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日本血吸虫未成熟卵单链抗体库的构建、筛选及初步应用 被引量：13
1
作者 何卓 汪世平 +4 位作者 肖小芹 曾少华 刘明社 李林 周帅锋 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第8期921-928,共8页
运用噬菌体展示技术构建日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)单链抗体(scFv)表达文库,以天然分子候选疫苗SIEA26～28ku为靶抗原筛选SIEA单链抗体库,获得特异性单链抗体.并将该scFv基因亚克隆至原核高效表达载体PET32a,诱导SIEA26～28k... 运用噬菌体展示技术构建日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)单链抗体(scFv)表达文库,以天然分子候选疫苗SIEA26～28ku为靶抗原筛选SIEA单链抗体库,获得特异性单链抗体.并将该scFv基因亚克隆至原核高效表达载体PET32a,诱导SIEA26～28ku特异性scFv大量表达.随后以此为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库,以期获得SIEA26～28ku天然分子候选疫苗相关的编码基因.结果显示,所获得的SIEA26～28ku特异性scFv,表达量高,采用该探针初步筛选出相关基因核糖体蛋白S4.SIEA26～28ku特异性scFv的获得,为进一步筛选、分析鉴定抗日本血吸虫病天然分子候选疫苗SIEA26～28ku的编码基因奠定了基础. 展开更多
关键词 日本血吸虫 未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA) 单链抗体(scFv) 噬菌体展示抗体库 CDNA文库
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检测日本血吸虫病胶体碳试纸条的研制与初步应用(英文) 被引量：3
2
作者 汪世平 余路新 +4 位作者 车宏莉 陈秀春 秦永华 高冬梅 刘明社 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1063-1069,共7页
目的:开发一种快速检测血清中日本血吸虫抗体的免疫诊断方法。方法:用胶体碳标记日本血吸虫成熟虫卵可溶性抗原(SEA),与待测血清中日本血吸虫抗体结合,再用SEA包被在硝酸纤维素膜(NC膜)上以捕捉碳标SEA-血吸虫抗体复合物,达到检测血吸... 目的:开发一种快速检测血清中日本血吸虫抗体的免疫诊断方法。方法:用胶体碳标记日本血吸虫成熟虫卵可溶性抗原(SEA),与待测血清中日本血吸虫抗体结合,再用SEA包被在硝酸纤维素膜(NC膜)上以捕捉碳标SEA-血吸虫抗体复合物,达到检测血吸虫抗体的目的。结果:检测137份血清,与间接血凝法(indirect haemagglutination assay,IHA)检测结果一致性为98.54%,如经IHA试剂盒检测呈阳性者即视为阳性血清,则该方法的检测敏感性为98.99%,特异性为97.37%;且检测条带的灰度与血清效价具有曲线关系,因而可以对待测血清作半定量分析。结论:胶体碳试条层析法操作简便,快速,具有较高的敏感性和特异性,适合作血吸虫现场检测。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 胶体碳试纸条 抗体检测 可溶性虫卵抗原
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腺病毒载体RNAi技术抑制血吸虫病小鼠肝细胞Fas表达 被引量：6
3
作者 刘明社 汪世平 +4 位作者 赵中夫 王兰 杨慧 张国英 张芸 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期358-361,共4页
目的探讨RNAi技术对血吸虫病肝组织中Fas表达的作用。方法采用尾静脉注射腺病毒载体,在小鼠体内表达Fas-shRNA抑制血吸虫病小鼠肝细胞Fas的表达。冰冻切片荧光显微镜检查腺病毒载体对肝细胞的转染率,免疫组化和Western Blot方法检测肝组... 目的探讨RNAi技术对血吸虫病肝组织中Fas表达的作用。方法采用尾静脉注射腺病毒载体,在小鼠体内表达Fas-shRNA抑制血吸虫病小鼠肝细胞Fas的表达。冰冻切片荧光显微镜检查腺病毒载体对肝细胞的转染率,免疫组化和Western Blot方法检测肝组织Fas表达情况,RT-PCR方法检测肝组织Fas mRNA表达情况。结果免疫组化和Western Blot方法检测均表明RNAi组Fas表达受到抑制(t=29.799,P<0.01),模型组和HK对照组Fas表达增强。对Fas mRNA表达的RT-PCR方法检测也与上述结果一致。腺病毒载体对肝细胞的转染率达78.5%。结论腺病毒载体Fas-shRNA能够有效抑制血吸虫病小鼠肝细胞Fas的表达,尾静脉注射腺病毒载体能高效率感染肝细胞。 展开更多
