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重叠延伸PCR法体外重建鸡主要组织相容性复合体Ⅰ 被引量:2
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作者 李新生 闫若潜 +5 位作者 高风山 方勤美 郝惠芳 李云岗 陈红英 夏春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1047-1052,共6页
本研究旨在体外重建鸡主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(MHCⅠ)重链(α链)胞外区与轻链(β2m)成熟肽的重组嵌合分子。采用RT-PCR法分别扩增鸡MHCⅠ的重链胞外区和轻链的成熟肽序列;采用重叠延伸PCR(Splicing overlap extension PCR method,... 本研究旨在体外重建鸡主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(MHCⅠ)重链(α链)胞外区与轻链(β2m)成熟肽的重组嵌合分子。采用RT-PCR法分别扩增鸡MHCⅠ的重链胞外区和轻链的成熟肽序列;采用重叠延伸PCR(Splicing overlap extension PCR method,SOE-PCR)把通过45个碱基的链连接的鸡MHCⅠ重链胞外区基因和轻链成熟肽基因重组到可溶性表达质粒pMAL-p2X进行可溶性表达。经琼脂糖凝胶电泳证明RT-PCR可分别扩增出鸡MHCⅠα链胞外区基因和β2m成熟肽基因,大小符合预期。采用MHCⅠα链胞外区序列的反义引物与β2m成熟肽基因正义引物有15个碱基重叠的两对引物,以MHCⅠα链胞外区序列与β2m成熟肽序列PCR产物的混合物作为模板,进行重叠延伸获得了预期大小的连接片段;测序显示重组质粒上MHCⅠα链胞外区序列与轻链β2m成熟肽基因的靶序列由一柔性的linker相连,阅读框正确且无移码。本研究表明SOE-PCR是体外重构鸡MHCⅠ的一种简捷可行方法。 展开更多
关键词 主要组织相容复合(mhc) 重链 轻链 重叠延伸PCR
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快长系F1鹅主要组织相容性复合物Ⅰ基因的克隆与序列分析
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作者 杨丽金 朱峰伟 +1 位作者 吕春伟 朱新产 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第9期25-31,共7页
根据GenBank中已发表的鸭科(Anatidae)雁属水禽主要组织相容性复合物Ⅰ(major histocompatibility complexⅠ,MHCⅠ)基因的多重比对确定保守序列,用Primer Premier 5.0软件在保守序列区域设计1对特异性引物,从快长系F1鹅的基因组DNA中... 根据GenBank中已发表的鸭科(Anatidae)雁属水禽主要组织相容性复合物Ⅰ(major histocompatibility complexⅠ,MHCⅠ)基因的多重比对确定保守序列,用Primer Premier 5.0软件在保守序列区域设计1对特异性引物,从快长系F1鹅的基因组DNA中扩增获得MHCⅠ基因片段序列,采用DNAsis、Mega 5.10、BLAST等多种生物学软件对核苷酸序列和氨基酸序列的结构、性质和功能进行分析。结果显示,克隆的F1鹅MHCⅠ基因片段长1036bp,编码96个氨基酸,与NCBI中五龙鹅MHCⅠ基因和编码序列的同源性达93%和83%,有72处碱基序列不同,16个氨基酸发生改变。与其他家禽也有较高的同源性,亲缘关系依次为四季鹅>鸡>鸭。F1鹅MHCⅠ基因片段编码蛋白分子质量为11.342ku,PI值为5.32,不稳定系数为34.92,脂肪系数为42.81,平均疏水性为-1.066,可能存在9个B细胞抗原表位,但不含信号肽,提示该蛋白为亲水性的非分泌蛋白,具有较高的免疫原性。在蛋白的二级结构中α-螺旋占31.25%,β-折叠占16.67%,β-转角占14.58%,无规则卷曲占37.50%,三级结构呈现近似哑铃型,具有2个结构域:氨基末端结构域和羧基末端结构域。因此,环境中的病原压力使MHC基因在物种之间和种群的个体之间都产生了明显差异,存在着多态性MHC分子与多样性抗原肽相互作用的关系。MHC决定着疾病易感性个体的差异,是研究疾病抗性的最佳候选标记基因。 展开更多
关键词 快长系F1鹅 主要组织相容复合基因 克隆 生物信息学
