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一种水稻叶片基因组DNA简易提取方法 被引量:1
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作者 金素奎 国倩倩 +1 位作者 刘巧泉 高继平 《生物技术通报》 北大核心 2025年第1期74-84,共11页
【目的】为了应对日益增加的大规模遗传材料鉴定需求,急需建立一种快速、简易、高效、低成本的基因组DNA提取方法。【方法】根据水稻遗传鉴定的特点,对传统TPS法进行改进和简化。(1)将特制的钢珠加样条与全自动研磨仪结合使用,提高了研... 【目的】为了应对日益增加的大规模遗传材料鉴定需求,急需建立一种快速、简易、高效、低成本的基因组DNA提取方法。【方法】根据水稻遗传鉴定的特点,对传统TPS法进行改进和简化。(1)将特制的钢珠加样条与全自动研磨仪结合使用,提高了研磨水稻叶片组织的速度;(2)使用TPS缓冲液室温研磨裂解,无需液氮冷冻研磨;(3)研磨后的组织匀浆仅需75℃水浴20 min即可完成裂解;(4)室温静置5 min后吸取粗提液上清5μL至96孔PCR板内,使用排枪加入95μL灭菌的去离子水进行稀释,即完成基因组DNA的提取过程。【结果】简易TPS法提取基因组DNA的步骤减少至6步以内,省略了DNA沉淀、离心、洗涤、溶解等过程。提取过程简单、快速,可在30 min内完成96个样本的DNA提取。提取过程中使用的试剂种类较少且廉价易得、安全环保。通过优化DNA提取液的用量,用简易TPS法提取的基因组DNA开展的各类常规分子遗传鉴定的效果与CTAB法及传统TPS法相当。【结论】简易TPS法提高了水稻基因组DNA提取的效率,适合高通量的遗传鉴定。 展开更多
关键词 水稻叶片 基因组dna CTAB法 传统TPS法 简易TPS法
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适用于玉米螟虫蜕DNA提取方法的筛选与验证
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作者 孙健博 丁新华 +5 位作者 贾尊尊 高国文 付开赟 吐尔逊·阿合买提 安尼瓦尔·库尔班 郭文超 《新疆农业科学》 北大核心 2025年第2期379-385,共7页
【目的】新疆伊犁河谷是亚洲玉米螟和欧洲玉米螟混合发生区,采用一种对玉米螟无损伤的提取方法,高效建立纯系种群,准确分离鉴定亚洲玉米螟和欧洲玉米螟,为后期开展生物学生态学研究提供科学依据。【方法】以玉米螟虫蜕为材料,建立一套... 【目的】新疆伊犁河谷是亚洲玉米螟和欧洲玉米螟混合发生区,采用一种对玉米螟无损伤的提取方法,高效建立纯系种群,准确分离鉴定亚洲玉米螟和欧洲玉米螟,为后期开展生物学生态学研究提供科学依据。【方法】以玉米螟虫蜕为材料,建立一套无形态特征损伤、经济适用、操作简单、快速且能满足后续PCR扩增检测技术的DNA提取方法。基于筛选试剂盒法(KM)、蛋白酶法(PM)、CTAB法(CM)等常用DNA提取方法,提取玉米螟虫蜕DNA、靶标COI序列扩增、琼脂糖凝胶检测。【结果】虫蜕有效的提取方法为处理3:蛋白酶法,其中蛋白酶法提取虫蜕的DNA浓度最高,为(23.03±0.01)ng/μL,但其纯度不高,不利于后续PCR扩增。处理3提取虫蜕的DNA浓度平均值为(8.46±0.22)ng/μL,符合提取要求,纯度较高为1.86,满足后续PCR扩增试验。【结论】处理3与蛋白酶法可以用于大批量提取玉米螟虫蜕gDNA,种群鉴定具有对玉米螟无损伤、成本低、步骤简单、避免氯仿和异丙醇伤害等优点,处理3较蛋白酶法有较高的扩增效率。 展开更多
关键词 玉米螟 幼虫蜕 dna提取 试剂盒法 蛋白酶法
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^(125)I的俄歇电子和氚的β射线细胞S值及DNA损伤模拟研究
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作者 沈江燕 朱坤 +3 位作者 李清 张德颂 李君利 闫聪冲 《原子能科学技术》 北大核心 2025年第2期478-486,共9页
