十年建设,五年腾飞——回顾细胞生物学系暨“肝脏保护与再生调节”北京市重点实验室建设情况

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作者 安威 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2010年第4期514-517,共4页

首都医科大学细胞生物学系成立于1995年,是国内较早成立细胞生物学科的医科院校之一。随后十年相继获批成为北京市重点学科和北京市重点实验室。学科及实验室的发展始终坚持走转化医学之路,以细胞分子生物学为切入点,以肝病的基因诊断... 首都医科大学细胞生物学系成立于1995年,是国内较早成立细胞生物学科的医科院校之一。随后十年相继获批成为北京市重点学科和北京市重点实验室。学科及实验室的发展始终坚持走转化医学之路,以细胞分子生物学为切入点,以肝病的基因诊断和治疗为核心开展研究,汇聚基础临床结合这一优势,形成了独具特色的学科发展方向,在科研、教学、人才建设方面都取得了良好的成绩。 展开更多

关键词 细胞生物学系 肝脏保护与再生调节 北京市重点实验室 学科

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体外诱导小鼠单核细胞向Kupffer细胞分化的方法建立及特征鉴定

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作者 李伟阳 李丽英 杨琳 《首都医科大学学报》 北大核心 2025年第2期289-295,共7页

目的建立一种体外诱导小鼠骨髓单核细胞向Kupffer细胞分化的方法,以用于Kupffer细胞的体外研究。方法从小鼠骨髓中分离单核细胞,经过巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)、转化生长因子-β1(transforming... 目的建立一种体外诱导小鼠骨髓单核细胞向Kupffer细胞分化的方法,以用于Kupffer细胞的体外研究。方法从小鼠骨髓中分离单核细胞,经过巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor 1,TGF-β1)和δ样蛋白4(delta-like protein 4,DLL4)联合诱导后,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qPCR)法检测骨髓单核细胞来源Kupffer细胞(induced monocyte-derived Kupffer cells,iMoKCs)中表面标志物C型凝集素结构域家族4F(C-type lectin domain family 4,member f,CLEC4F)、C型凝集素结构域家族1B(C-type lectin domain family 1,member b,CLEC1B)和含免疫球蛋白结构域蛋白4(V-set and immunoglobulin domain containing 4,VSIG4)mRNA水平的表达情况;通过免疫荧光的方法检测iMoKCs中蛋白质CLEC4F的表达;利用流式细胞分析技术评估iMoKCs的吞噬功能,用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测iMoKCs的增殖活性。结果从小鼠骨髓中分离的单核细胞,经过24 h的联合诱导,在mRNA水平即可表达Clec4f、Clec1b和Vsig4,并表达蛋白质CLEC4F,流式细胞术分析显示吞噬生物颗粒的iMoKCs约占总细胞数量的80%,CCK-8检测在第24 h、48 h、72 h,iMoKCs数量分别为初始数量(0 h)的1.4、2.0和2.9倍。结论M-CSF、TGF-β1和DLL4联合诱导可在体外成功将骨髓单核细胞分化成为iMoKCs,并且具有吞噬与增殖的能力,可替代原代Kupffer细胞进行体外研究。 展开更多

关键词 小鼠 KUPFFER细胞 吞噬 增殖 体外诱导 单核细胞

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Smad3 shRNA抑制TGFβ1对HSC-T6细胞活化的抗肝纤维化作用 被引量：9

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作者 郑素军 邢欣悦 +7 位作者 武聚山 王世美 张莹 韩源平 俞豪 陈煜 刘梅 段钟平 《临床肝胆病杂志》 CAS 2012年第4期289-295,共7页

