辽宁新品系绒山羊GMPR2基因的生物学功能研究

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作者 金梅 张丽丽 +4 位作者 曲杨乐 朴君 李秀娜 王宜萌 朴敬爱 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1706-1716,共11页

本研究在辽宁新品系绒山羊中发现了GMPR2基因,旨在研究其在皮肤中的功能作用与绒毛生长的关系。首先对此基因进行了生物信息学分析,再利用地高辛标记的原位杂交技术对其进行定位分析,然后利用荧光定量技术对其进行相对定量分析,RT-PCR... 本研究在辽宁新品系绒山羊中发现了GMPR2基因,旨在研究其在皮肤中的功能作用与绒毛生长的关系。首先对此基因进行了生物信息学分析,再利用地高辛标记的原位杂交技术对其进行定位分析,然后利用荧光定量技术对其进行相对定量分析,RT-PCR技术检测GMPR2基因是否在其他器官中表达,最后验证不同浓度褪黑激素处理不同时间是否影响其表达。结果表明,得到的基因全长确为GMPR2基因,与牛GMPR2同源性最高;在初次级毛囊中都表达,表达部位为内根鞘;GMPR2基因在退行期初级毛囊中的表达量最高(P<0.01),在兴盛期与休止期表达量相差不明显;另外,GMPR2基因只在皮肤中表达,在心、肝等内脏器官不表达;褪黑激素处理后,GMPR2的表达量明显降低。所以,推断GMPR2可能间接调节初、次级毛囊的生长萎缩。 展开更多

关键词 GMPR2基因 生物信息学分析 原位杂交 荧光定量 RT—PCR 褪黑激素

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人乳铁蛋白基因克隆及细胞表达研究 被引量：28

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作者 曹阳 高华颖 +4 位作者 于黎 袁晓东 李庆伟 汤敏谦 安利佳 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期9-14,共6页

通过PCR法直接克隆了 2 .36 6kb的人乳铁蛋白基因cDNA序列及 80 0bp的山羊 β.M乳球蛋白基因 5′端调控序列 ,并连接到表达载体pLNCX中。利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因cDNA的重组质粒pLNCXHLF ,并导入到小鼠乳腺癌细胞株MA.M 782中 ,G... 通过PCR法直接克隆了 2 .36 6kb的人乳铁蛋白基因cDNA序列及 80 0bp的山羊 β.M乳球蛋白基因 5′端调控序列 ,并连接到表达载体pLNCX中。利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因cDNA的重组质粒pLNCXHLF ,并导入到小鼠乳腺癌细胞株MA.M 782中 ,G418及PCR筛选获得阳性单克隆细胞 ,增殖后 ,转染细胞利用海藻酸钠固定化包埋培养 ,经激素诱导 ,培养液上清通过Western印记检测证明 ,转染细胞表达并分泌出人乳铁蛋白 ,分子质量为34kDa;ELISA法测出 ,每升培养基 (含 10 5个细胞 )重组蛋白最高表达量为 6 5mg ;抗菌实验表明 ,所获得的重组人乳铁蛋白具有抑制大肠杆菌生长的作用 ,而且比人乳铁蛋白标准品作用更强。 展开更多

关键词 人乳铁蛋白 脂质体 固定化 细胞表达 基因克隆

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精子干细胞转染法制备转基因兔的研究 被引量：16

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作者 曹阳 高华颖 +1 位作者 李庆伟 安利佳 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第10期17-21,共5页

采用直接注射的方法 ,将脂质体包裹的含人乳铁蛋白基因重组质粒 pLNCXHLF注入兔睾丸组织中 ,一个月后与正常雌兔交配。所产仔兔经PCR、Southern检测证明获得了转基因兔 ,转基因阳性率平均为 35 %。实验结果表明 ,通过注射可将外源基因... 采用直接注射的方法 ,将脂质体包裹的含人乳铁蛋白基因重组质粒 pLNCXHLF注入兔睾丸组织中 ,一个月后与正常雌兔交配。所产仔兔经PCR、Southern检测证明获得了转基因兔 ,转基因阳性率平均为 35 %。实验结果表明 ,通过注射可将外源基因导入到曲细精管中 ,进而完成对精子干细胞的转染 ,获得携带外源基因的成熟精子 ,受精后可得到转基因动物。该方法是一种简捷、有效的新途径 ,既节省时间又降低了成本 ,为利用精子载体制备转基因动物的研究提供了很有价值的参考。 展开更多

关键词 精子干细胞 脂质体 转基因动物 直接注射 基因工程 兔 睾丸 精子载体法 转染

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乳铁蛋白研究现状 被引量：15

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作者 曹阳 包永明 +1 位作者 安利佳 高华颖 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第12期132-138,共7页

