胶体金免疫层析技术在鸡蛋中喹诺酮类药物残留快速检测中的应用 被引量：6

1

作者 宋贵方 娄亚坤 +1 位作者 付燕峰 赵林萍 《今日畜牧兽医》 2019年第2期5-6,共2页

由于抗生素的大量使用尤其是广谱抗菌喹诺酮类药物的广泛应用在鸡的养殖上,造成了喹诺酮类药物在鸡肉产品和鸡蛋中的残留。胶体金免疫层析技术以快速、简便、灵敏、易保存、稳定性好等特点,弥补了传统方法的不足,适应于流通中的快速现... 由于抗生素的大量使用尤其是广谱抗菌喹诺酮类药物的广泛应用在鸡的养殖上,造成了喹诺酮类药物在鸡肉产品和鸡蛋中的残留。胶体金免疫层析技术以快速、简便、灵敏、易保存、稳定性好等特点,弥补了传统方法的不足,适应于流通中的快速现场筛查。本文主要介绍了胶体金免疫层析技术在鸡蛋中喹诺酮类药物残留的现场快速筛查方法的应用及发展前景。 展开更多

关键词 喹诺酮类药物 胶体金免疫层析技术 快速检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

一种基于荧光探针技术的鸭坦布苏病毒核酸检测方法的建立

2

作者 郭瑞 付燕峰 +3 位作者 娄亚坤 苗银萍 瞿超杰 任宝红 《中国动物保健》 2022年第11期121-123,共3页

为建立一种鸭坦布苏病毒荧光RT-PCR核酸检测方法,特针对鸭坦布苏病毒E基因的保守片段设计特异性引物和探针,在鸭坦布苏病毒核酸层面和合成基因质粒层面,经一系列优化调试完成方法初步建立。其后,对该方法的特异性、敏感性、重复性、标... 为建立一种鸭坦布苏病毒荧光RT-PCR核酸检测方法,特针对鸭坦布苏病毒E基因的保守片段设计特异性引物和探针,在鸭坦布苏病毒核酸层面和合成基因质粒层面,经一系列优化调试完成方法初步建立。其后,对该方法的特异性、敏感性、重复性、标准曲线、扩增效率等方面进行了验证。结果显示:该方法特异性100%;敏感性为10copies/μL;重复性CV值在0.07%~0.65%区间;标准曲线相关系数为0.9995,扩增效率为99.0%。综上所述,本试验成功建立了一种性能良好的鸭坦布苏病毒荧光探针RT-PCR核酸检测方法,可为DMTUV的临床诊断和流行性病学调查提供一种技术支撑。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 E基因 RT-PCR 探针

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于非洲猪瘟病毒B646 L和I177L基因双重实时荧光定量PCR鉴别ASFV-G-ΔI177 L疫苗株的检测方法

3

作者 郭瑞 韩小改 +2 位作者 娄亚坤 杨楠 任宝红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第12期52-57,共6页

为建立一种可鉴别非洲猪瘟病毒(ASFV)野毒株与ASFV-G-ΔI177L(I177L基因缺失株)疫苗株的实时荧光定量PCR检测方法,本试验针对非洲猪瘟病毒B646L与I177L两种基因保守性高的区域,分别设计了引物和探针,通过引物、探针最佳工作浓度筛选和... 为建立一种可鉴别非洲猪瘟病毒(ASFV)野毒株与ASFV-G-ΔI177L(I177L基因缺失株)疫苗株的实时荧光定量PCR检测方法,本试验针对非洲猪瘟病毒B646L与I177L两种基因保守性高的区域,分别设计了引物和探针,通过引物、探针最佳工作浓度筛选和退火温度优化,建立了一种双重实时荧光定量PCR核酸检测方法,并验证该方法的敏感性、特异性、重复性。结果显示,该检测方法建立的标准曲线线性关系良好,R2均>0.99;对pUC57-B646L和pUC57-I177L质粒标准品最低检出限均为10 copies/μL;与其他常见猪病病原无交叉反应,特异性强;批内变异系数为0.11%~1.39%,批间变异系数为0.21%~0.96%,均小于1.4%,重复性和稳定性良好。结果表明,本试验成功建立了一种性能良好的非洲猪瘟病毒B646L与I177L基因双重实时荧光定量PCR核酸检测方法,可为临床上非洲猪瘟病毒野毒株和ASFV-G-ΔI177L疫苗株的检测和鉴别提供技术支撑。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) B646L基因 I177L基因 双重实时荧光定量PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响 被引量：1