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鸡主要组织相容性复合体与抗病育种 被引量:5
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作者 李尚民 原新廷 +1 位作者 戴国俊 李国辉 《国外畜牧学(猪与禽)》 2007年第2期70-72,共3页
主要组织相容性复合体(MHC)是由染色体上紧密连锁的具有高度多态性的基因座位所组成的一个遗传区域,其在免疫系统中的作用与抗病性密切相关,因此成为近年来鸡抗病育种研究中的热门。本文对鸡MHC的结构、功能、与疾病抗性的关系以及最新... 主要组织相容性复合体(MHC)是由染色体上紧密连锁的具有高度多态性的基因座位所组成的一个遗传区域,其在免疫系统中的作用与抗病性密切相关,因此成为近年来鸡抗病育种研究中的热门。本文对鸡MHC的结构、功能、与疾病抗性的关系以及最新研究进展进行了综述,并展望其在鸡抗病育种中的应用前景。 展开更多
关键词 主要组织相容复合 mhc 抗病育种
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何谓主要组织相容性复合体(MHC)?
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《护士进修杂志》 北大核心 2007年第18期1642-1642,共1页
答:动物正常体细胞中均含有一定数量的染色体对称为二倍体。它们是由来自父母双方生殖细胞中的单倍体组成。在这些同源染色体中存在一系列基因,人类主要组织相容性复合体(MHC)基因位于第六对。在MHC中存在不同的基因位点,属于同一... 答:动物正常体细胞中均含有一定数量的染色体对称为二倍体。它们是由来自父母双方生殖细胞中的单倍体组成。在这些同源染色体中存在一系列基因,人类主要组织相容性复合体(MHC)基因位于第六对。在MHC中存在不同的基因位点,属于同一位点上的基因称为等位基因,MHC每个基因位点可由几个至几十位等位基因组成。MHC是编码主要组织相容性属于同一位点上的基因称为等位基因, 展开更多
关键词 人类主要组织相容复合 基因位点 等位基因 基因组成 mhc 生殖细胞 染色 二倍
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MHC-Ⅰ类分子抗原递呈与病毒免疫逃逸 被引量:5
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作者 刘莹 王团结 +4 位作者 吴思捷 赵俊杰 康凯 万建青 姚文生 《中国兽药杂志》 北大核心 2017年第11期71-77,共7页
阐述主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子递呈抗原过程,分析病毒干扰MHC-Ⅰ类分子抗原递呈所采取的策略,以期揭示病毒的免疫逃逸机制,为病毒疫苗的研制提供一定的思路。
关键词 主要组织相容复合类分子 抗原递呈 病毒 免疫逃逸
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西伯利亚鲟MHCⅡβ基因克隆、组织分布及细菌感染后的表达变化 被引量:6
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作者 田照辉 徐绍刚 +4 位作者 胡红霞 王巍 董颖 东天 孙爱 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期56-62,共7页
为研究鲟鱼主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)基因的分子特征和表达,利用RACE技术克隆获得了西伯利亚鲟Acipernser baerii MHCⅡβ cDNA序列1443 bp,包括开放阅读框(OFR)801 bp,编码184个氨基酸。Blast分析显... 为研究鲟鱼主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)基因的分子特征和表达,利用RACE技术克隆获得了西伯利亚鲟Acipernser baerii MHCⅡβ cDNA序列1443 bp,包括开放阅读框(OFR)801 bp,编码184个氨基酸。Blast分析显示,由MHCⅡβcDNA基因推导的氨基酸序列同其他物种的一致性为46%~83%,通过Smart站点分析,该序列具有SMART MHC_Ⅱ_beta结构域、SMART IGc1结构域和跨膜螺旋结构域;实时定量分析表明,正常情况下MHCⅡβ mRNA在西伯利亚鲟10种组织中均有表达,其中脾、头肾和血液中表达量较高,皮肤和肉中表达量极低(P<0.05);感染维氏气单胞菌Aeromonas veronii 40 h后,脾脏中MHCⅡβ mRNA的表达量显著低于未感染的对照组(P<0.05),直至93 h时恢复至对照组水平且有显著性变化(P<0.05)。研究表明,MHCⅡβ基因参与了西伯利亚鲟的免疫反应。 展开更多
