南方红豆杉内生真菌Bionectria sp.的分离、鉴定及代谢产物活性研究 被引量：17

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作者 余艳 胡昌华 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期131-135,共5页

从南方红豆杉树皮中分离到30株内生真菌,结合形态学和ITS-5.8S rDNA序列两种鉴定方法,确定其中1株(XH004)为生赤壳属(Bionectria)真菌,这是目前世界上首次从红豆杉科植物中分离到该属内生真菌.通过抑菌实验、细胞毒实验、TLC检测和HPCL... 从南方红豆杉树皮中分离到30株内生真菌,结合形态学和ITS-5.8S rDNA序列两种鉴定方法,确定其中1株(XH004)为生赤壳属(Bionectria)真菌,这是目前世界上首次从红豆杉科植物中分离到该属内生真菌.通过抑菌实验、细胞毒实验、TLC检测和HPCL检测证明XH004代谢产物具有明显的抗菌和杀细胞作用,且极可能含有紫杉醇或紫杉醇类似物. 展开更多

关键词 南方红豆杉 内生真菌 生赤壳属 紫杉醇

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美伐他汀产生菌桔青霉表观遗传调控基因RpdA的克隆及生物信息学解析 被引量：1

2

作者 宋璨 周峰 胡昌华 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期160-165,共6页

为从表观遗传调控的角度对美伐他汀产生菌桔青霉进行分子操作和遗传育种,克隆桔青霉表观遗传调控基因组蛋白去乙酰化酶基因RpdA,对多种真菌的组蛋白去乙酰化酶编码基因序列比较分析,设计简并引物,以桔青霉cDNA和DNA为模板,结合3-race... 为从表观遗传调控的角度对美伐他汀产生菌桔青霉进行分子操作和遗传育种,克隆桔青霉表观遗传调控基因组蛋白去乙酰化酶基因RpdA,对多种真菌的组蛋白去乙酰化酶编码基因序列比较分析,设计简并引物,以桔青霉cDNA和DNA为模板,结合3-race技术,克隆获取RpdA基因的全长序列,并对其蛋白结构进行生物信息学分析.研究发现:RpdA基因长2 072bp(GenBank登录号:KC417298),含4个外显子和3个内含子,cDNA开放阅读框长为1 092bp(GenBank登录号:KC417296),编码639个氨基酸,蛋白结构显示了较为保守的组蛋白去乙酰化酶ClassI家族结构特征. 展开更多

关键词 表现遗传 组蛋白去乙酰化酶 基因克隆 桔青霉

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玫瑰孢链霉菌基因组挖掘研究进展

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作者 叶磊鑫 胡昌华 廖国建 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2020年第5期411-417,共7页

玫瑰孢链霉菌是重要抗生素达托霉素的产生菌。基因组挖掘发现该菌具有丰富的次级代谢产物合成潜力,激活沉默次级代谢产物生物合成基因簇,发现了10多种具有多种生物活性的次级代谢产物。本文回顾了玫瑰孢链霉菌次级代谢产物的研究进展,... 玫瑰孢链霉菌是重要抗生素达托霉素的产生菌。基因组挖掘发现该菌具有丰富的次级代谢产物合成潜力,激活沉默次级代谢产物生物合成基因簇,发现了10多种具有多种生物活性的次级代谢产物。本文回顾了玫瑰孢链霉菌次级代谢产物的研究进展,以及激活这些沉默生物合成基因簇的研究策略。这些研究为其他链霉菌基因组挖掘提供了有效的思路和方法学参考。 展开更多

关键词 基因组挖掘 玫瑰孢链霉菌 沉默基因簇 肽基因组学

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西罗莫司酯化物对肾癌细胞系786-0的抑制作用及其机制初探 被引量：3

4

作者 胡昌华 李彦杰 +2 位作者 刘海洋 袁雪 邹祥 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期1-6,共6页