4

作者 曾小宇 苗银萍 +2 位作者 赵冰琳 魏卓 赵林萍 《中国兽药杂志》 北大核心 2017年第6期19-26,共8页

为研究不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响,通过原核表达获取猪瘟病毒重组E2蛋白、E0蛋白、C蛋白和NS5B蛋白,大小分别约为35、42、16和80 kD。经Ni-NTA亲和层析柱纯化并利用Band Scan软件进行计算,纯度均在90%以上,满足ELISA检... 为研究不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响,通过原核表达获取猪瘟病毒重组E2蛋白、E0蛋白、C蛋白和NS5B蛋白,大小分别约为35、42、16和80 kD。经Ni-NTA亲和层析柱纯化并利用Band Scan软件进行计算,纯度均在90%以上,满足ELISA检测包被用原料纯度的要求。将上述4种蛋白作为包被抗原进行ELISA,以10份企业阳性质控品血清和10份企业阴性质控品血清为检验指标比较不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响。结果以E2蛋白为原料的包被板检测质控血清时,灵敏度和特异性均达到80%以上,能够满足猪瘟病毒抗体ELISA检测的要求,故选择E2蛋白作为包被抗原并进行相关检测试剂的研制。用研制的试剂与国际知名度高、产品质量好的美国IDEXX同类试剂对432份临床猪血清进行符合性检测,结果与美国IDEXX试剂的阳性符合率为95.53%,阴性符合率为86.56%,总符合率为91.67%,两种试剂检测结果具有较高的一致性。试验表明,用E2蛋白为包被抗原对猪瘟病毒抗体进行ELISA检测的效果最好,制备的检测试剂可用于临床猪瘟病毒血清抗体的检测,为今后猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂的进一步研制奠定了基础。 展开更多

关键词 ELISA 检测效果 原核表达 E2蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽流感病毒H5、H7、H9亚型多重荧光RT-PCR检测方法的建立 被引量：3

5

作者 杨楠 翟少伦 +2 位作者 许军海 杨丹芳 娄亚坤 《中国动物保健》 2021年第6期101-105,共5页

为了简便、快速、准确的检测禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)H5、H7、H9亚型(lumpy skin disease virus,LSDV),本研究通过对禽流感病毒HA2基因保守区域的分析,设计、合成特异性引物和探针,结合Taq man-MGB探针技术,建立禽流感病... 为了简便、快速、准确的检测禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)H5、H7、H9亚型(lumpy skin disease virus,LSDV),本研究通过对禽流感病毒HA2基因保守区域的分析,设计、合成特异性引物和探针,结合Taq man-MGB探针技术,建立禽流感病毒H5、H7、H9亚型多重荧光RT-PCR检测方法。该方法敏感性较高,最低检出限为11copies/μL;与禽类常见病毒核酸均无交叉反应;不同稀释度的重组质粒的检测变异系数为0.1%~1.16%。上述结果表明,本研究建立的禽流感病毒H5、H7、H9亚型多重荧光RT-PCR检测方法比传统病毒分离鉴定方法时间更短,具有敏感性强、特异性高的特点,更适用于禽流感病毒H5、H7、H9亚型快速诊断及流行病学调查。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H5亚型 H7亚型 H9亚型 多重荧光RT-PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

真菌毒素胶体金检测试剂条质量研究 被引量：1

6

作者 娄亚坤 柴茂 +4 位作者 苑述友 苗银萍 张杰 付燕峰 赵林萍 《畜禽业》 2018年第10期4-5,共2页

目的研究真菌毒素胶体金检测试剂条的质量。方法应用胶体金免疫层析技术开发一种快速检测饲料谷物中黄曲霉毒素B1(AFB1)检测试剂条。为使该检测试剂条质量性能指标满足GB 2761-2011《食品中真菌毒素限量》及《饲料卫生标准》要求,通过... 目的研究真菌毒素胶体金检测试剂条的质量。方法应用胶体金免疫层析技术开发一种快速检测饲料谷物中黄曲霉毒素B1(AFB1)检测试剂条。为使该检测试剂条质量性能指标满足GB 2761-2011《食品中真菌毒素限量》及《饲料卫生标准》要求,通过灵敏度、特异性、实验室高效液相色谱法(HPLC)一致性分析,评价真菌毒素胶体金检测试剂条的质量性能。结果研制的检测试剂条灵敏度99%、特异性97%、假阴性率1%、假阳性率3%、与实验室HPLC法显著性差异分析χ~2<3. 84,灵敏度高,特异性好。结论研究中的真菌素胶体金检测试剂条能满足食品安全相关国标要求,可用于谷物、饲料中真菌毒素的现场检测。 展开更多