关键词 RNAI Fas(CD95) 腺病毒载体 血吸虫病 BALB/C小鼠
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肺微血管内皮细胞原代培养方法的建立 被引量：7
4
作者 贾建桃 张慧英 +4 位作者 王黎敏 赵中夫 刘明社 来丽娜 卢彦珍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期763-766,共4页
目的 建立大鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法, 观察细胞生长状态并鉴定细胞性质。方法 4-5周龄大鼠随机分成3组, 无菌状态下剥除胸膜, 将肺组织边缘剪成1 mm3的大小, 贴入一次性培养瓶, 分别用含肝素钠的DMEM完全培养液、RPMI1640完全... 目的 建立大鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法, 观察细胞生长状态并鉴定细胞性质。方法 4-5周龄大鼠随机分成3组, 无菌状态下剥除胸膜, 将肺组织边缘剪成1 mm3的大小, 贴入一次性培养瓶, 分别用含肝素钠的DMEM完全培养液、RPMI1640完全培养液以及含原代内皮细胞培养特制添加剂的完全培养液培养, 在倒置显微镜下观察细胞生长和形态, 免疫荧光组织化学染色观察细胞CD31的表达。结果 与2组对照组相比, 采用含原代内皮细胞培养特制添加剂的完全培养液培养, 获得的肺微血管内皮细胞数量多, 纯度高。内皮细胞于24 h迁移出肺组织块, 14 d左右汇合, 呈多角形, 以铺路石样镶嵌状排列生长。传代细胞呈长梭形, 生长迅速, 具有自发形成血管的倾向。细胞为CD31免疫反应阳性, 证实其为内皮细胞。结论 采用组织块贴壁法, 选择原代内皮细胞培养特制添加剂以及优化分离过程, 可以获得高纯度原代大鼠肺微血管内皮细胞。 展开更多
关键词 肺微血管内皮细胞 原代培养 大鼠
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127株结核分枝杆菌基因分型及耐药相关研究 被引量：1
5
作者 刘益萍 庞慧 +4 位作者 万康林 弓艳娥 郭旭霞 王艳霞 刘海灿 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1119-1125,共7页
目的研究山西省长治及周边地区结核分枝杆菌的基因多态性及基因型与耐药的相关性。方法收集结核分枝杆菌临床分离株,运用MLVA方法进行基因分型,对8种抗结核药物分别采用比例法进行药敏试验,应用BioNumerics 5.0软件进行聚类分析。结果 1... 目的研究山西省长治及周边地区结核分枝杆菌的基因多态性及基因型与耐药的相关性。方法收集结核分枝杆菌临床分离株,运用MLVA方法进行基因分型,对8种抗结核药物分别采用比例法进行药敏试验,应用BioNumerics 5.0软件进行聚类分析。结果 15个位点中Mtub21、MIRU26和ETRE多态性较高(HGI>0.6),MIRU40、ETRB、MIRU16、ETRD、MIRU23和ETRC位点多态性较低(HGI<0.3)。127株结核分枝杆菌共分为11个基因群102种基因型,90株为独特型,基因群中Ⅰ群所占比例最大(80.31%)。127株菌株对一线和二线抗结核药物的总耐药率分别为47.24%和23.62%。一线药物中链霉素(40.94%)的耐药率最高,乙胺丁醇(6.30%)最低。二线药物中左氧氟沙星(14.17%)的耐药率最高,丙硫异烟胺(3.15%)最低。链霉素的单耐药率最高(11.81%);耐多药率为21.26%(27/127);广泛耐多药率为3.15%。Ⅰ群菌株的耐药率与其它菌株的差别无统计学意义。结论初步证实山西长治及周边地区的结核分枝杆菌具有明显的多态性,Ⅰ群为主要流行群。结核分枝杆菌对二线药物的敏感性高于一线药物。主要流行菌株Ⅰ群菌株与耐药无明显的相关性。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 基因分型 MLVA 药敏试验
