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芥子碱通过抑制Notch2/Notch3-Hes1信号通路改善哮喘小鼠肺组织炎症和黏液高分泌
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作者 唐红梅 王孝芸 +7 位作者 王剑 张沄 王志彬 袁谢芳 王星 徐国锋 覃纲 李月蛟 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第2期286-292,共7页
目的探讨芥子碱对哮喘小鼠肺组织炎症和黏液分泌的影响。方法8周龄的雌性C57BL/6J小鼠随机分为对照(Control)组、卵清蛋白(OVA)组、芥子碱(Sinapine)组和Sinapine+OVA组。采用OVA+氢氧化铝[Al(OH)3]混悬液腹腔注射致敏和OVA滴鼻激发制... 目的探讨芥子碱对哮喘小鼠肺组织炎症和黏液分泌的影响。方法8周龄的雌性C57BL/6J小鼠随机分为对照(Control)组、卵清蛋白(OVA)组、芥子碱(Sinapine)组和Sinapine+OVA组。采用OVA+氢氧化铝[Al(OH)3]混悬液腹腔注射致敏和OVA滴鼻激发制备哮喘小鼠模型;滴鼻前1 h对Sinapine+OVA组和Sinapine组小鼠腹腔注射Sinapine溶液,OVA组和Control组小鼠给予等量0.9%氯化钠溶液。最后一次OVA滴鼻激发24 h后,HE染色观察肺组织炎症情况;PAS染色评估肺组织黏液分泌情况;荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肺组织白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、黏蛋白5ac(Muc5ac)以及Notch通路关键基因缺口受体(Notch)1、Notch2、Notch3和hes家族bHLH转录因子1(Hes1)mRNA表达水平;Western blot法检测Notch1、Notch2、Notch3和Hes1蛋白表达水平。结果与Control组比较,OVA组小鼠肺组织炎症评分和PAS评分升高(P<0.001),IL-4、IL-5、IL-13、TNF-α和Muc5ac mRNA表达水平增加(P<0.05),Notch通路中Notch2、Notch3和Hes1的mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.001),而Notch1 mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义;与OVA组比较,Sinapine+OVA组小鼠肺组织炎症评分和PAS评分降低(P<0.001),IL-4、IL-5、IL-13、TNF-α和Muc5ac mRNA表达下降(P<0.05),Notch通路中Notch2、Notch3和Hes1的mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),而Notch1 mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义。结论芥子碱可改善哮喘小鼠肺组织炎症和黏液高分泌,其作用机制可能与抑制Notch2/Notch3-Hes1信号通路有关。 展开更多
关键词 芥子碱 哮喘 Notch通路 促炎细胞因子 黏蛋白5AC 气道炎症 黏液高分泌
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和厚朴酚对哮喘小鼠肺组织炎症反应的干预作用及其机制 被引量:14
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作者 秦超 戴曦 +3 位作者 杨小琼 王荣丽 王星 李国平 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期214-220,共7页
目的:探讨和厚朴酚(HNK)对哮喘小鼠肺组织炎症反应的影响,阐明其干预作用及相关机制。方法:选取健康雌性C57BL/6J小鼠20只,随机分为对照组、模型组、地塞米松(DXM)组和HNK组,每组5只。采用鸡卵清蛋白(OVA)联合氢氧化铝[Al(OH)3]悬液腹... 目的:探讨和厚朴酚(HNK)对哮喘小鼠肺组织炎症反应的影响,阐明其干预作用及相关机制。方法:选取健康雌性C57BL/6J小鼠20只,随机分为对照组、模型组、地塞米松(DXM)组和HNK组,每组5只。采用鸡卵清蛋白(OVA)联合氢氧化铝[Al(OH)3]悬液腹腔注射致敏和OVA滴鼻激发构建哮喘小鼠模型,在激发前30 min分别对DXM组和HNK组小鼠予以腹腔注射DXM和HNK溶液,模型组小鼠予以等量生理盐水。处死小鼠后取小鼠肺组织,HE染色观察评估肺组织病理形态表现;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),行快速迪夫染色,观察炎性细胞浸润程度;ELISA法检测各组小鼠血清中白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素17(IL-17)水平,比色法检测各组小鼠肺组织匀浆中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,Western blotting法检测各组小鼠肺组织中磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、核因子κB(NF-κB)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和H2AX组蛋白(γH2Ax)表达水平,检测各组小鼠肺组织中γH2Ax免疫荧光强度。结果:与对照组比较,模型组小鼠气道上皮细胞脱落坏死数量明显增多,气道管壁增厚及气道旁炎症细胞浸润程度明显增加;与模型组比较,DXM组和HNK组小鼠上述表现减轻,而HNK组和DXM组小鼠肺组织病理改变表现相似。