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微阵列比较基因组杂交产前诊断8p23.1重复综合征胎儿的实验研究 被引量：1
1
作者 张艳亮 戴勇 +6 位作者 涂植光 李启运 王林纤 张丽 曾君 林秀华 刘士龙 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第17期1700-1701,共2页
目的了解一完全性心内膜垫缺陷（endocardial cushion defects，ECD）和右手轴前六指畸形患儿的基因组拷贝数变化（copy number variations，CNVs），探讨微阵列比较基因组杂交（array—based comparative genomic hybridization，array... 目的了解一完全性心内膜垫缺陷（endocardial cushion defects，ECD）和右手轴前六指畸形患儿的基因组拷贝数变化（copy number variations，CNVs），探讨微阵列比较基因组杂交（array—based comparative genomic hybridization，array—CGH）在分子细胞遗传诊断中运用的可行性和优越性。方法对胎儿及其父母进行常规G显带核型分析，运用array-CGH芯片对患儿进行全基因组高分辨率扫描和分析，实时定量PCR对array—CGH结果进行验证。结果常规G显带核型分析显示胎儿和父母的核型均正常。array—CGH结果显示8p23．1嗅觉受体／防卫素重复（ORDRs）之间存在大约1．43Mb的重复（位于10245882～11676699bp）。实时定量PCR证明array—CGH的结果是准确的。结论与传统的细胞遗传分析方法相比，array—CGH具有高分辨率、高特异性和高准确性等优点。 展开更多
关键词 微阵列比较基因组杂交 8p23.1重复 拷贝数变化 产前诊断
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人参皂苷Rh2抑制肝癌HepG2细胞迁移的实验研究 被引量：23
2
作者 冯子强 左国伟 +7 位作者 石庆强 赵绿翠 罗念 游智梅 夏菁 李丹阳 李静 陈地龙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期61-65,共5页
目的：研究人参皂苷Rh2对肝癌Hep G2细胞迁移的影响及其机制。方法：取对数生长期Hep G2细胞,Rh2（10~160μmol/L）诱导,同时设空白对照组,用CCK-8检测Rh2对细胞增殖影响;Transwell检测Rh2对细胞的迁移的影响;荧光素报告基因筛选可能的... 目的：研究人参皂苷Rh2对肝癌Hep G2细胞迁移的影响及其机制。方法：取对数生长期Hep G2细胞,Rh2（10~160μmol/L）诱导,同时设空白对照组,用CCK-8检测Rh2对细胞增殖影响;Transwell检测Rh2对细胞的迁移的影响;荧光素报告基因筛选可能的信号通路;Western blot检测Hep G2细胞中P-ERK、ERK、P-P38、P-38、P-JUK、JUK、MMP3等蛋白的表达;定量PCR方法检测AP1、MMP3基因的表达;荧光显微镜分别观察AP1、MMP3蛋白在细胞内的表达及分布。结果：CCK-8检测结果显示Rh2对肝癌Hep G2细胞生长抑制呈剂量和时间依赖性;Transwell检测显示Rh2对肝癌Hep G2细胞迁移有明显的抑制作用;荧光素报告基因筛选出AP1转录因子;Western blot检测结果显示P-ERK、MMP3蛋白表达水平呈下降趋势,PJUK、P-P38蛋白表达水平明显升高,ERK、JUK、P38蛋白则无明显变化;定量PCR方法结果显示：AP1、MMP3的基因表达下降。荧光结果显示：AP1、MMP3均分布在胞质内,随药物浓度的增加其荧光表达量减弱。结论：人参皂苷Rh2可通过激活MAPK通路来抑制肝癌Hep G2细胞的迁移。 展开更多
关键词 HEP G2细胞 Rh2 迁移 MAPK通路 AP1 MMP3
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大黄素诱导白血病K562细胞凋亡的实验研究 被引量：7
3
作者 金丹婷 刘北忠 +5 位作者 刘畅 王春光 王翀 王东生 郝坡 钟梁 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期822-825,共4页
目的:探讨大黄素对人白血病K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用。方法:采用MTT法检测大黄素对K562细胞的增殖抑制作用;通过Wight-Giemsa染色(W-G染色),在普通光镜下观察细胞的形态学变化;运用AnnexinV/PI双标记法检测大黄素对K562细胞的... 目的:探讨大黄素对人白血病K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用。方法:采用MTT法检测大黄素对K562细胞的增殖抑制作用;通过Wight-Giemsa染色(W-G染色),在普通光镜下观察细胞的形态学变化;运用AnnexinV/PI双标记法检测大黄素对K562细胞的凋亡效应;采用流式细胞技术检测细胞周期变化与凋亡情况;通过比色法检测Caspase-3、8、9的相对活性,分析大黄素诱导K562细胞凋亡的信号途径。