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芒果核苷二磷酸激酶(NDPK)基因克隆及表达分析 被引量:7
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作者 罗睿雄 赵志常 +2 位作者 黄建峰 党志国 高爱平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第11期2183-2190,共8页
采用3′RACE和RT-PCR技术克隆芒果核苷二磷酸激酶基因全长c DNA序列,并用实时荧光定量PCR分析该基因的表达模式。结果表明:Mi NDPK1基因c DNA全长1 019 bp,开放阅读框为447 bp,编码148个氨基酸。Mi NDPK1蛋白定位于细胞质,无信号肽和跨... 采用3′RACE和RT-PCR技术克隆芒果核苷二磷酸激酶基因全长c DNA序列,并用实时荧光定量PCR分析该基因的表达模式。结果表明:Mi NDPK1基因c DNA全长1 019 bp,开放阅读框为447 bp,编码148个氨基酸。Mi NDPK1蛋白定位于细胞质,无信号肽和跨膜区域,具有典型的核苷二磷酸激酶活性结构域和其他磷酸化活性位点;与麻疯树、橡胶树同源性最高为89%,与菠菜同源性最低为82%。Mi NDPK1在芒果各组织中均有表达,以叶片中表达最高,其次是花和果皮;在芒果进入生殖时期的花芽分化期表达量最高,此后在芒果果实发育进程中逐渐降低并趋于平稳。结合病害处理转录组样本中的差异性表达结果,推测芒果Mi NDPK1基因在花芽分化进程、抗病性诱导及免疫应答通路上发挥重要作用。 展开更多
关键词 芒果 核苷二磷酸激酶 基因克隆 生物信息学分析 表达分析
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植物核苷二磷酸激酶(NDPKs)研究进展 被引量:6
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作者 王文斌 王金胜 +1 位作者 邓西平 刘建东 《农学学报》 2011年第4期1-5,共5页
为了给植物核苷二磷酸激酶NDPKs的进一步研究提供参考,总结了植物核苷二磷酸激酶(NDPKs)的分类、亚细胞定位、功能及其在植物基因工程中的应用。重点分析了NDPKs功能方面研究的最新进展,NDPKs不仅能够作为一种"看家酶",维持细... 为了给植物核苷二磷酸激酶NDPKs的进一步研究提供参考,总结了植物核苷二磷酸激酶(NDPKs)的分类、亚细胞定位、功能及其在植物基因工程中的应用。重点分析了NDPKs功能方面研究的最新进展,NDPKs不仅能够作为一种"看家酶",维持细胞NDP和NTP代谢平衡,而且还是一组多功能蛋白,参与植物细胞的生长与分化、光敏色素A、紫外线-B、热击响应及氧化胁迫响应中的信号传导等多种生命活动过程,甚至具有核酸酶活性。最后指出植物NDPKs的研究方向,并展望了其在植物抗逆基因工程方面良好的应用前景。 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶 分类 亚细胞定位 功能 基因工程
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Nm23/NDPK的多种生物活性及其机制研究进展 被引量:4
3
作者 熊盛 邢少璟 +1 位作者 钱垂文 王一飞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期2066-2070,共5页
Human Nm23 family consists of eight gene products that have been implicated in cellular differentiation,development and apoptosis,as well as oncogenesis and tumor metastasis.The protein products of Nm23 are nucleoside... Human Nm23 family consists of eight gene products that have been implicated in cellular differentiation,development and apoptosis,as well as oncogenesis and tumor metastasis.The protein products of Nm23 are nucleoside diphosphate kinases(NDPKs),the key metabolic enzymes that catalyze the synthesis of nucleoside triphosphates(NTP) by transfer of the terminal phosphate between NDP and NTP.Recent investigations are focused on the extraordinary pleiotropy and its mechanism