与对照组比较,模型组小鼠血清中IL-4、IL-6和IL-17水平升高(P<0.05);与模型组比较,DXM组和HNK组小鼠血清中IL-4、IL-6和IL-17水平降低(P<0.05);而HNK组小鼠血清中IL-4、IL-6和IL-17水平与DXM组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,模型组小鼠肺组织匀浆中MDA水平升高(P<0.05),而SOD和GSH-Px活性降低(P<0.05);与模型组比较,DXM组和HNK组小鼠肺组织匀浆中MDA水平降低(P<0.05),而SOD和GSH-Px活性升高(P<0.05);HNK组小鼠MDA水平和SOD及GSH-Px活性与DXM组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,模型组小鼠肺组织中p-JNK、NF-κB、Caspase-3和γH2Ax蛋白表达水平升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,DXM组和HNK组小鼠肺组织中p-JNK、NF-κB、Caspase-3和γH2Ax蛋白表达水平降低(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05);HNK组小鼠肺组织中p-JNK、NF-κB、Caspase-3、γH2Ax和Bcl-2蛋白表达水平与DXM组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,模型组小鼠肺组织中γH2Ax免疫荧光强度明显增强;与模型组比较,DXM组和HNK组小鼠肺组织中γH2Ax免疫荧光强度减弱,HNK组小鼠γH2Ax免疫荧光强度与DXM组接近。结论:HNK可在一定程度上抑制哮喘小鼠的肺组织损伤及炎症反应,其机制可能与其抑制氧化应激反应及DNA损伤有关。 展开更多
关键词 和厚朴酚 哮喘 氧化应激 DNA损伤 地塞米松
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转位蛋白配体XBD173对香烟烟雾提取物诱导小鼠肺炎症反应的减轻作用及其机制 被引量:1
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作者 高兴洪 唐红梅 +4 位作者 李月蛟 王孝芸 王星 袁谢芳 吴敏 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期272-279,共8页
目的:探讨转位蛋白(TSPO)配体XBD173对香烟烟雾提取物(CSE)诱导小鼠肺炎症反应和巨噬细胞M1型极化的影响,阐明其相关分子机制。方法:18只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、CSE组和CSE+XBD173组,CSE组小鼠采取20μL CSE滴鼻,CSE+XBD17... 目的:探讨转位蛋白(TSPO)配体XBD173对香烟烟雾提取物(CSE)诱导小鼠肺炎症反应和巨噬细胞M1型极化的影响,阐明其相关分子机制。方法:18只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、CSE组和CSE+XBD173组,CSE组小鼠采取20μL CSE滴鼻,CSE+XBD173组小鼠给予相同剂量CSE和腹腔注射10 mg·kg^(-1)XBD173。采用HE染色和PAS染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现。培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、CSE组和CSE+XBD173组,CSE给药浓度为1%,XBD173给药浓度为4 mg·L^(-1),对照组给予相同体积的二甲基亚砜;刺激18 h后,流式细胞术检测各组RAW264.7细胞中CD80、CD86、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和活性氧(ROS)表达水平及细胞凋亡率,Western blotting法检测各组RAW264.7细胞中核因子κB/p65(NF-κB/p65)和磷酸化NF-κB/p65(p-NF-κB/p65)蛋白表达水平。采用siRNA敲低RAW264.7细胞中TSPO表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平。结果:动物实验,与对照组比较,CSE组小鼠肺组织中炎症细胞数量明显增多、支气管管壁增厚;与CSE组比较,XBD173+CSE组小鼠肺组织中炎症细胞减少,支气管管壁变薄。细胞实验,与对照组比较,CSE组RAW264.7细胞中CD80、CD86、iNOS和ROS表达水平明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),IL-6和TNF-αmRNA表达水平升高(P<0.05),p-NF-κB/p65蛋白表达水平明显升高(P<0.05),NF-κB/p65蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与CSE组比较,XBD173+CSE组RAW264.7细胞中CD80、CD86、iNOS和ROS表达水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),IL-6和TNF-αmRNA表达水平明显降低(P<0.05),p-NF-κB/p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。siRNA敲低RAW264.7细胞TSPO蛋白表达后,各组细胞中IL-6和TNF-αmRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:XBD173可减轻CSE引起的小鼠肺炎症反应,抑制CSE诱导的巨噬细胞M1极化,其机制可能与NF-κB蛋白有关。 展开更多
关键词 转位蛋白 XBD173 烟草提取物 巨噬细胞 核因子ΚB
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桔梗元参汤对过敏性哮喘小鼠气道炎症和黏液分泌的影响及其机制 被引量:1
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作者 唐红梅 李月蛟 +3 位作者 王星 王志彬 袁谢芳 王孝芸 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期10-17,共8页