结果:大黄素能显著抑制K562细胞的增殖,作用24、48、72h后的半数抑制率浓度分别为80、50、40μmol/L;处理组细胞在普通光镜下可见典型的凋亡形态学改变;AnnexinV/PI双标记法检测到K562细胞在大黄素的诱导下出现早期凋亡并呈剂量依赖性(P<0.01);流式细胞仪结果分析发现,处理组的K562细胞被阻滞于G0/G1期,与对照组相比,凋亡率明显升高并呈现剂量依赖性(P<0.01);大黄素可触发Caspase-3、8、9的活性增高(P<0.01)。结论:大黄素能有效地抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制和Caspase信号途径的活化有关。 展开更多
关键词 大黄素 K562细胞 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
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肿瘤患者外周血活化血小板测定及其临床意义 被引量：7
4
作者 郭金英 陈彦 +3 位作者 文阳安 姜习新 刘靳波 涂植光 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第4期510-512,共3页
目的:比较不同疾病状态下活化血小板测定值的差别及使用阿司匹林防治血栓的效果。方法:采用流式细胞仪测定126例肿瘤患者和60例非肿瘤患者外周血活化血小板CD62p和CD63的表达量,以及服用阿司匹林后的变化。结果:肿瘤患者外周血的活化血... 目的:比较不同疾病状态下活化血小板测定值的差别及使用阿司匹林防治血栓的效果。方法:采用流式细胞仪测定126例肿瘤患者和60例非肿瘤患者外周血活化血小板CD62p和CD63的表达量,以及服用阿司匹林后的变化。结果:肿瘤患者外周血的活化血小板CD62p和CD63的表达量明显高于非肿瘤患者(P<0.05),有血栓形成的肿瘤患者外周血的活化血小板CD62p和CD63的表达量明显高于无血栓形成的肿瘤患者(P<0.05),有血栓的肿瘤患者的活化血小板经过阿司匹林干预治疗后明显下降(P<0.05)。结论:测定活化血小板可以预测肿瘤患者存在高凝状态风险性的大小。同时,服用小剂量肠溶阿司匹林可以降低外周血活化血小板CD62p和CD63的值。 展开更多
关键词 活化血小板(CD62P和CD63) 阿司匹林 恶性肿瘤 血栓
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γ-干扰素、腺苷脱氨酶和新喋呤对结核性胸膜炎的诊断价值 被引量：4
5
作者 汪先桃 曾照芳 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第8期987-989,共3页
目的:研究胸水中γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)、腺苷脱氨酶(Adenosine deaminase,ADA)活性和新喋呤(Neopterin,Npt)水平对结核性胸膜炎的诊断价值。方法:分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)和偶联速率法检测43例结核性和38例恶性胸膜炎... 目的:研究胸水中γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)、腺苷脱氨酶(Adenosine deaminase,ADA)活性和新喋呤(Neopterin,Npt)水平对结核性胸膜炎的诊断价值。方法:分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)和偶联速率法检测43例结核性和38例恶性胸膜炎患者胸水中γ-干扰素、腺苷脱氨酶活性和新喋呤水平,并绘制受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC曲线)评价3项指标检测结核性胸膜炎的敏感性和特异性。结果:结核性胸膜炎组胸水中γ-干扰素、腺苷脱氨酶活性和新喋呤水平均显著高于非结核性胸膜炎组(P<0.05)。结论:胸水中γ-干扰素、腺苷脱氨酶活性和新喋呤水平测定有助于结核性胸膜炎的诊断。 展开更多
关键词 结核性胸膜炎 Γ-干扰素 腺苷脱氨酶 新喋呤
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毒力蛋白CbpA抗肺炎链球菌侵袭性感染的实验研究 被引量：1
6
作者 王箭 曹炬 +2 位作者 陈婷梅 王虹 尹一兵 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期483-487,共5页