关键词 真菌毒素 黄曲霉毒素B1 检测试剂条 食品安全

在线阅读 下载PDF 职称材料

UPLC-MS/MS测定4种兽药制剂中非法添加阿托品的方法研究 被引量：6

7

作者 胡兴娟 吴宁鹏 +3 位作者 董瑞静 董晓盈 李慧素 班付国 《中国兽药杂志》 2014年第11期49-52,共4页

建立了兽药中非法添加药物阿托品的超高效液相色谱－串联质谱（ UPLC－MS／MS）的检测方法。样品经提取稀释，采用 BEH C18柱为分离柱，外标法定量。结果表明，阿托品在0．5～10 ng／mL范围内线性关系良好，相关系数大于0．99。在4～6 m... 建立了兽药中非法添加药物阿托品的超高效液相色谱－串联质谱（ UPLC－MS／MS）的检测方法。样品经提取稀释，采用 BEH C18柱为分离柱，外标法定量。结果表明，阿托品在0．5～10 ng／mL范围内线性关系良好，相关系数大于0．99。在4～6 mg／g（或mg／mL）添加浓度范围内阿托品的平均回收率97．4％～110．9％，批内变异系数均小于10％，检测限为0．2 mg／g（或mg／mL），定量限为0．5 mg／g（或mg／mL）。该方法简便、灵敏度高、重现性好，适用于兽药中非法添加阿托品的含量测定。 展开更多

关键词 阿托品 兽药 超高效液相色谱-串联质谱

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪圆环病毒2型和3型双重荧光PCR检测方法建立及应用 被引量：4

8

作者 翟少伦 娄亚坤 +9 位作者 杜丽银 温肖会 翟颀 周秀蓉 贾春玲 霍玮 陈美霞 杨燕秋 吴国景 吕殿红 《中国动物保健》 2021年第3期101-102,共2页

猪圆环病毒属于圆环病毒科圆环病毒属,目前基因型分为PCV1、PCV2、PCV3和PCV4。但在临床上,PCV2和PCV3流行较多,且鉴于PCV2和PCV3高度相似的临床特征,因此,建立一种快速、可靠的可同时检测PCV2和PCV3的方法,对PCV的临床诊断和流行病学... 猪圆环病毒属于圆环病毒科圆环病毒属,目前基因型分为PCV1、PCV2、PCV3和PCV4。但在临床上,PCV2和PCV3流行较多,且鉴于PCV2和PCV3高度相似的临床特征,因此,建立一种快速、可靠的可同时检测PCV2和PCV3的方法,对PCV的临床诊断和流行病学调查意义深远。本研究利用生物信息学软件,设计2对引物和2条特异探针,建立了PCV2和PCV3双重荧光PCR检测方法,该方法特异性好,灵敏性高,最低检出限为10copies/μL。对从临床上采集的30份猪圆环病毒阳性样品进行鉴别检测,该方法的检测结果与PCV2或PCV3单重的商品化试剂盒检测结果一致。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3型 双重荧光PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽流感病毒H7N9亚型三重荧光PCR检测方法研究 被引量：2

9

作者 张杰 任宝红 +2 位作者 娄亚坤 苗银萍 赵林萍 《畜禽业》 2018年第9期1-2,共2页

目的建立一套能够同时检测禽流感病毒H7N9经典毒株和新型变异毒株的多重荧光定量PCR方法。方法以禽流感病毒H7N9亚型HA保守基因、HA裂解位点和NA基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,建立三重荧光PCR检测方法,并对该方法进行特异性和... 目的建立一套能够同时检测禽流感病毒H7N9经典毒株和新型变异毒株的多重荧光定量PCR方法。方法以禽流感病毒H7N9亚型HA保守基因、HA裂解位点和NA基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,建立三重荧光PCR检测方法,并对该方法进行特异性和敏感性验证。结果参考GenBank收录毒株序列设计引物;探针分别选用ROX、FAM、VIC为荧光基团;阈值设定原则以阈值线刚好超过阴性对照检测荧光曲线的最高点;试剂盒特异性好不受其他亚型流感病毒以及常见禽类病毒的干扰;灵敏度可以达到100~101个EID50。结论该研究建立的荧光PCR检测方法敏感特异,能够用于禽流感病毒H7N9毒株检测。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H7N9 荧光定量 PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

O型口蹄疫病毒固相阻断ELISA抗体检测方法研究 被引量：2

10

作者 张杰 苗银萍 +2 位作者 娄亚坤 任宝红 赵林萍 《养殖与饲料》 2018年第9期10-12,共3页

以VP1蛋白为包被抗原,采用方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度,最终确定固相阻断ELISA最适反应条件以及判定阈值,建立O型口蹄疫病毒衣壳蛋白抗体的固相阻断ELISA检测方法,并对该检测方法进行考核。试验结果表明,最佳抗原包被浓度为0.062 5... 以VP1蛋白为包被抗原,采用方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度,最终确定固相阻断ELISA最适反应条件以及判定阈值,建立O型口蹄疫病毒衣壳蛋白抗体的固相阻断ELISA检测方法,并对该检测方法进行考核。试验结果表明,最佳抗原包被浓度为0.062 5μg/m L;兔抗血清最佳工作浓度为16 000倍稀释,酶标二抗为8 000倍稀释;抑制率大于20%为阳性,抑制率小于20%为阴性;该方法与常见病原体无交叉反应,特异性和敏感性好,可以检测O型口蹄疫病毒VP1抗体,评价口蹄疫疫苗的免疫效果。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 衣壳蛋白 固相阻断 ELISA

