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柑橘黄龙病PCR检测技术优化
1
作者
杨亚
石卓艺
+7 位作者
周闰
彭丁文
朱宝德
王丽艳
孙倩楠
唐志敏
何艳晴
申超峰
《中国果菜》
2024年第12期20-24,30,共6页
为提高Jagoueix等建立的柑橘黄龙病PCR检测体系的检测效率和检出率,本研究对基因组DNA提取、PCR体系和PCR程序进行优化,分析了不同萃取次数、裂解温度和抗氧剂组合对总DNA质量的影响,并设置不同引物浓度梯度和退火温度梯度,研究其对检...
为提高Jagoueix等建立的柑橘黄龙病PCR检测体系的检测效率和检出率,本研究对基因组DNA提取、PCR体系和PCR程序进行优化,分析了不同萃取次数、裂解温度和抗氧剂组合对总DNA质量的影响,并设置不同引物浓度梯度和退火温度梯度,研究其对检测效果的影响。结果表明,萃取次数对DNA质量基本无影响;水浴65℃裂解比常温裂解提取的DNA质量更优,但总体差别不大;DNA提取液中添加β-巯基乙醇、β-巯基乙醇和PVP或者二者均不加入,对最终的基因组DNA的质量和纯度影响不大;引物浓度为0.4~1.0μmol/L出现稳定特征条带,引物浓度为0.1μmol/L时仍会产生引物二聚体;在66.5℃退火温度下的检测结果最优。因此,采取一次萃取、常温裂解、不添加抗氧化剂可简化DNA提取步骤;将引物浓度调整为0.8μmol/L效果最佳;退火温度66.5℃可提高检出率;优化后检测体系操作简便、稳定性好、检测率高,适于柑橘黄龙病的批量检测。
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关键词
柑橘黄龙病
DNA提取
PCR
检测体系
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职称材料
题名
柑橘黄龙病PCR检测技术优化
1
作者
杨亚
石卓艺
周闰
彭丁文
朱宝德
王丽艳
孙倩楠
唐志敏
何艳晴
申超峰
机构
郴州市
农业科学研究所
郴州市
柑橘
黄龙病
检验检测
中心
郴州市
柑橘
脱毒
技术研发中心
郴州市
农作物分子
技术
应用
研发
中心
郴州市
柑橘
黄龙病
(
木
虱
)
监测与
防控
技术研发中心
湘南学院
郴州市
农业农村局
出处
《中国果菜》
2024年第12期20-24,30,共6页
基金
郴州市技术研发中心项目:郴州市柑橘脱毒技术研发中心、郴州市柑橘黄龙病(木虱)监测与防控技术研发中心
国家重点研发计划课题早中熟柑橘大面积丰产增效轻简化栽培技术集成示范(2024YFD2300802)。
文摘
为提高Jagoueix等建立的柑橘黄龙病PCR检测体系的检测效率和检出率,本研究对基因组DNA提取、PCR体系和PCR程序进行优化,分析了不同萃取次数、裂解温度和抗氧剂组合对总DNA质量的影响,并设置不同引物浓度梯度和退火温度梯度,研究其对检测效果的影响。结果表明,萃取次数对DNA质量基本无影响;水浴65℃裂解比常温裂解提取的DNA质量更优,但总体差别不大;DNA提取液中添加β-巯基乙醇、β-巯基乙醇和PVP或者二者均不加入,对最终的基因组DNA的质量和纯度影响不大;引物浓度为0.4~1.0μmol/L出现稳定特征条带,引物浓度为0.1μmol/L时仍会产生引物二聚体;在66.5℃退火温度下的检测结果最优。因此,采取一次萃取、常温裂解、不添加抗氧化剂可简化DNA提取步骤;将引物浓度调整为0.8μmol/L效果最佳;退火温度66.5℃可提高检出率;优化后检测体系操作简便、稳定性好、检测率高,适于柑橘黄龙病的批量检测。
关键词
柑橘黄龙病
DNA提取
PCR
检测体系
Keywords
Citrus Huanglongbing
DNA extraction
PCR
detection system
分类号
S436 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
柑橘黄龙病PCR检测技术优化
杨亚
石卓艺
周闰
彭丁文
朱宝德
王丽艳
孙倩楠
唐志敏
何艳晴
申超峰
《中国果菜》
2024
0
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