目的观察Smad3 shRNA对TGFβ1作用于大鼠HSC-T6细胞增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化胶原的影响。方法Smad3 shRNA慢病毒感染HSC-T6,应用流式细胞仪检测其感染率,Real-time PCR检测对Smad3 mRNA表达的抑制作用;将HSC-T6对照、HSC-T6+TGF... 目的观察Smad3 shRNA对TGFβ1作用于大鼠HSC-T6细胞增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化胶原的影响。方法Smad3 shRNA慢病毒感染HSC-T6,应用流式细胞仪检测其感染率,Real-time PCR检测对Smad3 mRNA表达的抑制作用;将HSC-T6对照、HSC-T6+TGFβ1(10 ng/ml)、Smad3 shRNA以及Smad3 shRNA+TGFβ1(10 ng/ml)这4组细胞进行如下检测:(1)MTT检测细胞增殖;(2)流式细胞仪检测TGFβ1作用24、36 h细胞周期分布;(3)Real-time PCR检测24、36 h时细胞周期、增殖及肝纤维化相关基因mRNA的表达变化;(4)ELISA检测24、36 h培养液上清中胶原蛋白(COL)Ⅰ、COLⅢ及α-SMA的含量。结果Smad3 shRNA慢病毒感染HSC-T6细胞至96 h,感染率为71.3%,对Smad3 mRNA的表达抑制率为50%。(1)MTT结果显示,TGFβ1促进HSC-T6增殖;与相应未感染Smad3 shRNA病毒组相比,Smad3 shRNA组以及Smad3 shRNA+TGFβ1组细胞增殖能力均下降。(2)细胞周期检测发现,24、36 h时,Smad3 shRNA+TGFβ1组与Smad3 shRNA组相比,细胞周期分布差异无统计学意义(P>0.05);(3)Real-time PCR显示,Smad3 shRNA+TGFβ1组较HSC-T6+TGFβ1组,Smad3、原癌基因(c-myc)、细胞周期依赖性激酶-2(CDK-2)、细胞周期素E(cyclin E)、表皮生长因子(EGF)、核因子-κB(NF-κB)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、COLⅠ及基质金属蛋白酶(MMP)14等基因的mRNA在24、36 h表达均下调,HGF mRNA及COLⅢmRNA在24 h时上调、36 h时下调,Bcl-2 mRNA、MMP1 mRNA及MMP9 mRNA在24 h和36 h两个时段均表达上调。(4)ELISA检测发现,同一时间点比较,分别在24、36 h,TGFβ1可促进HSC-T6细胞COLⅠ(P=0.00,P=0.02)、α-SMA(P=0.00,P=0.01)的分泌;与HSC-T6+TGFβ1组相比,Smad3 shRNA+TGFβ1组COLⅠ于36 h分泌减少(P=0.00)、而α-SMA在24、36 h两个时间点分泌减少(P=0.00)。结论 Smad3 shRNA抑制了TGFβ1对HSC-T6的活化,显示了抗肝纤维化作用。 展开更多

关键词 SMAD3 shRNA 慢病毒载体 肝硬化 转化生长因子β1 肝星状细胞

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人类起源的探索--2022年诺贝尔生理学或医学奖 被引量：2

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作者 董凌月 王宇童 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第5期804-806,共3页

北京时间2022年10月3日,瑞典斯德哥尔摩卡罗琳斯卡医学院宣布将2022年诺贝尔生理学或医学奖授予瑞典进化遗传学家斯万特•佩博(Svante Paabo),以表彰他在“关于已灭绝古人类基因组和人类进化方面的发现”中做出的杰出贡献。本文对斯万特... 北京时间2022年10月3日,瑞典斯德哥尔摩卡罗琳斯卡医学院宣布将2022年诺贝尔生理学或医学奖授予瑞典进化遗传学家斯万特•佩博(Svante Paabo),以表彰他在“关于已灭绝古人类基因组和人类进化方面的发现”中做出的杰出贡献。本文对斯万特•佩博的生平、科学贡献和意义加以介绍。 展开更多

关键词 2022年诺贝尔生理学或医学奖 古人类基因组 人类进化

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链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞及人正常肝细胞生长的影响 被引量：1

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作者 李彦芹 王艳 +3 位作者 曹宁 平国玲 李卫红 张力平 《首都医科大学学报》 CAS 2008年第5期605-609,共5页

目的观察链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞及人Chang氏正常肝细胞生长增生的影响。方法常规培养链球菌,提取细菌全蛋白并通过阴离子交换层析获得蛋白分离组分SpⅠ和SpⅡ。不同浓度链球菌蛋白(10、50、100mg/L)作用于人肝癌Bel-7402细胞及... 目的观察链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞及人Chang氏正常肝细胞生长增生的影响。方法常规培养链球菌,提取细菌全蛋白并通过阴离子交换层析获得蛋白分离组分SpⅠ和SpⅡ。不同浓度链球菌蛋白(10、50、100mg/L)作用于人肝癌Bel-7402细胞及人Chang氏正常肝细胞24～72h后,采用MTT法检测两种细胞的增生活性。倒置显微镜下观察50mg/L链球菌全蛋白和SpⅡ对两种细胞的形态学变化。结果MTT结果显示,链球菌全蛋白及SpⅡ能显著抑制Bel-7402细胞的生长,与蛋白剂量和作用时间呈负相关关系;SpⅠ对Bel-7402细胞未显示出明显增生抑制作用。链球菌全蛋白及SpⅡ对人Chang氏正常肝细胞显示出不同程度的刺激生长作用。倒置显微镜下观察,链球菌全蛋白及SpⅡ作用后的Bel-7402细胞,细胞稀疏、脱落、排列紊乱,失去正常形态,而人Chang氏细胞未发现明显的形态学变化。结论链球菌全蛋白及SpⅡ能抑制人肝癌Bel-7402细胞的增生,并且能在一定程度上促进人Chang氏正常肝细胞增生。 展开更多

