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猪食道口线虫ITS-1和ITS-2rDNA的PCR-SSCP分析 被引量:13
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作者 林瑞庆 张新高 +4 位作者 胡友兰 李国清 翁亚彪 宋慧群 朱兴全 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期323-326,331,共5页
以采自我国不同地区猪体的食道口线虫虫株为研究对象,PCR扩增出ITS-1和ITS-2序列片段,然后采用单链构象多态性(SSCP)方法分析PCR产物,对不同地区食道口线虫进行分子鉴定。所有样品经SSCP分析显示两种带型,第一种为有齿食道口线虫带型,... 以采自我国不同地区猪体的食道口线虫虫株为研究对象,PCR扩增出ITS-1和ITS-2序列片段,然后采用单链构象多态性(SSCP)方法分析PCR产物,对不同地区食道口线虫进行分子鉴定。所有样品经SSCP分析显示两种带型,第一种为有齿食道口线虫带型,另一种为未定种食道口线虫带型。代表性样品的测序结果表明,未定种食道口线虫带型的样品为四棘食道口线虫。本研究在国际上首次报道了中国猪四棘食道口线虫的ITS序列,并建立了区分有齿食道口线虫和四棘食道口线虫的PCR-SSCP方法,从而为食道口线虫的分子生物学的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 食道口线虫 ITS-1 ITS-2 单链构象多态性(sscp)
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ADD1基因PCR-SSCPs标记与猪肌内脂肪含量及背膘厚的关系 被引量:22
2
作者 陈杰 赵茹茜 +2 位作者 杨晓静 佟辉 刘红林 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期66-69,共4页
采用PCR SSCPs方法在苏太猪脂肪细胞定向分化因子 1(ADD1)基因第 347和 374位点发现单核苷酸多态性(SNP) ,分别为ADD1第 90和 99位氨基酸密码子的第 3位碱基 ,但这两个位点碱基的替换均没有引起氨基酸序列的变化。通过对 10 0头苏太猪... 采用PCR SSCPs方法在苏太猪脂肪细胞定向分化因子 1(ADD1)基因第 347和 374位点发现单核苷酸多态性(SNP) ,分别为ADD1第 90和 99位氨基酸密码子的第 3位碱基 ,但这两个位点碱基的替换均没有引起氨基酸序列的变化。通过对 10 0头苏太猪肥育猪背最长肌中肌内脂肪含量的相关分析 ,发现杂合子AB肌内脂肪含量最高 ,极显著地高于AA纯合子 (P <0 0 1) ,BB纯合子肌内脂肪含量介于AB和AA之间 ,并有高于AA纯合子的趋势 (P =0 11)。各基因型间背膘厚没有显著差异。提示ADD1基因该位点上的PCR SSCPs可能作为选择肌内脂肪含量 。 展开更多
关键词 脂肪细胞定向分化因子1 ADD1 基因 肌内脂肪 PCR-单链构型多态性 背膘厚
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PCR-SSCP分析实践 被引量:12
3
作者 蔡辉国 陈佩贞 +3 位作者 张立冬 彭琼 纪新军 马双 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1995年第5期473-475,共3页
介绍了一种在一般实验室都能使用的适用于SSCP分析电泳的改良方法.并对如何设计引物、选择PCR条件和分析结果进行了讨论.
