摘要
利用根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)介导法将广谱抗虫基因豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入毛白杨 (PopulustomentosaCarr.) 12 85雌株和毛新杨 (P .tomentosa×P .bolleana)×毛白杨回交杂种 ,比较了不同卡那霉素 (Km)浓度和Km选择压力的施加方式对毛白杨芽的再生过程和转化频率的影响 ,经过严格筛选获得了大量转基因株系。对所获得的转基因株系从试管苗继代能力、叶片再生芽能力和嫩茎生根能力 3个指标进行了卡那霉素抗性 (Kmr)鉴定 ,将Kmr 植株初步确定为转基因植株。对部分Kmr 植株进行了分子检测 ,PCR鉴定和PCR_Southern检测证实 ,CpTI基因已整合进杨树基因组中。CpTI抑制活性检测表明 ,大部分转基因株系都对胰蛋白酶有一定的抑制活性 ,对照未转化植株没有抑制活性。
Cowpeatrypsininhibitor(CpTI)gene,aninsecticidalgene,wasintroducedintopoplar (Populus tomentosaCarr.)bygenetransformationmediatedbyAgrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn . Theinfluencesonregenerationandtransformationfrequencyofpoplarbytheconcentrationandadditionof kanamycinwerecompared.Kanamycinresistant(Kmr)plantletswereobtainedby 3- 4cyclesscreeninginse lectivecondition .Theabilityofleafregenerationandshootsubcultureandrootingfromthetransformedand non_transformedplantsinthepresenceof 50mg/Lkanamycinwasexamined .ThepresenceofCpTIgenein thetransgenicplantswereconfirmedbyPCRandPCR_Southernblot.Assayonproteinaseinhibitionactivity demonstratedthatleafproteinextractsofthetransgenicpoplarshowedhigherinhibitionactivityagainsttrypsin thanthatofcontrolplants.
基金
国家"8 63计划"
国家自然科学基金资助项目&&
关键词
毛白杨
根癌土壤杆菌
转基因植株
CPTI
抗虫育种
Populustomentosa,Agrobacteriumtumefaciens,Transformation,Cowpeatrypsininhibitorgene, Transgenicplants