目的:探讨桔梗元参汤(JGYST)对过敏性哮喘小鼠气道组织炎症和黏液分泌的影响,并阐明其相关作用机制。方法:40只雄性C57BL/J小鼠随机分为对照组、 JGYST组、卵清蛋白(OVA)组及OVA+JGYST组。OVA组和OVA+JGYST组小鼠用50μg OVA腹腔注射致... 目的:探讨桔梗元参汤(JGYST)对过敏性哮喘小鼠气道组织炎症和黏液分泌的影响,并阐明其相关作用机制。方法:40只雄性C57BL/J小鼠随机分为对照组、 JGYST组、卵清蛋白(OVA)组及OVA+JGYST组。OVA组和OVA+JGYST组小鼠用50μg OVA腹腔注射致敏,每周2次,致敏后连续7 d用OVA 20μg滴鼻激发哮喘;OVA+JGYST组小鼠每次OVA激发前1 h用JGYST 200μL灌胃,共灌胃7次;对照组用相同剂量的PBS缓冲液腹腔注射、滴鼻和灌胃;JGYST组小鼠用相同剂量PBS缓冲液腹腔注射和滴鼻,用相同剂量JGYST灌胃。采用HE染色和过碘酸-雪夫(PAS)染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现并计算炎症评分和PAS评分,流式细胞术检测各组小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、辅助性T淋巴细胞1 (Th1)、辅助性T淋巴细胞2 (Th2)和树突状细胞(DCs)数及成熟DCs百分率和活性氧(ROS)水平,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组小鼠肺组织中白细胞介素4 (IL-4)、白细胞介素10 (IL-10)和肿瘤坏死因子α (TNF-α)mRNA表达水平。结果:HE染色和PAS染色,对照组小鼠气道和肺泡结构完整、无炎症细胞浸润,无黏液分泌;与对照组比较,OVA组小鼠气道组织周围有大量炎症细胞浸润,炎症评分和PAS评分明显升高(P<0.01);与OVA组比较,JGYST组和OVA+JGYST组小鼠气道组织炎症细胞浸润减少,炎症评分和PAS评分明显降低(P<0.01)。流式细胞术检测,与对照组比较,OVA组小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞、Th2和DCs数均明显增加(P<0.05或P<0.01),成熟DCs百分率和ROS水平均明显升高(P<0.01);与OVA组比较,JGYST组和OVA+JGYST组小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞、 Th2和DCs数均明显减少(P<0.01),成熟DCs百分率和ROS水平均明显降低(P<0.01)。RT-qPCR法检测,与对照组比较,OVA组小鼠肺组织中IL-4、IL-10和TNF-α mRNA表达水平升高(P<0.01);与OVA组比较,JGYST组和OVA+JGYST组小鼠肺组织中IL-4和TNF-α mRNA表达水平降低(P<0.01),IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.01)。结论:JGYST可以减轻过敏性哮喘小鼠气道组织炎症和黏液分泌,其作用机制可能与其减少Th2细胞和DCs数量,降低ROS水平和促炎细胞因子表达水平同时升高抗炎细胞因子表达水平有关。 展开更多
关键词 桔梗元参汤 哮喘 气道炎症 活性氧 细胞因子
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脓毒症并发ARDS危险因素和预测指标的Meta分析 被引量:3
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作者 靳亚丽 揭致乾 范贤明 《西南大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第3期168-178,共11页
对脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的危险因素和预测指标进行Meta分析,通过计算机检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普网、SinoMed、PubMed、EMBASE、Web of science和Cochrane library数据库关于脓毒症并发ARDS的相关文献,... 对脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的危险因素和预测指标进行Meta分析,通过计算机检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普网、SinoMed、PubMed、EMBASE、Web of science和Cochrane library数据库关于脓毒症并发ARDS的相关文献,检索时间为2016年1月1日至2024年8月15日,英文主题检索词为Sepsis、Acute respiratory distress syndrome、Risk factors、Prevalence、Incidence、Mortality、Biomarkers等,采用Stata SE 15.1软件进行统计分析,共收集到35篇文献,涉及脓毒症并发ARDS患者3715人。结果显示:脓毒症并发ARDS的发病率为28.8%。在危险因素分析中发现,年龄、吸烟史、肺部感染、合并慢性阻塞性肺疾病(COPD)、胰腺炎、休克、APACHEⅡ评分、SOFA评分、血清乳酸以及血清HMGB1均与脓毒症并发ARDS的发生显著相关。在预测指标方面,APACHEⅡ评分、SOFA评分、C反应蛋白(CRP)及PaO_(2)/FiO_(2)显示出显著的预测效能。综合表明:脓毒症并发ARDS发病率较高,多种危险因素均可增加该病的发生风险。 展开更多
关键词 脓毒症 急性呼吸窘迫综合征 危险因素 发病率 META分析
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屋尘螨诱导的自噬通过β-catenin-Snail信号通路影响气道上皮屏障功能
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作者 曾紫菱 王星 +10 位作者 唐红梅 王志彬 马宁 李月蛟 王孝芸 袁谢芳 徐国锋 王巧巧 张汶 段佳瑶 张沄 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第9期1309-1318,共10页
