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理想的电生理学实验平台:急性分离的成年比格犬迷走神经节神经元 被引量:1
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作者 钱钊 乔国芬 李柏岩 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2020年第7期490-501,共12页
目的建立急性分离成年犬结状神经节神经元(VGN)电生理学研究平台。方法通过急性分离和培养雌雄成年比格犬VGN,利用全细胞膜片钳技术分别记录动作电位,电压依赖性的外向钾电流(IK)和超极化激活的阳离子电流(Ih)。结果动作电位波形分析结... 目的建立急性分离成年犬结状神经节神经元(VGN)电生理学研究平台。方法通过急性分离和培养雌雄成年比格犬VGN,利用全细胞膜片钳技术分别记录动作电位,电压依赖性的外向钾电流(IK)和超极化激活的阳离子电流(Ih)。结果动作电位波形分析结果显示:①雌性比格犬VGN不仅可以记录到传统分类中的髓鞘化A型和非髓鞘化C型神经元,还可以记录到雌性特异分布的Ah型神经元;②步阶电流除极在诱发相同持续放电频率时,A型所需要的刺激强度最小,Ah型所需要的电流强度与A型近似或轻微增加,而C型需要的刺激强度最大;③河豚毒素显著降低Ah型神经元的除极速率和触及阈值;蝎毒素可显著增加A-型的神经兴奋性;④所有受试神经元均表达IK和Ih,且2种电流密度均呈现A型>Ah型>C型;⑤尽管雌雄VGN分布的传入纤维种类有别,已知的A和C型VGN放电差异性并未在本研究中探讨。结论成年比格犬VGN可被成功急性分离,并用于动作电位、IK和Ih的记录;分类和电生理学特性足以完成药理学试验的需要,持续至少30 min的紧密封接应该满足药理学观察的需要。 展开更多
关键词 结状神经节 电生理学 膜片钳技术 比格犬
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抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:3
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作者 武正华 唐晓波 +4 位作者 王志刚 纪宏宇 于磊 刘慧文 朱大岭 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期148-151,共4页
目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。... 目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,以Westernblot鉴定mAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptidemassfingerprint,PMF),再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原。结果获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系。杂交瘤细胞分泌的mAbIg的亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7。Westernblot分析显示,在Mr为62000处有1条清晰的带。免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合。该mAb免疫沉淀物的Mr为62000,与hCE-Ⅱ的Mr相符。对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ。结论制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。 展开更多
关键词 人羧酸酯酶-Ⅱ 单克隆抗体 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
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抗人羧酸酯酶-Ⅱ多克隆抗体的制备、鉴定及应用
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作者 吴春铃 包红霞 +1 位作者 唐晓波 朱大岭 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期158-160,163,共4页
目的:构建人羧酸酯酶-Ⅱ(hCE-Ⅱ)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,制备多克隆抗体(pAb),并对其特性进行初步鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-GST)和pET-32a-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-His)。在... 目的:构建人羧酸酯酶-Ⅱ(hCE-Ⅱ)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,制备多克隆抗体(pAb),并对其特性进行初步鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-GST)和pET-32a-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-His)。在宿主菌BL21内进行诱导表达,hCE-Ⅱ-GST融合蛋白作为免疫原免疫大耳白兔,用辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,并用间接ELISA、West-ernblot及免疫组化检测抗体的灵敏度和特异性。结果:成功制备了抗hCE-Ⅱ的多克隆抗体。Westernblot鉴定表明该抗体可特异性识别重组蛋白以及天然的人肝微粒体蛋白。免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性结合肝包浆中的hCE-Ⅱ蛋白,而不与血管平滑肌细胞结合。结论:制备的pAb有较高的效价和较好的特异性,为肝癌诊断试剂盒的研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 hCE-Ⅱ 原核表达 融合蛋白 多克隆抗体