氚的辐射生物效应一直是研究热点,特别是在福岛核电站排放核废水后成为公众关注的焦点。氚极易进入人体并参与机体代谢活动,衰变放出的β射线对人体具有极大的危害,而靶向放射治疗则利用摄入的俄歇电子发射体能够进入癌细胞,并放出俄歇... 氚的辐射生物效应一直是研究热点,特别是在福岛核电站排放核废水后成为公众关注的焦点。氚极易进入人体并参与机体代谢活动,衰变放出的β射线对人体具有极大的危害,而靶向放射治疗则利用摄入的俄歇电子发射体能够进入癌细胞,并放出俄歇电子造成DNA严重损伤这一特性,达到有效杀死癌细胞的目的。为探究β射线在微纳米尺度的辐射生物效应,本研究利用清华大学研发的纳剂量学程序NASIC模拟计算了^(125)I和氚在不同尺度细胞内的细胞S值以及造成的DNA双链断裂(DSB)产额,深入探讨了其DNA损伤机制。结果表明,由于研究方法和粒子截面的不同,细胞S值的计算结果存在偏差,尤其对于S(N←Cy),相对偏差可达26.35%。此外,相较于^(125)I或氚均匀分布在细胞核内,与DNA结合时造成的DSB产额显著增加:^(125)I结合到DNA时的DSB产额是均匀分布时的2倍;而氚结合到DNA中使得DSB产额从1.31×10^(-11)Gy^(-1)·Da^(-1)增加至1.46×10^(-11)Gy^(-1)·Da^(-1)。本研究深入探究了微纳米尺度下放射性核素的损伤作用效应,为精确医疗和环境放射性污染风险评估提供重要的理论基础。 展开更多
关键词 放射性核素 ^(125)I 俄歇电子 氚β射线 细胞S值 dna损伤 蒙特卡罗方法
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超声快速处理方法对石蜡包埋组织蛋白质、DNA及RNA的影响
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作者 李小红 罗佳娣 +1 位作者 梁青春 童中艺 《中南大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期664-674,共11页
目的:石蜡包埋组织传统处理方法耗时长,而超声快速处理方法时间短,但其对组织蛋白质、DNA及RNA的影响尚未阐明。本研究拟通过苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色、免疫组织化学染色和分子病理检测探讨超声快速处理方法对石蜡包... 目的:石蜡包埋组织传统处理方法耗时长,而超声快速处理方法时间短,但其对组织蛋白质、DNA及RNA的影响尚未阐明。本研究拟通过苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色、免疫组织化学染色和分子病理检测探讨超声快速处理方法对石蜡包埋组织蛋白质、DNA及RNA的影响。方法:选取乳腺癌、结肠癌、肺癌、胃印戒细胞癌、肝癌及其他术后组织标本,使用已完成常规病理取材且诊断明确的剩余标本,每例标本取材2块,直径为1~3 mm,分为对照组(传统处理方法)和实验组(超声快速处理方法)。采用HE染色、免疫组织化学染色、DNA质量片段分析、荧光原位杂交-HER2基因检测、二代测序-EGFR、ALK基因检测、实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)-乳腺癌预后检测等分析超声快速处理方法对石蜡包埋组织蛋白质、DNA及RNA的影响,并与传统组织处理方法进行比较。结果:与对照组比较,实验组可以快速有效完成组织固定、脱水、透明、浸蜡过程,大幅度节约了病理诊断前处理标本需要的时间,且HE染色、免疫组织化学染色、DNA质量片段分析、荧光原位杂交-HER2基因检测、二代测序-EGFR、ALK基因检测、real-time RT-PCR-乳腺癌预后检测的结果与对照组完全一致。结论:超声快速处理方法可以快速有效缩短病理诊断前标本处理的时间,且不影响标本的DNA、RNA和蛋白质,可满足HE染色、免疫组织化学及分子病理检测。 展开更多
关键词 超声快速处理方法 苏木精-伊红染色 免疫组织化学染色 dna质量 RNA质量 分子病理检测
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珍稀濒危树种金钱槭的基因组DNA提取方法研究 被引量:2
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作者 吴晟昊 杨丽 +5 位作者 向松竹 胡茜茜 周志翔 郑波 施雪萍 刘梅 《安徽农业科学》 CAS 2024年第3期91-94,共4页
