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天然产物Ectoine与Hydroxyectoine的生物工程及医学应用研究进展 被引量:12
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作者 张欣 刘静 朱德锐 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期882-887,共6页
四氢嘧啶及衍生物(Ectoines,Ects)是嗜盐或耐盐细菌胞内合成的一类能够抵抗外界高盐胁迫的有机相容溶质(Compatible solute),主要包括四氢嘧啶(Ectoine)与羟基化四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)。在高温、干旱、高pH值、高压和高盐等... 四氢嘧啶及衍生物(Ectoines,Ects)是嗜盐或耐盐细菌胞内合成的一类能够抵抗外界高盐胁迫的有机相容溶质(Compatible solute),主要包括四氢嘧啶(Ectoine)与羟基化四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)。在高温、干旱、高pH值、高压和高盐等极端环境条件下,Ects不仅能够平衡细胞的渗透压,而且对蛋白质、DNA、细胞膜以及整个细胞提供抗逆协助作用。本文综述了Ects对生物大分子和细胞的保护与稳定作用,以及在临床疾病治疗应用方面的辅助作用,并讨论与展望了Ects在生物医药制剂和生物保健开发等方面的应用前景。 展开更多
关键词 ECTOINE 羟基化四氢嘧啶 有机相容溶质 生物工程 医学应用
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盐单胞菌Halomonassp.XH26在高盐胁迫下生长特性及羟基四氢嘧啶生物合成研究
2
作者 张蔓 林子静 +2 位作者 朱德锐 邢江娃 李永臻 《微生物学杂志》 北大核心 2025年第3期30-36,共7页
羟基四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)是四氢嘧啶(Ectoine)的羟基化衍生物,是一种重要的细胞保护剂。为了研究菌株Halomonas campaniensis XH26在高NaCl浓度培养条件下的生长特性和5-HE合成情况,分别设计了不同NaCl浓度(0%、12%、14%和1... 羟基四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)是四氢嘧啶(Ectoine)的羟基化衍生物,是一种重要的细胞保护剂。为了研究菌株Halomonas campaniensis XH26在高NaCl浓度培养条件下的生长特性和5-HE合成情况,分别设计了不同NaCl浓度(0%、12%、14%和16%)(质量分数)的嗜盐菌培养基,并利用高效液相色谱(HPLC)对培养后的发酵液中的Ectoine和5-HE产量进行分析。结果显示,随着浓度增加,细菌的生长受到明显抑制,光学显微镜和电镜下观察到菌体长轴明显增加;菌株在12%~18%NaCl条件下培养,5-HE合成量呈现先增加后降低的趋势,5-HE与Ectoine的产量比最高达到0.92,在NaCl浓度为14%时,5-HE的产量最高。此外,优化培养条件得到菌株生长最适温度为33~37℃,最适pH值在5~8之间。菌株Halomonas sp.XH26在高盐胁迫下增加5-HE生物合成的同时细胞形态发生了改变,这为阐明野生菌株的耐盐机制和相容性溶质的合成调控及优化发酵的策略开拓了思路。 展开更多
关键词 四氢嘧啶 羟基四氢嘧啶 盐单胞菌 盐胁迫 发酵工程
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青藏高原尕斯库勒盐湖可培养嗜盐耐盐微生物的群落结构与分离方法对比研究 被引量:3
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作者 马欣 马想蓉 +3 位作者 朱德锐 李轩领 沈国平 邢江娃 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期916-930,共15页