关键词 链球菌 人肝癌Bel-7402细胞 人Chang氏正常肝细胞

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CCAAT/增强子结合蛋白α抑制人肝癌细胞内的肝刺激因子表达 被引量：1

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作者 吴媛 董凌月 安威 《首都医科大学学报》 CAS 2014年第5期634-639,共6页

目的探讨CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)对人肝癌细胞内肝刺激因子(hepatic stimulator substance,HSS)表达的影响及其在表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)抑制HSS表达过程中的作用。方法... 目的探讨CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)对人肝癌细胞内肝刺激因子(hepatic stimulator substance,HSS)表达的影响及其在表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)抑制HSS表达过程中的作用。方法采用凝胶迁移电泳实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)研究C/EBPα与HSS启动子的体外相互作用,real-time PCR和Western blotting的方法测定hHSS mRNA和蛋白质表达情况。结果 EMSA实验证实C/EBPα可以与hHSS启动子-343/-330区域内的C/EBPα结合位点结合,对hHSS表达具有负性调节作用,C/EBPαsiRNA转染入HepG2细胞后,hHSS mRNA和蛋白质表达均升高。但C/EBPα表达下降并不影响EGF对hHSS表达,而EGF不改变C/EBPα的活性和表达。结论 C/EBPα可通过C/EBP位点抑制hHSS的表达,但不参与EGF对hHSS的转录调节过程。 展开更多

关键词 肝刺激因子 表皮生长因子 CCAAT/增强子结合蛋白α

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肝刺激因子稳定转染人肝癌细胞系的方法建立与表达鉴定

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作者 吴媛 张静 +1 位作者 董凌月 安威 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第6期924-928,共5页

目的建立稳定表达肝刺激因子(hepatic stimulator substance,HSS)的BEL-7402肝癌细胞系,并对其生物学特性进行鉴定。方法采用脂质体法将鉴定后的Flag-HSS-pc DNA3.0质粒转染到肝癌细胞系BEL-7402中,进行G418筛选,获得稳定转染的人肝癌... 目的建立稳定表达肝刺激因子(hepatic stimulator substance,HSS)的BEL-7402肝癌细胞系,并对其生物学特性进行鉴定。方法采用脂质体法将鉴定后的Flag-HSS-pc DNA3.0质粒转染到肝癌细胞系BEL-7402中,进行G418筛选,获得稳定转染的人肝癌细胞系。通过real-time PCR、Western blotting和免疫荧光染色等方法鉴定HSS mRNA和蛋白质表达及亚细胞定位。结果免疫荧光染色实验证实HSS基因能在稳定转染的肝癌细胞系中表达,并定位于线粒体中。同时发现在稳定转染细胞中HSS mRNA和蛋白质的表达也均高于野生型BEL-7402细胞。结论目前已成功构建稳定转染HSS的BEL-7402肝癌细胞系。为深入研究HSS的生理功能提供实验工具和研究基础。 展开更多

关键词 肝刺激因子 人肝癌细胞 转染

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基于MRI及临床指标的前列腺被膜外侵犯预测模型

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作者 范云鹏 熊天宇 +4 位作者 杨坤 刘占良 靳松 谢萍 牛亦农 《首都医科大学学报》 北大核心 2025年第2期243-251,共9页