[目的]明确高效提取金钱槭基因组DNA的方法。[方法]以金钱槭幼嫩叶片为材料,采用4种不同方法提取金钱槭基因组DNA,并通过紫外分光光度计法、琼脂糖凝胶电泳检测、限制性内切酶酶切和扩增保守基因片段等方法比较不同DNA的提取效率。[结果... [目的]明确高效提取金钱槭基因组DNA的方法。[方法]以金钱槭幼嫩叶片为材料,采用4种不同方法提取金钱槭基因组DNA,并通过紫外分光光度计法、琼脂糖凝胶电泳检测、限制性内切酶酶切和扩增保守基因片段等方法比较不同DNA的提取效率。[结果]高盐低pH法因操作时间较长导致DNA损失较多,提取到的DNA虽然杂质含量较低,但浓度也较低。SDS法提取效果不佳,提取到的DNA含量少且完整性差。尿素法提取的DNA质量最差,降解严重,难以用于后续分子生物学研究。改良CTAB法可以大量提取能够用于酶切及PCR扩增的DNA。[结论]金钱槭DNA高效提取方法的确定可以为相关的分子生物学研究提供科学依据和技术参考。 展开更多
关键词 金钱槭 dna提取 CTAB法
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鲨鱼翅种属DNA条形码鉴定方法的建立及应用 被引量:1
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作者 蒋晓霞 沙才华 +6 位作者 罗宝正 邵建宏 徐博文 黄海超 赵福振 周傲白雪 陈轩 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期920-929,共10页
精准鉴别鲨鱼翅的种属来源,是海关等执法部门履行《濒危野生动植物种国际贸易公约》(Convention on International Trade in Endangered Species of Wild Fauna and Flora,CITES)时面临的一项重大挑战。本研究建立了鲨鱼物种的细胞色素... 精准鉴别鲨鱼翅的种属来源,是海关等执法部门履行《濒危野生动植物种国际贸易公约》(Convention on International Trade in Endangered Species of Wild Fauna and Flora,CITES)时面临的一项重大挑战。本研究建立了鲨鱼物种的细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome c oxidase subunitⅠ,COⅠ)基因DNA条形码鉴定方法,并应用此技术对珠澳口岸截获的113个鲨鱼翅样本进行分析。结果表明:本研究共鉴定出19个物种,以大青鲨(Prionace glauca)和镰状真鲨(Carcharhinus falciformis)等真鲨科物种为主;被列入2019版CITES附录Ⅱ的样本数占比56.64%,被列入2023版CITES附录Ⅱ的样本数占比90.27%。所建立的方法对全部样本均产生特异性扩增,并测得有效序列;所测得物种的种内遗传距离≤2.08%,均值为0.63%,种间遗传距离为2.42%~27.27%,均值为15.37%,最小种间遗传距离大于最大种内遗传距离,种间平均遗传距离约为种内的24倍。所有物种依据亲缘关系在系统发育树内得以有效聚类,同科物种进一步聚集成小支,小支间未见物种交叉分布。综上所述,基于COⅠ基因的DNA条形码技术能够准确鉴定鲨鱼翅的物种来源,对鲨鱼的多样性保护具有重要意义。 展开更多
关键词 鲨鱼翅 种属鉴定 dna条形码 鉴定方法
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指向科学思维培养的“DNA的复制”教学设计 被引量:1
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作者 薛琪 《生物学教学》 北大核心 2024年第1期27-31,共5页
本节课创设诺奖问题情境,激发学习兴趣。学生亲历提出假说、演绎推理等环节探究DNA复制的方式;通过模型构建和论证分析的有机结合,推演DNA复制的过程。设置课后思考题,拓宽知识认知。在此过程中,实现对学生科学思维的激发、发展、深化... 本节课创设诺奖问题情境,激发学习兴趣。学生亲历提出假说、演绎推理等环节探究DNA复制的方式;通过模型构建和论证分析的有机结合,推演DNA复制的过程。设置课后思考题,拓宽知识认知。在此过程中,实现对学生科学思维的激发、发展、深化和提升。 展开更多
关键词 dna的复制 假说 演绎法 模型构建 科学思维
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不同DNA提取方法对大曲基因组DNA提取效果及扩增子文库的影响 被引量:1
8