嗜盐耐盐微生物在生物医药、生物酶等领域有着重要的应用潜力。为更好地利用青藏高原的盐湖微生物资源,以青藏高原尕斯库勒盐湖为研究对象,借助Illumina MiSeq测序平台分析盐湖微生物的群落组成,并采用寡营养培养、富集培养和梯度稀释... 嗜盐耐盐微生物在生物医药、生物酶等领域有着重要的应用潜力。为更好地利用青藏高原的盐湖微生物资源,以青藏高原尕斯库勒盐湖为研究对象,借助Illumina MiSeq测序平台分析盐湖微生物的群落组成,并采用寡营养培养、富集培养和梯度稀释等方法对嗜盐耐盐微生物进行大规模分离与培养。结果表明,高通量测序获得明确分类地位的细菌有30门50纲81目162科417属,古菌6门7纲9目15科39属。细菌优势属类群以矿生菌属(Fodinibius)和纤维单胞菌属(Gracilimonas)为主。古菌优势属类群以盐红菌属(Halorubrum)为主;纯培养法共获得502株嗜盐耐盐微生物,其中嗜盐耐盐细菌472株,分布在4门5纲7目9科13属,优势属为芽孢杆菌属(Bacillus)和盐单胞菌属(Halomonas),其中巴纽尔斯菌(Balneolota)门Fodinibius属可培养细菌是首次从盐湖中分离得到;嗜盐古菌30株,分布在1门1纲1目3科5属,优势属为Halorubrum。对比不同培养条件下的分离结果发现,1/2 TSA培养基和1/2 RCA培养基更有利于嗜盐耐盐细菌的分离,最佳富集天数为7天和30天,稀释梯度10-1和10-2可与未稀释样本互为补充来增加可培养嗜盐耐盐细菌的多样性;1/102216E培养基更适合于古菌的分离,最佳富集天数为7天和14天,且样本不稀释分离效果更好。研究结果可为青藏高原盐湖可培养微生物的分离方案优化提供理论依据和数据支撑。 展开更多
关键词 尕斯库勒盐湖 嗜盐耐盐微生物 分离培养 生物多样性 高盐环境
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青海湖盐单胞菌Ectoine合成基因簇ectABC的重组共表达 被引量:5
4
作者 朱德锐 韩睿 +4 位作者 沈国平 龙启福 李丹丹 刘建 刘德立 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期358-367,共10页
盐单胞菌属(Halomonas)通过胞内积聚有机相容溶质(Compatible solutes)来抵抗胞外的高盐渗透压。为了探究相容溶质Ectoine合成代谢相关基因的结构特征和异源共表达的可能性,以青海湖盐单胞菌Halomonas sp.QHL1为材料,通过高效液相色谱(H... 盐单胞菌属(Halomonas)通过胞内积聚有机相容溶质(Compatible solutes)来抵抗胞外的高盐渗透压。为了探究相容溶质Ectoine合成代谢相关基因的结构特征和异源共表达的可能性,以青海湖盐单胞菌Halomonas sp.QHL1为材料,通过高效液相色谱(HPLC)分析不同盐梯度下QHL1胞内Ectoine的积聚量,并借助于染色体步移技术(Genome walking)捕获QHL1菌株的Ectoine生物合成基因簇ect ABC,利用分子克隆技术分析ect ABC基因簇的异源重组表达(E.coli BL21)。研究结果表明:胞内Ectoine的积聚量随着培养基中Na+浓度的增加而增加,最大积聚量为167.1 mg/g细胞干重(1.0 mol/L Na+),但菌体生长却受到高浓度Na+的强烈抑制作用。QHL1的ect ABC操纵子全长序列为3580 bp,结构基因ect A(579 bp)、ect B(1269 bp)与ect C(390 bp)串联排列。基于生物信息学预测分析,两个启动子(δ70与δ38因子控制)和若干未知功能的保守模序(Motifs)存在于QHL1的ect操纵子上游。构建重组表达载体p ET-28-ect ABC,并在E.coli BL21中异源表达ect ABC基因簇(2438 bp)。SDS-PAGE结果显示Ect A、Ect B和Ect C分别为27.2、52.5和20.8 k D,与预测结果一致,表明ect A、ect B和ect C基因能在E.coli BL21中实现异源共表达,为构建Ectoine合成代谢基因整合的系统代谢工程,并实现低盐发酵控制和过量化生产提供了重要的理论基础。 展开更多
关键词 盐单胞菌属 ECTOINE ECT ABC基因簇 结构基因 共表达
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青海湖樊氏盐单胞菌QHL5四氢嘧啶合成影响因素分析 被引量:5
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作者 朱德锐 龙启福 +2 位作者 沈国平 李丹丹 刘德立 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期111-116,共6页
以青海湖野生菌株Halomonas ventosae QHL5为材料,初步探讨了多种因素对胞内相容溶质四氢嘧啶(Ectoine)合成的影响.通过设置OSM培养基(Oesterhelt-Stoeckenius medium)的不同单因素诱导条件(Na+、K+、Mg2+、p H和温度等),培养QHL5菌株,... 以青海湖野生菌株Halomonas ventosae QHL5为材料,初步探讨了多种因素对胞内相容溶质四氢嘧啶(Ectoine)合成的影响.通过设置OSM培养基(Oesterhelt-Stoeckenius medium)的不同单因素诱导条件(Na+、K+、Mg2+、p H和温度等),培养QHL5菌株,并采用80%乙醇抽提QHL5胞内四氢嘧啶,进行高效液相色谱(HPLC)定量检测.结果表明,QHL5胞内四氢嘧啶积聚的最佳单因素培养条件为Na+浓度为1.5 mol·L-1,K+浓度为0.75 mol·L-1,Mg2+浓度为0.2 mol·L-1,p H 8.0和35℃.在优化条件下,QHL5积聚的四氢嘧啶最大浓度为379.6±8.26 mg·L-1,达到167.1±3.64 mg·g-1细胞干重.QHL5胞内的四氢嘧啶合成受到Na+的渗透刺激作用,生物量却受到高浓度Na+的抑制,低浓度Mg2+(0.1—0.6 mol·L-1)和中浓度的K+(0.5—1.2 mol·L-1)对四氢嘧啶的生物合成具有重要的渗透刺激作用.与已报道的四氢嘧啶合成菌株相比,QHL5能合成单一的、高浓度的四氢嘧啶,具备潜在的商业制备和应用开发价值. 展开更多