目的利用简化的部位特异性磁共振(magnetic resonance imaging,MRI)指标及其他临床指标建立前列腺癌根治术后病理中出现前列腺被膜外侵犯(extraprostatic extension,EPE)的Nomogram临床预测模型。方法回顾性纳入181例行前列腺癌根治术的... 目的利用简化的部位特异性磁共振(magnetic resonance imaging,MRI)指标及其他临床指标建立前列腺癌根治术后病理中出现前列腺被膜外侵犯(extraprostatic extension,EPE)的Nomogram临床预测模型。方法回顾性纳入181例行前列腺癌根治术的(69.0±7.3)岁患者,他们在术前6个月内行3-特斯拉多参数MRI(3-Tesla multi-parametric MRI,3-T mpMRI)检查。根据被膜接触长度(capsular contact length,CCL)>15 mm、被膜膨出/不规则(bulge/irregularity)、目标病灶直径(diameter of index leision,dIL)、MRI上明显的前列腺被膜外侵犯(evident extraprostatic extension,eEPE)等mpMRI测量指标得出dIL*sEPE分级。通过Youden指数确定dIL的最佳截断值,将其分为一个二分类变量,记为dIL。建立基于dIL*sEPE分级和临床指标的Logistic回归模型。同时,比较临床指标、MRI指标、MRI指标联合临床指标的预测效能。最终,建立临床数据联合MRI数据的临床预测模型。结果病理性EPE占25.4%(46/181)。联合dIL*sEPE分级临床指标建立预测EPE的Nomogram预测模型。结论dIL*sEPE与临床指标联合时可准确预测前列腺被膜外侵犯。基于MRI影像特征及临床指标建立的预测前列腺癌根治术后EPE的Nomogram模型性能良好、使用简便,有益于前列腺癌根治术患者的分层管理,对适合行神经保留手术的患者有一定指导意义。 展开更多

关键词 前列腺癌 磁共振成像 预测模型 列线图 肿瘤分级 前列腺被膜外侵犯

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异种线粒体可为线粒体移植提供来源

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作者 杨圳 李文鹏 +3 位作者 牛添 薛慧雯 赵思喜 赵兴波 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第2期273-283,共11页

线粒体是真核细胞的细胞器,是细胞能量代谢、氧化应激、热量生成以及信号转导的重要场所。线粒体移植(mitochondrial transplantation,MT)是目前治疗线粒体功能障碍及抗衰老研究最为前沿的技术手段。本研究将牦牛(Bos grunniens)、普通... 线粒体是真核细胞的细胞器,是细胞能量代谢、氧化应激、热量生成以及信号转导的重要场所。线粒体移植(mitochondrial transplantation,MT)是目前治疗线粒体功能障碍及抗衰老研究最为前沿的技术手段。本研究将牦牛(Bos grunniens)、普通牛(Bos taurus)和马(Equus caballus)的线粒体移植至小鼠(Mus musculus),旨在探究异种线粒体移植的可行性及作用效果。研究结果显示,通过共聚焦成像、数字PCR及DNA测序检测到牦牛、普通牛和马的线粒体能够移植至小鼠体内,并在小鼠广泛的组织、器官中至少可维持14 d。MT小鼠产生了积极的生物学效应,包括提高ATP含量和线粒体DNA拷贝数(P<0.05),其效应可维持到14 d,并在第7 d达到最大值。MT小鼠活性氧(ROS)水平表现为初期(注射2 h)显著上升(P<0.05),在第7 d和第14 d逐渐下降至接近对照组水平(P>0.05)。研究结果支持了异种线粒体移植的有效性,并表明其效果可以维持至14 d。本研究为未来的临床应用提供了科学依据。 展开更多

关键词 线粒体移植 异种线粒体 线粒体DNA拷贝数 三磷酸腺苷 活性氧

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雄激素受体与PI3K/AKT通路相互作用机制在前列腺癌中的研究进展

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作者 熊天宇 赵有权 +1 位作者 谢萍 牛亦农 《首都医科大学学报》 北大核心 2025年第2期269-282,共14页

雄激素受体通路与磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositide 3-kinases,PI3K)/AKT通路均在前列腺癌的疾病进展中占据着举足轻重的地位。两条通路之间存在着错综复杂的相互作用,彼此间展现出相互制约的负向调节关系。鉴于此,针对这两条通... 雄激素受体通路与磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositide 3-kinases,PI3K)/AKT通路均在前列腺癌的疾病进展中占据着举足轻重的地位。两条通路之间存在着错综复杂的相互作用,彼此间展现出相互制约的负向调节关系。鉴于此,针对这两条通路的联合抑制策略有望成为前列腺癌治疗的重要途径。本文旨在全面综述雄激素受体与PI3K/AKT通路相互作用的分子机制,以期为相关领域的研究提供新的视角与启示。 展开更多