目的:原核表达肺炎链球菌毒力蛋白CbpA,探讨其作为肺炎链球菌候选蛋白疫苗的价值。方法:分离培养TIGE4型肺炎链球菌,获取其染色体DNA,采用基因体外重组的方法将CbpA片段克隆到PET-32(a)原核表达载体内,测序鉴定后,原核表达及纯化CbpA;C... 目的:原核表达肺炎链球菌毒力蛋白CbpA,探讨其作为肺炎链球菌候选蛋白疫苗的价值。方法:分离培养TIGE4型肺炎链球菌,获取其染色体DNA,采用基因体外重组的方法将CbpA片段克隆到PET-32(a)原核表达载体内,测序鉴定后,原核表达及纯化CbpA;CbpA蛋白抗原主动和抗体被动免疫BALB/c小鼠,TIGR4型肺炎链球菌攻击,监测其生存时间。结果:获得了原核表达的重组抗原蛋白,Western blot鉴定证实为目的蛋白,镍柱纯化并透析复性可得到纯度达90%以上的重组蛋白。主动和被动免疫BALB/c小鼠后,TIGR4型肺炎链球菌攻击,与未免疫组相比,产生的保护性作用具有统计学意义。结论:CbpA蛋白免疫小鼠后可抵抗肺炎链球菌侵袭性感染,CbpA蛋白可作为肺炎链球菌的候选蛋白疫苗。 展开更多
关键词 抗原 肺炎链球菌 CbpA
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Drosha蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义
7
作者 曾宗跃 贾微 +2 位作者 杨欣 张海龙 柳满然 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期56-58,共3页
目的:探讨胰腺癌组织中Drosha蛋白表达状况及其临床意义。方法:收集胰腺癌样本85例及对应癌旁组织53例,采用H&E和免疫组化法检测胰腺癌组织标本中Drosha蛋白的表达并分析其与临床病理因素之间的关系。采用定量PCR方法检测Drosha基... 目的:探讨胰腺癌组织中Drosha蛋白表达状况及其临床意义。方法:收集胰腺癌样本85例及对应癌旁组织53例,采用H&E和免疫组化法检测胰腺癌组织标本中Drosha蛋白的表达并分析其与临床病理因素之间的关系。采用定量PCR方法检测Drosha基因表达。结果:胰腺癌组织中Drosha的表达阳性率为72.9%(62/85),而相应癌旁Drosha表达阳性率为100%(53/53),两者表达差异有统计学意义(P=0.000),Drosha蛋白在胰腺癌中的阳性强度平均积分值由10.3分降至2.3分。Drosha蛋白的表达与肿瘤的分期(c2=19.2,P=0.0003)、分级(c2=10.8,P=0.013)、淋巴结转移(c2=23.6,P=0.00003)等密切相关。与对应癌旁组织相比,Drosha基因在胰腺癌组织中表达下调(P=0.000)。结论:Drosha蛋白在胰腺癌组织中表达下降,Drosha可能在胰腺癌的发生、发展中具有重要作用。 展开更多
关键词 胰腺癌 DROSHA 免疫组化 临床意义
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RNA干扰enolase-1基因治疗胃癌的实验研究 被引量：3
8
作者 刘靖 鲍依稀 +2 位作者 刘明学 祝绚 李进 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期455-458,462,共5页
目的:探讨RNA干扰enolase-1基因对人胃癌的治疗作用。方法:根据enolase-1mRNA序列构建表达enolase-1特异的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)真核表达质粒pMSCVU6/ENO-1si1,pMSCVU6/ENO-1si2,pMSCVU6/ENO-1si3。种植人胃癌SGC-790... 目的:探讨RNA干扰enolase-1基因对人胃癌的治疗作用。方法:根据enolase-1mRNA序列构建表达enolase-1特异的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)真核表达质粒pMSCVU6/ENO-1si1,pMSCVU6/ENO-1si2,pMSCVU6/ENO-1si3。种植人胃癌SGC-7901细胞于裸鼠皮下建立裸鼠肿瘤模型。将构建成功的三种siRNA质粒分别转染SGC-7901细胞株,pMSCVU6/ENO-1si2和pMSCVU6/ENO-1si3转染裸鼠瘤体内。MTT法检测SGC-7901细胞增殖状况;测量荷瘤裸鼠的肿瘤体积,计算抑瘤率;RT-PCR检测SGC-7901细胞enolase-1mRNA表达;分别以免疫组化SP法和Western blot检测体内外enolase-1蛋白表达。结果:SGC-7901细胞株及裸鼠瘤体均被所采用的质粒成功转染。SGC-7901细胞受pMSCVU6/ENO-1si2转染后,其生长活性受到明显抑制(P<0.01),enolase-1mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01)。体内抑瘤实验表明,pMSCVU6/ENO-1si2组平均瘤体积为(380±26)mm3,pMSCVU6/ENO-1si3组与空白对照组分别为(993±124)mm3和(1102±131)mm3;pMSCVU6/ENO-1si2组抑瘤率为65.52%,pMSCVU6/ENO-1si3组为9.89%;pMSCVU6/ENO-1si2组肿瘤体积明显小于pMSCVU6/ENO-1si3组和空白对照组,差异具有显著性(P<0.01);pMSCVU6/ENO-1si3组和空白对照组之间肿瘤体积无显著差异(P>0.05);pM-SCVU6/ENO-1si2组与pMSCVU6/ENO-1si3组和空白对照组相比,enolase-1蛋白表达减弱。结论:表达siRNA的enolase-1基因特异的真核表达质粒能成功转染体内、外胃癌细胞,其中pMSCVU6/ENO-1si2可有效抑制人胃癌细胞的生长。 展开更多