目的探讨屋尘螨(house dust mites,HDM)诱导的细胞自噬通过β-catenin-Snail信号途径影响气道上皮紧密连接的机制。方法使用不同时间点(0、3、6、12、24、48 h)和不同浓度的HDM(0、40、100、200μg/mL)刺激人支气管上皮细胞(16HBE),筛... 目的探讨屋尘螨(house dust mites,HDM)诱导的细胞自噬通过β-catenin-Snail信号途径影响气道上皮紧密连接的机制。方法使用不同时间点(0、3、6、12、24、48 h)和不同浓度的HDM(0、40、100、200μg/mL)刺激人支气管上皮细胞(16HBE),筛选合适的刺激浓度和刺激时间。使用氧化应激抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)、细胞自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)、HDM以及它们联合刺激16HBE细胞。使用mCherry-EGFP-LC3B、Beclin-1-siRNA、ATG14-siRNA慢病毒转染细胞,然后用NAC和HDM刺激细胞。免疫荧光检测气道上皮细胞中自噬相关蛋白LC3B和紧密连接相关蛋白Occludin、ZO-1的表达水平;采用DCFH-DA检测各组细胞中活性氧(ROS)水平;Western blot检测Occludin、ZO-1、LC3B、Beclin-1、ATG5、ATG14、P62、Snail、β-catenin、p-β-catenin蛋白表达水平。结果免疫荧光结果显示,与对照组比较,200μg/mL HDM刺激可以显著诱导细胞自噬(P<0.05),增加LC3B蛋白表达水平(P<0.05),同时促进ROS水平(P<0.05);与HDM组相比,HDM+3-MA组、HDM+ATG14-si组和HDM+Beclin-1-si组的紧密连接相关蛋白Occludin、ZO-1的表达水平明显增高(P<0.05),HDM+NAC组ROS水平明显下降,且LC3B蛋白表达水平明显降低。Western blot实验结果显示,与HDM组相比,3-MA和自噬蛋白低表达珠(Beclin-1-si、ATG14-si)可以减轻HDM诱导的细胞自噬(P<0.05),同时抑制HDM诱导的Snail、p-β-catenin表达上调,改善HDM诱导的Occludin、ZO-1降低(P<0.05);与HDM组相比,NAC+HDM组LC3BⅠ向LC3BⅡ的转化减少(P<0.001),Snail、p-β-catenin、Beclin-1、ATG14蛋白水平明显降低(P<0.01),而Occludin、ZO-1蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论HDM通过引起细胞自噬影响气道上皮细胞间的紧密连接,其机制可能与β-catenin-Snail信号通路有关。 展开更多
关键词 屋尘螨 细胞自噬 气道上皮细胞 紧密连接
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白藜芦醇对中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织炎症的抑制作用及其机制 被引量:6
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作者 冉琴 张雷 +6 位作者 张沄 邱玉环 袁谢芳 王孝芸 唐红梅 王星 李国平 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期897-902,共6页
目的:探讨白芦藜醇对中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织炎症的抑制作用,并阐明其作用机制。方法:选取18只C57BL/6J雌性小鼠,采用脂多糖(LPS)+卵白蛋白(OVA)联合致敏方法建立中性粒细胞性哮喘小鼠模型,随机分为模型组(LPS+OVA组)、白藜芦醇组(... 目的:探讨白芦藜醇对中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织炎症的抑制作用,并阐明其作用机制。方法:选取18只C57BL/6J雌性小鼠,采用脂多糖(LPS)+卵白蛋白(OVA)联合致敏方法建立中性粒细胞性哮喘小鼠模型,随机分为模型组(LPS+OVA组)、白藜芦醇组(Res组,于激发前2h灌胃30mg·kg^(-1)白藜芦醇)和N-乙酰半胱氨酸组(NAC组,于激发前2h灌胃3mmol·kg^(-1) N-乙酰半胱氨酸);同时选取6只同周龄小鼠作为正常对照组(PBS组)。于乙酰甲胆碱雾化期间观察各组小鼠的行为学变化,采用肺功能仪分析小鼠气道高反应(AHR),光学显微镜观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和炎症细胞,HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现,酶联免疫法(ELISA)检测各组小鼠BALF上清中白细胞介素17(IL^(-1)7)水平,特异性荧光探针DCF-DA染色分析肺组织活性氧(ROS)水平,丙二醛(MDA)试剂盒检测肺组织匀浆中MDA水平。结果:与PBS组比较,LPS+OVA组小鼠Penh值、细胞总数、炎症细胞、气道炎症及评分均明显升高(P<0.05或P<0.01),BALF上清中IL^(-1)7水平明显升高(P<0.01),肺组织内ROS荧光强度明显升高,肺匀浆中MDA水平明显升高(P<0.01)。与LPS+OVA组比较,Res组和NAC组小鼠Penh值、细胞总数、炎症细胞、气道炎症及评分明显降低(P<0.05或P<0.01),BALF上清中IL^(-1)7水平均明显降低(P<0.05),肺组织内ROS荧光强度降低,肺匀浆中MDA水平明显降低(P<0.01)。结论:白藜芦醇能够有效抑制中性粒细胞性哮喘小鼠肺组织中的炎症反应,其机制可能与白藜芦醇抑制体内发生的氧化应激反应有关。 展开更多
关键词 中性粒细胞性哮喘 白藜芦醇 炎症 氧化应激
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烟曲霉对人支气管上皮细胞DNA损伤和IL-33表达的影响及其机制