关键词 前列腺癌 雄激素受体 PI3K AKT 信号通路

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激活大麻素受体1诱导的单核巨噬细胞J774A.1的迁移依赖RNA结合蛋白HuR 被引量：2

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作者 赵中新 常娜 +2 位作者 盖菁菁 田蕾 李丽英 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第1期76-82,共7页

目的研究大麻素受体1(cannabinoid receptor 1,CB1)在单核巨噬细胞迁移中的重要作用以及RNA结合蛋白人抗原R(human antigen R,HuR)参与其中的可能机制。方法选用单核巨噬细胞系J774A.1,应用琼脂糖凝胶电泳和免疫荧光染色技术鉴定J774A.1... 目的研究大麻素受体1(cannabinoid receptor 1,CB1)在单核巨噬细胞迁移中的重要作用以及RNA结合蛋白人抗原R(human antigen R,HuR)参与其中的可能机制。方法选用单核巨噬细胞系J774A.1,应用琼脂糖凝胶电泳和免疫荧光染色技术鉴定J774A.1中CB1以及HuR的表达;ACEA和AM281分别为CB1的药理学激动剂和拮抗剂,应用Boyden chamber法检测ACEA和AM281对J774A.1迁移活性的影响。HuR的基因干扰用于确定激活CB1诱导的J774A.1迁移功能是否依赖HuR;胞质蛋白的分离用于探究激活CB1是否能引起J774A.1胞质中HuR的富集;RT-qPCR和Western blotting法检测CB1和HuR mRNA和蛋白质的变化情况。结果该研究证明J774A.1在基因和蛋白质水平上均表达CB1和HuR;激活CB1能够促进J774A.1的迁移(P<0.01)并且能够被其药理学拮抗剂AM281所抑制;激活CB1诱导的J774A.1的迁移依赖HuR;激活CB1促进了J774A.1胞质中HuR的富集进一步影响了CB1的表达,由此HuR参与了激活CB1诱导的J774A.1的迁移。结论激活CB1能够诱导单核巨噬细胞系J774A.1的迁移,且此过程依赖RNA结合蛋白HuR。 展开更多

关键词 人抗原R 大麻素受体1 细胞迁移

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磷酸鞘胺醇调节小鼠单核巨噬细胞炎性细胞因子表达的机制研究 被引量：1

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作者 张媛媛 李伟阳 +1 位作者 杨琳 李丽英 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第5期729-733,共5页

目的本课题探究了磷酸鞘胺醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)对小鼠单核巨噬细胞J774A.1表达炎性细胞因子的调节机制。方法应用蛋白印迹实验检测小鼠单核巨噬细胞J774A.1是否表达S1P受体,进一步应用实时荧光定量聚合酶链反应检测小鼠单... 目的本课题探究了磷酸鞘胺醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)对小鼠单核巨噬细胞J774A.1表达炎性细胞因子的调节机制。方法应用蛋白印迹实验检测小鼠单核巨噬细胞J774A.1是否表达S1P受体,进一步应用实时荧光定量聚合酶链反应检测小鼠单核巨噬细胞J774A.1在S1P刺激下是否表达炎性细胞因子,最后应用药理学工具干预S1P受体(S1P receptor,S1PRs)信号系统研究小鼠单核巨噬细胞J774A.1表达炎性细胞因子的调节机制。结果 S1PR2拮抗剂(JTE-013)、S1PR3拮抗剂(CAY-10444)可抑制小鼠单核巨噬细胞系J774A.1炎性细胞因子的表达;而S1PR1拮抗剂(W146)对小鼠单核巨噬细胞炎性细胞因子的表达并无影响。结论磷酸鞘胺醇通过S1PR2和S1PR3上调小鼠单核巨噬细胞J774A.1炎性细胞因子的表达。 展开更多

关键词 单核巨噬细胞 磷酸鞘胺醇 炎性反应因子

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S1PR1/3介导骨髓间充质干细胞向肌成纤维细胞分化的信号通路探讨 被引量：2

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作者 杨苑儒 周璇 +2 位作者 张若辰 李丽英 杨乐 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第2期277-281,共5页