关键词 聚合酶链反应 单链构象多态性 临床检验
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人脑胶质瘤组织P^(16INK4)蛋白的表达及其基因突变SSCP分析 被引量:6
4
作者 邱吉庆 谭岩 +2 位作者 赵刚 郭云宝 王长坤 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期273-276,共4页
目的 :探讨人脑胶质瘤组织 P16INK4蛋白低表达水平与胶质瘤恶性程度的关系及其基因突变的情况。方法 :采用免疫组化方法测定人脑胶质瘤标本 41例 ,同时采用新鲜胶质瘤组织标本1 5例进行 p1 6m RNA表达逆转录 PCR检测 ,并进行基因突变单... 目的 :探讨人脑胶质瘤组织 P16INK4蛋白低表达水平与胶质瘤恶性程度的关系及其基因突变的情况。方法 :采用免疫组化方法测定人脑胶质瘤标本 41例 ,同时采用新鲜胶质瘤组织标本1 5例进行 p1 6m RNA表达逆转录 PCR检测 ,并进行基因突变单链构象多态性分析 ( SSCP)。结果 :P1 6蛋白阳性表达 30例 ,阴性表达 1 1例 ,胶质瘤组织 p1 6m RNA表达水平相对低于对照组 ,p1 6基因外显子 2未发生基因突变 ,也未发生外显子 2的纯合缺失。结论 :胶质瘤组织p1 6m RNA和蛋白表达水平降低 ,并与其分级相关 ,提示 P1 6蛋白及其 m RNA异常是影响胶质瘤发生发展的重要因素 ,胶质瘤组织 p1 展开更多
关键词 神经胶质瘤 遗传学 P^16INK4 多态现象 单链构象
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二花脸猪FSHR座位PCR-SSCP标记与产活仔数的关系 被引量:14
5
作者 陈杰 刘红林 +1 位作者 姜志华 吴彦宁 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期53-56,共4页
采用PCR SSCP (PCR 单链构型多态性 )作为遗传标记 ,对二花脸猪促卵泡素受体 (FSHR)基因座位与产活仔数性状的关系进行了研究。结果表明 ,PCR SSCP分型共产生 2种等位基因 ,3种基因型。对不同标记基因型的二花脸猪群头胎产活仔数、头三... 采用PCR SSCP (PCR 单链构型多态性 )作为遗传标记 ,对二花脸猪促卵泡素受体 (FSHR)基因座位与产活仔数性状的关系进行了研究。结果表明 ,PCR SSCP分型共产生 2种等位基因 ,3种基因型。对不同标记基因型的二花脸猪群头胎产活仔数、头三胎产活仔数之和 ,及最高产活仔数进行单因子方差分析 ,发现该标记座位与最高产活仔数显著相关 ,其贡献率达 10 9%。基因效应分析表明 ,等位基因B的加性效应值为 0 37头 ,等位基因A的加性效应值为 - 0 6 0头。 展开更多
关键词 二花脸猪 促卵泡素受体(FSHR) PCR-单链构型多态性 产活仔数
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常见食源性感染致病菌属、种用PCR-RFLP及PCR-SSCP技术鉴定探讨 被引量:4
6
作者 洪帮兴 江丽芳 +3 位作者 胡玉山 方丹云 陶剑平 晏辉钧 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期151-155,共5页
【目的】探讨运用聚合酶链反应邛艮制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)进行食源性感染常见致病菌属种鉴定的可行性。【方法】选择细菌23S rDNA基因作为鉴别细菌属的靶基因,通过设计合适的通... 【目的】探讨运用聚合酶链反应邛艮制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)进行食源性感染常见致病菌属种鉴定的可行性。【方法】选择细菌23S rDNA基因作为鉴别细菌属的靶基因,通过设计合适的通用引物进行PCR扩增,并对13属食源性感染常见致病菌和5种不同血清型大肠杆菌扩增产物的酶切片段进行RFLP分析和SSCP分析。【结果】运用通用引物可以扩增出13 属食源性感染常见致病菌的23S rDNA基因HpaⅡ酶切产物的RFLP分析表明,不同种属的致病菌表现出不同的RFLP图谱,利于进行细菌属的鉴定。不同种属食源性感染常见致病菌SSCP图谱变异性更大,不利于进行种属间鉴别。对5种不同血清型大肠杆菌的23S rDNA基因扩增产物的RFLP和SSCP分析表明,不同血清型大肠杆菌表现出相似的RFLP图谱。SSCP图谱的变异性较大,这有利于进行血清型间鉴别甚至株间的鉴别。【结论】PCR-RFLP和PCR-SSCP具有应用于食源性感染常见致病菌种、属鉴别诊断的潜力。 展开更多