of Nm23/NDPK.In this article,we review the recent progress in studies of the mechanism of Nm23/NDPK as metastasis suppressors,and other bioactivities of NDPK out of phosphate transfer enzyme,as well as the character of NDPK’s quaternary structure and the relation between its structure and function.In addition to these,the potential applications of NDPK as an enhancer of antiviral drugs or Nm23 as a drug target were also described.Findings herein summarized provide new and intriguing suggestions for a more extensive understanding of the biological functions of the star molecule,Nm23/NDPK. 展开更多
关键词 基因 Nm23 核苷二磷酸激酶
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牙龈卟啉单胞菌通过NDK/ATP/P2X7影响口腔鳞状细胞癌恶性表型的实验研究
4
作者 魏巍 谭小容 +2 位作者 李慕秋 龚忠诚 李晨曦 《口腔医学研究》 北大核心 2025年第5期378-385,共8页
目的:探索牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis,P.g)分泌的核苷二磷酸激酶(nucleoside diphosphate kinase,NDK)是否通过耗竭口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞外三磷酸腺苷(Adenosine triphosp... 目的:探索牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis,P.g)分泌的核苷二磷酸激酶(nucleoside diphosphate kinase,NDK)是否通过耗竭口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞外三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)调控P2X7门控从而影响OSCC的恶性表型。方法:收集2022年1月~2023年12月就诊于新疆医科大学第一附属医院(附属口腔医院)口腔颌面肿瘤外科30例患者临床资料和OSCC组织样本通过免疫组织化学染色检测OSCC组织中P.g与P2X7的表达。通过体外培养SCC 9和SCC 25细胞,培养P.g(W83型),敲除P.g(W83型)中的NDK(P.g-△NDK)后并培养,建立细胞/细菌的共培养模型(采用细胞免疫荧光观察共培养模型),加入或不加入ATP,运用CCK-8、细胞划痕、Transwell、乳酸脱氧酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放、检测P.g和P.g-△NDK对各组OSCC细胞增殖、迁移、侵袭能力及毒性的影响,并用蛋白质印迹实验验证其各组间P2X7蛋白的表达。结果:在OSCC组织中P.g与P2X7的表达显著高于癌旁组织(P<0.0001);细胞学实验中,感染P.g的SCC9和SCC 25细胞增殖、迁移、侵袭能力增强(P<0.01),细胞毒性也增强(P<0.0001),感染P.g-△NDK后,SCC 9和SCC 25细胞增殖、迁移、侵袭能力进一步增强(P<0.01),细胞毒性减弱(P<0.0001);各组加入ATP后,Control组、感染P.g组及感染P.g-△NDK组的细胞增殖、迁移、侵袭能力均增强(P<0.05),细胞毒性均减弱(P<0.0001),其中感染P.g组上清液中ATP含量明显减少(P<0.05),P2X7表达与ATP含量呈正相关关系。结论:P.g分泌的NDK具有耗竭SCC 9和SCC 25细胞外ATP的能力,敲除NDK后,P2X7表达上调,从而增强其增殖、迁移、侵袭能力,并降低细胞毒性。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单胞菌 口腔鳞状细胞癌 核苷二磷酸激酶 三磷酸腺苷 嘌呤能离子通道型受体7
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核苷二磷酸激酶A亚基(rhNDPK-A)对体内S_(180)、H_(22)、Lewis及H460肿瘤生长的影响 被引量:1
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作者 邢少璟 熊盛 +2 位作者 张美英 李久香 王一飞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1740-1743,共4页