目的:研究西罗莫司酯化物(Temsirolimus)对肾癌细胞786-0增殖与凋亡的影响,并探讨分子作用机制.方法:采用显微镜形态学观察和MTT法检测细胞增殖抑制;流式细胞仪分析用药48h后肾癌细胞周期变化和细胞凋亡率;Western免疫印迹法检测P70S6K,... 目的:研究西罗莫司酯化物(Temsirolimus)对肾癌细胞786-0增殖与凋亡的影响,并探讨分子作用机制.方法:采用显微镜形态学观察和MTT法检测细胞增殖抑制;流式细胞仪分析用药48h后肾癌细胞周期变化和细胞凋亡率;Western免疫印迹法检测P70S6K,4EBP-1蛋白水平表达变化.结果:西罗莫司酯化物作用786-0细胞的IC50=3.31μmol/L;给药48h后,细胞明显阻滞于G0/G1期,G2/M期细胞比例减少,细胞凋亡率增加;肾癌786-0细胞中P70S6K和4EBP-1蛋白的磷酸化水平明显下降.结论:西罗莫司酯化物能显著抑制肾癌细胞786-0的细胞增殖作用,阻滞细胞周期于G0/G1期且诱导细胞凋亡,其机制可能与P70S6K和4EBP-1磷酸化相关. 展开更多

关键词 西罗莫司酯化物 肾癌细胞 增殖抑制 细胞凋亡 细胞周期 P70S6K 4EBP 1

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南方红豆杉内生放线菌的分离鉴定和次级代谢潜力评估 被引量：2

5

作者 罗红丽 关菲菲 +4 位作者 沈兰 黄长武 李丹 胡昌华 廖国建 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期93-97,共5页

目的以南方红豆杉茎和叶为材料分离内生放线菌,并对分离菌株进行分类、抗菌活性和次级代谢产物合成相关基因开展研究。方法样品经严格的表面消毒,选用3种培养基分离南方红豆杉内生放线菌;分离菌株通过形态观察和16S RNA序列分析进行分... 目的以南方红豆杉茎和叶为材料分离内生放线菌,并对分离菌株进行分类、抗菌活性和次级代谢产物合成相关基因开展研究。方法样品经严格的表面消毒,选用3种培养基分离南方红豆杉内生放线菌;分离菌株通过形态观察和16S RNA序列分析进行分类鉴定;使用琼脂移块法测试分离菌株的抗菌活性;通过PCR检测分离菌株的PKS-I/NRPS、卤化酶和P450酶基因。结果从3个样品中获得了6株内生放线菌,属于链霉菌属(Streptomyces)和小单孢菌属(Micromonospora)。部分分离菌株具有抗菌活性,其中1株对耐药金黄色葡萄球菌有拮抗活性,6株具有NRPS基因,2株具有PKS-I基因,1株具有P450酶基因和卤化酶基因。生物信息学分析表明,卤化酶和P450基因与Complestatin生物合成簇中相应基因有高达81%和95%一致性,暗示内生放线菌具有合成这种重要抗HIV活性化合物的潜力。结论南方红豆杉作为一种重要药用植物,其内生放线菌以链霉菌和小单孢菌为主,有很好的合成次级代谢产物的潜力,值得进一步深入研究。 展开更多

关键词 红豆杉 内生放线菌 PCR筛查 Complestatin

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截短侧耳素溶剂提取工艺的优化 被引量：3

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作者 张翔 黄宇琪 +1 位作者 邹祥 胡昌华 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期151-155,共5页

采用溶剂法提取截短侧耳素产生菌Pleurotus mutilis烘焙菌体中的截短侧耳素。筛选适宜的提取溶剂,在单因素实验的基础上通过正交实验对提取过程中的多个影响因素进行了筛选和优化,确定提取工艺为:液料比4∶1(mL:g)的醋酸丁酯为提取溶剂... 采用溶剂法提取截短侧耳素产生菌Pleurotus mutilis烘焙菌体中的截短侧耳素。筛选适宜的提取溶剂,在单因素实验的基础上通过正交实验对提取过程中的多个影响因素进行了筛选和优化,确定提取工艺为:液料比4∶1(mL:g)的醋酸丁酯为提取溶剂,提取时间为10 min,振摇转速为140 r/min,提取次数为3次,截短侧耳素的提取率为94.56%。工艺条件简单、稳定可行,具有实际应用价值。 展开更多