关键词 23S RDNA 限制性片段长度多态性 单链构象多态性 聚合酶链反应 食源性感染
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绵羊LHR基因PCR-SSCP多态性与繁殖性状的关联分析 被引量:4
7
作者 王利红 高勤学 +3 位作者 张伟 靳春方 李玉春 王锋 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期362-369,共8页
通过聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析方法检测绵羊品种(湖羊、晋中绵羊和陵川半细毛羊)促黄体素受体(luteinizing hormone receptor,LHR)基因外显子11核酸序列的单核苷酸多态性,并研究该基因多态性对湖羊性早熟和产羔数的... 通过聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析方法检测绵羊品种(湖羊、晋中绵羊和陵川半细毛羊)促黄体素受体(luteinizing hormone receptor,LHR)基因外显子11核酸序列的单核苷酸多态性,并研究该基因多态性对湖羊性早熟和产羔数的影响。结果表明:在6对引物扩增产物中,只有引物P2和P6的扩增片段具有多态性,引物P2扩增区存在2种基因型,分别为LL和LM型,在3个绵羊品种中均未检测到MM型;引物P6扩增区存在6种不同的SSCP带型,经序列比对分析存在T2053A、A2044T和G2003A的错义突变。湖羊和晋中绵羊P2扩增区基因型分布差异不显著(P>0.05),而与陵川半细毛羊均存在极显著差异(P<0.01);P6扩增区的2 053、2 044、2 003位点各基因型分布在湖羊和晋中绵羊间差异不显著(P>0.05),而与陵川半细毛羊间存在显著差异。P2扩增位点仅陵川半细毛羊的基因分布不符合哈迪-温伯格定律;P6扩增区湖羊和晋中绵羊在各突变位点的等位基因频率处于群体平衡状态,陵川半细毛羊除2 003突变位点基因分布处于群体不平衡状态外,其余突变位点的等位基因频率分布符合哈迪-温伯格定律;LHR外显子11区不同基因型湖羊各胎次产羔数差异不显著(P>0.05),表明LHR外显子11对湖羊的性早熟和高繁殖力性状没有显著影响。 展开更多
关键词 促黄体素受体基因 聚合酶链式反应-单链构象多态性 繁殖力 湖羊 晋中绵羊 陵川半细毛羊
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PCR-SSCP技术在植物病毒学上的应用 被引量:9
8
作者 魏太云 林含新 +2 位作者 吴祖建 林奇英 谢联辉 《福建农业大学学报》 CSCD 2000年第2期181-186,共6页
聚合酶链式反应及单链构象多态性技术作为一种区分检测基因组之间微小差异的有效方法 ,具有快速、简便、灵敏和适用于大样品量筛选的特点 .本文详细介绍了该技术的条件优化及改进策略 .该技术在植物病毒学上主要应用于 :(1)分子变异 ;(... 聚合酶链式反应及单链构象多态性技术作为一种区分检测基因组之间微小差异的有效方法 ,具有快速、简便、灵敏和适用于大样品量筛选的特点 .本文详细介绍了该技术的条件优化及改进策略 .该技术在植物病毒学上主要应用于 :(1)分子变异 ;(2 )混合侵染的检测 ;(3) 展开更多
关键词 植物病毒 应用 PCR-sscp 分子变异 分子流行病学
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应用SSCP技术分析我国柑橘衰退病毒的混合感染 被引量:6
9
作者 张建坤 洪霓 王国平 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期346-349,共4页