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作者 王侨 曾紫菱 +8 位作者 王星 马宁 王志彬 徐国锋 袁谢芳 王孝芸 李月蛟 唐红梅 张沄 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1205-1216,共12页
目的:探讨烟曲霉(Af)对人支气管上皮细胞DNA损伤和白细胞介素33(IL-33)表达的影响,阐明其相关作用机制。方法:采用不同浓度(1、5和10 mg·L^(-1))Af刺激支气管上皮BEAS-2B细胞,筛选合适的刺激浓度。采用N-乙酰半胱氨酸(NAC)和Af刺激... 目的:探讨烟曲霉(Af)对人支气管上皮细胞DNA损伤和白细胞介素33(IL-33)表达的影响,阐明其相关作用机制。方法:采用不同浓度(1、5和10 mg·L^(-1))Af刺激支气管上皮BEAS-2B细胞,筛选合适的刺激浓度。采用N-乙酰半胱氨酸(NAC)和Af刺激BEAS-2B细胞时,将细胞分为对照组、Af组、NAC组和Af+NAC组。采用DNA双链断裂修复抑制剂NU7441和Af刺激BEAS-2B细胞时,将细胞分为对照组、Af组、NU7441组和Af+NU7441组。采用彗星实验检测各组细胞彗星尾部DNA百分率,采用免疫荧光法检测各组细胞中DNA损伤相关蛋白磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)表达水平,采用2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测各组细胞中活性氧(ROS)水平,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中IL-33、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)和白细胞介素25(IL-25)mRNA表达水平,采用Western blotting法检测各组细胞中磷酸化核因子κB(p-NF-κB)、磷酸化共济失调毛细血管扩张突变(p-ATM)和γH2AX蛋白表达水平。结果:与对照组比较,1 mg·L^(-1) Af组细胞中彗星尾部DNA百分率和γH2AX表达水平差异无统计学意义(P>0.05),5 mg·L^(-1) Af组细胞中彗星尾部DNA百分率和γH2AX表达水平明显升高(P<0.01);与5 mg·L^(-1) Af组比较,10 mg·L^(-1) Af组细胞中彗星尾部DNA百分率和γH2AX表达水平均明显升高(P<0.01)。与对照组比较,1 mg·L^(-1) Af组支气管上皮细胞中ROS水平明显升高(P<0.05);与1 mg·L^(-1) Af组比较,5 mg·L^(-1) Af组细胞中ROS水平明显升高(P<0.01);与5 mg·L^(-1) Af组比较,10 mg·L^(-1) Af组细胞中ROS水平明显升高(P<0.05)。NAC处理后,与Af组比较,Af+NAC组细胞中彗星尾部DNA百分率(P<0.01)、γH2AX表达水平(P<0.05)和ROS水平(P<0.01)明显降低;NU7441处理后,与Af组比较,Af+NU7441组细胞中彗星尾部DNA百分率明显升高(P<0.01),γH2AX表达水平明显升高(P<0.01)。RT-qPCR检测,NAC处理后,与对照组比较,Af组细胞中IL-33 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);与Af组比较,Af+NAC组细胞中IL-33 mRNA表达水平明显降低(P<0.05);NU7441处理后,与Af组比较,Af+NU7441组细胞中IL-33 mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。Westernblotting法检测,NAC处理后,与对照组比较,Af组细胞中p-NF-κB、p-ATM和γH2AX蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与Af组比较,Af+NAC组细胞中p-NF-κB、p-ATM和γH2AX蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。NU7441处理后,与Af组比较,Af+NU7441组细胞中p-NF-κB、p-ATM和γH2AX蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:Af通过引起人支气管上皮细胞DNA损伤促进细胞中IL-33表达,其机制可能与激活ATM/NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 烟曲霉 DNA损伤 白细胞介素33 支气管上皮细胞 活性氧
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恒河猴源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性和致病性 被引量:4
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作者 徐文星 安微 +8 位作者 王乃福 王绥家 王建华 刘忠梅 晁哲 王昱 高慎阳 李丹丹 徐国锋 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期69-73,共5页
为了查明引起海口市某进境实验动物隔离场3例恒河猴死亡的原因,本试验分别采集3只恒河猴的心脏、肝脏、脾脏、肺脏和淋巴结样本,进行细菌分离,通过细菌形态特征、显微镜镜检、生化鉴定、16S核糖体RNA(16S rRNA)序列分析对分离菌进行病... 为了查明引起海口市某进境实验动物隔离场3例恒河猴死亡的原因,本试验分别采集3只恒河猴的心脏、肝脏、脾脏、肺脏和淋巴结样本,进行细菌分离,通过细菌形态特征、显微镜镜检、生化鉴定、16S核糖体RNA(16S rRNA)序列分析对分离菌进行病原学鉴定;采用纸片扩散法(K-B法)测定分离菌的耐药表型;采用玻片凝集法测定分离菌的血清型;采用动物回归试验分析分离菌的致病性。结果显示,从3只恒河猴上各分离鉴定出1株大肠杆菌,命名为H01株(分离自脾脏)、H02株(分离自淋巴结)和H03株(分离自肝脏);3株大肠杆菌对12种常用抗菌药物产生不同程度耐药,并且都呈现多重耐药,其中对阿莫西林、庆大霉素、氯霉素、氟苯尼考和复方新诺明表现为耐药,仅对阿莫西林-克拉维酸钾、阿米卡星和多黏菌素B表现敏感;玻片凝集试验显示,H01株的血清型为O8,H02株的血清型为O3,H03株的血清型为O9;动物回归试验显示,3株分离菌都是强毒株。本试验为实验动物恒河猴源大肠杆菌病的防治提供参考依据。 展开更多
