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五氯酚对人胎盘碱性磷酸酶抑制的研究
被引量：
6
1
作者
耿芳宋
王秀丽
+1 位作者
童家明
刘洪明
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2000年第4期397-401,共5页
监测人胎盘碱性磷酸酶在不同浓度五氯酚溶液中活力与荧光光谱的变化 ;测定五氯酚对其抑制的类型及pH对其抑制的影响 .结果显示 :低浓度的五氯酚 (<1 0mmol/L)使酶活力及其荧光强度迅速下降 ,发射峰位明显红移 ;继续提高五氯酚浓度 ,...
监测人胎盘碱性磷酸酶在不同浓度五氯酚溶液中活力与荧光光谱的变化 ;测定五氯酚对其抑制的类型及pH对其抑制的影响 .结果显示 :低浓度的五氯酚 (<1 0mmol/L)使酶活力及其荧光强度迅速下降 ,发射峰位明显红移 ;继续提高五氯酚浓度 ,其活力与荧光强度逐渐下降 ,发射峰位仍在红移 ;五氯酚浓度为 5 0mmol/L时 ,荧光淬灭 ,但酶仍保留 5 1 4%的活力 ;五氯酚浓度高达 10 0mmol/L时 ,酶剩余活力为 30 0 % .进一步实验表明五氯酚使L 色氨酸的荧光强度降低 ,并伴有发射峰位的红移 ,当五氯酚浓度为 5 0mmol/L时 ,L 色氨酸的荧光淬灭 .五氯酚是人胎盘碱性磷酸酶的反竞争性抑制剂 ,其抑制常数 (Ki)为 3 86mmol/L .其抑制也受溶液 pH影响 ,pH <7 5时 ,对酶无抑制 ;pH为 7 5～ 10 5时 ,随 pH的增加 ,抑制作用逐渐增强 .提示五氯酚能够进入酶分子内部使其荧光淬灭 ,并抑制了酶活力 ;表明酶活力抑制与五氯酚的解离状态有关 .
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关键词
五氯酚
人胎盘碱性磷酸酶
抑制作用
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职称材料
应用siRNA技术探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的VEGF对树突状细胞的影响
被引量：
3
2
作者
王海燕
葛银林
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期358-363,共6页
为探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)对树突状细胞(dendritic cell,DC)功能及其分化的影响,针对VEGF基因设计siRNA(small interferingRNA,siRNA),采用脂质体转染法以100nmol/L最佳转...
为探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)对树突状细胞(dendritic cell,DC)功能及其分化的影响,针对VEGF基因设计siRNA(small interferingRNA,siRNA),采用脂质体转染法以100nmol/L最佳转染浓度导入MCF-7乳腺癌细胞(siRNA组),以脂质体Lipofectamine2000TM转染MCF-7乳腺癌细胞培养上清培养正常DC作为对照(对照组),采用ELISA法检测经siRNA干扰VEGF基因后的MCF-7乳腺癌细胞分泌的VEGF因子含量,Western印迹检测VEGF蛋白表达,以探讨siRNA的基因沉默效果;以siRNA组和对照组培养上清分别培养外周血单个核细胞,用流式细胞仪检测所诱导DC表型CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达,用MTT法检测转染前后两组DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)对MCF-7细胞的细胞毒作用.结果显示,MCF-7乳腺癌细胞培养上清能明显抑制正常DC分化成熟及抗原递呈能力,干扰VEGF基因后MCF-7乳腺癌细胞培养上清对DC的影响明显降低,CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达较对照组显著升高,而CD1a表达下降(P<0.01).转染前后DC诱导的CTL对MCF-7细胞的杀伤活性有明显差异(P<0.01).由此可见,siRNA可靶向抑制MCF-7乳腺癌细胞VEGF的表达,下调VEGF后的MCF-7细胞上清对DC分化成熟及功能的抑制作用明显降低,从而推测VEGF在肿瘤的发生、发展和免疫抑制方面可能起着重要的作用.