关键词 enolase-1 RNA干扰 胃癌 基因治疗
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HPLC-ED检测血浆游离型甲氧基肾上腺素类物质诊断嗜铬细胞瘤及预后观察 被引量：3
9
作者 杨香春 甄乾娜 +1 位作者 李启富 丁敏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期537-541,共5页
目的:探讨高效液相色谱-电化学法(high performance liquid chromatography-electrochemical detection,HPLC-ED)检测血浆游离型甲氧基肾上腺素类物质(metanephrines,MNs)在嗜铬细胞瘤中诊断应用和预后观察。方法:采用HPLC-ED检测分析... 目的:探讨高效液相色谱-电化学法(high performance liquid chromatography-electrochemical detection,HPLC-ED)检测血浆游离型甲氧基肾上腺素类物质(metanephrines,MNs)在嗜铬细胞瘤中诊断应用和预后观察。方法:采用HPLC-ED检测分析血浆游离型MNs嗜铬细胞瘤患者21例、健康对照组26例、原发性高血压组23例和非嗜铬细胞瘤性肾上腺占位性疾病组24例。结果:嗜铬细胞瘤患者血浆游离型MNs浓度明显高于其他3组(P<0.05);以甲氧基去甲肾上腺素(normetanephrine,NMN)150 ng/L和(或)甲氧基肾上腺素(metanephrine,MN)120 ng/L为切点,诊断敏感度、特异性分别为100%、89%。NMN、MN浓度与肿瘤体积密切相关(NMN:r=0.952,P=0.000;MN:r=0.510,P=0.018)。嗜铬细胞瘤患者在肿瘤切除后血MNs浓度迅速降低。结论:血浆游离型MNs是诊断嗜铬细胞瘤和预后观察的良好标志物。 展开更多
关键词 高效液相色谱-电化学法 甲氧基肾上腺素类物质 嗜铬细胞瘤
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结直肠癌循环血游离miRs分子诊断标志物研究进展 被引量：1
10
作者 杨得志 唐石伏 柳满然 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期277-280,共4页
微小RNAs(microRNAs,miRs)是一类非编码小分子单链RNA,主要在翻译水平负性调控基因表达。近年来研究发现,循环血游离miRs对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)具有潜在的诊断作用。CRC患者具有特异性的循环血游离miRs表达谱,其中,miR-18a... 微小RNAs(microRNAs,miRs)是一类非编码小分子单链RNA,主要在翻译水平负性调控基因表达。近年来研究发现,循环血游离miRs对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)具有潜在的诊断作用。CRC患者具有特异性的循环血游离miRs表达谱,其中,miR-18a、miR-21、miR-29a和miR-92a等miRs均具有潜在的CRC诊断价值,而miR-7具有潜在的CRC早期诊断价值。这些研究结果表明,循环血游离miRs有可能成为新的CRC分子诊断标志物。 展开更多
关键词 结直肠癌 循环血游离miRs 诊断价值
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IL-8通过上调Bcl-2的表达和下调caspase-3的表达抑制MCF-7乳腺癌细胞凋亡 被引量：24
11
作者 庞雪利 李矿发 +5 位作者 魏兰 黄云秀 苏敏 王林 曹红 陈婷梅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期307-311,共5页
目的探讨白细胞介素8(IL-8)对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响及其机制。方法 Western blot法检测MCF-7细胞IL-8受体CXC趋化因子受体1(CXCR1)、CXCR2的表达;反转录PCR、Western blot法检测(0、20、40、80、160)ng/mL IL-8对MCF-7细胞Bcl-2、c... 目的探讨白细胞介素8(IL-8)对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响及其机制。