文章综述了乳铁蛋白最新研究成果,主要包括乳铁蛋白分子结构、分离提取方法、生物学功能、乳铁蛋白基因及重组乳铁蛋白的研究现状,介绍了乳铁蛋白及其活性多肽(抗菌肽、促进细胞生长肽)的抗微生物(细菌、病毒、真菌)作用、促进细胞生长... 文章综述了乳铁蛋白最新研究成果,主要包括乳铁蛋白分子结构、分离提取方法、生物学功能、乳铁蛋白基因及重组乳铁蛋白的研究现状,介绍了乳铁蛋白及其活性多肽(抗菌肽、促进细胞生长肽)的抗微生物(细菌、病毒、真菌)作用、促进细胞生长作用、免疫增强作用、抗氧化及抗肿瘤作用、参与铁代谢过程等作用,对铁蛋白在临床及食品工业中的应用作了分析。 展开更多

关键词 乳铁蛋白 分子结构 功能 基因 重组

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响应面法优化花椒油树脂的超声提取工艺 被引量：13

5

作者 邵杰 宋瑞雯 +3 位作者 王改玲 孙晓侠 钱时权 陶志杰 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第24期329-331,共3页

以花椒为研究对象,用花椒油树脂提取率为衡量提取工艺指标。在前期单因素实验研究的基础上,选取液固比、乙醇浓度、超声输出功率为影响因素,油树脂提取率为响应值,利用Box-Benhnken中心组合设计原理和响应面分析法,研究各自变量及其交... 以花椒为研究对象,用花椒油树脂提取率为衡量提取工艺指标。在前期单因素实验研究的基础上,选取液固比、乙醇浓度、超声输出功率为影响因素,油树脂提取率为响应值,利用Box-Benhnken中心组合设计原理和响应面分析法,研究各自变量及其交互作用对提取率的影响,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型。在提取温度80℃、超声时间5min的条件下,确定最佳提取条件为液固比12∶1、乙醇浓度56%、超声输出功率210W。在此条件下,花椒油树脂平均提取率为33.60%。与理论预测值34.19%相比,相对误差约为1.73%。说明通过响应面优化后得出的回归方程具有一定的实践指导意义。 展开更多

关键词 花椒 油树脂 超声萃取 响应面法

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榄香烯复合瘤苗主动免疫的抗肿瘤效应 被引量：7

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作者 金梅 施广霞 +2 位作者 朴花 薛冰 钱振超 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1999年第1期50-51,共2页

为研究我们研制的榄香烯(elemene)复合瘤苗主动免疫抗瘤效应的分子机制及其与热休克蛋白(heat shock protein,HSP)的可能关系,本文首先观察、比较厂榄香烯或/和热休克复合瘤苗主动免疫的抗瘤效应.1 材料与方法1.1 主要药品和试剂1%榄香... 为研究我们研制的榄香烯(elemene)复合瘤苗主动免疫抗瘤效应的分子机制及其与热休克蛋白(heat shock protein,HSP)的可能关系,本文首先观察、比较厂榄香烯或/和热休克复合瘤苗主动免疫的抗瘤效应.1 材料与方法1.1 主要药品和试剂1%榄香烯注射液(批号940823,大连金港制药).25%戊二醛(E Merk).RPMI 1640全培基(Gibco RPMI 1640含15 mmol/L Hepes,2 mmol/L谷氨酰胺、常规量抗菌素、20%小牛血清,杭州四季青公司).1.2 实验动物和瘤株BALB/c系小鼠(H-2~d)和异基因型小鼠腹水型肝癌H22(H-2^-)高淋巴转移亚系以及615系小鼠(H-2~k)和其同基因型L615 T淋巴细胞性白血病,均由本室常规传代、保种.实验动物体重20～26g,按体重分类后随机分组,每组20只,雌雄各半.1.3 展开更多

关键词 榄香烯 复合瘤苗 主动免疫 抗肿瘤

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鱼类趋化因子基因的研究 被引量：8

7

作者 赫崇波 王强 +2 位作者 刘卫东 周遵春 徐晓虹 《水产科学》 CAS 北大核心 2006年第7期367-370,共4页

关键词 鱼类 趋化因子 先天免疫 基因

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东北地区大豆种质资源的RAPD聚类分析 被引量：11

8

作者 苏乔 刘文哲 +2 位作者 吴军 安利佳 孙百增 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期184-188,共5页