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1996-2011年湖南省汨罗市血吸虫病疫情纵向观察 被引量：1
6
作者 刘益萍 汪世平 +8 位作者 李庆华 杨五霞 彭辉阳 周火炬 刘明社 张树菊 周云飞 冯其梅 许进 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期786-791,共6页
目的观察洞庭湖区湖沼型疫区采取以传染源控制为主的综合防治措施控制血吸虫病效果。方法收集、整理汨罗市1996-2011年血吸虫病有关疫情资料进行回顾性分析,观察实施以传染源控制为主的综合防治措施前后螺情与病情的变化。结果洞庭湖区... 目的观察洞庭湖区湖沼型疫区采取以传染源控制为主的综合防治措施控制血吸虫病效果。方法收集、整理汨罗市1996-2011年血吸虫病有关疫情资料进行回顾性分析,观察实施以传染源控制为主的综合防治措施前后螺情与病情的变化。结果洞庭湖区湖沼型血吸虫病疫区实施人畜同步化疗为主的措施,垸外活螺平均密度、感染性钉螺密度变化不明显,维持在0.29～0.63只/0.1m2和0.003 4～0.037 9只/0.1m2,人群患病率维持在2.13%～3.68%,耕牛感染率维持在1.10%～4.36%之间;实施以传染源控制为主的综合防治措施后垸外活螺平均密度虽有波动,但整体呈下降趋势,从0.52只/0.1m2下降至0.18只/0.1m2,感染性钉螺平均密度从0.003 8只/0.1m2下降至0.000 7只/0.1m2,钉螺感染率呈下降趋势,从第一阶段的0.72%以上下降到0.38%以下,人群患病率从2.86%下降至1.25%,耕牛感染率从2006年的2.87%上升到2008年的5.92%,又下降到2010年的1.70%。急性血吸虫病感染以散发为主,1996-2009年共发生急性血吸虫病49例,血吸虫病例以7～14岁组为多,男性感染率显著高于女性,学生多见,因游泳戏水感染最多,多为垸外感染,秋季和夏季为高发期,落实以传染源控制为主的综合防治措施后的2010-2011年未发生急感病例。结论血吸虫病以传染源控制为主的综合防治措施在洞庭湖区湖沼型疫区取得了明显的防治效果。加强在易感地带查灭阳性钉螺,减少垸外人畜活动,重视宣教,严防儿童在夏、秋季节发生血吸虫病的急性感染,适宜开展人畜同步化疗,依然是湖区血吸虫病防治的关键。 展开更多
关键词 血吸虫病 传染源控制 疫情 纵向观察
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pVAX1/IL-18对日本血吸虫DNA疫苗效果影响的初步研究 被引量：3
7
作者 程红兵 周云飞 +7 位作者 张树菊 冯其梅 刘益萍 崔国艳 魏红 李芬 刘明社 汪世平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期774-777,787,共5页
目的探讨pVAX1/IL-18对日本血吸虫pVAX1/SjRPS4·CB疫苗免疫保护效果的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为NS组、pVAX1空质粒组、pVAX1/IL-18组、pVAX1/SjRPS4·CB组、pVAX1/SjRPS4·CB+pVAX1/IL-18组,每组12只。每组小鼠在左... 目的探讨pVAX1/IL-18对日本血吸虫pVAX1/SjRPS4·CB疫苗免疫保护效果的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为NS组、pVAX1空质粒组、pVAX1/IL-18组、pVAX1/SjRPS4·CB组、pVAX1/SjRPS4·CB+pVAX1/IL-18组,每组12只。每组小鼠在左后腿股四头肌注射相对应质粒100μg或者等剂量生理盐水,隔2W加强1次,共注射3次。末次免疫后3周腹部贴片感染小鼠。感染后8周剖杀小鼠,用ELISA法检测小鼠特异性抗体IgG,计算减虫率、肝组织减卵率、肠减卵率、每雌减卵率。结果 pVAX1/SjRPS4·CB、pVAX1/IL-18联合免疫小鼠后,IgG滴度为1∶12 800,高于单独免疫组;减虫率、肝组织减卵率、肠减卵率、每雌减卵率与其他组相比差异均有统计学意义。结论 pVAX1/IL-18对日本血吸虫DNA疫苗具有明显增效作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫 IL18 pVAX/SjRPS4·CB 疫苗
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