关键词 青海湖 相溶物质 四氢嘧啶 影响因素
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发酵温度对青海农用沼气池微生物群落的影响 被引量:6
6
作者 韩睿 朱德锐 +2 位作者 李屹 陈来生 张广楠 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第6期2483-2494,共12页
为了研究发酵温度对青海农用沼气池微生物群落结构的影响,以沼气池全年6个温度时期的24个泥样为研究对象,采用变性梯度凝胶电泳分析样品中细菌与古菌的群落结构及其变化差异.结果显示:发酵温度的波动变化对微生物群落结构、多样性及沼... 为了研究发酵温度对青海农用沼气池微生物群落结构的影响,以沼气池全年6个温度时期的24个泥样为研究对象,采用变性梯度凝胶电泳分析样品中细菌与古菌的群落结构及其变化差异.结果显示:发酵温度的波动变化对微生物群落结构、多样性及沼气池产气量影响显著.细菌在温度最高(九月中旬)和最低(三月中旬)的2个采样时期多样性最高,古菌仅在温度最高时期多样性最高.在细菌类群中,厚壁菌门Firmicutes、拟杆菌门Bacteroidetes和变形菌门Proteobacteria是所有样品中丰度最高的类群(三者总和>72.43%),是发酵系统中重要的功能细菌类群.细菌属分类水平上,理研菌科佩特里单胞菌属Petrimonas、梭菌属Clostridium、泰氏菌属Tissierella和假单胞菌属Pseudomona是所有样品的优势类群,总丰度比例较为恒定(约32.40%).在古菌类群中,甲烷微菌目是最优势类群,丰度为40.62%~64.74%.产甲烷菌属Methanogenium是所有样品中主要的产气功能种群,丰度波动范围为32.62%~55.74%,随全年温度的变化而波动,此与沼气的产气规律相一致. 展开更多
关键词 发酵温度 青海 农用沼气池 微生物群落结构 变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)
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基于宏基因组的青海农用沼气池微生物组成和功能分析 被引量:2
7
作者 韩睿 陈来生 +3 位作者 李全辉 李屹 钟启文 朱德锐 《农业机械学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第6期326-333,共8页
以产气性能不同的青海农用沼气池为研究对象,利用宏基因组技术分析了全年温度最高和最低时期污泥样品的微生物组成和功能特征。物种注释显示发酵系统中蕴藏着丰富的微生物种群。在细菌类群中,拟杆菌门、厚壁菌门和变形菌门丰度最高,占... 以产气性能不同的青海农用沼气池为研究对象,利用宏基因组技术分析了全年温度最高和最低时期污泥样品的微生物组成和功能特征。物种注释显示发酵系统中蕴藏着丰富的微生物种群。在细菌类群中,拟杆菌门、厚壁菌门和变形菌门丰度最高,占所有菌群相对丰度的72.37%~74.00%,参与关键的发酵作用。在4种样品中,互养菌门(相对丰度1.62%~4.73%)丰度偏低,与沼气产气的变化规律相一致,可能是沼气生产重要的功能类群。在属水平上,优势类群依次是海螺菌属(相对丰度6.75%)、梭菌属(相对丰度4.56%)、密螺旋体属(相对丰度3.60%)和假单胞菌属(相对丰度3.01%)。古菌类群中,产甲烷菌属(相对丰度25.41%~31.65%)是最优势类群,也是最主要的产气功能类群。功能注释表明,产气好比产气差的样品具有更多的有效基因,参与甲烷代谢相关路径的功能基因丰度更高。在样品中,甲烷代谢途径涉及的氢代谢营养型产甲烷菌参与CO2还原反应,所有代谢通路完整,且产气好的样品功能酶基因丰度趋高。研究结果表明,在青海农用沼气发酵系统中,甲烷产生的途径主要依赖于H2氧化/CO2还原的合成。 展开更多
关键词 农用沼气池 宏基因组 微生物组成 功能特征 甲烷代谢 青海省
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青海户用沼气池料液温度变化特征及对产气的影响 被引量:6
8
作者 韩睿 朱德锐 陈来生 《中国沼气》 北大核心 2016年第6期95-100,共6页