对东北地区不同类型大豆共３２份材料进行了ＲＡＰＤ分析，并应用ＰＳＢＡＰＣ２软件按照最远法构建了聚类图。结果表明，东北不同地区的栽培大豆各以较近的关系聚在一起，基本反映了大豆品种生态类型的地理分布。野生种（Ｇ．ｓｏ... 对东北地区不同类型大豆共３２份材料进行了ＲＡＰＤ分析，并应用ＰＳＢＡＰＣ２软件按照最远法构建了聚类图。结果表明，东北不同地区的栽培大豆各以较近的关系聚在一起，基本反映了大豆品种生态类型的地理分布。野生种（Ｇ．ｓｏｊａ）和半野生种（Ｇ．ｇｒａｃｉｌｉｓ）大豆可以聚为一类，但二者与栽培大豆（Ｇ．ｍａｘ）明显分开，故初步认为与野生种的亲缘关系较近，或应归类到野生种中。 展开更多

关键词 大豆 RAPD 种质资源 聚类分析

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人表皮生长因子(hEGF)基因合成及在枯草杆菌BS9920中分泌表达 被引量：5

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作者 易庆 王关林 方宏筠 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第1期47-50,共4页

采用 PCR技术人工合成了一段长约 1 75 bp的人表皮生长因子 ( h EGF)的基因片段 .为了便于克隆 ,在该片段的 5′端设计了 Pst 的酶切位点及与 p US1 86载体 signal sequence相连接的碱基部分 ,在 3′端设计了 Hind 的酶切位点及终止密码... 采用 PCR技术人工合成了一段长约 1 75 bp的人表皮生长因子 ( h EGF)的基因片段 .为了便于克隆 ,在该片段的 5′端设计了 Pst 的酶切位点及与 p US1 86载体 signal sequence相连接的碱基部分 ,在 3′端设计了 Hind 的酶切位点及终止密码子 .经 DNA测序分析 ,合成的片段与已发表的 h EGF在序列上完全一致 ;之后将其克隆至枯草杆菌分泌型质粒载体p US1 86上 ,构建重组载体 p USE并转化一株枯草杆菌突变菌株 BS992 0感受态细胞 ;以 PCR法快速筛选重组菌落 ,RIA检测结果表明 BS992 0阳性转化子能够表达和分泌 h 展开更多

关键词 枯草杆菌 人表皮生长因子 基因表达 PCR技术 基因合成 酶切位点 尿抑胃素 多肽

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榄香烯或/和热休克对肿瘤细胞凋亡的影响 被引量：3

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作者 金梅 胡景慧 +2 位作者 吴志华 朴花 钱振超 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2003年第2期133-133,共1页

关键词 榄香烯 热休克 肿瘤细胞 影响 细胞凋亡

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不同保果方式对串番茄品种果穗整齐度及产量的影响 被引量：5

11

作者 王五宏 冯辉 +1 位作者 徐娜 吴志刚 《种子》 CSCD 北大核心 2007年第10期15-17,共3页

研究了花序电动振动辅助授粉、PCPA蘸花处理及自然授粉对串番茄ST 02、ST 03、ST 04的果穗整齐度和产量的影响。结果表明,电动振动辅助授粉和蘸花处理较自然授粉明显提高了果穗的整齐度和产量,且蘸花处理的产量最高,操作最为便捷。

关键词 串番茄 人工辅助授粉 产量 品质

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果树基因工程研究进展及展望 被引量：17

12

作者 王关林 方宏筠 《中国果树》 北大核心 2002年第3期43-47,49,共6页

关键词 果树 基因工程 研究进展 遗传 品种改良

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花生中辅酶Q_(10)的提取工艺及含量测定 被引量：3

13

作者 王改玲 宋瑞雯 +1 位作者 陶志杰 孙晓侠 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期236-239,共4页

花生中富含辅酶Q10,以高效液相色谱法测量的辅酶Q10含量为指标,系统研究了利用超声波细胞破碎仪从花生中提取辅酶Q10时不同提取条件对其含量的影响。结果表明:4个因素对提取率影响大小的顺序为:提取功率>提取时间>单次辐射时间>... 花生中富含辅酶Q10,以高效液相色谱法测量的辅酶Q10含量为指标,系统研究了利用超声波细胞破碎仪从花生中提取辅酶Q10时不同提取条件对其含量的影响。结果表明:4个因素对提取率影响大小的顺序为:提取功率>提取时间>单次辐射时间>料液比,其中提取功率和提取时间对花生中辅酶Q10的提取率有极显著影响。最佳工艺参数为:提取功率400 W,提取时间15 min,单次辐射时间为6.0 s/5.0,料液比为1∶6,在此条件下花生中辅酶Q10的提取率为92.4μg/g。 展开更多