目的在转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGFβ1)诱导的分化模型中探讨RhoA信号对于磷酸鞘氨醇受体1/3(sphingosine 1-phosphate receptor 1/3,S1PR1/3)介导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)向... 目的在转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGFβ1)诱导的分化模型中探讨RhoA信号对于磷酸鞘氨醇受体1/3(sphingosine 1-phosphate receptor 1/3,S1PR1/3)介导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)向肌成纤维细胞(myofibroblast,MF)分化的影响及其机制。方法分离并培养小鼠原代BMSC,TGFβ1诱导其分化。采用qRT-PCR检测分化标志物平滑肌肌动蛋白α(α-smooth muscle actin,αSMA)、Ⅰ型胶原[procollagenα1(Ⅰ),Colα1(Ⅰ)]和Ⅲ型胶原[Colα1(Ⅲ)]的mRNA表达;采用Pull-down试剂盒检测RhoA的活化。结果 TGFβ1能够显著上调BMSC细胞中分化标志物αSMA、Colα1(Ⅰ)和Colα1(Ⅲ)的mRNA表达,呈现剂量依赖效应。TGFβ1能够激活小G蛋白RhoA,该作用可以被S1PR1或S1PR3拮抗剂所阻断。RhoA抑制剂C3转移酶能够阻断TGFβ1诱导的αSMA、Colα1(Ⅰ)和Colα1(Ⅲ)mRNA水平的上调。结论RhoA信号参与了S1PR1/3介导的BMSC向MF的分化。 展开更多

关键词 小鼠 骨髓间充质干细胞 磷酸鞘氨醇受体 RHOA

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过表达apoA-Ⅰ对BEL-7402细胞内脂质堆积的影响 被引量：3

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作者 覃岭 王宇童 《首都医科大学学报》 CAS 2012年第2期198-204,共7页

目的通过建立过表达载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,apoA-Ⅰ)的细胞模型,用不同浓度及不同类型的脂肪酸作用于细胞,检测过表达apoA-Ⅰ与正常细胞内脂质水平,来研究利用过表达apoA-Ⅰ促进ATP结合盒转运子A1(ATP-bindingcassette trans... 目的通过建立过表达载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,apoA-Ⅰ)的细胞模型,用不同浓度及不同类型的脂肪酸作用于细胞,检测过表达apoA-Ⅰ与正常细胞内脂质水平,来研究利用过表达apoA-Ⅰ促进ATP结合盒转运子A1(ATP-bindingcassette transporter A1,ABCA1)介导的脂质转运途径,降低脂质合成,进而影响非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)细胞的脂质堆积的分子机制,探索一种新方法,通过apoA-Ⅰ/ABCA1这一途径改变细胞内脂质代谢来预防NASH。方法①通过不同浓度和类型的脂肪酸处理人肝癌细胞系BEL-7402细胞,作用6、12、24 h后,经油红O染色,检测不同时间脂质在细胞内的定位,从而确定出适合的脂肪酸浓度及作用时间;②通过MTT法检测不同浓度及类型的脂肪酸作用细胞6、12、24 h后,细胞活性的变化情况;③分别转染空载体质粒pcDNA 3.0与质粒pcDNA3.0/apoA-Ⅰ,通过Western blotting的实验方法,检测细胞内、外apoA-Ⅰ的表达情况;④对正常或过表达apoA-Ⅰ的BEL-7402细胞模型,以最适的实验条件作用于正常(对照组)和过表达apoA-Ⅰ(实验组)的BEL-7402细胞,检测细胞内胆固醇、游离脂肪酸以及三酰甘油的含量。结果①200μmol/L或400μmol/L浓度脂肪酸作用6、12及24 h均可使脂质在BEL-7402细胞胞质中堆积,脂质的产生对脂肪酸呈剂量和时间依赖性;②饱和脂肪酸棕榈酸使细胞活性降低,且对细胞生长的抑制作用随棕榈酸的浓度及作用时间的增加而加强;③apoA-Ⅰ过表达于BEL-7402细胞内,且apoA-Ⅰ可以释放到细胞外,协助ABCA1转运胆固醇;④与正常的BEL-7402细胞相比,过表达apoA-Ⅰ组细胞内的三酰甘油、游离脂肪酸以及胆固醇均有显著减少。结论与正常组相比,过表达apoA-Ⅰ可以减少胆固醇、游离脂肪酸及三酰甘油在人肝细胞内的聚积,从而对于NASH的防治具有治疗作用。 展开更多

关键词 ATP结合盒转运子A1 非酒精性脂肪性肝炎 载脂蛋白A-Ⅰ

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过表达apoA-Ⅰ可缓解BEL-7402细胞中衣霉素诱导的内质网应激

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作者 张灿 王宇童 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期163-169,共7页