关键词 截短侧耳素 提取 优化 正交实验

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基因组定向编辑技术的专利概述及其对高校创新创业教育的启示 被引量：2

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作者 樊祥宇 林燕萍 +1 位作者 廖国建 谢建平 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1258-1262,共5页

锌指核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN)、转录激活子样效应因子核酸酶(Transcription activator-like effector nucleases,TALEN)和成簇规律间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/C... 锌指核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN)、转录激活子样效应因子核酸酶(Transcription activator-like effector nucleases,TALEN)和成簇规律间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/Cas9核酸酶是三个主要的基因组定向编辑技术。它们在基因功能研究、物种改造和疾病预防与基因治疗等各个领域都有重大科学研究及应用价值。每个技术背后都有过和有着激烈的知识产权归属之争。本文归纳总结这三大基因组定向编辑技术的知识产权,以期为研发具有自主知识产权的基因组编辑工具提供一些借鉴,也为现阶段高校创新创业教育提供启示。 展开更多

关键词 ZFN TALEN CRISPR/Cas 知识产权

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结肠癌细胞系LHX6基因启动子甲基化检测与分析 被引量：1

8

作者 刘海洋 李彦杰 +1 位作者 吴宗辉 胡昌华 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期172-176,共5页

为探讨结肠癌细胞SW480和HT-29中LHX6基因启动子区CpG岛的甲基化状态,分析去甲基化与结肠癌细胞增殖的关系,用甲基化特异性PCR对SW480和HT-29细胞的LHX6基因启动子区域CpG岛进行检测,对比经5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-A... 为探讨结肠癌细胞SW480和HT-29中LHX6基因启动子区CpG岛的甲基化状态,分析去甲基化与结肠癌细胞增殖的关系,用甲基化特异性PCR对SW480和HT-29细胞的LHX6基因启动子区域CpG岛进行检测,对比经5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理后两株细胞该区域甲基化水平之间的差异,用(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,噻唑蓝)(MTT)法检测5-Aza-CdR对其增殖的影响,观察5-Aza-CdR对细胞形态的影响.结果表明,SW480与HT-29细胞的LHX6基因启动子区域CpG岛均存在甲基化,分别为41.9%和28.6%;经5-Aza-CdR处理后,SW480甲基化率由41.4%降低到39.7%,HT-29甲基化率由27.4%降低至18.5%(p<0.05);两株细胞的增殖明显被抑制.结肠癌细胞系SW480和HT-29的LHX6基因均存在不同程度的甲基化,研究结果为LHX6可能作为结肠癌肿瘤检测的新分子靶标奠定基础. 展开更多

关键词 LHX6基因 结肠癌细胞 5-AZA-CDR 甲基化特异性PCR

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以CRISPR/Cas9专利为例的知识产权教育 被引量：1

9

作者 樊祥宇 廖国建 谢建平 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1269-1273,共5页

随着世界经济全球化步伐的加快,知识产权的重要性凸显。高校是知识产权意识和能力教育的主战场。我国现有知识产权教育与专业的密切程度急需提高。文章结合全球首个CRISPR/Cas9专利权的授权公布和作者授课经历,提出了一种新的知识产权... 随着世界经济全球化步伐的加快,知识产权的重要性凸显。高校是知识产权意识和能力教育的主战场。我国现有知识产权教育与专业的密切程度急需提高。文章结合全球首个CRISPR/Cas9专利权的授权公布和作者授课经历,提出了一种新的知识产权普及教育模式,将知识产权教育分为启蒙教育和深入研修两个阶段。第一阶段将知识产权教育与专业课课程无缝整合,后一阶段主要针对有志于发展成为知识产权专业人才的学生。我们认为这种教学模式的推广将解决现有知识产权教育中教材的欠缺以及教师的不足,有利于知识产权意识在生物医学等理工科学生的普及。遗传学在生物医学中具有特别重要的地位,因此,文章以遗传学最近的热点技术之一——基于CRISPR/Cas的基因组编辑新工具为例进行阐述。CRISPR/Cas从最初的微生物遗传学发现到成为基因组编辑的重要工具,贯穿了基础研究转化为关键技术的全过程,可以很好体现生物医学相关的知识产权教育的精髓。 展开更多