作者 叶光斌 幸洪静 +1 位作者 杨志阳 宗绪岩 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期118-126,共9页
大曲是中国传统白酒典型的“多酶多菌”的发酵剂。免培养的分子生物学方法已经成为大曲微生物群落研究的常规方法。通过评估不同DNA提取方法对大曲基因组DNA提取效果及扩增子文库的影响,选择适合用于大曲DNA提取的最佳方法。该研究选择4... 大曲是中国传统白酒典型的“多酶多菌”的发酵剂。免培养的分子生物学方法已经成为大曲微生物群落研究的常规方法。通过评估不同DNA提取方法对大曲基因组DNA提取效果及扩增子文库的影响,选择适合用于大曲DNA提取的最佳方法。该研究选择4种DNA提取方法分别对2种大曲进行大曲微生物DNA的提取,结合DNA提取质量、qPCR定量结果、细菌16S rRNA基因和真菌ITS基因扩增子文库的Illumina Miseq测序结果,评估大曲基因组DNA不同提取方法的效果。从DNA得率和生物量的综合分析表明,SDS-based提取法的DNA得率高于试剂盒提取法,其中原位SDS-based提取法DNA得率高达5.46×10^(4)ng/g,但DNA纯度较低;SDS-based提取法的qPCR定量结果比试剂盒提取法高10^(1)~10^(6)量级,其中洗脱加SDS-based提取法的微生物生物量最高,比原位SDS-based提取法的生物量高10^(1)~10^(3)量级;试剂盒提取法的微生物生物量最低,细菌和真菌的生物量只有10^(2)~10^(4)copies/g。扩增子文库间Shannon多样性指数的比较结果表明,不同DNA提取方法在真菌ITS扩增子文库间存在显著差异,而在细菌16S rDNA扩增子文库间差异不显著。洗脱处理样本的真菌扩增子文库Shannon指数要高于原位处理的样本。通过对扩增子文库间存在显著性差异操作分类单元(operational taxonomic units,OTU)的比较可以看出,在细菌16S rDNA扩增子文库中,多数OTUs存在丰度差异,但它们大多数能在不同DNA提取方法中检测到;然而在真菌ITS扩增子文库间,少数OTUs在不同DNA提取方法中检测不到,说明DNA提取方法对部分真菌微生物基因组的提取存在显著影响,且洗脱处理有利于真菌基因组DNA的提取。综合对比4种DNA提取方法,洗脱加SDS-based提取法最适合用于大曲微生物的定量和群落结构分析。 展开更多
关键词 dna提取方法 大曲 扩增子文库 微生物群落 qPCR Illumina Miseq测序
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一种适用于梅花鹿源性产品鉴定的微量组织DNA提取方法的建立
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作者 任雨贺 金美伶 宋超 《特产研究》 2024年第5期54-57,共4页
为建立一种适宜梅花鹿源性产品分子鉴定的高效、便捷微量组织基因组DNA提取的方法。本研究分别以鲜品梅花鹿茸、风干梅花鹿茸、烘干梅花鹿茸、鲜品梅花鹿鞭、烘干梅花鹿鞭、风干梅花鹿鞭、鲜品梅花鹿肉、干品梅花鹿尾、梅花鹿血为样本,... 为建立一种适宜梅花鹿源性产品分子鉴定的高效、便捷微量组织基因组DNA提取的方法。本研究分别以鲜品梅花鹿茸、风干梅花鹿茸、烘干梅花鹿茸、鲜品梅花鹿鞭、烘干梅花鹿鞭、风干梅花鹿鞭、鲜品梅花鹿肉、干品梅花鹿尾、梅花鹿血为样本,采用Chelex-100树脂溶液和蛋白酶K结合的方法提取基因组DNA,并检测其浓度与纯度;以此DNA为模板,扩增梅花鹿线粒体DNA的Dloop区特异性基因,并对PCR扩增产物进行琼脂糖核酸电泳及测序。结果表明,基于Chelex-100树脂提取法获得的基因组DNA模板浓度为52.57~63.39 ng/μL,A260/A280比值为1.75~1.96;梅花鹿线粒体特异性基因扩增产物电泳条带清晰,且长度准确;扩增产物测序,相似性大于95%。Chelex-100树脂提取法能够提取微量梅花鹿组织样本基因组DNA,且此方法低价、简便,适用于梅花鹿源性产品的真伪鉴定。 展开更多
关键词 梅花鹿 Chelex-100树脂提取法 dna提取 源性产品鉴定
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纸基法血液基因组DNA的提取与应用
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作者 刘壮 何茹月 胡圣伟 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期82-87,共6页