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两个改造后的肿瘤抑素抗肿瘤活性肽活性研究 被引量:11
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作者 王淑静 刘兴汉 +1 位作者 季宇彬 陈宁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1152-1161,共10页
为了研究改造后的肿瘤抑素2个抗肿瘤活性肽的作用机制,明确其不同的抗肿瘤活性,采用基因工程技术原理,人工合成肿瘤抑素中185~203位氨基酸所对应的19肽和T7肽(74~98位氨基酸)基础上改造的21肽碱基序列,将其与融合蛋白表达载体pTYB2重... 为了研究改造后的肿瘤抑素2个抗肿瘤活性肽的作用机制,明确其不同的抗肿瘤活性,采用基因工程技术原理,人工合成肿瘤抑素中185~203位氨基酸所对应的19肽和T7肽(74~98位氨基酸)基础上改造的21肽碱基序列,将其与融合蛋白表达载体pTYB2重组后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,用几丁质亲和层析柱一步纯化,直接获得19肽和21肽,利用MTT法、细胞生长曲线、TUNEL法、流式细胞仪早期细胞凋亡检测和细胞周期检测,小鼠H22腹水型转移型肝癌实体瘤抑瘤实验并结合组织病理学切片,来研究19肽和21肽单独应用或联合应用对肿瘤细胞和内皮细胞生长和凋亡的影响以及对体内肿瘤的抑制情况.体内外实验表明:获得的19肽抗肿瘤活性以直接作用肿瘤细胞为主,也有抑制新生血管生成的作用.基因重组21肽抗肿瘤作用是通过抑制肿瘤组织新生血管生成实现的.19肽、21肽联合应用对肿瘤细胞、内皮细胞生长抑制和促凋亡作用明显增强,抗肿瘤活性大大提高.联合用药弥补了单独用药不足,产生协同抗肿瘤作用,可能会成为今后肿瘤治疗的一个主要方向. 展开更多
关键词 肿瘤抑素 蛋白质表达 细胞增殖 细胞凋亡 肿瘤治疗
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兔抗人细胞色素P450 1A2多克隆抗体的制备及鉴定 被引量:1
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作者 刘海英 杨微 +5 位作者 李郁梅 郭蕾 吴春玲 徐东花 唐晓波 朱大岭 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期448-451,共4页
目的:制备兔抗人细胞色素P4501A2(CYP1A2)抗体及其特性鉴定。方法:利用生物信息学方法分析CYP1A2蛋白的序列,根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择多肽序列,合成CYP1A2多肽,与载体蛋白钥孔戚血蓝素(Keyhole limpet hem... 目的:制备兔抗人细胞色素P4501A2(CYP1A2)抗体及其特性鉴定。方法:利用生物信息学方法分析CYP1A2蛋白的序列,根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择多肽序列,合成CYP1A2多肽,与载体蛋白钥孔戚血蓝素(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,免疫日本大耳白兔制备抗CYP1A2抗体。辛酸-硫酸铵法纯化抗体,间接ELISA法测定抗体的效价及相对亲和力常数,Western blot鉴定其特异性,免疫组化进行定位。结果:获得针对小分子CYP1A2的抗体。该抗体效价为1∶16000;相对亲和力常数在10^5-10^6/M,具有实用价值;可与CYP1A2合成肽及天然CYP1A2出现特异性反应;可识别正常人肝脏组织CYP1A2;Western blot的结果显示,该抗体识别的相应抗原的相对分子质量为58000。结论:合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗体。制备的兔抗CYP1A2合成肽抗体可应用于酶联免疫吸附试验、免疫印迹、免疫组化实验。 展开更多
关键词 CYP1A2 合成肽 多克隆抗体
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鼠抗人CD20单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:2
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作者 包红霞 吴春铃 +5 位作者 李淑珍 唐晓波 褚晓杰 王爽 张家宁 朱大岭 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期454-456,共3页
目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(即CD20-His)。以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠... 目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(即CD20-His)。以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠制备(mAb),用间接ELISA法测定抗体的效价,Western blot、免疫荧光鉴定其特异性及免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。结果:CD20-GST和CD20-His蛋白在大肠杆菌中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的CD20蛋白,经细胞融合得到1株稳定分泌CD20抗体的杂交瘤细胞株,Western blot和免疫组化显示抗CD20mAb与CD20蛋白具有良好的反应性。结论:成功制备高纯度CD20蛋白并以此为抗原制备了1株能够稳定分泌抗人CD20的鼠mAb的杂交瘤细胞株BD11F4,为进一步研究CD20对非霍奇金淋巴瘤的诊断治疗提供基础。 展开更多
关键词 CD20 原核表达 融合蛋白 抗体制备