在线阅读 下载PDF 职称材料

非洲猪瘟流行形势和防控对策

11

作者 张剑 《河南畜牧兽医》 2022年第21期33-35,共3页

非洲猪瘟(ASF)从2018年8月3日在中国沈阳被确诊以来,疫情的大范围传播,成为养猪业的头号“杀手”,使我国养殖业遭受重创。随着防控力度的加强,使之得到了有效控制,但是由于部分地区疫苗的不规范使用和非洲猪瘟病毒传播,使得ASF在国内流... 非洲猪瘟(ASF)从2018年8月3日在中国沈阳被确诊以来,疫情的大范围传播,成为养猪业的头号“杀手”,使我国养殖业遭受重创。随着防控力度的加强,使之得到了有效控制,但是由于部分地区疫苗的不规范使用和非洲猪瘟病毒传播,使得ASF在国内流行发生新的变化,大多数地区已不再呈现暴发式发生,流行趋势逐渐放缓,在不少地区出现了临床症状表现增多,死亡率降低,发病不易察觉等情况。相关研究发现我国存在非洲猪瘟变异弱毒株,这种毒株具有高度传播性,致病力弱的特点。 展开更多

关键词 非洲猪瘟 养猪业 致病力 弱毒株 防控对策 传播性 流行形势 流行趋势

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测中包被抗原的研究

12

作者 娄亚坤 任宝红 +3 位作者 张杰 曾小宇 付燕峰 赵林萍 《畜禽业》 2018年第8期15-16,共2页

目的研究不同的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原性蛋白对PRRSV抗体ELISA检测效果的影响。方法将PRRSV重组N蛋白、M蛋白和CGP5蛋白3种蛋白抗原单独包被,灵敏度分别为85.0%、60.0%、50.0%。为进一步优化ELISA检测方法 ,以N蛋白为主包被蛋白,M... 目的研究不同的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原性蛋白对PRRSV抗体ELISA检测效果的影响。方法将PRRSV重组N蛋白、M蛋白和CGP5蛋白3种蛋白抗原单独包被,灵敏度分别为85.0%、60.0%、50.0%。为进一步优化ELISA检测方法 ,以N蛋白为主包被蛋白,M蛋白和GP5蛋白以不同的比例混合包被,研究最佳包被条件。结果当N蛋白、M蛋白和GP5蛋白以5ng:5ng:5ng/孔包被时,敏感性和特异性均达到100%,混包效果优于抗原性蛋白单独包被。为今后PRRSV抗体ELISA检测试剂的进一步研制奠定了基础。 展开更多

关键词 ELISA 猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白 M蛋白 GP5蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

口蹄疫病毒O型抗体直接竞争ELISA检测方法研究

13

作者 张杰 苗银萍 +2 位作者 娄亚坤 曾小宇 赵林萍 《畜禽业》 2018年第8期4-5,共2页

目的建立一种敏感、特异、快速的O型口蹄疫病毒抗体检测方法。方法以O型口蹄疫病毒衣壳蛋白VP1和HRP标记VP1兔抗血清为原料,通过方阵滴定试验确定ELISA的反应条件以及阈值,建立直接竞争ELISA检测方法 ,并运用该方法检测已知临床阴阳性... 目的建立一种敏感、特异、快速的O型口蹄疫病毒抗体检测方法。方法以O型口蹄疫病毒衣壳蛋白VP1和HRP标记VP1兔抗血清为原料,通过方阵滴定试验确定ELISA的反应条件以及阈值,建立直接竞争ELISA检测方法 ,并运用该方法检测已知临床阴阳性样品。结果 VP1抗原包被浓度为50ng/μL;HRP标记抗血清工作浓度为1:2000;抑制率大于30%为阳性,抑制率小于30%为阴性;检测120阳性临床血清,阳性检出率为90.8%;检测120份阴性临床血清,阴性检出率为93.3%。结论研究建立的直接竞争ELISA方法操作简单,能够用于检测口蹄疫病毒O型抗体VP1抗体。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 VP1 直接竞争 ELISA

在线阅读 下载PDF 职称材料