文章以青海省乐都县5户运行状况基本稳定的沼气池为研究对象,收集了2014年7月~2015年6月沼气池内外温度数据,系统研究了沼气池料液温度随环境温度变化的变化特征,分析了温度变化对沼气产气的影响。结果表明,料液温度受环境温度影响较大... 文章以青海省乐都县5户运行状况基本稳定的沼气池为研究对象,收集了2014年7月~2015年6月沼气池内外温度数据,系统研究了沼气池料液温度随环境温度变化的变化特征,分析了温度变化对沼气产气的影响。结果表明,料液温度受环境温度影响较大,出现特殊的“极值延后”现象,且料液温度越高,沼气池的产气状况越好。该研究结果将为调控青海省户用沼气池料液温度,进而提高沼气产气效率提供理论依据。 展开更多
关键词 青海 户用沼气池 温度 变化特征 产气
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青海汉族牙周病患者口腔微生物的群落结构分析 被引量:3
9
作者 李志艳 赵翀 +3 位作者 刘静 张欣 朱德锐 陈筠 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期786-789,共4页
目的:明确青海汉族牙周病患者口腔微生物的多样性和种群分析。方法:纳入慢性牙周炎患者10例、正常人群5例,唾液样本共15例,用Illumina MiSeq测序平台进行细菌16S r RNA基因(V3-V4区)高通量测序,用Mothur软件分析微生物的群落结构和多样... 目的:明确青海汉族牙周病患者口腔微生物的多样性和种群分析。方法:纳入慢性牙周炎患者10例、正常人群5例,唾液样本共15例,用Illumina MiSeq测序平台进行细菌16S r RNA基因(V3-V4区)高通量测序,用Mothur软件分析微生物的群落结构和多样性。结果:基于97%的相似性类聚获得牙周病组和正常组的物种注释OTU数目分别为为60和14。牙周病组的优势菌属依次是Enterobacteriaceae unclassified、Pseudomonas、Acinetobacter、Bacillus、Aeromonadaceae unclassified、Neisseria、Haemophilus、Fusobacterium、Staphylococcus、Lactococcus。结论:青海汉族牙周病组的唾液微生物多样性与丰度明显高于正常组,可能与相关疾病的发生存在相关性。 展开更多
关键词 青海 牙周病 高通量测序 微生物多样性
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CRISPR/Cas9优化E.coli MG1655的L-Arg合成途径及代谢组学分析
10
作者 林子静 陈允亮 +1 位作者 张蔓 李永臻 《生物学杂志》 北大核心 2025年第5期40-45,共6页
以大肠杆菌MG1655为起始菌株(M0),采用CRISPR/Cas9基因组编辑技术对L-精氨酸合成基因簇进行优化。首先,敲除鸟氨酸脱羧酶基因speC和speF以增加精氨酸前体物鸟氨酸的供应,然后整合谷氨酸棒状杆菌来源基因簇argCJBDF失活精氨酸脱羧酶基因a... 以大肠杆菌MG1655为起始菌株(M0),采用CRISPR/Cas9基因组编辑技术对L-精氨酸合成基因簇进行优化。首先,敲除鸟氨酸脱羧酶基因speC和speF以增加精氨酸前体物鸟氨酸的供应,然后整合谷氨酸棒状杆菌来源基因簇argCJBDF失活精氨酸脱羧酶基因adiA以期阻断L-精氨酸的降解,同时加强L-精氨酸的外源合成途径,得到重组菌株M1(MG1655ΔspeCΔspeFΔadiA::argCJBDF)。结果显示,重组菌株M1中精氨酸产量达1.35 g/L,与M0菌株相比提高0.88 g/L。利用非靶向代谢组学技术对2个菌株的代谢产物进行比较分析,结果表明,重组菌株M1中精氨酸代谢途径及其相关代谢产物浓度发生相应的变化,影响了精氨酸、赖氨酸等氨基酸类、有机酸类等多种代谢物的合成。研究为后续针对性地调控这些旁路代谢途径,构建高产L-精氨酸工程菌株提供了研究思路和方向。 展开更多
关键词 大肠杆菌MG1655 L-精氨酸 基因编辑 优化工程 代谢组学
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一种含有锌氨基黏土和Ectoine保湿消毒凝胶的制备及其效果评价
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作者 乔丽娟 严雅军 +6 位作者 马明煜 应智业 陶宇杰 陈康 高翔 刘秉鑫 朱德锐 《应用化工》 北大核心 2025年第6期1446-1450,共5页