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关键词
树突状细胞
血管内皮生长因子
RNA干扰
MCF-7细胞
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职称材料
题名
五氯酚对人胎盘碱性磷酸酶抑制的研究
被引量：
6
1
作者
耿芳宋
王秀丽
童家明
刘洪明
机构
青岛大学医学院生物化学教研室
青岛大学
医学院
物理
教研室
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2000年第4期397-401,共5页
基金
山东省卫生厅资助项目!( 95 0 3 6)
文摘
监测人胎盘碱性磷酸酶在不同浓度五氯酚溶液中活力与荧光光谱的变化 ;测定五氯酚对其抑制的类型及pH对其抑制的影响 .结果显示 :低浓度的五氯酚 (<1 0mmol/L)使酶活力及其荧光强度迅速下降 ,发射峰位明显红移 ;继续提高五氯酚浓度 ,其活力与荧光强度逐渐下降 ,发射峰位仍在红移 ;五氯酚浓度为 5 0mmol/L时 ,荧光淬灭 ,但酶仍保留 5 1 4%的活力 ;五氯酚浓度高达 10 0mmol/L时 ,酶剩余活力为 30 0 % .进一步实验表明五氯酚使L 色氨酸的荧光强度降低 ,并伴有发射峰位的红移 ,当五氯酚浓度为 5 0mmol/L时 ,L 色氨酸的荧光淬灭 .五氯酚是人胎盘碱性磷酸酶的反竞争性抑制剂 ,其抑制常数 (Ki)为 3 86mmol/L .其抑制也受溶液 pH影响 ,pH <7 5时 ,对酶无抑制 ;pH为 7 5～ 10 5时 ,随 pH的增加 ,抑制作用逐渐增强 .提示五氯酚能够进入酶分子内部使其荧光淬灭 ,并抑制了酶活力 ;表明酶活力抑制与五氯酚的解离状态有关 .
关键词
五氯酚
人胎盘碱性磷酸酶
抑制作用
Keywords
pentachlorophenol, alkaline phosphatase, fluorescence spectra, activity, inhibition
分类号
Q555.7 [生物学—生物化学]
R996 [医药卫生—毒理学]
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职称材料
题名
应用siRNA技术探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的VEGF对树突状细胞的影响
被引量：
3
2
作者
王海燕
葛银林
机构
青岛大学
医学院
附属医院输血科
青岛大学医学院生物化学教研室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期358-363,共6页
基金
青岛市科技局科技计划项目(No.07-2-1-7-nsh)~~
文摘
为探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)对树突状细胞(dendritic cell,DC)功能及其分化的影响,针对VEGF基因设计siRNA(small interferingRNA,siRNA),采用脂质体转染法以100nmol/L最佳转染浓度导入MCF-7乳腺癌细胞(siRNA组),以脂质体Lipofectamine2000TM转染MCF-7乳腺癌细胞培养上清培养正常DC作为对照(对照组),采用ELISA法检测经siRNA干扰VEGF基因后的MCF-7乳腺癌细胞分泌的VEGF因子含量,Western印迹检测VEGF蛋白表达,以探讨siRNA的基因沉默效果;以siRNA组和对照组培养上清分别培养外周血单个核细胞,用流式细胞仪检测所诱导DC表型CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达,用MTT法检测转染前后两组DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)对MCF-7细胞的细胞毒作用.结果显示,MCF-7乳腺癌细胞培养上清能明显抑制正常DC分化成熟及抗原递呈能力,干扰VEGF基因后MCF-7乳腺癌细胞培养上清对DC的影响明显降低,CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达较对照组显著升高,而CD1a表达下降(P<0.01).转染前后DC诱导的CTL对MCF-7细胞的杀伤活性有明显差异(P<0.01).由此可见,siRNA可靶向抑制MCF-7乳腺癌细胞VEGF的表达,下调VEGF后的MCF-7细胞上清对DC分化成熟及功能的抑制作用明显降低,从而推测VEGF在肿瘤的发生、发展和免疫抑制方面可能起着重要的作用.
关键词
树突状细胞
血管内皮生长因子
RNA干扰
MCF-7细胞
Keywords
dendritic cell
vascular endothelial growth factor （VEGF）
small interfering RNA （siRNA）
MCF-7 cells
分类号
Q753 [生物学—分子生物学]
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
五氯酚对人胎盘碱性磷酸酶抑制的研究
耿芳宋
王秀丽
童家明
刘洪明
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2000
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
应用siRNA技术探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的VEGF对树突状细胞的影响
王海燕
葛银林
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
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