方法 Western blot法检测MCF-7细胞IL-8受体CXC趋化因子受体1(CXCR1)、CXCR2的表达;反转录PCR、Western blot法检测(0、20、40、80、160)ng/mL IL-8对MCF-7细胞Bcl-2、caspase-3表达的影响;CCK-8法检测(0、40、80)ng/mL IL-8对MCF-7细胞增殖的影响;相差显微镜下观察80ng/mL IL-8处理MCF-7后细胞形态的变化;Western blot法检测80ng/mL IL-8联合信号通路抑制剂10μmol/L PD980590、10μmol/L LY294002或50μmol/L AG490[分别为丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)、磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)信号通路抑制剂],共同处理MCF-7细胞后,细胞内Bcl-2蛋白表达的变化;Western blot法检测(0、20、40、80、160)ng/mL IL-8对MCF-7细胞磷酸化p-AKT表达的影响;流式细胞术、反转录PCR以及Western blot法分别检测80ng/mL IL-8联合10μmol/L LY294002共同处理MCF-7细胞后,细胞凋亡以及细胞内Bcl-2、caspase-3表达的变化。结果 IL-8受体CXCR1、CXCR2在MCF-7细胞中均有表达;在IL-8的作用下,MCF-7细胞Bcl-2表达升高,caspase-3表达下降,抗凋亡能力明显增强;IL-8能显著上调MCF-7细胞中p-AKT的表达;PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002能显著抑制IL-8抗MCF-7细胞凋亡的作用,且减少Bcl-2并增加caspase-3的表达。结论 IL-8可显著抑制MCF-7细胞的凋亡,其机制可能与IL-8激活PI3K/AKT信号通路而上调Bcl-2、下调caspase-3的表达有关。 展开更多
关键词 IL-8 乳腺癌 MCF-7细胞 凋亡
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阿奇霉素联合亚胺培南对肺炎克雷伯菌生物膜的抑制作用 被引量：14
12
作者 穆小萍 唐玲玲 +3 位作者 纪存委 黄艳芬 张德纯 黄瑞玉 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期617-620,共4页
目的研究阿奇霉素(azithromycin,AZM)联合亚胺培南(imipenem,IPM)对肺炎克雷伯菌生物膜(biofi lm,BF)的抑制作用。方法采用改良平板法建立肺炎克雷伯菌BF模型,微量稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度,银染法快速鉴定细菌BF,噻唑蓝(MTT)... 目的研究阿奇霉素(azithromycin,AZM)联合亚胺培南(imipenem,IPM)对肺炎克雷伯菌生物膜(biofi lm,BF)的抑制作用。方法采用改良平板法建立肺炎克雷伯菌BF模型,微量稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度,银染法快速鉴定细菌BF,噻唑蓝(MTT)比色法测定BF中的活菌数,棋盘设计法测定阿奇霉素和亚胺培南对BF的协同抑制作用,用RT-PCR对联合用药前后luxS基因的表达进行相对定量分析,检测结果采用SPSS13.0软件进行统计处理。结果加入1/16、1/4MIC阿奇霉素可显著增加1/4、1/2及1MIC亚胺培南对肺炎克雷伯菌BF的抑菌活性;加入1/4、1/2及1MIC的亚胺培南也可显著增加1/16、1/4MIC阿奇霉素的抑菌活性;1MIC IPM与1/4、1/16MIC AZM联合应用;1/2MIC IPM与1/4MIC AZM联合应用可以下调lux S基因的表达。结论阿奇霉素与亚胺培南联合使用可下调肺炎克雷伯菌lux S基因的表达,从而增强其对BF的抑菌活性。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 生物膜 阿奇霉素 亚胺培南 LUXS基因 协同作用
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高效液相色谱-程序波长紫外检测法同时测定血浆中的色氨酸及其代谢物 被引量：12
13
作者 甄乾娜 黄小兰 +2 位作者 张晓清 班艳娜 丁敏 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期435-438,共4页
建立了一种高效液相色谱-程序波长紫外检测法同时测定血浆中色氨酸(Trp)及其主要代谢产物犬尿氨酸(Kyn)和5-羟色胺(5-HT)。以茶碱为内标(IS),采用BDS-Hypersil-C8柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离。流动相为10 mmol/L醋酸钠缓冲液(pH 4.... 建立了一种高效液相色谱-程序波长紫外检测法同时测定血浆中色氨酸(Trp)及其主要代谢产物犬尿氨酸(Kyn)和5-羟色胺(5-HT)。以茶碱为内标(IS),采用BDS-Hypersil-C8柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离。流动相为10 mmol/L醋酸钠缓冲液(pH 4.5)-乙腈(94∶6,v/v),流速为0.6 mL/min;柱温为25℃;紫外检测波长设定:Kyn和IS为360 nm,5-HT为220 nm,Trp为302 nm。3种物质的平均回收率为87%～113%;线性范围分别为3.97～400μmol/L(Trp),0.421～20.2μmol/L(Kyn),4.36～980 nmol/L(5-HT);检出限分别为0.134μmol/L(Trp),0.016 0μmol/L(Kyn),2.03 nmol/L(5-HT)。利用该方法对15例抑郁症患者和15例健康志愿者的血浆进行测定,结果表明两组间Trp的代谢存在显著的差异。 展开更多
