目的利用基因工程技术克隆、表达人层粘连蛋白α4链LG4-5组件(hum an lam in in alpha4 LG4-5 modu le,hLNα4LG4-5)蛋白并制备其特异性多克隆抗体。方法采用RT-PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG4-5的cDNA片段,T/A克隆法将其插入pMD-18...目的利用基因工程技术克隆、表达人层粘连蛋白α4链LG4-5组件(hum an lam in in alpha4 LG4-5 modu le,hLNα4LG4-5)蛋白并制备其特异性多克隆抗体。方法采用RT-PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG4-5的cDNA片段,T/A克隆法将其插入pMD-18T载体进行测序。采用DNA重组技术构建原核表达载体pET-28 a-LG4-5,用BL21(DE3)/pET系统表达hLNα4LG4-5融合蛋白,以SDS-PAGE鉴定所表达的融合蛋白。用含融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒免疫家兔,制备抗hLNα4LG4-5多克隆抗体,W estern印迹法检测抗体的特异性。结果成功克隆了hLNα4LG4-5的cDNA片段,12%SDS-PAGE电泳检测显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28 a-LG4-5总蛋白中出现一条分子质量为42×103的新蛋白带,制备了效价为1∶10 240的hLNα4LG4-5多克隆抗体,W estern印迹分析证实可检测到特异性目的蛋白带。结论克隆并原核表达了hLNα4LG4-5蛋白,制备了特异性抗hLNα4LG4-5的多克隆抗体,为进一步研究LG组件在疾病发生中所起的作用打下了基础。展开更多
目的克隆并表达具有生物学活性的人层黏连蛋白α4链LG1组件(hum an lam in in alpha4 chain LG1 modu le,hLNα4LG1)蛋白。方法RT-PCR扩增hLNα4LG1的cDNA片段并将其插入pMD-18T载体进行测序。将测序片段亚克隆入原核表达载体pET-28 a并...目的克隆并表达具有生物学活性的人层黏连蛋白α4链LG1组件(hum an lam in in alpha4 chain LG1 modu le,hLNα4LG1)蛋白。方法RT-PCR扩增hLNα4LG1的cDNA片段并将其插入pMD-18T载体进行测序。将测序片段亚克隆入原核表达载体pET-28 a并在BL21(DE3)大肠杆菌中进行表达,W estern b lot对表达蛋白进行鉴定。用N i-NTA亲和柱对目的蛋白进行纯化,并通过细胞黏附与伸展实验对其生物学活性进行检测。结果成功克隆了hLNα4LG1的cDNA片段,SDS-PAGE及W estern b lot分析显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28 a-LG1总蛋白中出现一条分子量为26×103的新蛋白带。与对照组相比,N i-NTA亲和层析纯化的目的蛋白有明显促进A549细胞伸展与黏附的作用。结论克隆并原核表达了hLNα4LG1蛋白,目的蛋白具有促进细胞黏附与伸展的活性,为深入研究hLNα4LG1的功能奠定了基础。展开更多
文摘目的利用基因工程技术克隆、表达人层粘连蛋白α4链LG4-5组件(hum an lam in in alpha4 LG4-5 modu le,hLNα4LG4-5)蛋白并制备其特异性多克隆抗体。方法采用RT-PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG4-5的cDNA片段,T/A克隆法将其插入pMD-18T载体进行测序。采用DNA重组技术构建原核表达载体pET-28 a-LG4-5,用BL21(DE3)/pET系统表达hLNα4LG4-5融合蛋白,以SDS-PAGE鉴定所表达的融合蛋白。用含融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒免疫家兔,制备抗hLNα4LG4-5多克隆抗体,W estern印迹法检测抗体的特异性。结果成功克隆了hLNα4LG4-5的cDNA片段,12%SDS-PAGE电泳检测显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28 a-LG4-5总蛋白中出现一条分子质量为42×103的新蛋白带,制备了效价为1∶10 240的hLNα4LG4-5多克隆抗体,W estern印迹分析证实可检测到特异性目的蛋白带。结论克隆并原核表达了hLNα4LG4-5蛋白,制备了特异性抗hLNα4LG4-5的多克隆抗体,为进一步研究LG组件在疾病发生中所起的作用打下了基础。
文摘目的克隆并表达具有生物学活性的人层黏连蛋白α4链LG1组件(hum an lam in in alpha4 chain LG1 modu le,hLNα4LG1)蛋白。方法RT-PCR扩增hLNα4LG1的cDNA片段并将其插入pMD-18T载体进行测序。将测序片段亚克隆入原核表达载体pET-28 a并在BL21(DE3)大肠杆菌中进行表达,W estern b lot对表达蛋白进行鉴定。用N i-NTA亲和柱对目的蛋白进行纯化,并通过细胞黏附与伸展实验对其生物学活性进行检测。结果成功克隆了hLNα4LG1的cDNA片段,SDS-PAGE及W estern b lot分析显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28 a-LG1总蛋白中出现一条分子量为26×103的新蛋白带。与对照组相比,N i-NTA亲和层析纯化的目的蛋白有明显促进A549细胞伸展与黏附的作用。结论克隆并原核表达了hLNα4LG1蛋白,目的蛋白具有促进细胞黏附与伸展的活性,为深入研究hLNα4LG1的功能奠定了基础。