以随机采样的方式,从湖北、湖南和江西3省10县的柑橘产区收集242份温州蜜柑(CitrusunshiuMarc.)、橘(C.reticulataBlanco)、甜橙(C.sinensisOsbeck)和柚(C.grandisOsbeck)样品。对PAS-ELISA法初步检测呈阳性的样品进行柑橘衰退病毒(Citr... 以随机采样的方式,从湖北、湖南和江西3省10县的柑橘产区收集242份温州蜜柑(CitrusunshiuMarc.)、橘(C.reticulataBlanco)、甜橙(C.sinensisOsbeck)和柚(C.grandisOsbeck)样品。对PAS-ELISA法初步检测呈阳性的样品进行柑橘衰退病毒(Citrustristezavirus,CTV)CP基因(coatingproteingene,CPgene)的RT-PCR扩增,结果来自14个样品采集地的120份样品感染了CTV,单个采样点的感染率为20.0%~71.4%,而总感染率达49.6%,表明CTV在这些地区广泛发生。单链构象多态性(single-strandconformationpolymorphism,SSCP)分析显示,120份CTV的CP基因RT-PCR的扩增产物共产生120种SSCP带型,而且存在广泛的混合感染。 展开更多
关键词 柑橘衰退病 CP基因 RT-PCR 单链构象多态性 混合感染
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PCR-SSCP法检测乙型肝炎病毒前C区基因变异 被引量:2
10
作者 朱传武 罗端德 +3 位作者 曾令兰 李淑莉 李伟 高勇 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期393-396,共4页
为探索一种快速、简便检测乙型肝炎病毒 (HBV)前 C区基因变异的方法 ,用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增 94例乙肝患者血清 HBV前 C区基因片断 ,阳性扩增产物用单链构象多态性 (SSCP)法进行检测 ,对具有不同特征性电泳图谱的 PCR产物再以直... 为探索一种快速、简便检测乙型肝炎病毒 (HBV)前 C区基因变异的方法 ,用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增 94例乙肝患者血清 HBV前 C区基因片断 ,阳性扩增产物用单链构象多态性 (SSCP)法进行检测 ,对具有不同特征性电泳图谱的 PCR产物再以直接测序法加以核定 ,以辨别不同图谱与野生株、变异株或野生株、变异株混合感染之间的关系。结果显示 :有 86例患者 HBV前 C区 PCR扩增阳性 ,SSCP法检测发现有 3种常见的特征性电泳图谱 ,测序后证实 ,它们分别代表了野生株、变异株 (nt1896位 G→ A)及野生株、变异株混合感染的 SSCP图谱 ;在某些变异株图谱中 ,尚可见其它位点也存在变异 ,其中以 nt1899位 G→ A突变最为常见。提示 :以 PCR- SSCP技术检测 HBV前C区变异具有敏感性高 ,特异性强 ,简单、快捷、价廉等优点 ,而且特别适用于大样本的筛检 ,因此有应用价值 。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 单链构象多态性 乙型肝炎病毒 变异
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猪源沙门氏菌氟喹诺酮耐药基因突变的SSCP分析 被引量:2
11
作者 李淑梅 郝海玲 +1 位作者 宁红梅 齐永华 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第20期139-141,共3页
应用PCR扩增猪源沙门氏菌GyrA基因的喹诺酮耐药决定区,并对扩增产物进行SSCP分析,比较SSCP图谱与耐药性之间的相关性。同时对GyrA基因扩增产物进行测序,分析氨基酸的变异情况。结果显示,猪源沙门菌GyrA基因的喹诺酮耐药决定区PCR扩增产... 应用PCR扩增猪源沙门氏菌GyrA基因的喹诺酮耐药决定区,并对扩增产物进行SSCP分析,比较SSCP图谱与耐药性之间的相关性。同时对GyrA基因扩增产物进行测序,分析氨基酸的变异情况。结果显示,猪源沙门菌GyrA基因的喹诺酮耐药决定区PCR扩增产物的大小为317 bp,敏感菌株与标准菌株SSCP图谱相一致,耐药菌株与标准菌株的SSCP图谱差异明显,GyrA基因QRDR的突变位于第83和87位氨基酸位点。通过SSCP可早期、准确、快速地检测出猪源沙门氏菌是否对氟喹诺酮耐药。 展开更多
关键词 单链构象多态分析 猪源沙门氏菌 氟喹诺酮 GYRA基因
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凝胶组成对小麦SSCP技术的影响 被引量:1
12
作者 余桂红 唐克轩 +5 位作者 马鸿翔 吴勇华 周淼平 张旭 任丽娟 陆维忠 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2007年第5期391-395,共5页