关键词 高效液相色谱法 色氨酸 犬尿氨酸 5-羟色胺 血浆
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骨形态发生蛋白9定向诱导多潜能干细胞成骨分化 被引量：27
14
作者 张燕 文巍 罗进勇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1291-1298,共8页
为确认和评价骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein9,BMP9)定向诱导多潜能干细胞成骨分化的能力,以鼠间充质干细胞C3H10、小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)和骨髓基质细胞(bone marrow stromalcell,BMSC)... 为确认和评价骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein9,BMP9)定向诱导多潜能干细胞成骨分化的能力,以鼠间充质干细胞C3H10、小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)和骨髓基质细胞(bone marrow stromalcell,BMSC)三种多潜能干细胞为目标细胞,用重组腺病毒的方法将BMP9导入细胞,通过荧光素酶报告基因实验、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)定量测定、钙盐沉积实验、realtime PCR、动物实验和组织化学染色等方法,观察BMP9对于多潜能干细胞成骨分化的定向诱导作用.结果提示,BMP9能诱导C3H10、MEFs和BMSC细胞ALP的表达,且具有剂量依赖性.BMP9在体外能够促进C3H10细胞和MEFs细胞的钙盐沉积.经BMP9刺激后,C3H10细胞成骨相关基因ALP、Runx2、骨桥素(osteopontin,OPN)和骨钙素(osteocalcin,OC)的mRNA水平均增加.荧光素酶报告基因实验证实,BMP9可以活化Smad和成骨关键基因Runx2.动物实验和组织化学染色检查显示,BMP9可以诱导C3H10细胞在裸鼠皮下异位成骨,因此,BMP9具有定向诱导多潜能干细胞成骨分化的能力. 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白9 多潜能干细胞 信号转导 分化 转化生长因子
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云芝糖肽、丹参酮ⅡA对荷瘤小鼠的抗肿瘤及免疫调节作用 被引量：14
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作者 祝绚 鲍依稀 +2 位作者 李进 刘靖 王宏萍 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期526-529,共4页
目的:研究云芝、丹参有效组分单体以及复方对EAC荷瘤小鼠的抗肿瘤和免疫调节作用,为肿瘤的中药治疗新方剂的临床广泛应用提供一定的实验基础。方法:建立EAC实体型荷瘤小鼠动物模型,随机分为6组:生理盐水对照组(NS)、阿霉素治疗组(ADM)... 目的:研究云芝、丹参有效组分单体以及复方对EAC荷瘤小鼠的抗肿瘤和免疫调节作用,为肿瘤的中药治疗新方剂的临床广泛应用提供一定的实验基础。方法:建立EAC实体型荷瘤小鼠动物模型,随机分为6组:生理盐水对照组(NS)、阿霉素治疗组(ADM)、云芝糖肽组(PSP)、丹参酮Ⅱ组(TanⅡA)、复方组(PSP+TanⅡA)和综合治疗组(PSP+TanⅡA+ADM),并给予相应药物治疗,应用免疫组化法检测小鼠脾脏IL-2、IL-2R和肿瘤组织中周期蛋白CDK4以及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达,并计算抑瘤率、脏器指数,结果与对照组和化疗组进行比较。结果:云芝糖肽组小鼠脾脏IL-2、IL-2R水平高于NS组和化疗组(P<0.05),各药物治疗组肿瘤Bax均高于化疗组,CDK4均低于NS组(P<0.05),复方组Bax高于NS组(P<0.05),云芝组糖肽、丹参酮ⅡA组、综合治疗组CDK4低于化疗组(P<0.05),云芝糖肽组、复方组与综合治疗组肿瘤Bcl-2低于NS组(P<0.05),各药物治疗组对肿瘤有明显的抑制作用(P<0.05),复方组胸腺指数高于NS组,各药物治疗组胸腺指数均高于化疗组(P<0.05)。结论:云芝糖肽、丹参酮ⅡA对EAC荷瘤小鼠有明显的抗肿瘤和免疫调节作用,并能缓解化疗药物所引起的毒副作用,二者联用存在一定协同作用。 展开更多
关键词 云芝糖肽 丹参酮ⅡA 艾氏腹水癌 免疫调节 周期蛋白 凋亡相关蛋白
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人YB-1蛋白的高效原核表达、纯化及其多抗的制备 被引量：10