建立一种提取小鼠血液中基因组DNA的纸基方法进行分子鉴定和基因分型,选择试剂盒提取法和常规煮沸法作为对比,分别对10只基因敲除型小鼠后代组织的基因组DNA进行提取,用多基因PCR扩增进行鉴定,随机选择2只小鼠的鉴定结果进行测序验证。... 建立一种提取小鼠血液中基因组DNA的纸基方法进行分子鉴定和基因分型,选择试剂盒提取法和常规煮沸法作为对比,分别对10只基因敲除型小鼠后代组织的基因组DNA进行提取,用多基因PCR扩增进行鉴定,随机选择2只小鼠的鉴定结果进行测序验证。PCR均扩增出符合预期大小的条带,验证了纸基法的稳定性和特异性。3种DNA提取方法的PCR扩增结果表明,试剂盒提取法与纸基法提取效果相似,共鉴定出4只野生型小鼠,5只基因敲除杂合型小鼠和1只基因敲除型纯合型小鼠;煮沸法对小鼠基因型DNA提取效果较差。测序分析结果显示,基因类型与纸基法鉴定基因类型一致。用纸基法提取基因组DNA不需要专业设备就可满足小鼠血液基因组DNA的提取及下游试验,可为基因型鉴定提供一种可靠快速的方法。 展开更多
关键词 Whatman No.1纤维素滤纸 纸基法 dna提取 基因型鉴定
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鱼类环境DNA保存条件的比较研究
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作者 刘洋 应方 +3 位作者 杨俊 王焕英 洪文杰 王庭璋 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期114-120,共7页
为探索环境水样中鱼类DNA的最佳保存方法和保存时间,选取饲养鱼的水样为研究对象,在无核酸污染的环境中,采用0.45μm孔径滤膜对相同体积的水样进行预处理,并对富集环境DNA(eDNA)的滤膜进行不同保存方法和不同保存时间捕获的eDNA质量、鱼... 为探索环境水样中鱼类DNA的最佳保存方法和保存时间,选取饲养鱼的水样为研究对象,在无核酸污染的环境中,采用0.45μm孔径滤膜对相同体积的水样进行预处理,并对富集环境DNA(eDNA)的滤膜进行不同保存方法和不同保存时间捕获的eDNA质量、鱼类12S rRNA基因文库浓度、基于ASVs方法的鱼类12S rRNA扩增子测序结果的比较研究。研究结果显示:-20℃冷冻、-80℃冷冻、无水乙醇-常温、75%乙醇-常温、Longmire’s保存液-常温以及TK保存液-常温等6种保存方法捕获的eDNA效果最好的是TK保存液-常温,其次为冷冻保存(-20℃、-80℃)。-20℃冷冻、-80℃冷冻和TK保存液-常温等3种保存方法在同一保存时间下具有良好的稳定性,且在保存时间2周内的测试条件下,也能稳定保存滤膜,最大程度还原水样中鱼类的遗传信息。研究对eDNA样本最佳保存条件的探索,将为第三方基因检测实验室对鱼类eDNA保存策略提供技术基础,便于eDNA宏条形码技术的开展。 展开更多
关键词 Edna 保存条件 dna提取 扩增子测序 ASVs方法
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法医学DNA遗传标记和DNA甲基化分子标记的集成检验技术
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作者 易娜 赵光斌 +7 位作者 康克莱 姚伊人 郭柯利 赵杰 张驰 缪磊 王乐 季安全 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第9期2156-2167,共12页
DNA遗传标记在法医学领域的个体识别、亲缘关系鉴定、始祖推断和表型特征刻画等方面具有重要作用。DNA甲基化分子标记在法医学领域的生物学年龄推断、组织体液鉴定和表型预测等方面具有独特优势。目前的研究多是在不同的检验流程中对DN... DNA遗传标记在法医学领域的个体识别、亲缘关系鉴定、始祖推断和表型特征刻画等方面具有重要作用。DNA甲基化分子标记在法医学领域的生物学年龄推断、组织体液鉴定和表型预测等方面具有独特优势。目前的研究多是在不同的检验流程中对DNA甲基化分子标记和DNA遗传标记独立地进行检验,通过不同的分析流程分别解读这两种标记所蕴含的生物信息。用一份生物检材通过一次检测同时得到DNA遗传信息和表观遗传信息的集成检验方法,能够在获得丰富遗传数据的基础上有效关联这两种标记的生物学信息,节省检验时间,降低检验成本和简化实验流程。本文分别介绍了基于毛细管电泳平台、焦磷酸测序平台和二代测序平台进行DNA遗传标记和DNA甲基化分子标记集成检验的多种方案,分析了各方案在不同平台的技术特点,归纳了各方案的集成化程度和实际应用能力,重点分析了在其他领域中基于二代测序技术进行集成检验的技术路线,以期挖掘其在法医学生物检材中的应用潜力,探讨了位点间相互作用和甲基化预处理方法对DNA遗传标记和DNA甲基化分子标记集成检验的影响,提出了在法医学生物检材中应用集成检验技术所面临的挑战,期望为法医学研究实践提供参考。 展开更多