关键词 恒河猴 大肠杆菌 分离鉴定 耐药性 血清型 致病性
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Lyn激酶对肺腺癌EGFR下游信号通路的调节作用研究 被引量:2
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作者 戴曦 李国平 +3 位作者 杨小琼 王孝芸 伍娟 梁丽娴 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期43-49,共7页
背景与目的:目前,酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKI)应用于存在表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)突变的患者虽然取得了重大突破,但大约70%的患者仍难以避免地出现TKI耐药,治疗效果不尽人意。... 背景与目的:目前,酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKI)应用于存在表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)突变的患者虽然取得了重大突破,但大约70%的患者仍难以避免地出现TKI耐药,治疗效果不尽人意。本研究通过研究Lyn激酶对EGFR突变肺腺癌细胞株的调节作用,探讨Lyn激酶对EGFR下游信号通路的影响,以期寻找新的分子靶点,提高肺癌的临床诊治水平。方法:采用慢病毒转染方法构建Lyn激酶高表达的EGFR突变细胞株Hcc827(Hcc827-Lyn+/+),通过裸鼠荷瘤实验、MTT实验、克隆实验、侵袭实验及蛋白[质]印迹法(Western blot),检测高表达Lyn激酶的Hcc827细胞株移植于裸鼠皮下后的生长状况,以及Lyn激酶高表达Hcc827细胞株在体外培养时增殖、克隆、侵袭能力及EGFR下游信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与Hcc827细胞株比较,Hcc827-Lyn+/+细胞株在裸鼠荷瘤实验中表现出更强的增殖能力,但各组荷瘤裸鼠均未见明显远处转移。体外培养时,Hcc827-Lyn+/+细胞株增殖、克隆及侵袭能力强于Hcc827细胞株。Hcc827-Lyn+/+细胞株EGFR及其下游PI3K/AKT、JAK/STAT信号通路相关蛋白表达上调。结论:Lyn激酶高表达能通过EGFR下游信号通路上调EGFR突变肺腺癌细胞株的增殖、侵袭能力。 展开更多
关键词 Lyn激酶 肺腺癌 表皮生长因子受体 裸鼠 增殖 侵袭
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鼻内滴注烟草提取物和脂多糖建立慢性阻塞性肺疾病小鼠模型的评价 被引量:9
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作者 梁小波 吴德洪 +3 位作者 王星 张沄 王孝芸 李国平 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1454-1458,I0022,共6页
目的:建立鼻内滴注烟草提取物(CSE)和脂多糖(LPS)制备慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠模型,并探讨其可行性。方法:24只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组和模型组,每组12只,鼻内滴注CSE和LPS建立COPD小鼠模型,测定2组小鼠支气管肺泡灌洗液(BA... 目的:建立鼻内滴注烟草提取物(CSE)和脂多糖(LPS)制备慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠模型,并探讨其可行性。方法:24只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组和模型组,每组12只,鼻内滴注CSE和LPS建立COPD小鼠模型,测定2组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、中性粒细胞数和巨噬细胞数,观察2组小鼠肺组织病理学表现并测定PAS阳性细胞数、肺泡平均内衬间隔(MLI)和肺泡破坏指数(DI),Western blotting法检测2组小鼠肺组织中E-cadherin、Vimentin和α-SMA蛋白表达水平。结果:实验4和6周时模型组小鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞数和巨噬细胞数明显高于对照组(P<0.01),模型组小鼠肺组织出现典型粘液高分泌和肺气肿改变;实验4和6周时模型组小鼠PAS阳性细胞数、肺泡MLI(P<0.01)和DI(P<0.01)明显高于对照组;与对照组比较,实验4和6周时模型组小鼠肺组织中E-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.01),Vimentin和α-SMA蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:采用鼻内滴注CSE和LPS的方法可在较短时间内建立COPD小鼠模型。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 疾病模型 动物 烟草提取物 脂多糖 支气管肺泡灌洗液
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短链脂肪酸对脂多糖诱导的大鼠急性呼吸窘迫综合征的影响及其作用机制 被引量:4
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作者 向小琴 张婷婷 +2 位作者 钟江姗 尹国芳 范贤明 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期561-568,共8页