关键词 花生 辅酶Q10 高效液相色谱法

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牛SLC27A1基因SNPs筛选及其与中国荷斯坦奶牛产奶性状的关联分析 被引量：4

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作者 吕延飞 魏彩虹 +7 位作者 张莉 路国彬 刘开东 陆健 孙丹 张世芳 柳楠 杜立新 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第23期12471-12475,共5页

[目的]对牛SLC27A1基因进行SNPs筛选并与中国荷斯坦奶牛的产奶性状进行关联分析,以期发现对中国荷斯坦奶牛产奶性状有显著影响的SNP位点。[方法]根据性能测定记录选取48头中国荷斯坦奶牛,提取血样DNA,组成2个DNA池,用于SNPs筛选,采用PCR... [目的]对牛SLC27A1基因进行SNPs筛选并与中国荷斯坦奶牛的产奶性状进行关联分析,以期发现对中国荷斯坦奶牛产奶性状有显著影响的SNP位点。[方法]根据性能测定记录选取48头中国荷斯坦奶牛,提取血样DNA,组成2个DNA池,用于SNPs筛选,采用PCR-SSCP和克隆测序方法对DNA池进行SLC27A1基因SNPs筛选。针对发现的SNP位点,采用PCR-RFLP方法对另外231头中国荷斯坦奶牛进行群体基因型检测,采用SAS(8.02)GLM过程对各基因型与产奶性状进行关联分析。[结果]在exon3发现T112C位点,在3‘UTR发现G64A位点,T112C为同义突变;经PCR-RFLP检测,发现在T112C位点存在TT、TC、CC3种基因型,G64A位点存在GG、GA、AA3种基因型。2个位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态。T112C位点的CC型个体的产奶量极显著高于TC型个体(P<0.01),3种基因型对乳蛋白率和乳脂率影响均不显著(P>0.05),乳蛋白率呈现CC>TC>TT的趋势,乳脂率呈现TT>TC>CC的趋势;G64A位点3种基因型对产奶量、乳蛋白率、乳脂率的影响均不显著(P>0.05),但产奶量呈现GA>GG>AA的趋势,乳蛋白率和乳脂率呈现AA>GG>GA的趋势。[结论]该基因T112C位点与产奶量性状有一定的关联性,通过提高CC基因型频率有望提高中国荷斯坦奶牛的产奶量,SLC27A1基因可作为调控中国荷斯坦奶牛产奶量的候选基因,同时为该基因的标记辅助育种和进一步研究奠定了良好基础。 展开更多

关键词 SLC27A1基因 SNPS PCR-SSCP PCR-RFLP 产奶性状

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鸟类线粒体DNA结构特点及在鸟类研究中的应用 被引量：3

15

作者 刘铸 杨春文 +2 位作者 金建丽 金志民 戴鹏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期42-47,共6页

介绍了鸟类mtDNA的结构和鸟类mtDNA作为分子标记的特点,并综述了mtDNA作为分子标记在鸟类的种间系统发生关系及分类、鸟类分子钟、地理分布区的推断和种群遗传多样性的研究中应用现状。

关键词 鸟类 线粒体DNA 分子标记

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鸟类消化系统形态学研究进展 被引量：4

16

作者 刘铸 杨春文 +2 位作者 金建丽 金志民 戴鹏 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第7期3506-3507,3518,共3页

从消化道形态结构与食性、食物质量、能量、生态类型等方面的关系,对国内外鸟类消化系统形态学研究现状进行综述,并对未来研究工作进行展望,以期为相关研究者提供科学的借鉴。

关键词 鸟类 消化系统 形态学

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辽东湾斑海豹(Phoca largha)线粒体D-loop区异质型研究初探 被引量：2

17

作者 高祥刚 孙凡越 +3 位作者 李云峰 鹿志创 韩家波 赫崇波 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期248-261,276,共15页

采用PCR技术和DNA克隆测序技术,随机测定了3头斑海豹mtDNA控制区(D-loop区)CSB-3上、下游1000 bp左右的序列,每头斑海豹任选14个克隆菌斑进行测序,结果所得序列均无重复,得到42个单倍型。结合GenBank已发表的斑海豹mtDNA控制区序列(Phoc... 采用PCR技术和DNA克隆测序技术,随机测定了3头斑海豹mtDNA控制区(D-loop区)CSB-3上、下游1000 bp左右的序列,每头斑海豹任选14个克隆菌斑进行测序,结果所得序列均无重复,得到42个单倍型。结合GenBank已发表的斑海豹mtDNA控制区序列(Phoca largha,AM181031),通过ClustalX1.83、MEGA3.1和FastPCRv3.6等生物信息学软件进行序列比对,发现我国珍稀保护动物斑海豹个体内线粒体DNA(mtDNA)的控制区CSB-3之后存在异质型现象,且存在数目不等的串联重复序列。从分子水平进行了不同类型重复序列变化规律的研究,初探了mtDNA控制区异质型在斑海豹中的存在情况。 展开更多