目的:观察rhNDPK-A对动物移植性肿瘤生长的抑制作用,为临床应用提供科学依据。方法:昆明种健康小鼠85只,每只动物右前肢腋皮下接种传代后8d的S180或H22瘤细胞5×106个,随机分为8组;C57BL/6健康小鼠85只,每只动物右前肢腋皮下接种传... 目的:观察rhNDPK-A对动物移植性肿瘤生长的抑制作用,为临床应用提供科学依据。方法:昆明种健康小鼠85只,每只动物右前肢腋皮下接种传代后8d的S180或H22瘤细胞5×106个,随机分为8组;C57BL/6健康小鼠85只,每只动物右前肢腋皮下接种传代后10d的Lewis瘤细胞2×105个,分组方法同上。给动物接种瘤细胞后24h开始给药。S180和H22模型用尾静脉注射,每日1次,连用8d;Lewis模型用腹腔注射,每日1次,连用10d。Balb/c/neu裸鼠38只,腋窝皮下接种H460瘤组织块1·5mm×1·5mm×1·5mm,当移植瘤体积生长至100mm×100mm×100mm分5组开始腹腔注射给药,每日1次共17次。每周两次测瘤径,计算相对瘤体积,同时称体重。于末次给药后48h处理各组动物,剖瘤称重,计算瘤重抑制率,并进行统计学处理。结果:rhNDPK-A单用,中剂量与高剂量对S180肿瘤生长较明显,抑制率>40%。3个剂量对H22肿瘤生长均具有不同程度的抑制作用,但rhNDPK-A单用,对Lewis肿瘤生长无明显的抑制作用。rhNDPK-A20mg/kg与DDP(0·5mg/kg)合用,对H22肿瘤生长抑制率明显提高。20mg/kgrhNDPK-A对人肺腺癌H460裸鼠移植性肿瘤生长抑制达35·9%。结论:rhNDPK-A对S180、H22、H460肿瘤的生长具有一定的抑制作用,对Lewis肿瘤生长无明显的抑制作用。rhNDPK-A高剂量与DDP合用,对H22肿瘤生长的抑制具有协同作用。 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶 顺铂 肉瘤180 肝肿瘤 肺肿瘤
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转移力不同的肺癌克隆细胞中nm23-H1基因产物NDPK的表达 被引量:1
6
作者 张彬 熊敏 +1 位作者 韩安家 梁英杰 《中山医科大学学报》 CSCD 2000年第6期448-450,共3页
【目的】比较转移抑制基因nm2 3 H1表达产物核苷酸二磷酸激酶 (nucleosidediphosphatekinase ,NDPK)在转移力不同的肺癌克隆株中的表达。【方法】通过单细胞克隆技术及裸鼠接种筛选出高转移及低转移的人肺巨细胞癌克隆细胞株及高转移的... 【目的】比较转移抑制基因nm2 3 H1表达产物核苷酸二磷酸激酶 (nucleosidediphosphatekinase ,NDPK)在转移力不同的肺癌克隆株中的表达。【方法】通过单细胞克隆技术及裸鼠接种筛选出高转移及低转移的人肺巨细胞癌克隆细胞株及高转移的人肺腺癌克隆细胞株 ,用LSAB免疫组化法检测nm2 3 H1基因产物NDPK的表达。【结果】NDPK在高转移及低转移的人肺巨细胞癌克隆细胞移植瘤及转移瘤中均有表达 ,高转移株的阳性细胞数目及强度均高于低转移株和裸鼠正常肺组织 ;NDPK在高转移的肺腺癌克隆细胞移植瘤中有表达 ,表达强度低于裸鼠正常肺组织。【结论】nm2 3 H1基因对肺巨细胞癌并不具转移抑制基因的功能 ,而可能促进肿瘤的发生、发展和转移。 展开更多
关键词 肺癌 肿瘤转移 核苷酸二磷酸激酶 NM23-H1
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NDPK-A C4/109/145S突变体降低磷酸转移酶活性但增加DNase活性
7
作者 高雪 张志红 +3 位作者 吕芬 钱垂文 王一飞 熊盛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期260-266,共7页
核苷二磷酸激酶A(nucleoside diphosphate kinase A,NDPK-A)有广泛的生物学活性,在肿瘤转移和调控中起重要作用.单独抑制NDPK-A中任何1个Cys所形成的二硫键,不会降低NDPK-A的磷酸转移酶活性和DNase活性.本实验通过构建C4/109/145S突变... 核苷二磷酸激酶A(nucleoside diphosphate kinase A,NDPK-A)有广泛的生物学活性,在肿瘤转移和调控中起重要作用.单独抑制NDPK-A中任何1个Cys所形成的二硫键,不会降低NDPK-A的磷酸转移酶活性和DNase活性.本实验通过构建C4/109/145S突变体并研究其生物学效应,为NDPK-A结构与功能的研究提供参考.用定点突变法将NDPK-A的4位、109位和145位Cys突变为Ser,构建pBV220-NDPK-A C4/109/145S和pEGFP-NDPK-A C4/109/145S两种重组质粒.在大肠杆菌中高效表达NDPK-A C4/109/145S突变体,纯化后可获得均一的重组NDPK-A C4/109/145S突变体蛋白.HPLC法和DNA消化法测定发现,C4/109/145S突变体磷酸转移酶活性低于野生型NDPK-A,而DNase活性高于野生型NDPK-A.以A549细胞作为模式细胞的流式细胞仪周期检测表明,C4/109/145S突变体与野生型NDPK-A一致,均可将细胞周期延滞在S期和G2/M期.这些结果证实,NDPK-A结构异构与其磷酸转移酶活性密切相关,其酶活性至少需要1个Cys残基存在,NDPK-A结构中的二硫键也可能是其DNase活性的负调控机制之一,胞内NDPK-A的氧化还原异构可能对细胞周期无显著影响. 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶A 定点突变 磷酸转移酶活性 DNA酶活性 细胞周期