目的探讨短链脂肪酸(SCFAs)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的影响及作用机制。方法20只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、低剂量SCFAs组与高剂量SCFAs组,每组5只,对照组及模型组予以生理盐水,低、高剂... 目的探讨短链脂肪酸(SCFAs)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的影响及作用机制。方法20只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、低剂量SCFAs组与高剂量SCFAs组,每组5只,对照组及模型组予以生理盐水,低、高剂量SCFAs组分别予以低剂量SCFAs(乙酸钠300 mg/kg,丙酸钠100 mg/kg,丁酸钠100 mg/kg)和高剂量SCFAs(乙酸钠600 mg/kg,丙酸钠200 mg/kg,丁酸钠200 mg/kg),提前灌胃7 d。随后对照组大鼠气管内灌注生理盐水,其他三组通过气管内灌注LPS(5 mg/kg)构建大鼠ARDS模型。造模12 h后处死大鼠,检测动脉血氧分压(PaO_(2))、肺湿/干重比(W/D),HE染色观察肺组织病理变化,ELISA法检测血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-10的浓度,Western blotting检测肺组织中c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p-JNK、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、p-ERK、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、p-p38 MAPK、核因子κB(NF-κB)p65、p-NF-κB p65蛋白的表达,免疫组化检测结肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达。结果与对照组比较,模型组PaO_(2)降低,肺W/D、肺损伤病理评分升高,血清及BALF中TNF-α、IL-6、IL-10浓度明显增高,肺组织中p-JNK/JNK、p-ERK/ERK、p-p38 MAPK/p38 MAPK和p-NF-κB p65/NF-κB p65比值明显升高,结肠组织中ZO-1、Occludin蛋白相对表达量明显降低(P<0.05)。与模型组比较,低、高剂量SCFAs组PaO_(2)升高,肺W/D、肺损伤病理评分降低,血清及BALF中TNF-α、IL-6浓度下降,IL-10浓度进一步升高,肺组织中p-JNK/JNK、p-ERK/ERK、p-p38 MAPK/p38 MAPK和p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低,结肠组织中ZO-1、Occludin蛋白相对表达量增高(P<0.05)。与低剂量SCFAs组比较,高剂量SCFAs组上述指标改善更明显(P<0.05)。结论SCFAs具有调节免疫与炎症的作用,能有效减轻LPS诱导的大鼠ARDS,其机制可能与通过增强肠道屏障功能、抑制MAPK和NF-κB信号通路活化,从而减少致炎因子释放、增加抗炎因子生成有关。 展开更多
关键词 急性呼吸窘迫综合征 脂多糖 短链脂肪酸 MAPK/NF-κB信号通路
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二氧化硅通过调节人气道上皮细胞自噬促进MUC5AC表达 被引量:1
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作者 王孝芸 唐红梅 +5 位作者 王星 马宁 李月蛟 袁谢芳 徐国锋 张沄 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期303-308,共6页
目的 探讨二氧化硅(SiO_(2))对人气道上皮细胞株(Beas-2b)黏蛋白5AC(MUC5AC)表达的影响及其作用机制。方法 用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基在37℃和5%CO_(2)的培养箱培养Beas-2b。使用NC-siRNA、ATG5-siRNA、BECN1-siRNA及mCherry-EGF... 目的 探讨二氧化硅(SiO_(2))对人气道上皮细胞株(Beas-2b)黏蛋白5AC(MUC5AC)表达的影响及其作用机制。方法 用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基在37℃和5%CO_(2)的培养箱培养Beas-2b。使用NC-siRNA、ATG5-siRNA、BECN1-siRNA及mCherry-EGFP-LC3等慢病毒转染Beas-2b。各转染组细胞用相应慢病毒(MOI=20)转染12 h后换新鲜培养基,并用嘌呤霉素(1μg/mL)进行筛选,获得稳定转染细胞株。用SiO_(2)(100μg/mL)刺激前述稳定转染细胞株24 h,并设PBS对照组。免疫荧光和免疫印迹检测MUC5AC、自噬相关蛋白5(ATG5)、BECN1和微管相关蛋白轻链3(LC3)的蛋白水平;共聚焦显微镜观察人气道上皮细胞自噬情况。结果 SiO_(2)组的MUC5AC、ATG5、BECN1和LC3Ⅱ的表达高于对照组(P <0.05);ATG5和BECN1敲减细胞株中,SiO_(2)刺激后MUC5AC和LC3Ⅱ的表达均低于对照组(P <0.05)。结论 SiO_(2)可通过调节人气道上皮细胞自噬促进MUC5AC表达,其作用机制与ATG5和BECN1信号途径相关。 展开更多
关键词 二氧化硅 自噬 黏蛋白5AC ATG5 BECN1
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Lyn对屋尘螨诱导的人支气管上皮细胞中MUC5AC表达的影响及其机制
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作者 王孝芸 蓝楠 +3 位作者 唐红梅 袁谢芳 王星 李国平 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期211-215,共5页