关键词 法医遗传学 dna 甲基化 集成检验方法 二代测序
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食用植物油DNA提取方法比较及优化研究
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作者 甘生睿 王进英 +2 位作者 王淑珍 杨芙蓉 董国鑫 《中国粮油学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期157-164,共8页
以油菜籽、芝麻和亚麻籽为原料,螺旋压榨法制油,采用乳化法、富集法、十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)法、树脂试剂盒法和冷冻干燥法提取植物油DNA,并通过超微量可见分光光度计、实时聚合酶链式反应(PCR)、微卫星(SSR)分子标记评价DNA质量... 以油菜籽、芝麻和亚麻籽为原料,螺旋压榨法制油,采用乳化法、富集法、十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)法、树脂试剂盒法和冷冻干燥法提取植物油DNA,并通过超微量可见分光光度计、实时聚合酶链式反应(PCR)、微卫星(SSR)分子标记评价DNA质量。结果表明CTAB法提取的DNA质量浓度高、纯度好、耗时短、起始油量低、费用低、适合分子分析。选择CTAB法,考察起始油量、有机化合物添加、裂解缓冲液组成、裂解和沉淀时间的提取效率。优化条件为最低起始油量100μL,有机化合物添加CTAB-氯仿∶异戊醇(CTAB-C∶I),裂解缓冲液组成为CTAB-β巯基乙醇-蛋白酶K(CTAB-βME-PK),裂解20 min,沉淀9 h。该方法在7种精炼植物油中提取到适合分子溯源的DNA,为植物油可追溯性和真实性检测提供了技术支撑。 展开更多
关键词 食用植物油 dna提取 方法优化 SSR分子标记
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入侵植物一年蓬基因组DNA提取方法优化
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作者 王仕文 杨子琼 +5 位作者 魏淑雅 丁彤 顾婉如 陈雨蓓 屈利利 童跃伟 《安徽农学通报》 2024年第13期66-70,共5页
一年蓬为菊科飞蓬属植物,是分布较广、危害较重的一种外来入侵杂草。为优选该植物基因组DNA的提取方法,本研究采取四因素三水平正交试验设计,对一年蓬基因组DNA的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)提取方法进行优化,并与常规的植物基因组试剂... 一年蓬为菊科飞蓬属植物,是分布较广、危害较重的一种外来入侵杂草。为优选该植物基因组DNA的提取方法,本研究采取四因素三水平正交试验设计,对一年蓬基因组DNA的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)提取方法进行优化,并与常规的植物基因组试剂盒法进行对比。结果表明,一年蓬基因组DNA较优的提取方法为改良CTAB法,即一年蓬的干燥叶片经CTAB-free去除多糖,并加入β-巯基乙醇防止酚氧化,用氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提3次。改良CTAB法提取的一年蓬基因组DNA质量较高,微量分光光度计检测的A_(260)/A_(280)数值接近1.8~2.0,且凝胶电泳DNA条带清晰,无明显拖带。该方法为该植物的遗传多样性和入侵机制等研究提供参考。 展开更多
关键词 菊科 一年蓬 dna提取方法 改良CTAB法 正交试验
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糖肾康调控脱氧核糖核酸甲基化减轻糖尿病肾病足细胞焦亡的机制