SSCP技术易受凝胶浓度、丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例和添加物等诸多因素的影响。本研究探讨了凝胶中丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例、凝胶浓度和添加物等。结果显示:凝胶中丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1、凝胶浓度为12%... SSCP技术易受凝胶浓度、丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例和添加物等诸多因素的影响。本研究探讨了凝胶中丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例、凝胶浓度和添加物等。结果显示:凝胶中丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1、凝胶浓度为12%、凝胶中不添加蔗糖和甘油为最佳的凝胶组成,单链DNA条带清晰,杂带少,容易观察。 展开更多
关键词 小麦 聚丙烯酰胺凝胶 DNA单链构象多态性技术
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中国羊驼种群MC1R基因的PCR-SSCP分析 被引量:3
13
作者 姜俊兵 任杰 +1 位作者 于秀菊 董常生 《家畜生态学报》 2010年第3期15-18,共4页
探究黑素皮质素受体1(melanocortin 1-receptor,MC1R)基因型与羊驼毛色形成之间的关系,研究采用PCR-SSCP结合DNA测序方法,对60头羊驼个体(51头白色被毛,9头有色被毛)的MC1R基因的多态性进行检测,并分析了MC1R基因位点突变与羊驼不同毛... 探究黑素皮质素受体1(melanocortin 1-receptor,MC1R)基因型与羊驼毛色形成之间的关系,研究采用PCR-SSCP结合DNA测序方法,对60头羊驼个体(51头白色被毛,9头有色被毛)的MC1R基因的多态性进行检测,并分析了MC1R基因位点突变与羊驼不同毛色之间的相关性。结果表明,羊驼MC1R基因存在SSCP多态性,初步判定为AB和AA两种基因型,其中A基因的基因频率为55.0%,B基因的基因频率为45.0%,AB型的基因型频率为90.0%,AA型的基因型频率为10.0%,6个AA基因型均在有色被毛羊驼个体中检出;测序检测显示,AA型羊驼MC1R基因的第801号碱基发生突变,该碱基突变导致编码的氨基酸由异亮氨酸(I)突变为缬氨酸(V)。 展开更多
关键词 羊驼 黑色素皮质激素受体1 单链构象多态性
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用PCR-SSCP银染方法检测人原发性胃癌APC基因点突变 被引量:1
14
作者 宫立群 余龙 +3 位作者 尹浩然 王瑞年 朱正纲 林言箴 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1996年第11期765-768,共4页
在PCR基础上建立了APC基因10个片段的SSCP检测体系,对影响SSCP的各种条件进行了探讨,发现主要的影响因素是电泳温度和凝胶浓度。用SSCP银染法检测人胃癌组织中APC基因的点突变,在20例中,5例有异常电泳条带(25%),表明在相应的DNA片段中... 在PCR基础上建立了APC基因10个片段的SSCP检测体系,对影响SSCP的各种条件进行了探讨,发现主要的影响因素是电泳温度和凝胶浓度。用SSCP银染法检测人胃癌组织中APC基因的点突变,在20例中,5例有异常电泳条带(25%),表明在相应的DNA片段中发生了突变。5例突变均位于第15号外显子,其中2例位于第4号片段(密码子998-1141);3例位于第6号片段(密码子1260-1410)。研究结果表明,APC基因突变和胃癌的发生有关。PCR-SSCP银染法快速、简便,特别适用于对大样本基因点突变的检测。 展开更多
关键词 胃肿瘤 PCR-sscp APC基因 基因突变
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SSCP法mtDNA分型的法医学应用 被引量:1
15
作者 艾红伟 余纯应 +4 位作者 赵贵森 黄代新 柯技 岳霞 杨庆恩 《法医学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期117-119,共3页