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犬恶丝虫核苷二磷酸激酶(NDPK)基因的原核表达及其免疫荧光定位
8
作者 张浩杰 刘梅 +6 位作者 李春燕 何冉 兰景超 罗娌 古小彬 谢跃 杨光友 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第9期1453-1460,共8页
对犬恶丝虫核苷二磷酸激酶(NDPK)基因的基本特征进行探究,并评估其诊断价值,旨在为犬恶丝虫病的诊断提供依据。本研究原核表达了Di-NDPK,通过生物信息学、免疫印迹和免疫荧光组化分析了该蛋白的基本特征,通过检测犬恶丝虫阳性血清评估了... 对犬恶丝虫核苷二磷酸激酶(NDPK)基因的基本特征进行探究,并评估其诊断价值,旨在为犬恶丝虫病的诊断提供依据。本研究原核表达了Di-NDPK,通过生物信息学、免疫印迹和免疫荧光组化分析了该蛋白的基本特征,通过检测犬恶丝虫阳性血清评估了rDi-NDPK的诊断价值。免疫印迹显示,Di-NDPK具有良好的反应原性,免疫荧光组化显示,Di-NDPK在犬恶丝虫的侧索及肠上皮细胞和肠腔中分布。间接ELISA显示,该方法的敏感性为66.7%(16/24),特异性为38.9%(14/36),其中与犬细粒棘球蚴病阳性血清、犬钩虫病阳性血清以及犬弓首蛔虫病阳性血清发生交叉反应。Di-NDPK是一个分泌蛋白,但不适合作为犬恶丝虫病的诊断候选抗原。 展开更多
关键词 犬恶丝虫 ndpk基因 克隆 原核表达 免疫荧光定位
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核苷二磷酸激酶A亚基的纯化、鉴定及其对顺铂抗癌作用的增强 被引量:5
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作者 王一飞 邢少璟 +4 位作者 张美英 钱垂文 林锋 罗勇 李久香 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期40-43,共4页
目的 了解核苷二磷酸激酶A亚基 (NDPK A)能否提高顺铂的抗癌效果。方法 利用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和Western印迹杂交来监测和鉴定目标蛋白NDPK A ,利用离子交换、亲和层析结合高效液相色谱纯化分离目标蛋白 ... 目的 了解核苷二磷酸激酶A亚基 (NDPK A)能否提高顺铂的抗癌效果。方法 利用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和Western印迹杂交来监测和鉴定目标蛋白NDPK A ,利用离子交换、亲和层析结合高效液相色谱纯化分离目标蛋白 ;MTT比色法测定药物对细胞生长抑制率的影响。结果 获得NDPK A单体蛋白 ,酶比活为 8mmol·min- 1·g- 1蛋白质 ;细胞生长抑制率显示 ,NDPK A单独处理细胞时未见明显的细胞毒性 ,但与顺铂联合处理却能大大加强后者对鼠肺腺癌细胞LA795和人喉癌细胞Hep 2的细胞毒性。结论 NDPK A与顺铂联用能增强顺铂对体外培养的鼠肺腺癌细胞LA795和人喉癌细胞Hep 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶类 顺铂 LA795 HEP-2 化学治疗
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大肠癌中Survivin和nm23-H1的表达及其联合检测的临床意义 被引量:7
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作者 刘伟 黄超 邢伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第19期2074-2076,共3页