内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER stress)对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的发生发展具有十分重要的作用。本实验室前期结果证实,载脂蛋白A1(apolipoprotein A-Ⅰ,apo A-Ⅰ)可以通过减少肝... 内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER stress)对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的发生发展具有十分重要的作用。本实验室前期结果证实,载脂蛋白A1(apolipoprotein A-Ⅰ,apo A-Ⅰ)可以通过减少肝细胞脂质堆积来减轻蛋氨酸胆碱缺乏饲料造成的非酒精性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH),但相关机制仍不十分清楚。为探索apo A-Ⅰ对内质网应激的影响,本研究采用衣霉素处理人肝癌BEL-7402细胞。Western印迹结果证实,衣霉素确实可以诱导BEL-7402细胞内质网应激,并具有时间和剂量依赖性。通过将apo A-Ⅰ表达载体及其对照载体转染到BEL-7402细胞,再加入衣霉素处理,结果显示,与对照组相比,过表达apo A-Ⅰ的细胞内质网应激标志分子表达明显减轻,同时与脂质合成相关的固醇调节元件结合蛋白1、脂肪酸合成酶和乙酰辅酶A羧化酶1蛋白质水平明显降低。脂质检测结果表明,细胞内甘油三酯和游离胆固醇水平也明显降低(P<0.05)。上述结果表明,apo A-Ⅰ能够减轻衣霉素引起的内质网应激,可能机制是通过调控固醇调节元件结合蛋白1减少肝细胞的脂质堆积。 展开更多

关键词 载脂蛋白A-Ⅰ 内质网应激 衣霉素 固醇调节元件结合蛋白1 非酒精性脂肪性肝病

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miR-29s通过下调大麻素受体1抑制ACEA促J774A.1细胞迁移的活性

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作者 段向辉 常娜 李丽英 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第2期230-235,共6页

目的研究miR-29a-3p、miR-29b-3p和miR-29c-3p是否可以影响J774A.1细胞中大麻素受体1(cannabinoid receptor type 1,CB1)的表达以及其迁移功能。方法 RT-q PCR法检测CB1 mRNA表达;Boyden chamber法检测J774A.1细胞迁移能力的变化。结果... 目的研究miR-29a-3p、miR-29b-3p和miR-29c-3p是否可以影响J774A.1细胞中大麻素受体1(cannabinoid receptor type 1,CB1)的表达以及其迁移功能。方法 RT-q PCR法检测CB1 mRNA表达;Boyden chamber法检测J774A.1细胞迁移能力的变化。结果本研究证明了在J774A.1细胞里,CB1的激动剂ACEA(Arachidonyl-2'-chloroethylamide)可以上调CB1 mRNA的表达,而分别转染了miR-29a-3p、miR-29b-3p和miR-29c-3p的mimics后可以抑制这一过程;同时对J774A.1细胞转染miR-29a-3p、miR-29b-3p和miR-29c-3p的mimics可以阻碍ACEA诱导的J774A.1细胞的迁移。结论 miR-29s通过下调CB1的表达抑制了ACEA促J774A.1细胞迁移的活性。 展开更多

关键词 MIR-29 大麻素受体1 细胞迁移

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几种不同提取线粒体的方法对线粒体含量及活性的影响 被引量：5

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作者 吴媛 董凌月 +1 位作者 安威 安云庆 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2010年第2期241-244,共4页

目的比较几种不同的提取线粒体的方法对线粒体蛋白浓度及活性的影响。方法采用蔗糖密度梯度离心法、普利莱试剂盒提取方法和Pierce线粒体提取试剂盒方法分别提取线粒体,测定提取得到的线粒体蛋白浓度、污染情况和活性。结果同样数量的... 目的比较几种不同的提取线粒体的方法对线粒体蛋白浓度及活性的影响。方法采用蔗糖密度梯度离心法、普利莱试剂盒提取方法和Pierce线粒体提取试剂盒方法分别提取线粒体,测定提取得到的线粒体蛋白浓度、污染情况和活性。结果同样数量的细胞采用普利莱法提取得到的线粒体蛋白浓度高于其他2种方法所提取的线粒体蛋白浓度(P<0.05);采用Westernblotting的方法测定提取的线粒体发现采用普利莱法提取得到的线粒体中胞质蛋白污染较其他2种方法提取得到的线粒体少,线粒体纯度高;测定线粒体中细胞色素C和ATP含量后发现同样采用普利莱法提取得到的线粒体活性最高。结论普利莱法提取线粒体的方法优于蔗糖密度梯度离心法和Pierce线粒体提取试剂盒方法。 展开更多

