突变一致性达75%。混合细胞系检测显示,酶切富集PCR-焦磷酸测序技术的检测灵敏度达0.1%。结论酶切富集PCR-焦磷酸测序技术具有快速、准确、灵敏度高等优点,可用于临床NSCLC患者K-ras突变的筛查。 展开更多

关键词 癌 非小细胞肺 基因 ras 点突变 酶切富集PCR 焦磷酸测序

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胃癌及胃液中p53、ras基因突变与临床病理的关系 被引量：5

13

作者 王新美 齐兆生 +3 位作者 李建钊 王新云 韩红梅 孙红 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2002年第2期177-180,共4页

目的 :探讨胃良性病变向恶性转化过程中 p5 3、ras基因突变的规律 ,并分析胃癌无损伤基因检测的可行性。方法 :应用PCR SSCP及免疫组织化学方法对比研究。结果 :异型增生 p5 3基因突变率 10 % (3/30 )、ras基因突变率 16 7% (5 /30 ) ... 目的 :探讨胃良性病变向恶性转化过程中 p5 3、ras基因突变的规律 ,并分析胃癌无损伤基因检测的可行性。方法 :应用PCR SSCP及免疫组织化学方法对比研究。结果 :异型增生 p5 3基因突变率 10 % (3/30 )、ras基因突变率 16 7% (5 /30 ) (二者总突变率 2 6 7% ) ;早期胃癌p5 3基因突变率 35 % (7/2 0 )、ras基因突变率 6 0 % (12 /2 0 ) (二者总突变率 85 % ,其中 2例重复突变 ) ;中晚期胃癌 p5 3基因突变率 6 0 % (18/30 )、ras基因突变率 4 3 3% (13/30 ) (二者总突变率 90 % ,其中 4例重复突变 ) ;胃息肉ras基因突变仅 1/10。 30例胃溃疡边缘正常黏膜均未发现 p5 3、ras基因突变。p5 3基因突变的 2 5例胃癌的胃液中其相应的突变率 32 % (8/2 5 )。 19例胃癌患者的胃液中 9例有ras基因突变 4 7 1% (9/19)。异型增生 p5 3蛋白过度表达阳性率13 3% (4/30 ) ,p2 1ras蛋白阳性率 16 7% (5 /30 )。胃癌 p5 3蛋白阳性率 5 6 % (2 8/5 0 ) ,p2 1ras蛋白阳性率 6 0 % (30 /5 0 )。正常胃黏膜上皮、溃疡边缘正常黏膜及胃息肉均呈p5 3及ras蛋白阴性表达。结论 :胃癌的发生发展与癌基因ras与抑癌基因p5 3的突变有关 ,且两种基因同时检测 ,可覆盖绝大多数胃癌病例 ,提高了本项技术的可靠性 ,提供了胃癌无损伤基因? 展开更多

关键词 胃癌 胃液 P53 ras 基因突变 临床病理

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大肠癌ras癌基因、p53抑癌基因突变与临床研究 被引量：4

14

作者 白元松 张秀梅 +1 位作者 卢振霞 侯治富 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期146-147,共2页

关键词 大肠肿瘤 ras基因 P53基因 基因突变

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电化学发光PCR定量检测H-ras癌基因点突变 被引量：6

15

作者 朱德斌 邢达 +1 位作者 沈行燕 刘晋峰 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1248-1251,M005,共5页

提出了一种电化学发光PCR(ECL-PCR)分析方法, 该法可用于定量检测基因点突变. 其检测H-ras癌基因PCR扩增产物的灵敏度可达100 fmol;线性范围为0.1～500 pmol. 用ECL-PCR分析法对膀胱癌组织中H-ras癌基因进行突变检测, 只需要10 μL样品,... 提出了一种电化学发光PCR(ECL-PCR)分析方法, 该法可用于定量检测基因点突变. 其检测H-ras癌基因PCR扩增产物的灵敏度可达100 fmol;线性范围为0.1～500 pmol. 用ECL-PCR分析法对膀胱癌组织中H-ras癌基因进行突变检测, 只需要10 μL样品, 20 min的孵育时间和30 s的采集时间, 得出20例膀胱癌样品中有7例存在点突变, 通过标准曲线方程定量计算出突变样品的量. ECL-PCR分析方法在灵敏度、线性范围、分析时间等方面都优于传统的检测方法, 是一种安全、快速、灵敏、定量检测基因点突变的分析方法. 展开更多