目的观察Survivin与nm23-H1蛋白在大肠癌及其癌旁组织中的表达情况,探讨其联合检测与淋巴结转移的关系。方法采用免疫组化S-P法研究66例大肠癌和15例癌旁组织的Survivin和nm23-H1的表达情况,分析其与临床病理特征的关系。结果在大肠癌... 目的观察Survivin与nm23-H1蛋白在大肠癌及其癌旁组织中的表达情况,探讨其联合检测与淋巴结转移的关系。方法采用免疫组化S-P法研究66例大肠癌和15例癌旁组织的Survivin和nm23-H1的表达情况,分析其与临床病理特征的关系。结果在大肠癌及其癌旁组织中,Survivin阳性率分别为75.7%、62.1%,有显著性差异(χ2=13.254,P=0.000);nm23-H1的阳性率分别为26.7%、93.3%,差异有统计学意义(χ2=4.125,P=0.042)。Survivin的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、肝转移、Dukes分期有关(P<0.05)。nm23-H1的表达与淋巴结转移、肝转移、Dukes分期有关(P<0.01)。Survivin阳性率与淋巴结转移呈正相关(r=0.247,P=0.046),nm23-H1阳性率与淋巴结转移呈负相关(r=-0.359,P=0.003)。Survivin与nm23-H1蛋白表达呈负相关(r=-0.296,P=0.016)。结论 Survivin蛋白的抑制凋亡作用和nm23-H1蛋白的抑制转移作用可能在大肠癌的发生、发展过程中起重要作用,联合检测是判断大肠癌患者淋巴结转移倾向及预后的重要指标。 展开更多
关键词 SURVIVIN NM23核苷二磷酸激酶类 结直肠肿瘤 淋巴转移
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核苷二磷酸激酶A的异构及其分子机制 被引量:3
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作者 熊盛 钱垂文 +6 位作者 王一飞 黄立 李久香 严玖凤 王小宁 张晓伟 毕志刚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期815-821,共7页
对核苷二磷酸激酶A(NDPKA)的异构及其分子机制进行研究.还原和非还原SDSPAGE观察重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPKA)的异构;RPHPLC分析rhNDPKA异构体的反相色谱行为,并测定rhNDPKA异构体的酶活性;多角度激光散射法测定rhNDPKA异构体在溶液... 对核苷二磷酸激酶A(NDPKA)的异构及其分子机制进行研究.还原和非还原SDSPAGE观察重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPKA)的异构;RPHPLC分析rhNDPKA异构体的反相色谱行为,并测定rhNDPKA异构体的酶活性;多角度激光散射法测定rhNDPKA异构体在溶液中的表观分子量;飞行质谱分析异构体的质量肽谱.结果发现,rhNDPKA在非还原SDSPAGE上表现为4条带,对应于NDPKA的氧化型、还原型、氧化型二聚体和还原型二聚体,其分子量分别为18.1kD、21.3kD、35.2kD和38.3kD.RPHPLC发现,还原型rhNDPKA和氧化型rhNDPKA疏水性有差异.新鲜制备的rhNDPKA在纯水溶液中,经空气氧化后,逐渐由还原型向氧化型过渡,而还原剂或生理盐水可使rhNDPKA稳定于还原型或氧化型.酶活测定结果表明,还原型rhNDPKA比活性为1965±166Umg,氧化型rhNDPKA比活性为974±53Umg.多角度激光散射检测发现,还原型rhNDPKA在溶液中仍可形成六聚体.质量肽谱结果证明,在氧化型rhNDPKA中,C4和C145位巯基形成二硫键,而C109位巯基游离存在.根据本文所确定的NDPKA单体中的二硫键位置,推导出rhNDPKA单体异构体和二聚体异构体的变构原理,这为进一步研究NDPKA的多能性调节机制打下了良好基础. 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶A 异构 多角度激光散射 飞行质谱 二硫键 分子机制
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尘螨肠道微生物蛋白核苷二磷酸激酶的克隆、表达及纯化 被引量:2
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作者 杨小猛 王俊轶 +2 位作者 陈涛 刘志刚 杨平常 《江西师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2014年第5期485-488,共4页
根据GenBank中NDP kinase的基因序列,采用生物信息学方法将其中稀有密码子改造为大肠埃希菌常用密码子并进行二级结构优化,合成NDP kinase基因,构建原核表达载体pET28a-NDP kinase并酶切鉴定其序列,在大肠埃希菌BL21(DE3)中用异丙基-β... 根据GenBank中NDP kinase的基因序列,采用生物信息学方法将其中稀有密码子改造为大肠埃希菌常用密码子并进行二级结构优化,合成NDP kinase基因,构建原核表达载体pET28a-NDP kinase并酶切鉴定其序列,在大肠埃希菌BL21(DE3)中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,重组产物采用镍离子金属螯合亲和层析柱纯化.经密码子改造和二级结构优化后NDP kinase基因长度为490 bp,其编码蛋白理论分子量为21.5 kDa,重组表达载体经酶切鉴定与理论推测结果相符,在大肠埃希菌BL21(DE3)中该基因经IPTG诱导可高效表达,纯化后的重组蛋白分子量约为21.5 kDa,其单一蛋白纯度达95%以上.本研究成功构建了尘螨肠道微生物蛋白核苷二磷酸酶(NDP kinase)基因的pET28a原核重组质粒,为进一步研究NDP kinase在尘螨疫苗免疫治疗中的作用机理提供了基础. 展开更多