关键词 线粒体 线粒体的提取方法 线粒体活性

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磷酸鞘胺醇参与KkAy 2型糖尿病小鼠胰腺纤维化发病机制探讨 被引量：1

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作者 修磊 常娜 姜涛 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第11期59-64,共6页

目的探讨磷酸鞘胺醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)是否参与Kk Ay 2型糖尿病小鼠胰腺纤维化的发生,这一过程是否和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)相关。方法应用Real-time RTPCR的方法检测Kk Ay 2型糖尿病... 目的探讨磷酸鞘胺醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)是否参与Kk Ay 2型糖尿病小鼠胰腺纤维化的发生,这一过程是否和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)相关。方法应用Real-time RTPCR的方法检测Kk Ay 2型糖尿病小鼠及C57小鼠胰腺中鞘胺醇激酶1(Sph K1)的mRNA水平,并检测反映胰腺星状细胞活化的指标平滑肌肌动蛋白α(α-smooth muscle actin,α-SMA)、TGF-β1以及细胞外基质的主要成分Ⅰ型胶原[collagenα1(Ⅰ),Colα1(Ⅰ)]和Ⅲ型胶原[collagenα1(Ⅲ),Colα1(Ⅲ)]的水平。结果与对照组C57小鼠相比,Kk Ay 2型糖尿病小鼠胰腺高表达Sph K1、TGF-β1、α-SMA、Colα1(Ⅰ)及Colα1(Ⅲ),并且Sph K1与TGF-β1存在明显正相关。结论磷酸鞘胺醇可能参与了Kk Ay 2型糖尿病小鼠胰腺纤维化的发生,并且这一过程可能与TGF-β1相关。 展开更多

关键词 糖尿病 胰腺纤维化 磷酸鞘胺醇 鞘胺醇激酶 转化生长因子-Β1

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高内涵分析及Western blotting法在蛋白质核质分布研究中的应用及比较研究 被引量：4

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作者 纪晓方 李丽英 常娜 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第5期616-620,共5页

目的使用不同方法对蛋白质的核质分布进行检测并比较差异。方法细胞经免疫荧光染色后使用高内涵分析(high content analysis,HCA)对蛋白质的细胞质或细胞核总荧光强度进行分析;分别提取胞质及胞核蛋白,使用Western blotting法对核质组... 目的使用不同方法对蛋白质的核质分布进行检测并比较差异。方法细胞经免疫荧光染色后使用高内涵分析(high content analysis,HCA)对蛋白质的细胞质或细胞核总荧光强度进行分析;分别提取胞质及胞核蛋白,使用Western blotting法对核质组分中的蛋白质含量进行鉴定。结果两种方法均可检测到蛋白质的出核转运;经定量分析,HCA法检测到的HuR蛋白质/核比升高倍数小于Western blotting法。结论使用HCA法检测蛋白质核质定位具有准确、客观、成本低、快捷、多参数等特点,不失为Western blotting的有效补充及替代方法。 展开更多

关键词 高内涵分析 WESTERN BLOTTING 蛋白质核质分布

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应用改良PCR法构建高GC含量启动子多位点定点突变载体 被引量：1

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作者 姜鸾 邵蕾 +1 位作者 胡旸 董凌月 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2010年第1期88-92,共5页

目的利用StrataGene公司的QuickChangeTM定点突变试剂盒对高GC含量的人肝刺激因子启动子进行多位点定点突变。方法采用含有多位点突变的引物扩增启动子片段,通过加入不同浓度的DMSO,降低高GC含量模板及引物的解链温度,利用乙醇沉淀提高... 目的利用StrataGene公司的QuickChangeTM定点突变试剂盒对高GC含量的人肝刺激因子启动子进行多位点定点突变。方法采用含有多位点突变的引物扩增启动子片段,通过加入不同浓度的DMSO,降低高GC含量模板及引物的解链温度,利用乙醇沉淀提高酶切产物的浓度。结果经测序鉴定成功构建5个含有不同突变位点的hHSS启动子突变载体。结论这种改良的PCR方法提高了对高GC含量启动子进行扩增的效率,具有快速、简便、经济、成功率高的特点,是值得推广的多位点定点突变载体构建方法。 展开更多

关键词 定点突变 PCR DMSO 人肝刺激因子

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