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作者 李朴 孔飞飞 +2 位作者 余雪梅 成凤 涂植光 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第14期1579-1581,共3页
目的构建YB-1原核表达系统,诱导表达后纯化YB-1融合蛋白并制备其多抗。方法采用RT-PCR扩增YB-1编码序列,将该序列克隆至载体pET-32a(+);转化BL21(DE3),确定最佳表达条件;采用亲和层析与超滤纯化目的蛋白,经Western blot鉴定后免疫家兔,... 目的构建YB-1原核表达系统,诱导表达后纯化YB-1融合蛋白并制备其多抗。方法采用RT-PCR扩增YB-1编码序列,将该序列克隆至载体pET-32a(+);转化BL21(DE3),确定最佳表达条件;采用亲和层析与超滤纯化目的蛋白,经Western blot鉴定后免疫家兔,制备其抗体。结果成功扩增YB-1编码序列并构建了其表达载体;SDS-PAGE结果显示,表达条件经优化后(28℃,5h,0.5mmol/LIPTG),YB-1融合蛋白在BL21中得到高效可溶性表达;Western blot结果证实,表达产物经纯化后获得了纯度较高的YB-1融合蛋白,将该蛋白免疫家兔后获得了效价与特异性较高的抗体。结论成功建立了YB-1蛋白的原核表达系统及蛋白纯化方法 ,并制备了其抗体。 展开更多
关键词 YB-1 原核表达 亲和层析 多抗制备
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人参皂苷Rh2对人红白血病K562细胞HDAC1/2活性和周期蛋白的影响 被引量：9
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作者 夏菁 陈地龙 +5 位作者 左国伟 魏强 游智梅 李丹阳 刘泽洪 李静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1062-1066,共5页
目的 探讨人参皂苷单体Rh2[20（S）-ginsenoside Rh2,Rh2（S）]对人红白血病K562细胞增殖及对组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）、HDAC2活性和周期蛋白的影响。方法 以10-80μmol/L的Rh2（S）作用于体外培养的K562细胞,采用CCK-8法检测Rh2（S... 目的 探讨人参皂苷单体Rh2[20（S）-ginsenoside Rh2,Rh2（S）]对人红白血病K562细胞增殖及对组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）、HDAC2活性和周期蛋白的影响。方法 以10-80μmol/L的Rh2（S）作用于体外培养的K562细胞,采用CCK-8法检测Rh2（S）对K562细胞增殖活性的影响;流式细胞术（FCM）检测细胞周期、细胞凋亡的变化;化学比色法检测细胞中HDAC活性;Western blot法检测（10、20、40、60）μmol/L Rh2（S）诱导48 h后HDAC1、HDAC2、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖激酶4（CDK4）、p16INK4A和p21蛋白的表达。结果 CCK-8结果显示,Rh2（S）在20-80μmol/L浓度范围内能有效抑制K562细胞生长,并呈时间剂量依赖性;FCM结果显示,60μmol/L Rh2（S）将K562细胞周期阻滞在G0/G1期;（20、40、60）μmol/L Rh2（S）诱导K562早期凋亡,其凋亡率分别为（8.09±0.86）%、（9.44±0.53）%、（22.80±2.16）%,与空白对照组（2.63±0.14）%相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;40~60μmol/L Rh2（S）能降低K562细胞中HDAC的活性;Western blot结果显示,Rh2（S）能够下调HDAC1/2和cyclin D1、CDK4,激活p16INK4A和p21的表达。结论 Rh2（S）可能是通过抑制HDAC1、HDAC2的活性,下调cyclin D1激活p16INK4A和p21的表达,从而抑制白血病细胞增殖,诱导周期阻滞和细胞凋亡。 展开更多
关键词 人参皂苷Rh2(S) K562 细胞周期 组蛋白去乙酰化酶
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Notch信号通路在骨形态发生蛋白9诱导的多潜能干细胞成骨分化中的作用 被引量：9
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作者 刘强 翁亚光 +2 位作者 徐道晶 罗敏 唐敏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第23期2492-2496,共5页