关键词 尘螨 肠道微生物 蛋白核苷二磷酸激酶
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重组人抑癌相关蛋白核苷二磷酸激酶A的原核表达 被引量:2
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作者 冉延超 王一飞 +4 位作者 熊盛 张美英 黄文韬 罗林波 刘秋英 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期954-959,共6页
目的 :为提高表达量 ,简化纯化工艺 ,获得可用于临床研究的重组人NDPK -A蛋白 ,构建带有 6×His纯化标签的原核表达载体 ,优化表达条件获得产物高表达并鉴定产物活性。方法 :将抑癌基因nm2 3-H1从质粒pBVNMH1中亚克隆于带有纯化标... 目的 :为提高表达量 ,简化纯化工艺 ,获得可用于临床研究的重组人NDPK -A蛋白 ,构建带有 6×His纯化标签的原核表达载体 ,优化表达条件获得产物高表达并鉴定产物活性。方法 :将抑癌基因nm2 3-H1从质粒pBVNMH1中亚克隆于带有纯化标签的表达载体pQE4 0中 ;梯度变化表达条件获得产物高表达 ;镍离子螯合层析柱纯化目的蛋白 ;Westernblot鉴定产物的免疫原性 ;HPLC测定产物的激酶活性 ;鸡胚尿囊膜试验鉴定产物抑制血管新生的生物活性。结果 :pQE - 4 0中亚克隆的nm2 3-H1序列无误 ;目的蛋白最高表达量可达 4 9 6 % ;纯化的表达产物能与天然NDPK -A的多克隆抗体特异结合 ;酶比活为 4 72U/mg ;具有抑制鸡胚尿囊膜血管新生的活性。结论 :表达质粒pQE -nm2 3H1能高效表达重组人NDPK -A ,纯化工艺简便 ,产物活性与天然NDPK -A无异。 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶 肿瘤抑制蛋白质类
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nm23蛋白在非小细胞肺癌患者肺癌组织和淋巴结表达的临床意义 被引量:4
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作者 王志新 高广正 +1 位作者 赵晓晏 张楚毅 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 1997年第1期15-17,共3页
目的探讨nm23基因与肺癌转移的关系。方法采用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)快速免疫组织化学法检测49例非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织和49份配对淋巴结标本nm23基因产物-核苷二磷酸激酶(NDPK/... 目的探讨nm23基因与肺癌转移的关系。方法采用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)快速免疫组织化学法检测49例非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织和49份配对淋巴结标本nm23基因产物-核苷二磷酸激酶(NDPK/nm23)。结果NDPK/nm23在NSCLC的肺癌组织表达为57.14%(28/49),其中鳞癌为60.87%(14/23),腺癌为53.85%(14/26)。26例伴淋巴结转移的肺癌标本中阳性16例(61.54%)。NDPK/nm23表达与淋巴结转移没有负相关,在淋巴结转移灶有较高表达(53.85%,14/26)。结论nm23基因在肺癌的发生、转移中可能起着不同的作用。 展开更多
关键词 肺肿瘤 核苷二磷酸激酶 免疫组织化学法
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人类腺苷酸激酶家族中几个新亚型及其功能特点 被引量:3
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作者 孔凡志 沈欢欢 +2 位作者 姜楠 杨焕民 杨锐 《黑龙江八一农垦大学学报》 2016年第2期37-44,共8页