关键词 电化学发光PCR 膀胱癌 H—ras癌基因 点突变

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肝细胞癌中ras,P53基因突变的研究 被引量：5

16

作者 朱争艳 宫恩聪 吴秉铨 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 1997年第1期31-33,共3页

为了探讨原癌基因ras和肿瘤抑制基因P53在肝癌中的变化,我们利用免疫组化技术检测了福尔马林固定、石蜡包埋肝癌组织内ras P21、P53蛋白的过量表达,利用聚合酶链式反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术分析了ras和P53基因部分外显子... 为了探讨原癌基因ras和肿瘤抑制基因P53在肝癌中的变化,我们利用免疫组化技术检测了福尔马林固定、石蜡包埋肝癌组织内ras P21、P53蛋白的过量表达,利用聚合酶链式反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术分析了ras和P53基因部分外显子的单链构象多态性。 在25例活检手术外检标本中,免疫组化检测结果5例P21阳性,8例P53阳性,其中有3例为ras P21、P53同时阳性。对P21、P53免疫组化阳性的标本利用PCR-SSCP分析检测ras 12、13和59、61密码子,P53第5、6、7、8外显子的基因突变,发现3例在ras 59、61密码子有异常电泳带,4例在P53第7外显子,2例在第5外显子、第6外显子、第8外显子各1例有异常泳动带,其中有1例在第7、8外显子上均发现异常电泳带。实验表明:1.P53基因突变多发生在分化差的肿瘤中。2.在肝癌的发生发展过程中,同时有原癌基因ras的激活和肿瘤抑制基因P53的灭活。 展开更多

关键词 肝肿瘤 肝细胞癌 ras基因 P53 基因突变

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RAS基因突变在急性髓系白血病患者中的临床意义 被引量：3

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作者 魏计锋 仇惠英 +4 位作者 陈泽 苗蕾 王莹 赵利东 蔡志梅 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1391-1396,共6页

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者RAS基因突变的临床特征及其对预后的影响。方法:通过二代测序技术(NGS)检测2011年5月至2021年2月本院180例初诊AML患者的43种髓系基因突变,回顾性分析RAS基因突变的分子学及临床特征,并分析其对患者疗... 目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者RAS基因突变的临床特征及其对预后的影响。方法:通过二代测序技术(NGS)检测2011年5月至2021年2月本院180例初诊AML患者的43种髓系基因突变,回顾性分析RAS基因突变的分子学及临床特征,并分析其对患者疗效及生存的影响。结果:180例AML患者中,RAS通路相关基因的突变比例依次为NRAS(14.4%)、KRAS(2.2%)、FLT3-ITD(13.8%)、PTPN11(7.7%)、KIT(5.0%)、FLT3-TKD(3.8%)、CBL(2.7%)。73例(40.6%)AML患者伴有RAS通路相关基因突变。NRAS/KRAS基因突变型患者的外周血白细胞数及骨髓原始幼稚细胞比例高于RAS基因野生型的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。NRAS/KRAS基因突变与CBL基因突变有显著相关性(r=0.287)。在年轻AML(年龄<60岁)患者中,RAS基因突变型患者与野生型患者在完全缓解率(CR)、无进展生存时间(PFS)及总生存时间(OS)上无明显统计学差异(P> 0.05)。在老年AML(年龄≥60岁)患者中,RAS基因突变型患者的PFS及OS均明显低于RAS野生型患者(P<0.05)。结论:在AML患者中,RAS基因突变较为常见,RAS基因突变与患者的临床特点、疗效有一定相关性,对老年AML可能是一种预后不良的分子学标志。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 ras基因 突变 预后

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皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族12/13位密码子突变的检测 被引量：2

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作者 胡成久 郭瑞珍 王燕 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第4期576-578,共3页