目的探讨SSCP法mtDNA分型在法医鉴定实践中的意义。方法PCR扩增mtDNAHV-I和HV-II的序列多态性片段,直接用SSCP技术分型。对70个湖北汉族真三联家系和140例随机个体进行检测,比较家系中mtDNA的单倍型SSCP图谱。统计分析SSCP法用于两个高... 目的探讨SSCP法mtDNA分型在法医鉴定实践中的意义。方法PCR扩增mtDNAHV-I和HV-II的序列多态性片段,直接用SSCP技术分型。对70个湖北汉族真三联家系和140例随机个体进行检测,比较家系中mtDNA的单倍型SSCP图谱。统计分析SSCP法用于两个高变区在母系确定、个人识别中的意义和鉴别能力。结果在70个家系中,母亲和孩子的HV-I、HV-IISSCP带型完全相同;家系中父亲与母子的HV-I图谱不同占98.57%;HV-IISSCP图谱不同占97.13%。140例随机个体的HVI、HVII区分别检出21、16种单倍型,GD值分别为0.9556、0.9356。结论mtDNA-SSCP分型在嫌疑人筛查和母系亲缘关系推断中有实际应用价值。 展开更多
关键词 线粒体DNA 单链构象多态性 个人识别 母系家系
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利用PCR-SSCP及克隆分析对HERG基因突变的新发现(英文) 被引量:1
16
作者 杨平 戴德哉 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期66-68,共3页
为研究QT延长综合征(LQTS)致病的分子遗传学基础。我们在PCR基础上建立SSCP方法对LQT患者和正常对照者HERG基因的突变进行研究。并且利用克隆技术对突变进行确证。通过SSCP分析,在1例正常对照者中发现异常... 为研究QT延长综合征(LQTS)致病的分子遗传学基础。我们在PCR基础上建立SSCP方法对LQT患者和正常对照者HERG基因的突变进行研究。并且利用克隆技术对突变进行确证。通过SSCP分析,在1例正常对照者中发现异常条带,该突变无法用直接测序确证,因此我们将其转入质粒,克隆后再进行测序。结果提示在HERG基因752位点(5′→3′)异常插入9个碱基。突变型为杂合子。突变导致蛋白通道氨基酸序列中插入GlyAlaGly。与其他已报道的突变不同,本文所发现的3个氨基酸的插入突变不是LQTS发生的遗传基础。 展开更多
关键词 QT延长综合征 HERG基因 突变 PCR-sscp
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凝胶浓度对SSCP技术的影响 被引量:4
17
作者 刚锰 葛辉 +1 位作者 王洪月 王秀利 《河北渔业》 2009年第5期20-22,共3页
SSCP技术易受凝胶浓度、丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例和添加物等诸多因素的影响。本研究探讨了凝胶中丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例、凝胶浓度和添加物等对海胆SSCP技术的影响。结果显示:凝胶中丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29... SSCP技术易受凝胶浓度、丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例和添加物等诸多因素的影响。本研究探讨了凝胶中丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例、凝胶浓度和添加物等对海胆SSCP技术的影响。结果显示:凝胶中丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1、凝胶浓度为10%、凝胶中甘油为最佳的凝胶组成,单链DNA条带清晰,杂带少,容易观察。 展开更多
关键词 海胆 聚丙烯酰胺凝胶 DNA单链构象多态性技术
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应用非同位素aPCR-SSCP法检测P53基因突变 被引量:1
18
作者 陈军 汪慧民 +1 位作者 李满枝 吴荫棠 《中山医科大学学报》 CSCD 1994年第4期256-259,共4页