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三氧化二砷对组织纤维化的作用及机制研究进展 被引量:1
7
作者 支凤楠 沈秀芸 +1 位作者 刘冰 蒋雅楠 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2021年第7期543-550,共8页
砷是一种在自然环境中广泛分布的金属,长期接触可导致在人体内蓄积中毒。同时,三氧化二砷也是重要的抗肿瘤药物,对急性早幼粒细胞性白血病和肝癌等均有显著治疗作用,但其治疗过程中也会引起心、肝和肾等组织的不良反应。纤维化是一种病... 砷是一种在自然环境中广泛分布的金属,长期接触可导致在人体内蓄积中毒。同时,三氧化二砷也是重要的抗肿瘤药物,对急性早幼粒细胞性白血病和肝癌等均有显著治疗作用,但其治疗过程中也会引起心、肝和肾等组织的不良反应。纤维化是一种病理性瘢痕形成过程,严重时会导致器官结构和功能受损。近年来研究表明,砷与组织纤维化密切相关。本文总结三氧化二砷对不同器官(包括心、肝、肺和肾等)纤维化的作用和机制,分析三氧化二砷不同给药时间、给药剂量及给药方式对纤维化的影响,发现三氧化二砷能诱导心、肝及血管纤维化,而在肺、肾及皮肤组织则表现出剂量相关的双向调节作用。介绍非编码RNA介导三氧化二砷作用机制的进展,这些新发现提示长非编码RNA和环状RNA可能是三氧化二砷诱导纤维化的潜在重要机制。本综述旨在为三氧化二砷的临床合理用药和毒性预防提供新思路。 展开更多
关键词 三氧化二砷 纤维化 非编码RNA
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长链非编码RNA在心律失常中的作用研究进展 被引量:1
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作者 廖蕾 沈秀芸 +1 位作者 吕保江 蒋雅楠 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2021年第3期211-216,共6页
长链非编码RNA(lncRNA)在心律失常中具有重要作用。lncRNA通过影响心脏电重构、结构重构、能量代谢障碍及自主神经重构等机制参与房颤的发生,通过调节离子通道编码基因诱发长QT间期综合征,通过改变心脏传导影响心肌肥厚/心力衰竭诱导的... 长链非编码RNA(lncRNA)在心律失常中具有重要作用。lncRNA通过影响心脏电重构、结构重构、能量代谢障碍及自主神经重构等机制参与房颤的发生,通过调节离子通道编码基因诱发长QT间期综合征,通过改变心脏传导影响心肌肥厚/心力衰竭诱导的心律失常等。本文综述上述研究进展,以期为心律失常的研究和治疗提供新思路。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 心律失常 心房颤动
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Piezo通道的功能及其药理学研究进展
9
作者 崔昌鹏 熊雪 +4 位作者 王雪 李蝴蝶 周萌 马海兰 李柏岩 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2021年第6期457-461,共5页
自被发现以来,机械敏感性离子通道受国内外学者广泛关注,尤其是近年来发现的Piezo通道,对哺乳动物的机械信号转导至关重要。该通道分布广泛,参与机体多种生理和病理过程。新近研究表明,Piezo通道参与细胞增殖、分化和迁移及触觉感知、... 自被发现以来,机械敏感性离子通道受国内外学者广泛关注,尤其是近年来发现的Piezo通道,对哺乳动物的机械信号转导至关重要。该通道分布广泛,参与机体多种生理和病理过程。新近研究表明,Piezo通道参与细胞增殖、分化和迁移及触觉感知、血压的自发调节等过程,也与非小细胞肺癌等疾病的发生有关,而药物可通过Piezo通道干预生理和病理进程。本文主要综述Piezo通道的功能及与之相关的药理学研究进展,为靶向药物的开发提供借鉴。 展开更多
关键词 Piezo通道 机械敏感性离子通道 血压调控 Yoda1
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血压神经调控性别差异的关键:Ah型髓鞘化压力感受器神经元
10
作者 刘丽 乔国芬 李柏岩 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2019年第11期984-993,共10页
大量基础与临床的统计学结果表明,无论是正常血压还是高血压的发病率,成年男性均明显高于同龄女性,这种性别差异在绝经期后消失。我们经过近20年的研究发现,成年雌性大鼠结状神经节及孤束核中不仅分布有传统分类的髓鞘化A型和非髓鞘化C... 大量基础与临床的统计学结果表明,无论是正常血压还是高血压的发病率,成年男性均明显高于同龄女性,这种性别差异在绝经期后消失。我们经过近20年的研究发现,成年雌性大鼠结状神经节及孤束核中不仅分布有传统分类的髓鞘化A型和非髓鞘化C型内脏感觉/压力感受器神经元以外,还特异性分布一种髓鞘化Ah型神经元,它的电生理学特性、化学敏感性以及离子通道表达均与A型和C型有所不同。在体和离体研究结果显示,Ah型神经元具有以下功能特征:①仅分布于成年雌性大鼠,神经兴奋性依赖于雌激素的存在;②属于髓鞘化纤维,传导速度室温下2~20 m·s^-1,但动作电位复极期有类似于C型驼峰切记;③动作电位除极阈值、除极速度、动作电位时程以及放电频率均不同于A和C型;④同为髓鞘化纤维,Ah型对神经递质和血管活性物质敏感;⑤虽表现有除极期驼峰,Ah型对辣椒素不敏感,同工凝集素B4表达阴性;⑥Ah型功能性表达Nav1.7,Nav1.8和Nav1.9;⑦Ah型对血管紧张素Ⅱ高度敏感,并高表达血管紧张素Ⅱ型受体,参与降压作用;⑧Ah型对血清素高度敏感,可能与其高表达血清素Ⅲ型受体有关,下行抑制心脏疼痛感受,参与无痛心绞痛的发病过程;⑨Ah型对组胺高度敏感,并高表达组胺Ⅱ型受体,与哮喘发病的性别差异密切相关。综上所述,成年雌性大鼠髓鞘化Ah型内脏感觉神经元/压力感受器神经元,独立存在并不同于A和C型,是构成与内脏感觉/主动脉压力反射传入通路性别差异相关生理功能的神经解剖学基础,为合理解释上述相关病理生理机制揭开了新的一页。 展开更多
关键词 自主神经调控 压力反射传入功能 电生理学
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