目的初步探讨Notch信号通路对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导多潜能干细胞成骨分化的作用和机制。方法腺病毒表达载体(AdBM P9/AdGFP、AdHey1/AdRFP)和BMP9/GFP条件培养基处理C2C12细胞,细胞化学染色和活性定... 目的初步探讨Notch信号通路对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导多潜能干细胞成骨分化的作用和机制。方法腺病毒表达载体(AdBM P9/AdGFP、AdHey1/AdRFP)和BMP9/GFP条件培养基处理C2C12细胞,细胞化学染色和活性定量检测早期成骨标志物碱性磷酸酶(ALP),定量RT-PCR检测Notch信号通路靶基因Hey1,以了解Hey1在AdBMP9介导的成骨分化作用中的表达和作用;采用细胞密度实验和Notch信号通路抑制剂(DAPT)检测Notch信号通路对成骨的影响;在AdBMP9/AdGFP处理下,检测细胞上Notch信号通路配体、受体表达变化。结果 AdBMP9作用下,1、3、5、7dALP活性持续增加(P<0.05);Hey1一过性升高,其与AdBMP9呈剂量依赖性;Hey1可协助BMP9成骨(P<0.05),不能单独起效。80%和40%细胞密度组ALP量和Hey1表达均高于20%组(P<0.05);DAPT组中ALP活性明显降低(P<0.05);在AdBMP9作用下,Notch信号通路配受体有不同程度的上调,其中受体Notch4和配体Jag-1上调最为明显(分别为11.3倍和5.1倍)。结论 Notch信号通路参与BMP9介导的多潜能干细胞成骨分化,其可能的机制是BMP9通过诱导Notch通路配体、受体表达上调使Hey1升高,后者协同成骨。 展开更多
关键词 NOTCH信号通路 骨形态发生蛋白9 多潜能干细胞 发状分裂相关增强子-1 DAPT
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高效液相色谱法同时测定胆汁中9种结合型胆汁酸 被引量：12
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作者 王文娟 邓文平 +2 位作者 王猛 陈耿 丁敏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期59-62,共4页
目的：建立测定人胆汁中结合型胆汁酸的HPLC-紫外检测法。方法：胆汁样品经固相萃取，采用WatersNovaC18色谱柱，柱温为25℃，流动相为甲醇：磷酸盐缓冲液（60mmol／L，pH3．3）（66：34，v／v），流速0．8ml／min，检测波长197nm。结果... 目的：建立测定人胆汁中结合型胆汁酸的HPLC-紫外检测法。方法：胆汁样品经固相萃取，采用WatersNovaC18色谱柱，柱温为25℃，流动相为甲醇：磷酸盐缓冲液（60mmol／L，pH3．3）（66：34，v／v），流速0．8ml／min，检测波长197nm。结果：9种结合型胆汁酸在20min内分离完全，各胆汁酸在浓度为8-1000umol／L范围内线性良好，r为0．9991-0．9999；最低检测限为1．25-3．13umol／L；该方法日内变异在3．77％-8．20％之间，日间变异在6．73％～17．11％之间，各胆汁酸的回收率在88．23％．109．75％之间。结论：本方法准确、灵敏、快速，适用于胆汁中结合型胆汁酸水平的实验室研究和临床常规检测。 展开更多
关键词 胆汁 胆汁酸 色谱法
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普萘洛尔对映异构体诱导HUVEC细胞的蛋白质表达谱差异 被引量：7
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作者 毛小琴 邱峰 +2 位作者 邱宗荫 陈世知 贾雄飞 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期165-171,共7页
手性药物只能通过严格的手性识别才能选择性地与特定生物大分子相互作用,在药动学、药效学等方面上表现出手性特征.以非选择性β肾上腺素能受体阻滞剂普萘洛尔(PRO)的对映异构体R(+)/S(-)-PRO为模型药物,分别作用于人脐静脉内皮细胞(HUV... 手性药物只能通过严格的手性识别才能选择性地与特定生物大分子相互作用,在药动学、药效学等方面上表现出手性特征.以非选择性β肾上腺素能受体阻滞剂普萘洛尔(PRO)的对映异构体R(+)/S(-)-PRO为模型药物,分别作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC),提取全细胞蛋白质,经双向电泳、MALDI-TOF-MS、SWISSPROT数据库分析鉴定差异表达蛋白质;共筛选出22个差异表达蛋白质点,鉴定了HSP86、HSP84、GRP75、KLC18、KBTB2、TGM2、GBLP、GCNT2、RAB36、KLH34等10种蛋白质.研究表明,PRO对映异构体可引起广泛的基因表达改变,涉及信号分子、代谢酶、骨架蛋白、伴侣蛋白等,且具有显著的手性特征,这可能与PRO显著的手性生物学特征有紧密联系,但仍需开展进一步深入研究,以明确产生PRO手性生物学特征的多种途径和机制.蛋白质组学技术为深入了解药物的手性生物学特征及其作用机制提供了新的思路和策略,对手性药物开发和临床合理用药有着重要的意义. 展开更多
关键词 普萘洛尔 对映异构体 蛋白质组学 立体选择性 人脐静脉内皮细胞
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