关键词 斑海豹 MTDNA控制区 串联重复序列 异质型

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双点突变核糖核酸酶抑制因子在毕赤酵母中的表达及对抗氧化能力的影响 被引量：1

18

作者 吴毓 赵宝昌 +3 位作者 王继红 赵鹏 吴妍宁 崔秀云 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期249-254,共6页

人胎盘核糖核酸酶抑制因子(HRI)是一种存在于细胞浆中的 50 kDa的酸性蛋白质,富含亮氨酸和半胱氨酸。作为胞浆蛋白可保护细胞不受外来的胰RNase的侵袭。HRI有32个半胱氨酸残基,且多数半胱氨酸残基是成对的并在序列上相连。文章用丙氨酸... 人胎盘核糖核酸酶抑制因子(HRI)是一种存在于细胞浆中的 50 kDa的酸性蛋白质,富含亮氨酸和半胱氨酸。作为胞浆蛋白可保护细胞不受外来的胰RNase的侵袭。HRI有32个半胱氨酸残基,且多数半胱氨酸残基是成对的并在序列上相连。文章用丙氨酸同时取代 cys328/cys329,并将此双突变的 HRI 的 cDNA 片段构建于质粒pPIC9K,电击转化入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,进行分泌型表达。对表达产物进行亲和层析纯化及抗氧化活性检测。实验结果表明,双点突变后的HRI对RNase A的亲和力几乎没有影响,但其抗氧化能力却增加 7~9倍。此种抗氧化能力的提高可能是因为在cys328 cys329之间不能形成二硫键而稳定了HRI的三维结构所致。 展开更多

关键词 核糖核酸酶抑制因子 定点突变 毕赤酵母 半胱氨酸 二硫键

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辽东湾斑海豹遗传多样性的AFLP分析 被引量：1

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作者 赫崇波 高祥刚 +3 位作者 孙凡越 鹿志创 马志强 韩家波 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第S1期347-351,共5页

利用AFLP标记技术对辽东湾斑海豹的遗传多样性进行分析。采用7对AFLP引物对斑海豹3个群体(按不同采样年份分类)43个个体扩增共得到241个位点,3个群体内的多态位点比例为80.45%～95.85%,总多态位点比例为99.59%。群体的香农(Shannon)多... 利用AFLP标记技术对辽东湾斑海豹的遗传多样性进行分析。采用7对AFLP引物对斑海豹3个群体(按不同采样年份分类)43个个体扩增共得到241个位点,3个群体内的多态位点比例为80.45%～95.85%,总多态位点比例为99.59%。群体的香农(Shannon)多样性指数为0.3817～0.4716,群体间的遗传距离在0.1742～0.4023之间。2007年群体的多态位点比例、Shannon多样性指数均高于2006年群体,2005年群体处于中等水平。用NTSYS软件进行个体聚类及UPGMA方法构建的群体系统树,发现3个群体的个体基本随机聚到一起,界限不十分明显,说明3年的群体差异不明显,甚至可以认为它们是混合群体。结果表明,斑海豹群体遗传多样性水平较低,遗传结构趋于简单化,且存在较强的基因交流。 展开更多

关键词 斑海豹 遗传多样性 AFLP分析

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吴屯杨再生体系的建立

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作者 王颖 刘明国 +2 位作者 金华 闫艳华 姜国斌 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第2期95-97,共3页

以吴屯杨叶片为材料,探讨了不同消毒时间、不同激素以及不同部位叶片对吴屯杨叶片再生的影响,建立了吴屯杨叶片再生体系。试验表明:外植体最佳消毒时间为7 min,叶片分化不定芽的最佳培养基为MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.15 mg/L,抽茎培养基以M... 以吴屯杨叶片为材料,探讨了不同消毒时间、不同激素以及不同部位叶片对吴屯杨叶片再生的影响,建立了吴屯杨叶片再生体系。试验表明:外植体最佳消毒时间为7 min,叶片分化不定芽的最佳培养基为MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.15 mg/L,抽茎培养基以MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.15 mg/L+GA31.0 mg/L为最佳,最佳生根培养基为1/2MS+IBA0.2 mg/L+NAA0.03 mg/L。 展开更多

关键词 吴屯杨 不定芽 再生体系

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