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作者 周乐 高冉冉 +3 位作者 韩聪 王一川 鲍孝云 李伟 《世界中医药》 北大核心 2025年第11期1906-1911,1922,共7页
目的:探讨糖肾康通过调控DNA甲基化和足细胞焦亡改善糖尿病肾病(DKD)的机制。方法:采用30 mmol/L葡萄糖培养基诱导小鼠足细胞(MPC5)48 h建立足细胞损伤模型,制备糖肾康大鼠含药血清、采用DNA甲基化抑制剂(5-Aza-CdR)干预足细胞,观察细... 目的:探讨糖肾康通过调控DNA甲基化和足细胞焦亡改善糖尿病肾病(DKD)的机制。方法:采用30 mmol/L葡萄糖培养基诱导小鼠足细胞(MPC5)48 h建立足细胞损伤模型,制备糖肾康大鼠含药血清、采用DNA甲基化抑制剂(5-Aza-CdR)干预足细胞,观察细胞焦亡炎症介质Nod样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)、白细胞介素(IL-18)及IL-1β表达情况。采用高通量甲基化捕获测序筛选甲基化基因并结合网站预测,筛选出差异基因特异性蛋白1(Sp1)并进行实时定量PCR(qPCR)验证,构建并转染Sp1过表达质粒,观察糖肾康通过影响Sp1甲基化对足细胞焦亡的影响。结果:5-Aza-Cd可减少细胞焦亡炎症介质的表达(P<0.01)。结合甲基化测序、网站预测及qPCR验证,Sp1发生了甲基化且表达水平更高最具差异性,加入5-Aza-CdR后,Sp1表达明显减少(P<0.01),糖肾康对Sp1表达影响与5-Aza-CdR差异无统计学意义(P>0.05)。Sp1过表达后加入糖肾康或5-Aza-CdR均能减轻细胞焦亡因子的表达(P<0.01或P<0.05),且糖肾康的保护作用优于5-Aza-CdR(P<0.05)。结论:DNA甲基化可能通过调控足细胞焦亡参与了DKD进展,其机制可能是通过Sp1甲基化激活了细胞焦亡关键因子NLRP3炎性体,进一步通过NLRP3-Caspase-1-IL-1β/IL-18轴促进炎症介质表达,导致了足细胞焦亡,糖肾康或正是通过影响Sp1甲基化发挥足细胞保护作用,延缓DKD进展。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 dna甲基化 足细胞 细胞焦亡 高通量甲基化捕获测序 差异基因特异性蛋白1 糖肾康颗粒 益气活血清泄法
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桃基因组DNA提取方法及部位的比较研究 被引量:10
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作者 郭金英 范崇辉 +3 位作者 王力荣 朱更瑞 方伟超 李红娟 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期205-207,共3页
通过对桃基因组DNA几种提取方法所得的DNA质量分析,表明分步离心法是最为理想的提取方法,能满足RAPD及其他分子生物学研究的需要。用此方法提取桃不同部位基因组DNA,结果分析表明,从嫩叶和幼嫩果实提取DNA产率较高。
关键词 dna 提取方法 分步离心法 基因组 部位 比较研究 生物学 嫩叶 幼嫩果实
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茶树基因组DNA的高效提取方法 被引量:69
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作者 黄建安 黄意欢 +2 位作者 罗军武 王坤波 周李华 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期402-407,共6页
为了从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的茶树叶片中分离出高质量的基因组 DNA,对 4种植物 DNA提取方法进行改良后 ,以茶树春梢为材料 ,对提取效果进行了比较 ,并首次采用 CTAB区室法提取茶树基因组DNA.结果表明 ,用该 4种方法提取的 ... 为了从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的茶树叶片中分离出高质量的基因组 DNA,对 4种植物 DNA提取方法进行改良后 ,以茶树春梢为材料 ,对提取效果进行了比较 ,并首次采用 CTAB区室法提取茶树基因组DNA.结果表明 ,用该 4种方法提取的 DNA,其 OD2 6 0 / OD2 80 都在 1.8以上 ,相对分子质量均大于 2 1kb,能完全被Eco R 酶切消化 ,也能获得清晰的 PCR扩增图谱 .因此 ,只要操作合理 ,4种方法均能提取出高质量的 DNA. 展开更多