以卡波姆980为基料,通过正交实验设计确定水凝胶基质的最佳配比及制备工艺条件,添加具有高抑菌性能的抗菌成分锌氨基黏土(Zinc-aminoclay,ZnAC)和相容溶质四氢嘧啶(Ectoine)两种主要功效成分,研制具备抑菌和保湿效果的免洗消毒保湿凝胶... 以卡波姆980为基料,通过正交实验设计确定水凝胶基质的最佳配比及制备工艺条件,添加具有高抑菌性能的抗菌成分锌氨基黏土(Zinc-aminoclay,ZnAC)和相容溶质四氢嘧啶(Ectoine)两种主要功效成分,研制具备抑菌和保湿效果的免洗消毒保湿凝胶,并进行保湿性能评价及抗菌效果检测。结果表明,水凝胶体系最佳配比为纯水100 mL,卡波姆500 mg,NaOH 5.0 mL,甘油3.0 mL,ZnAC 500 mg,Ectoine 2.0 g;大肠杆菌和白色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为(11.03±0.04)mm和(15.50±0.03)mm;使用前后皮肤的含水量提升约22.4%,使用60 min后皮肤的含水量提升了11.64%。由此表明,含ZnAC和Ectoine的免洗保湿消毒水凝胶的保湿和抗菌效果良好,制备工艺安全可靠,值得推广。 展开更多
关键词 锌氨基黏土 四氢嘧啶 保湿 消毒
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药物联合应用治疗棘球蚴病的研究进展 被引量:8
12
作者 杨海山 赵玲莉 +2 位作者 李超群 李永臻 张翔 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期539-547,共9页
棘球蚴病是一种严重的人兽共患寄生虫病,以手术治疗为首选治疗方式,但存在术中易播散、术后易复发等问题,因此药物治疗对包虫病患者术前、术中和术后都必不可少。特殊化学药物联合阿苯达唑可发挥药物协同作用,明显增强治疗效果;中药组... 棘球蚴病是一种严重的人兽共患寄生虫病,以手术治疗为首选治疗方式,但存在术中易播散、术后易复发等问题,因此药物治疗对包虫病患者术前、术中和术后都必不可少。特殊化学药物联合阿苯达唑可发挥药物协同作用,明显增强治疗效果;中药组分联合阿苯达唑可增强疗效、降低药物剂量,具有保肝作用。因此,联合用药以发挥增效减毒为目标,一定程度上弥补了阿苯达唑等经典药物的不足,为包虫病的药物治疗提供了新的思路。本文对各药物联合治疗包虫病的效果做一综述,为今后探索药物联用治疗包虫病提供参考。 展开更多
关键词 包虫病 阿苯达唑 药物治疗 联合用药 增效减毒
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青海土族、回族与藏族牙周病的可疑致病微生物差异分析 被引量:4
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作者 刘静 石晴 +3 位作者 李志艳 赵翀 陈筠 朱德锐 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期803-808,共6页
目的:通过高通量测序的方法明确青海土族、回族和藏族人群牙周病可疑致病菌的多样性和差异。方法:纳入青海慢性牙周炎患者28例唾液样本,其中互助县土族8例、平安县回族10例和玉树藏族10例。健康对照组12例,利用Illumina平台进行细菌16S ... 目的:通过高通量测序的方法明确青海土族、回族和藏族人群牙周病可疑致病菌的多样性和差异。方法:纳入青海慢性牙周炎患者28例唾液样本,其中互助县土族8例、平安县回族10例和玉树藏族10例。健康对照组12例,利用Illumina平台进行细菌16S r RNA基因(V3-V4区)高通量测序,后利用Mothur软件分析牙周病可疑致病菌的群落结构和多样性。结果:基于97%的相似性类聚获得牙周病组土、回、藏族患者和对照组物种注释(operational taxonomic unit,OTU)数目分别为181、210、38和14,土族类群11门19纲87属,回族13门21纲113属,藏族2门4纲21属;对照组有4门5纲12属。土族和回族共有的已知致病菌为梭杆菌属、普氏菌属和卟啉单胞菌属;土族中仅有的为消化链球菌;回族中仅有密螺旋体;同时检出大量的可疑致病菌。结论:该研究的发现对青海地区口腔疾病的治疗和防控具有参考意义。 展开更多
关键词 青海 牙周病 高通量测序 微生物多样性 可疑致病菌
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盐碱土壤中嗜盐微生物促进植物生长与代谢调节研究进展 被引量:9
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作者 舒志万 韩睿 +3 位作者 王智博 邢江娃 王嵘 朱德锐 《江苏农业科学》 北大核心 2022年第16期27-36,共10页
盐碱土壤是陆生生态环境的重要组成部分,其中存在多种具有特殊理化性质的微生物,参与土壤与植物根际之间的相互作用,影响植物吸收养分、种子萌发、根茎生长和功能代谢等过程。本文系统综述了嗜盐微生物胞内积聚或分泌的不同活性分子(吲... 盐碱土壤是陆生生态环境的重要组成部分,其中存在多种具有特殊理化性质的微生物,参与土壤与植物根际之间的相互作用,影响植物吸收养分、种子萌发、根茎生长和功能代谢等过程。本文系统综述了嗜盐微生物胞内积聚或分泌的不同活性分子(吲哚-3-乙酸、细胞分裂素、嗜铁素、脱落酸等),发现它们具有促进植物生长、缓解盐胁迫、促进矿物元素的吸收以及强化溶磷固氮等调节作用。此外,多种次生代谢产物对植物病原菌黑曲霉、烟曲霉、辣椒疫霉菌和马铃薯干腐病菌等,具有一定的抑制作用,并参与土壤改良和环境修复等过程。本文为后续盐碱土壤改良和农作物增产等应用研究提供一定的理论参考依据。 展开更多