关键词 西伯利亚鲟 主要组织相容复合基因( mhcⅡβ) 实时定量 细菌感染
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多发性骨髓瘤患者可溶性MICA和NK细胞NKG2D受体的检测
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作者 梅冰 陈永玲 +1 位作者 王昌富 袁琳 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期294-295,共2页
目的检测多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者血清可溶性主要组织相容性复合物Ⅰ类相关链A(soluble MICA,sMICA)和天然杀伤(NK)细胞表面NKG2D(natural-killer group 2,member D)受体表达的关系。方法 ELISA法检测38例MM患者和40例健... 目的检测多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者血清可溶性主要组织相容性复合物Ⅰ类相关链A(soluble MICA,sMICA)和天然杀伤(NK)细胞表面NKG2D(natural-killer group 2,member D)受体表达的关系。方法 ELISA法检测38例MM患者和40例健康人对照的血清sMICA含量,流式细胞术检测外周血NK细胞表面NKG2D受体的表达。结果 MM患者血清sMICA为(458±207)pg/ml显著高于健康对照组(135±82)pg/ml(t=9.133,P<0.01);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期MM患者血清sMICA(x-±s,pg/ml)分别为258±126、489±191和585±163,Ⅱ期和Ⅲ期均高于Ⅰ期患者(t分别为3.377和5.172,P均<0.01)。回归分析显示MM患者血清sMICA含量与外周血NK细胞表面NKG2D受体水平呈负相关(r=-0.749,P<0.01)。结论 MM患者血清sMICA含量变化与该病的发生及疾病活动性有一定关联。 展开更多
关键词 多发骨髓瘤 主要组织相容复合类相关链A 天然杀伤细胞2群成员D
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MHC及其在肉鸡和蛋鸡中的不同 被引量:3
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作者 吴艳 侯水生 +1 位作者 刘小林 肖红卫 《动物科学与动物医学》 2004年第4期38-39,共2页
本文综述了鸡MHC的结构、组成等特性,并介绍了其在肉鸡和蛋鸡中的不同。最后,总结了鸡MHC的作用,并对其在鸡育种中的应用前景进行了展望。
关键词 主要组织相容复合 mhc 肉鸡 蛋鸡 结构 组成 育种 多基因家族 抗原递呈作用 抗病
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三个品系蛋鸭β2m基因的克隆及多态性研究
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作者 张琳 于森 +5 位作者 白俊平 林冬梅 杨少华 黄艳艳 吴家强 蒋万春 《山东农业科学》 2018年第8期142-147,共6页
为明确鸭主要组织相容性复合体Ⅰ(major histocompatibility complex,MHCⅠ)β微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)分子的多态性和特征,推进相关免疫研究,本试验对我国3个地方品系蛋鸭的多条β2m基因进行克隆,序列经特征分析、同源比对和... 为明确鸭主要组织相容性复合体Ⅰ(major histocompatibility complex,MHCⅠ)β微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)分子的多态性和特征,推进相关免疫研究,本试验对我国3个地方品系蛋鸭的多条β2m基因进行克隆,序列经特征分析、同源比对和遗传进化分析后,进行了高变异位点的计算,并将重要变异位点在3D结构上进行了定位。