目的:探讨Lyn对屋尘螨(HDM)诱导的人支气管上皮细胞中MUC5AC表达的影响,并初步阐明其可能的相关作用机制。方法:选取人支气管上皮16HBE细胞,将其分为PBS组(给予PBS)和HDM组(给予1μg·L-1 HDM),采用脂质体转染法将LynsiRNA分别转至... 目的:探讨Lyn对屋尘螨(HDM)诱导的人支气管上皮细胞中MUC5AC表达的影响,并初步阐明其可能的相关作用机制。方法:选取人支气管上皮16HBE细胞,将其分为PBS组(给予PBS)和HDM组(给予1μg·L-1 HDM),采用脂质体转染法将LynsiRNA分别转至PBS组和HDM组细胞。构建人MUC5AC启动子荧光素酶报告基因,采用Promega双荧光素酶报告基因试剂盒检测相对荧光素酶活性(RLU),采用免疫荧光法检测16HBE细胞中MUC5AC的表达,并在共聚焦显微镜下观察。采用Western blotting法检测16HBE细胞中STAT6的表达水平。结果:双荧光素酶报告基因检测,HDM组16HBE细胞中MUC5AC启动子的RLU高于PBS组(P<0.05);与未干扰时比较,LynsiRNA干扰后HDM组RLU明显升高(P<0.05)。免疫荧光法检测,HDM组MUC5AC表达水平高于PBS组(P<0.05);与未干扰时比较,LynsiRNA干扰后HDM组MUC5AC表达水平升高(P<0.05)。Western blotting法检测,LynsiRNA干扰后,HDM组细胞中STAT6表达水平升高(P<0.05)。结论:Lyn缺失能增加人支气管上皮细胞中MUC5AC的表达,其机制可能与Lyn调控STAT6信号途径有关。 展开更多
关键词 LYN 屋尘螨 人支气管上皮细胞 MUC5AC STAT6
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CD83重组蛋白的原核表达、复性纯化及多克隆抗体制备
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作者 马宁 李兴杰 +3 位作者 姜鸿宇 徐国锋 王星 张宗德(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第20期2506-2511,共6页
目的:利用原核表达系统表达、纯化CD83蛋白,制备CD83多克隆抗体。方法:构建CD83胞外结构域的原核表达质粒,利用TOP10F’菌株表达,使用IPTG诱导并寻找最佳条件;采用0.3%SKL将包涵体溶解变性,透析复性后通过GST亲和层析纯化GST-CD83蛋白;... 目的:利用原核表达系统表达、纯化CD83蛋白,制备CD83多克隆抗体。方法:构建CD83胞外结构域的原核表达质粒,利用TOP10F’菌株表达,使用IPTG诱导并寻找最佳条件;采用0.3%SKL将包涵体溶解变性,透析复性后通过GST亲和层析纯化GST-CD83蛋白;通过QuickAntibody免疫佐剂免疫SD大鼠制备CD83多克隆抗体,ELISA分析抗体的反应活性和特异性。结果:成功构建重组质粒pGEX-2T-CD83(Met1-Arg133),获得最佳诱导条件:0.2 mmol/L IPTG、25℃、O/N。成功获得CD83重组蛋白,免疫大鼠后获得了特异性及活性较高且效价为1∶104~1∶105的多克隆抗体。结论:获得的CD83重组蛋白及多克隆抗体,为后期深入开展CD83蛋白及CD83抗体的免疫抑制特性研究提供支持。 展开更多
关键词 CD83重组蛋白 原核表达 包涵体复性 多克隆抗体
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维生素B12通过下调自噬增强HDM处理的人气道上皮细胞中ZO-1的表达
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作者 李月蛟 蓝楠 +5 位作者 王星 唐红梅 王志彬 张沄 袁谢芳 王孝芸 《实用医学杂志》 2025年第21期3345-3351,共7页
目的探讨维生素B12(VB12)对屋尘螨(HDM)处理的人气道上皮细胞株(Beas-2b)中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)表达的影响及其作用机制。方法用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养人气道上皮细胞株Beas-2b。将Beas-2b分为四组:Control、VB12、HDM、VB... 目的探讨维生素B12(VB12)对屋尘螨(HDM)处理的人气道上皮细胞株(Beas-2b)中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)表达的影响及其作用机制。方法用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养人气道上皮细胞株Beas-2b。将Beas-2b分为四组:Control、VB12、HDM、VB12+HDM。使用NC-siRNA、ATG5-siRNA、BECN1-siRNA和mcherry-EGFP-LC3等慢病毒转染Beas-2b。各转染组细胞用相应慢病毒(MOI=20)转染细胞12 h后换新鲜培养基,并用嘌呤霉素(1μg/mL)进行筛选,获得稳定转染细胞株。分别用VB12(20μg/mL)和HDM(50μg/mL)刺激细胞24 h。免疫荧光和蛋白质印迹检测ZO-1、自噬相关蛋白5(ATG5)、苄氯素1(BECN1)和微管相关蛋白轻链3(LC3)的蛋白水平。共聚焦显微镜观察人气道上皮细胞自噬情况。结果与Control组比较,HDM组的ZO-1表达降低(P<0.05),而ATG5、BECN1和LC3的表达升高(P<0.05);与HDM组相比,VB12+HDM组ZO-1表达升高(P<0.05),ATG5、BECN1和LC3的表达降低(P<0.01),且自噬体形成减少(P<0.05);ATG5和BECN1敲减细胞株中,HDM处理后ZO-1表达增加(P<0.05)。结论VB12可通过下调自噬增加HDM处理的人气道上皮细胞中ZO-1的表达,其作用机制与ATG5和BECN1信号途径相关。 展开更多
关键词 维生素B12 闭锁小带蛋白-1 自噬 自噬相关蛋白5 苄氯素1
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