关键词 盐碱土壤 嗜盐微生物 植物生长 代谢调节
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lncRNA LINC00339通过下调miR-149-5p表达调控ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤 被引量:14
15
作者 王进鹏 龙启福 +2 位作者 雷延成 张豪 林存山 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期277-283,共7页
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00339对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的影响及分子机制。方法:将HBMEC分为对照组(未经任何处理)、ox-LDL(50 mg/L)组、ox-LDL+si-NC组(转染si-NC+50 mg/L ox-LDL)... 目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00339对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的影响及分子机制。方法:将HBMEC分为对照组(未经任何处理)、ox-LDL(50 mg/L)组、ox-LDL+si-NC组(转染si-NC+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+si-LINC00339组(转染si-LINC00339+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+miR-NC组(转染miR-NC+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+miR-149-5p组(转染miR-149-5p+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+si-LINC00339+anti-miR-NC组(共转染si-LINC00339和anti-miR-NC+50 mg/L ox-LDL)及ox-LDL+si-LINC00339+anti-miR-149-5p组(共转染si-LINC00339和anti-miR-149-5p+50 mg/mL ox-LDL)。RT-qPCR检测LINC00339和miR-149-5p的表达水平;分别检测丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白表达;双萤光素酶报告基因实验检测LINC00339和miR-149-5p的靶向关系。结果:ox-LDL诱导的HBMEC中LINC00339的表达水平升高,miR-149-5p的表达水平降低(P<0.05)。抑制LINC00339表达或过表达miR-149-5p可致HBMEC的MDA含量降低,SOD和CAT活性升高,细胞凋亡率降低,Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低(P<0.05)。LINC00339靶向调控miR-149-5p,敲减miR-149-5p表达逆转了抑制LINC00339表达对ox-LDL诱导的HBMEC氧化损伤的作用。结论:抑制LINC00339表达可能通过上调miR-149-5p表达抑制ox-LDL诱导的HBMEC凋亡和氧化应激反应,从而减轻细胞损伤。 展开更多
关键词 LINC00339 微小RNA-149-5p 人脑微血管内皮细胞 氧化应激 细胞凋亡
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黄芪多糖联合5-FU对肝癌HepG2细胞EMT转化的影响 被引量:11
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作者 白芸 李永臻 +1 位作者 祁艳娟 龙启福 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第2期8-15,共8页