结果表明,鸭β2m基因高度保守,仅个别碱基发生突变,序列中半胱氨酸、免疫球蛋白超基因家族的特征基序"Yx Cx Vx H"和与重链相互作用的位点均保守性存在;筛选的47条β2m氨基酸序列同源性为95%~100%,完全一致序列普遍存在;鸭β2m氨基酸序列与鸡同源性最高,与鱼类和两栖类最低,结果与遗传进化分析相一致;成熟肽中高变异位点和与重链相互作用的变异位点多位于β折叠上,但不会对β2m的功能产生影响。综合来看,鸭β2m基因保守性高,仅存在一种类型,与MHCⅠ重链的作用方式也相对固定。本试验结果有助于深入理解鸭β2m的分子特性,推动MHCⅠ相关免疫研究的开展。 展开更多
关键词 主要组织相容复合(mhc) β微球蛋白(β2m) 多态
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5匹马外周血单个核细胞表达MHC-I类分子的差异分析 被引量:2
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作者 马建 郭巍 +3 位作者 沈楠 孔宪刚 沈荣显 周建华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1414-1420,共7页
基于RT-PCR方法,扩增了用于马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)减毒疫苗株CTL表位研究的5匹马的编码经典MHC—I类分子的大部分基因,具体包括编码肽结合区大部分区域、α3区、穿膜区及胞浆区蛋白的基因,并进行... 基于RT-PCR方法,扩增了用于马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)减毒疫苗株CTL表位研究的5匹马的编码经典MHC—I类分子的大部分基因,具体包括编码肽结合区大部分区域、α3区、穿膜区及胞浆区蛋白的基因,并进行了PCR产物的克隆和测序。试验马匹外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)的总RNA提取物经RT-PCR扩增,并将所得产物进行T-A克隆。从每匹马的所有克隆中,分别随机挑取鉴定为阳性重组质粒的21~23个克隆用于测序分析。研究结果表明,5匹试验马匹各自具有3~5个等位基因,由于MHC-Ⅰ分子等位基因表达的共显性特征,可以推测马的基因组内可能存在2~3个基因座对应于这些等位基因,这与国外已有研究结论基本一致。另外,不同马匹PBMC表达的MHC-Ⅰ类分子的差别水平不一致。除了6号与7号和10号马之间MHC-Ⅰ类分子的差异较大,无相同或高度相近的经典MHC-Ⅰ类分子序列外,各马匹间均表达具有1个或1个以上的相同或高度同源的对应经典的MHC-Ⅰ类分子的mRNA。以上研究结果既可作为正在开展的EIAV减毒疫苗株CTL表位研究的基础性、支持性数据,又可进一步丰富国内马的经典MHC-Ⅰ分子多态性方面的相关研究。 展开更多
关键词 经典主要组织相容复合类分子 多态 反转录一聚合酶链式反应
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MHC区域人类基因变异详图绘制成功
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《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第11期491-491,共1页
一个由加拿大和美国科学家组成的研究小组公布了他们绘制的主要组织相容性复合体(MHC)中的人类基因变异详图。MHC是人类基因组里最重要的区域,广泛参与免疫应答的诱导与调节,激发机体特异性免疫反应,在免疫学上具有极为重要的意义... 一个由加拿大和美国科学家组成的研究小组公布了他们绘制的主要组织相容性复合体(MHC)中的人类基因变异详图。MHC是人类基因组里最重要的区域,广泛参与免疫应答的诱导与调节,激发机体特异性免疫反应,在免疫学上具有极为重要的意义。专家认为,该项研究工作是在这个重要区域分析基因变异性的一个里程碑,为今后进一步揭开免疫相关疾病的遗传根源打下了良好的基础。研究成果发表在9月24日出版的《自然遗传学》网络版上。 展开更多
关键词 人类基因组 基因变异 mhc 主要组织相容复合 免疫应答 美国科学家 免疫反应 相关疾病
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