摘要
目的观察不同浓度氢醌（hydroquinone，HQ）对人肺腺癌A549细胞活性氧（reactiveoxygen species，ROS）、脂质过氧化损伤产物丙二醛（malonaldehyde，MDA）、抗氧化酶活性以及氧化损伤修复酶人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶（human8-oxo—guanine DNA glycoslase，hOGG1）基因mRNA表达的影响，探讨HQ毒作用的分子机制。方法不同浓度HQ作用于A549细胞，噻唑兰（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法测定细胞存活率，荧光探针检测细胞内ROS的变化，比色法测定MDA含量和过氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）及谷胱甘肽过氧物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活力，逆转录聚合酶链反应（reverse transcription—polymerase chain reaction，RT-PCR）技术分析hOGG1基因mRNA的表达。结果随着HQ浓度的增加，各实验结果为：（1）A549细胞的吸光度值（A值）下降，160μmol／L和320μmol／L浓度组[（0．584±0．098）、（0．328±0．066）]与对照组（0．989±0．150）相比差异有统计学意义（q值分别为5．56、9．07，P值均〈0．05），且两组细胞存活率均低于80％；（2）A549细胞内ROS生成增多，40μmol／L和80μmol／L浓度组A值[（39．80±4．15）、（101．99±9．45）]与对照组（5．71±0．50）相比差异有统计学意义（q值分别为10．74、30．32，P值均〈0．05）；（3）SOD、GSH-Px活性下降，活性值在80μmol／L时[（22．93±0．56）U／mg prot、（25．60±2．31）U／mg prot]均低于对照组[（25．62±0．28）U／mg prot、（38．97±2．61）U／mg prot]，差异有统计学意义（q值分别为12．17、8．78，P值均〈0．05）；MDA含量升高，在40μmoL／L和80μmol／L[（1．07±0．01）nmol/mg prot、（1．19±0．08）nmol/mg prot]时高于对照组[（0．77±0．04）nmol/mg prot]，差异有统计学意义（q值分别为10．90、15．49，P值均〈0．05）；SOD（r=-0．95，F=20．00，P=0．04）与GSH-Px（r=-0．99，F=115．48，P=0．01）活力的下降和MDA（r=0．96，F=21．31，P=0．04）含量的升高均与HQ浓度的变化具有剂量-反应关系；（4）RT-PCR结果显示：HQ作用后，A549细胞hOGG1mRNA的表达呈下降趋势，80μmoL／L浓度组hOGG1mRNA的表达（0．478±0．017）与对照组（0．715±0．038）相比降低较明显（q=11．70，P〈0．05）。结论HQ可以诱导细胞活性氧增加和hOGG1基因mRNA表达水平下降，提示氧化损伤是HQ毒作用的重要机制。
Objective To explore the effects of hydroquinone （HQ） on reactive oxygen species （ROS） generation, antioxidase activities and the expression of human 8-oxo-guanine DNA glycoslase （ hOGG1 ） mRNA in human A549 lung adenocarcinoma cell strains. Methods A549 cells were treated with different concentrations of HQ. Cell survival was determined by methyl thiazolyl tetrazolium（MTT）. Changes of ROS were detected by fluorescent probe. The contents of malonaldehyde and activities of antioxidase were determined through colorimetry. Reverse transcriptase-polymerase chain reaction （RT-PCR） was used to assess the level of hOGG1 mRNA. Results With the increased concentration of HQ, the findings were as follows. （1）The absorbance value of A549 cell decreased. There was significant difference between 160 μmol/L （0.584 ±0.098） and 320 μmoL/L （0.328 ±0.066） of HQ（q=5.56 and 9.07,P〈0.05） with the control group（0. 989 ±0. 150） ,and the cell survival rate were less than 80%. （2） The ROS in A549 cell increased. 40 μmol/L （ 39.80 ± 4. 15 ） and 80 μmol/L （ 101.99 ±9. 45 ） had statistical significance （ q = 10. 74 and 30. 32,P 〈0. 05）with the control group （5.71 ± 0. 50）. （3）It was found that the activities of superoxide dismutas （SOD） and glutathione peroxidasd （ GSH-Px ） decreased and malonaldehyde （ MDA ） increased. Compared with the control group[ （25.62 ±0. 28） U/mg prot and （38.97 ±2. 61 ） U/rag prot], the activities of SOD and GSH-Px had a significant decrease （q = 12. 17 and 8.78 ,P 〈 0. 05）in 80 μmol/L [ （22. 93 ± 0. 56 ） U/mg prot and （ 25. 60 ±2. 31 ） U/mg prot ]. And MDA had a significant increase （ q = 10. 90 and 15.49, P 〈 0. 05 ） in 40 μmol/L [ （ 1.07 ±0. 01 ） nmol/mg prot ] and 80 μmol/L [ （ 1.19± 0. 08）nmol/mg prot]as compared with the control group [ （0. 77 ±0. 04） nmol/mg prot]. The decrease of SOD （ r = - 0.95 ,F = 20.00 ,P = 0. 04 ） and GSH-Px activities （ r = - 0. 99, F = 115. 48, P = 0. 01 ） and the increase of MDA eontents（r = 0. 96,F =21.31 ,P =0. 04） all had a dose-response relationship. （4） RT-PCR results showed that the expression of hOGG1 mRNA decreased. The significant difference was observed between the expression of hOGG1 mRNA in 80 μmol/L （0. 478 ± 0. 017 ） （ q = 11.70, P 〈 0. 05 ） with the control group（0. 715 ± 0. 038 ）. Conclusion This study suggests that HQ could induce oxidative damage and changes of the expression of hOGG1 mRNA in A549 cells.
出处
《中华预防医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第5期428-433,共6页
Chinese Journal of Preventive Medicine
基金
国家自然科学基金（30571535）
关键词
氢醌类
丙二醛
逆转录聚合酶链反应
Hydroquinones
Malondialdehyde
Reverse transcriptase polymerase chain reaction
作者简介
通信作者：张遵真，Email：zhangzunzhen@163．com