目的探讨黄芪多糖(APS)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对肝癌Hep G2细胞上皮细胞间质转型(EMT作用的分子机制。方法噻唑蓝(MTT)、Transwell法分别检测黄芪多糖与5-FU单独或联合使用对Hep G2细胞增殖、侵袭的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白... 目的探讨黄芪多糖(APS)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对肝癌Hep G2细胞上皮细胞间质转型(EMT作用的分子机制。方法噻唑蓝(MTT)、Transwell法分别检测黄芪多糖与5-FU单独或联合使用对Hep G2细胞增殖、侵袭的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测黄芪多糖与5-FU单独或联合使用时对Hep G2细胞EMT相关因子表达的影响。结果黄芪多糖与5-FU单独或联合使用均能抑制Hep G2细胞的增殖、迁移;均能上调Hep G2细胞内钙粘附蛋白E(E-cadherin)表达、下调波形蛋白(vimentin)和趋化因子受体4(CXCR4)表达;总体趋势为785.26μmol/L黄芪多糖+23.90μmol/L 5-FU>392.63μmol/L黄芪多糖+23.90μmol/L 5-FU>392.63μmol/L黄芪多糖>23.90μmol/L5-FU>空白对照。结论黄芪多糖联合5-FU具有协同抑制肝癌细胞生长转移的作用,其机制可能与抑制EMT有关。 展开更多
关键词 黄芪多糖 5-FU EMT转化 HEPG2细胞 肝癌
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青藏高原小柴旦盐湖微生物群落结构及多样性 被引量:14
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作者 刘静 张欣 +3 位作者 沈国平 封希媛 龙启福 朱德锐 《水生态学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期55-64,共10页
通过探究小柴旦盐湖微生物群落结构与多样性,为盐湖微生物资源的开发利用和生态保护提供重要的理论参考依据。利用Illumina Mi Seq测序平台对小柴旦盐湖细菌和古菌的16S rRNA基因(V3~V5区)进行高通量测序,获得细菌和古菌的物种注释OTU(O... 通过探究小柴旦盐湖微生物群落结构与多样性,为盐湖微生物资源的开发利用和生态保护提供重要的理论参考依据。利用Illumina Mi Seq测序平台对小柴旦盐湖细菌和古菌的16S rRNA基因(V3~V5区)进行高通量测序,获得细菌和古菌的物种注释OTU(Operational Taxonomic Units)数目分别为870和410,其中分类地位明确的细菌有18门、24纲、135属,古菌2门、4纲、22属。细菌优势类群依次是厚壁菌门(Firmicutes,34.05%)、变形菌门(Proteobacteria,32.91%)、拟杆菌门(Bacteroidetes,18.01%)和蓝细菌门(Cyanobacteria,8.46%);优势种群依次是芽孢杆菌属(Bacillus,21.53%)、Chloroplast-norank(6.65%)和海杆菌属(Marinobacter,4.05%)。古菌的优势类群和优势种群主要是未确定分类地位的沃斯古菌门(Woesearchaeota DHVEG-6,80.84%),相关的系统分类学尚需深入研究。小柴旦盐湖微生物的种群结构复杂、类群丰富,细菌Shannon多样性指数(4.77±0.45)显著高于古菌(2.79±0.45),且存在大量的新种资源。 展开更多
关键词 小柴旦盐湖 高通量测序 微生物多样性 种群结构 聚类分析
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青藏高原盐湖细菌群落与超盐环境因素的相关性 被引量:9
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作者 朱德锐 韩睿 +3 位作者 石晴 沈国平 龙启福 双杰 《中国环境科学》 EI CAS CSSCI CSCD 北大核心 2017年第12期4657-4666,共10页
以青藏高原极端盐湖为研究对象,采用16S r RNA基因(V3~V4区)高通量测序方法分析盐湖细菌的群落结构差异和超盐环境因子的制约相关性.结果显示,超盐环境样本中细菌的群落结构组成相对稳定,进化趋同,且复杂度和多样性指数显著低于非超盐环... 以青藏高原极端盐湖为研究对象,采用16S r RNA基因(V3~V4区)高通量测序方法分析盐湖细菌的群落结构差异和超盐环境因子的制约相关性.结果显示,超盐环境样本中细菌的群落结构组成相对稳定,进化趋同,且复杂度和多样性指数显著低于非超盐环境.青藏高原超盐环境中细菌的优势类群是厚壁菌门Firmicutes(74.04%~81.04%)、次为变形菌门Proteobacteria(15.51%~20.06%)、拟杆菌门Bacteroidetes(2.68%~4.84%)和放线菌门Actinobacteria(0.71%~2.45%).比较分析其它类型超盐环境,青藏高原超盐环境具有高丰度的特色属群芽孢杆菌属Bacillus(50.63%~58.35%)、乳球杆菌属Lactococcus(9.28%~11.81%)和海洋芽孢杆菌属Oceanobacillus(8.41%~10.52%).基于典范对应CCA分析,表明优势属群(Bacillus、Lactococcus、Pseudomonas、Oceanobacillus、Stenotrophomonas、Psychrobacter、Myroides、Brochothrix和Arthrobacter)和超盐样本的聚集,与环境因子(总盐度、Cl^-、K^+、Mg^(2+)和CO_3^(2-)浓度)呈明显的正相关. 展开更多