关键词 知识产权教学 生物医学教育 CRISPR/Cas系统

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P-gp蛋白功能抑制剂高通量筛选模型的建立与应用 被引量：4

10

作者 郎廷元 晏菊芳 胡昌华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1396-1399,共4页

目的建立高通量筛选模型,寻找疗效好、毒副作用小的肿瘤多药耐药逆转剂。方法以罗丹明123荧光染料胞内积累实验为基础,建立基于细胞水平的高通量筛选模型,对480个中药样品进行了高通量筛选,并采用剂量—活性依赖实验和抗性增敏实验验证... 目的建立高通量筛选模型,寻找疗效好、毒副作用小的肿瘤多药耐药逆转剂。方法以罗丹明123荧光染料胞内积累实验为基础,建立基于细胞水平的高通量筛选模型,对480个中药样品进行了高通量筛选,并采用剂量—活性依赖实验和抗性增敏实验验证阳性样品。结果模型Z′因子为0.72,筛选得到2个中药样品。结论建立的P-gp蛋白功能抑制剂高通量筛选模型稳定性好,灵敏度高,筛选得到的2种中药样品具有较好的P-gp蛋白功能抑制活性。 展开更多

关键词 P糖蛋白 抑制剂 高通量筛选 中药样品

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美伐他汀产生菌橘青霉原生质体的制备与再生 被引量：2

11

作者 张文琦 胡昌华 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期117-120,共4页

确定美伐他汀产生菌橘青霉(Penicillium citrinum)的原生质体的制备及再生的最佳条件.通过正交实验设计的方法,确定了接种量约108个孢子时,于85 mL YPL-20液体培养基中25℃,210 rpm,培养60 h,0.5%纤维素酶和蜗牛酶等比例混合酶液,在30... 确定美伐他汀产生菌橘青霉(Penicillium citrinum)的原生质体的制备及再生的最佳条件.通过正交实验设计的方法,确定了接种量约108个孢子时,于85 mL YPL-20液体培养基中25℃,210 rpm,培养60 h,0.5%纤维素酶和蜗牛酶等比例混合酶液,在30℃酶解2 h,以蔗糖为高渗稳定剂的PGA培养基,原生质体再生形成率可达42.45%.本结果为深入研究橘青霉菌株的原生质体诱变、构建基因工程菌和提高美伐他汀产量奠定基础. 展开更多

关键词 橘青霉 原生质体 正交设计 形成率

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玫瑰孢链霉菌SWU2010遗传转化体系的建立和优化

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作者 马廷梅 柳青 +2 位作者 王磊 胡昌华 廖国建 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期153-158,共6页

玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus)是近几年备受关注的抗生素—达托霉素(Daptomycin)的产生菌,具有重要的研究价值和应用前景.目的:为了对Streptomyces roseosporus中的功能基因进行研究,构建达托霉素高产菌株,需要建立一种稳定... 玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus)是近几年备受关注的抗生素—达托霉素(Daptomycin)的产生菌,具有重要的研究价值和应用前景.目的:为了对Streptomyces roseosporus中的功能基因进行研究,构建达托霉素高产菌株,需要建立一种稳定、高效的遗传转化体系.方法:以pSET152和pKC1139为载体,探索优化了S.roseosporus SWU2010与大肠杆菌进行接合转移的条件,以此为基础将体外构建的ploxP质粒和带有cre重组酶基因的质粒pALcre先后转入S.roseosporus SWU2010中.结果:AS-1培养基是接合转移的最佳培养基;孢子的预萌发条件为50℃热激10 min,转化效率达10-6～10-5.另外,抗生素覆盖时间16～18 h效果最好.利用已建立的接合转移体系,成功将两侧带有loxP位点的安普霉素抗性基因成功敲除.实验结果为进一步研究达托霉素的生物合成基因和对达托霉素进行组合生物合成改造奠定了基础. 展开更多

关键词 玫瑰孢链霉菌 接合转移 pKC1139 pSET152 CRE LOXP

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