关键词 脱氧核糖核酸 茶树 提取方法
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苹果黑星病菌DNA提取方法研究 被引量:17
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作者 胡小平 杨家荣 +1 位作者 商文静 杨之为 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2004年第4期41-43,共3页
 采用CTAB法、SDS法、Parker法及改进的SDS法提取苹果黑星病菌的DNA,经紫外分光光度计测定,改进SDS法提取的DNA得率较其他3种方法高,约为Parker法的2倍。改进SDS法提取的DNAA260nm/A280nm值为1.700~1.900,DNA纯度较高,而其他3种方法...  采用CTAB法、SDS法、Parker法及改进的SDS法提取苹果黑星病菌的DNA,经紫外分光光度计测定,改进SDS法提取的DNA得率较其他3种方法高,约为Parker法的2倍。改进SDS法提取的DNAA260nm/A280nm值为1.700~1.900,DNA纯度较高,而其他3种方法提取的DNAA260nm/A280nm值均高于1.900,DNA中所含RNA的量较高。4种方法提取的DNA在230nm波长处的吸收值分别为0.658,0.257,0.926和0.208,说明DNA不同程度地被酚类物质所污染,但改进的SDS法提取的DNA受污染程度最小。 展开更多
关键词 苹果 黑星病菌 dna 提取方法 黑星病 CTAB法 SDS法 Parker法
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漾濞核桃叶片基因组DNA的两种提取方法效果比较 被引量:25
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作者 杨恩 陈少瑜 +2 位作者 张雨 范志远 习学良 《西部林业科学》 CAS 2005年第4期72-75,共4页
以漾濞核桃不同生长期的叶片为材料,采用高盐低pH法和改良CTAB法作提取其基因组DNA的效果比较实验。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和RAPD扩增对所提取的DNA样品进行检测,比较所得DNA的产量、质量,认为从漾濞核桃不同发育时期叶片... 以漾濞核桃不同生长期的叶片为材料,采用高盐低pH法和改良CTAB法作提取其基因组DNA的效果比较实验。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和RAPD扩增对所提取的DNA样品进行检测,比较所得DNA的产量、质量,认为从漾濞核桃不同发育时期叶片中获得DNA的提取效果不同。4种叶样以冬芽和新叶的效果为好,老叶最差;用两种提取方法从叶片中得到的DNA产量和质量有所不同,高盐低pH法提取的DNA纯度高,但是产量较低;而改良CTAB法则相反,产量高,纯度低。 展开更多
关键词 漾濞核桃 叶片 基因组dna dna提取方法
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植原体DNA提取方法的改良 被引量:15
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作者 漆艳香 谢艺贤 +3 位作者 张辉强 朱水芳 廖晓兰 肖启明 《生物技术通报》 CAS CSCD 2004年第4期44-46,共3页
在总结多种植原体DNA提取方法的基础上 ,发展了一种提取植原体DNA新方法。用此方法提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳检测到大于 15kb的DNA主带 ,基本无DNA碎带 ,不用RNase处理 ,也无RNA干扰 ,OD2 60 / 2 80 值显示产物纯度较高 ,无需任何处理 。
关键词 植原体 dna 提取方法 琼脂糖凝胶电泳 序列分析
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