目的:探讨皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族(H-ras/N-ras/K-ras)12/13位密码子的突变情况。方法:从14例皮肤病理性瘢痕,14例瘢痕癌石蜡包埋组织中提取DNA,进行PCR扩增及测序,分析H-ras、N-ras、K-ras基因第12、13位密码子突变情况... 目的:探讨皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族(H-ras/N-ras/K-ras)12/13位密码子的突变情况。方法:从14例皮肤病理性瘢痕,14例瘢痕癌石蜡包埋组织中提取DNA,进行PCR扩增及测序,分析H-ras、N-ras、K-ras基因第12、13位密码子突变情况。结果:28个样本均成功提取DNA,扩增出基因片段,经测序均未发现H-ras、N-ras、K-ras基因第12、13位密码子的点突变。结论:皮肤病理性瘢痕和瘢痕癌中Ras基因家族的突变位点有待进一步探讨。 展开更多

关键词 突变 ras基因 皮肤病理性瘢痕 瘢痕癌

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胰腺癌反义K-ras癌基因片段的分离和克隆 被引量：1

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作者 蒋奎荣 刘训良 +5 位作者 卢春 苗毅 戴存才 徐泽宽 曾怡 黄丽 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期554-557,共4页

目的:分离及克隆胰腺癌基因组中K-ras基因片段,构建重组反义K-ras癌基因逆转录病毒载体,并探讨其意义。方法:设计2对PCR引物,分别在上下游引物中引进BamHⅠ和EcoRⅠ位点,以胰腺癌细胞株BxPC-3基因组DNA为模板扩增K-ras基因外显子1及侧... 目的:分离及克隆胰腺癌基因组中K-ras基因片段,构建重组反义K-ras癌基因逆转录病毒载体,并探讨其意义。方法:设计2对PCR引物,分别在上下游引物中引进BamHⅠ和EcoRⅠ位点,以胰腺癌细胞株BxPC-3基因组DNA为模板扩增K-ras基因外显子1及侧翼序列,并采用重组DNA技术将目的基因插入逆转录病毒载体LZRSpBMN-Z中,并经菌液PCR和限制性内切酸酶切鉴定。结果:K-ras基因外显子1及侧翼序列已成功地克隆入LZRSpBMN-Z中。结论:LZRSpBMN-Z是胰腺癌反义基因治疗中新型候选载体之一。应用PCR方法获取反义K-ras目的基因外显子1方便可行,可用于重组反义K-ras癌基因逆转录病毒载体的构建。 展开更多

关键词 胰腺肿瘤 逆转录病毒表达载体 反义 k—ras癌基因 克隆

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甲状腺癌组织中H-ras基因突变及蛋白表达的预后价值 被引量：1

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作者 李晓曦 陈国锐 +2 位作者 赵国华 赵国强 吴惠茜 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期102-104,共3页

对５４例甲状腺癌标本分别用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测Ｈ－ｒａｓ基因第１２位密码子的突变及免疫组化法检测ｐ２１ｒａｓ蛋白，并用时序检验分析ｒａｓ基因突变和ｐ２１ｒａｓ蛋白表达与甲状腺癌的关系。结果发现，甲状腺癌中１８例（３... 对５４例甲状腺癌标本分别用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测Ｈ－ｒａｓ基因第１２位密码子的突变及免疫组化法检测ｐ２１ｒａｓ蛋白，并用时序检验分析ｒａｓ基因突变和ｐ２１ｒａｓ蛋白表达与甲状腺癌的关系。结果发现，甲状腺癌中１８例（３３．３％）有ｒａｓ基因突变和４９例（９０．７％）有ｐ２１ｒａｓ蛋白过度表达。临床分期晚、分化程度低的甲状腺癌突变率较高，具有Ｈ－ｒａｓ原癌基因突变和ｐ２１ｒａｓ蛋白阳性的病例有较高的复发率和死亡率。表明ｒａｓ基因突变及其蛋白过度表达在甲状腺癌的发生和发展过程中发挥作用。 展开更多

关键词 甲状腺肿瘤 基因突变 p21ras基因 预后

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