腺苷酸激酶(Adenylate kinase,AK)是一种催化磷酸基团在腺嘌呤核苷酸之间相互转换,从而调节细胞内的不同部分腺嘌呤核苷酸比例的磷酸转移酶。近年来,越来越多的腺苷酸激酶同工酶新亚型被发现,现从编码腺苷酸激酶基因的定位、腺苷酸激酶... 腺苷酸激酶(Adenylate kinase,AK)是一种催化磷酸基团在腺嘌呤核苷酸之间相互转换,从而调节细胞内的不同部分腺嘌呤核苷酸比例的磷酸转移酶。近年来,越来越多的腺苷酸激酶同工酶新亚型被发现,现从编码腺苷酸激酶基因的定位、腺苷酸激酶的底物偏好及其功能等几个方面做了综述,为全面深入了解腺苷酸激酶家族提供了良好的理论基础和新线索。 展开更多
关键词 腺嘌呤核苷酸 腺苷酸激酶 核苷二磷酸激酶
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海洋聚磷菌中核苷二磷酸激酶基因的克隆及序列分析 被引量:1
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作者 任世英 肖天 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期61-63,共3页
以海洋聚磷茵 Halomonas YSR-3的总 DNA 为模板,用 PCR 法扩增核苷二磷酸激酶基因,将扩增片段克隆到 pGM-T 载体,转化 Escherichia coli TOP10菌株,经蓝白斑筛选、菌落 PCR 得到阳性克隆,测序后对序列进行 Blast 比对分析。得到的基因... 以海洋聚磷茵 Halomonas YSR-3的总 DNA 为模板,用 PCR 法扩增核苷二磷酸激酶基因,将扩增片段克隆到 pGM-T 载体,转化 Escherichia coli TOP10菌株,经蓝白斑筛选、菌落 PCR 得到阳性克隆,测序后对序列进行 Blast 比对分析。得到的基因序列长度为420 bp,翻译后的序列与 Loktanella yestfoldensisSKA53,Jannaschia sp.CCS1,Roseobacter sp.CCS2的核苷二磷酸激酶蛋白序列相似性分别为89%,86%,85%。 展开更多
关键词 盐单胞菌属 聚磷菌 核苷二磷酸激酶(ndpk)
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核苷二磷酸激酶B稳定表达细胞系的建立及其对新城疫病毒F48E9株复制的影响
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作者 郭育培 班付国 +2 位作者 闫若潜 方先珍 丁壮 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第8期2283-2288,共6页
为研究核苷二磷酸激酶B(nucleoside diphosphate kinase B,NDPK B)蛋白表达对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)F48E9株复制与增殖的影响,本试验将真核表达重组质粒pEGFP-NDPK B转染Vero细胞,经G418压力筛选出了阳性细胞单克隆,... 为研究核苷二磷酸激酶B(nucleoside diphosphate kinase B,NDPK B)蛋白表达对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)F48E9株复制与增殖的影响,本试验将真核表达重组质粒pEGFP-NDPK B转染Vero细胞,经G418压力筛选出了阳性细胞单克隆,并通过RT-PCR、Western blotting和倒置荧光显微镜观察鉴定了NDPK B mRNA和蛋白质的表达,在细胞系基础上,通过HA-HI、TCID50及实时荧光定量PCR检测NDPK B蛋白对NDV F48E9株复制和增殖的影响。结果表明,试验成功地构建了高表达NDPK B蛋白的Vero/NDPK B细胞系,并在此基础上,通过检测证明了NDPK B能抑制NDV F48E9株在Vero细胞中的复制与增殖,提示以NDPK B为基础有可能设计开发抗NDV的新药物或抗病毒增效剂,对NDV进行预防或治疗。 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶B 表达 新城疫病毒 复制与增殖
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过表达核苷二磷酸激酶对透明质酸的产量和相对分子质量的影响
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作者 虞菊萍 刘玮 +2 位作者 叶萌 唐东洋 高向东 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期232-238,共7页
为了考察核苷二磷酸激酶(NDK)对透明质酸合成过程的影响,将核苷二磷酸激酶基因(ndk)和透明质酸合成酶基因在重组枯草芽孢杆菌细胞内共同进行过表达,成功构建了两株工程菌株Hp8tg及Pn8tg,均获得了均一相对分子质量透明质酸(HA)。通过响... 为了考察核苷二磷酸激酶(NDK)对透明质酸合成过程的影响,将核苷二磷酸激酶基因(ndk)和透明质酸合成酶基因在重组枯草芽孢杆菌细胞内共同进行过表达,成功构建了两株工程菌株Hp8tg及Pn8tg,均获得了均一相对分子质量透明质酸(HA)。通过响应面分析试验对诱导条件进行了优化,通过单糖组成分析、傅里叶红外光谱分析及核磁共振波谱分析对HA进行了鉴定。ndk过表达使HA产量提高了1.3倍,相对分子质量提高了1.1倍。研究结果表明,核苷二磷酸激酶的过表达可消除尿苷二磷酸(UDP)蓄积对Ⅱ型透明质酸合成酶的抑制作用,从而提高了HA的产量及相对分子质量。此策略可以有效提高HA的产量和相对分子质量,也为其他多糖的制备提供了新的思路。 展开更多