建立一种非同位素的不对称聚合酶链反应-单链构象多态性技术(aPCR-SSCP):通过不对称PCR(aPCR)获得单链,普通PAGE电泳分离,经银染快速准确检出突变;应用这种方法,研究了4株鼻咽癌细胞株CNE1,CNE... 建立一种非同位素的不对称聚合酶链反应-单链构象多态性技术(aPCR-SSCP):通过不对称PCR(aPCR)获得单链,普通PAGE电泳分离,经银染快速准确检出突变;应用这种方法,研究了4株鼻咽癌细胞株CNE1,CNE2,HK1和SUNE1中肿瘤抑制基因P53基因突变,证实CNE1,CNE2在第8外显子,HK1在第5外显子有突变,并发现新建立的细胞株SUNE1存在第8外显子的突变。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 肿瘤抑制基因 鼻咽肿瘤
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降落式PCR和SSCP检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体γ基因重排
19
作者 韩西群 齐宗利 +2 位作者 贺莉 陆地 赵彤 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第2期188-191,共4页
目的以降落式PCR和单链构型多态性(SSCP)方法检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体(TCR)γ基因重排,探讨其在淋巴细胞白血病诊断中的价值。方法盐析法提取淋巴细胞白血病患者外周血白细胞DNA,TCR-γ基因重排通用引物和降落式PCR扩增基因... 目的以降落式PCR和单链构型多态性(SSCP)方法检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体(TCR)γ基因重排,探讨其在淋巴细胞白血病诊断中的价值。方法盐析法提取淋巴细胞白血病患者外周血白细胞DNA,TCR-γ基因重排通用引物和降落式PCR扩增基因重排。分别采用琼脂糖凝胶电泳、SSCP和DNA直接测序方法检测PCR扩增产物。阳性细胞系DNA模板与反应增生性淋巴组织DNA按不同比例混合后扩增,检测降落式PCR的灵敏度。结果琼脂糖电泳中,18例T淋巴细胞白血病中有15例、4例B淋巴细胞白血病中有2例为阳性,阳性标本经SSCP进一步分析,呈不连续条带。DNA直接测序证实扩增产物为TCR-γ基因重排。阳性对照模板占1%以上时可得到阳性扩增结果。结论TCR-γ基因重排通用引物结合降落式PCR可有效扩增T淋巴细胞白血病基因重排,可用于T淋巴细胞白血病的辅助诊断。 展开更多
关键词 降落式PCR sscp 检测 淋巴细胞白血病 单克隆T细胞受体γ 基因重排 单链构型多态性 聚合酶链反应 检测
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光滑假丝酵母菌ITSⅠ区PCR-SSCP分子流行病学分析
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作者 王菡 于仁涛 +2 位作者 刘建玲 纪蕾 韩黎 《中国感染控制杂志》 CAS 2008年第3期152-156,共5页
目的建立基于聚合酶链反应的单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术,对引起常见医院感染的光滑假丝酵母菌进行基因多态性分析,并探讨改善其灵敏度和分辨率的优化条件。方法采用PCR-SSCP技术对临床分离的19株光滑假丝酵母菌以及1株标准株ATCC... 目的建立基于聚合酶链反应的单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术,对引起常见医院感染的光滑假丝酵母菌进行基因多态性分析,并探讨改善其灵敏度和分辨率的优化条件。方法采用PCR-SSCP技术对临床分离的19株光滑假丝酵母菌以及1株标准株ATCC90030的rDNA的ITSⅠ区(引物ITS1/ITS2)和ITSⅡ区(引物ITS3/ITS4)多态性进行分析,并对PCR-SSCP的条件进行优化。结果ITSⅠ区较ITSⅡ区保守性低,变异性较强,较为适合SSCP分型。针对ITSⅠ区,SSCP电泳在无甘油时,4℃和15℃均将菌株分为6型,但各型所含菌株不同;存在5%甘油时,SSCP电泳分辨率明显增高。结论在15℃及5%甘油存在的条件下,针对ITSI区的PCR-SSCP分型是一种快速、简便的适合于致医院感染光滑假丝酵母菌分型的新流行病学研究手段。 展开更多
关键词 光滑假丝酵母菌 PCR-sscp 流行病学研究 真菌
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