关键词 青藏高原 极端盐湖 嗜盐细菌 超盐环境 环境因子
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Ectoine高产菌株Halomonas sp.XH26的鉴定及紫外诱变选育 被引量:17
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作者 田磊 张芳 +3 位作者 沈国平 高翔 龙启福 朱德锐 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期31-35,共5页
通过紫外线诱变小柴旦盐湖盐单胞菌菌株Halomonas sp.XH26,以获得高产Ectoine的突变株,为工程生产Ectoine提供优良的发酵菌源。采用形态学观察、生理生化试验及16S rRNA基因测序分析明确菌株的分类地位。紫外诱变筛选Ectoine产量超过原... 通过紫外线诱变小柴旦盐湖盐单胞菌菌株Halomonas sp.XH26,以获得高产Ectoine的突变株,为工程生产Ectoine提供优良的发酵菌源。采用形态学观察、生理生化试验及16S rRNA基因测序分析明确菌株的分类地位。紫外诱变筛选Ectoine产量超过原始菌株2倍以上的正向突变菌株,HPLC测定胞内Ectoine产量,并对突变株进行连续培养,研究Ectoine的产量稳定性。实验结果显示:原始菌株XH26(Ectoine优化产量456.82 mg/L±15.72 mg/L,CDW 0.71 g/g±0.04 g/g),经9轮紫外循环诱变处理后(50 s为最佳诱变时间),获得7株高产Ectoine突变菌,Ectoine产量均大幅提高(约200%)。其中,积聚量最大的菌株HU09-32,产量可达1351.09 mg/L±17.69 mg/L(增幅290%),将7株突变菌连续培养40 d(接种2 d/次),胞内Ectoine产量稳定,生长特性、增殖速度与积聚量明显优于原始菌株XH26,具有很好的发酵生产和工业应用潜力。 展开更多
关键词 盐单胞菌 ECTOINE 紫外诱变 积聚量 突变育种
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高盐盐湖可分离嗜盐耐盐菌的种群多样性及四氢嘧啶产量评价 被引量:6
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作者 张田田 李永臻 +3 位作者 沈国平 王嵘 朱德锐 邢江娃 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期168-178,共11页
为了解柴达木盆地茶卡盐湖、柯柯盐湖和小柴旦盐湖等三大硫酸镁亚型高盐盐湖可分离嗜盐耐盐菌的种群多样性,采用RM中、高盐培养基筛选分离可培养的嗜盐菌和耐盐菌,扩增16S rRNA基因序列进行种属鉴定和环境因子典范对应分析(CCA),选取优... 为了解柴达木盆地茶卡盐湖、柯柯盐湖和小柴旦盐湖等三大硫酸镁亚型高盐盐湖可分离嗜盐耐盐菌的种群多样性,采用RM中、高盐培养基筛选分离可培养的嗜盐菌和耐盐菌,扩增16S rRNA基因序列进行种属鉴定和环境因子典范对应分析(CCA),选取优势菌属构建系统发育树,并采用高效液相色谱法(HPLC)检测次级代谢产物四氢嘧啶(Ectoine)积聚量,筛选高产菌株。结果表明三大盐湖共分离获得嗜盐和耐盐菌113株,优势种属为Bacillus(42株)、Staphylococcus(30株)和Halomonas(26株),各丰度与盐湖类型相关;其中中度嗜盐菌居多,其次为耐盐菌和弱嗜盐菌。系统发育分析表明Bacillus属存在5个进化分支,由6个种组成,Halomonas属存在6个进化分支,由7个种组成。HPLC检测四氢嘧啶积聚量,获得具有高产四氢嘧啶潜力菌株7株。这些研究结果说明柴达木盆地硫酸镁亚型高盐盐湖可分离嗜盐耐盐菌的优势菌属以Bacillus、Staphylococcus和Halomonas为主,且多为中度嗜盐菌,其高产四氢嘧啶的潜力菌株可用于后续四氢嘧啶发酵应用研究。 展开更多
关键词 柴达木盆地 高盐盐湖 可培养细菌 种群多样性 四氢嘧啶
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