关键词 透明质酸 核苷二磷酸激酶 透明质酸合成酶 尿苷二磷酸 产量 均一相对分子质量 枯草芽孢杆菌
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植物核苷二磷酸激酶研究进展 被引量:9
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作者 朱馨妮 汪珊珊 +1 位作者 周佳琴 朱世华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期19-28,共10页
核苷二磷酸激酶(Nucleoside diphosphate kinases,NDPKs)是一类高度保守的蛋白,大小一般在70-100 k D,在生物体内大多数以六聚体形式存在,仅在少数原核生物中以四聚体形式存在。NDPK主要参与维持核苷二磷酸和核苷三磷酸的平衡。目前在... 核苷二磷酸激酶(Nucleoside diphosphate kinases,NDPKs)是一类高度保守的蛋白,大小一般在70-100 k D,在生物体内大多数以六聚体形式存在,仅在少数原核生物中以四聚体形式存在。NDPK主要参与维持核苷二磷酸和核苷三磷酸的平衡。目前在植物中已发现4种NDPK:NDPKⅠ、NDPKⅡ、NDPKⅢ和NDPKⅣ,相关研究主要集中在前3种。NDPKⅠ与植物生长发育、非生物胁迫、感病应激和激素响应有关;NDPKⅡ参与光合作用和活性氧清除;NDPKⅢ参与能量代谢和细胞程序性死亡;NDPKⅣ仅在拟南芥和水稻基因组中发现,预测定位于内质网,功能未知。除了上述的主要作用外,NDPK在某些植物中还有特殊功能,如参与DNA复制、参与淀粉和纤维素的合成、参与生长素调节和发挥核酶活性等。这些作用机制是否存在物种特异性还有待进一步的研究。对NDPK的系统进化、生物功能的最新进展进行了综述。最后对NDPK的发展趋势进行了展望,有助于将来对NDPK进行更深入和全面的研究。 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶 ndpk 系统进化 功能
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鲍曼不动杆菌核苷二磷酸激酶的结构和功能研究(英文) 被引量:2
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作者 胡颖嵩 冯峰 刘迎芳 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第3期260-267,共8页
近年来,鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)在医院里越来越受到人们的关注,尤其是在重症监护病房(ICUs).它以强大的多重耐药性(multiresistance)而闻名.核苷二磷酸激酶(nucleoside diphosphate kinase,NDK)是一种进化上非常保守的酶... 近年来,鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)在医院里越来越受到人们的关注,尤其是在重症监护病房(ICUs).它以强大的多重耐药性(multiresistance)而闻名.核苷二磷酸激酶(nucleoside diphosphate kinase,NDK)是一种进化上非常保守的酶,它能催化核苷之间磷酸基团的转移.我们解析了鲍曼不动杆菌NDK野生型和C端氨基酸残基Arg141-Thr142-Arg143(RTR)截短突变体的结构.通过和黄色黏菌(Myxococcus xanthus)NDK的三维结构进行比较,推断鲍曼不动杆菌NDK的催化机制和黄色黏菌类似.通过激酶活性实验和圆二色谱实验,发现鲍曼不动杆菌NDK E28A突变体二级结构发生了改变,从而导致蛋白催化活性降低,说明Glu28是鲍曼不动杆菌NDK结构中非常关键的氨基酸残基.鲍曼不动杆菌NDK C端RTR截短突变体显示出催化活性极大的降低,这可能与C端RTR残基介导的二体间相互作用有关.虽然RTR截短突变体中的Lys33伸向了和野生型中不同的方向,和Val15产生相互作用弥补了一部分因为RTR截短丢失的相互作用,维持了RTR截短突变体和野生型类似的结构.但是,Lys33产生的相互作用依然太弱,不足以维持蛋白在催化的动态过程中整体结构的高效转换.我们解析的鲍曼不动杆菌NDK晶体高分辨率结构将有助于科学家设计针对鲍曼不动杆菌的药物. 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 核苷二磷酸激酶(NDK) 晶体结构
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