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单细胞测序技术及其在心血管研究方面的应用 被引量:1
1
作者 倪潇 李光 《中国心血管病研究》 CAS 2019年第12期1093-1096,共4页
单细胞测序在单个细胞水平研究细胞异质性以及生物多样性。与传统测序研究群体细胞基因的平均变化相比,充分展现了单个细胞间的差异性。近几年来,单细胞测序技术为单个细胞水平研究细胞命运谱系、动态分析细胞异质性、寻找心血管疾病治... 单细胞测序在单个细胞水平研究细胞异质性以及生物多样性。与传统测序研究群体细胞基因的平均变化相比,充分展现了单个细胞间的差异性。近几年来,单细胞测序技术为单个细胞水平研究细胞命运谱系、动态分析细胞异质性、寻找心血管疾病治疗的新靶点、明确干细胞移植标准等提供了有力的帮助。本文介绍了单细胞测序的主要类型,并结合其在心血管研究方面的应用进行了综述。 展开更多
关键词 单细胞测序 心血管系统 细胞异质性 细胞命运谱系 干细胞移植
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膜电位对人牙囊干细胞成骨分化的作用及其电生理机制研究
2
作者 顾煜婕 杨宜丹 +6 位作者 廖思琪 王荷一 周蕊 兰小蓉 徐晓梅 左东川 曾锦 《口腔医学研究》 北大核心 2025年第5期413-419,共7页
目的:探讨膜电位对人牙囊干细胞(human dental follicle stem cells,hDFCs)成骨分化的作用及其电生理机制。方法:组织块结合酶消化法分离、培养hDFCs。构建载有人Kir2.1钾通道特异短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)基因序列的慢病毒... 目的:探讨膜电位对人牙囊干细胞(human dental follicle stem cells,hDFCs)成骨分化的作用及其电生理机制。方法:组织块结合酶消化法分离、培养hDFCs。构建载有人Kir2.1钾通道特异短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)基因序列的慢病毒载体。采用慢病毒转染结合Kir2.1钾通道特异阻断剂(4-甲氧基苄基-1-萘基甲基-胺盐,ML133),通过成骨分化诱导、茜素红染色、定量逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-qPCR)以及全细胞膜片钳实验方法,观察药物阻断Kir2.1钾通道的功能或抑制Kir2.1钾通道的表达对hDFCs成骨分化能力以及膜电位的影响。降低细胞外钾离子的浓度(1 mmol/L),通过钙离子成像观察促使膜电位超极化对细胞内钙离子浓度的影响。采用钙池操纵钙通道(store-operated Ca^(2+)channels,SOCs)阻断剂(La^(3+))以及内质网钙泵阻断剂毒胡萝卜素(Thapsigargin,TG),通过钙离子成像鉴定SOCs通道在hDFCs介导的钙离子内流,并评估其在膜电位超极化导致hDFCs胞内钙离子浓度变化中的作用。结果:茜素红染色、RT-qPCR以及全细胞膜片钳结果显示,药物阻断Kir2.1钾通道的功能或抑制Kir2.1钾通道的表达能够抑制hDFCs成骨矿化能力、成骨相关基因(RUNT相关转录因子2、骨钙素)的表达,并能够逆转hDFCs成骨分化过程中发生的膜电位超极化。钙成像结果显示:(1)SOCs通道介导hDFCs的钙离子内流。(2)促使膜电位超极化能够引起hDFCs胞内钙离子浓度的升高,该作用可被药物阻断Kir2.1钾通道的功能或抑制Kir2.1钾通道的表达抑制;可通过移除细胞外钙离子抑制;可被SOCs通道阻断剂抑制。结论:Kir2.1钾通道介导的膜电位超极化参与hDFCs成骨分化的调控,其机制与hDFCs胞内钙离子浓度的升高有关,而SOCs通道介导的钙离子内流在这一过程中起到重要作用。 展开更多
关键词 人牙囊细胞 成骨分化 Kir2.1通道 膜电位超极化 钙离子
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蛋白激酶C对高血压状态下血管平滑肌收缩的调节作用及机制的研究进展 被引量:4
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作者 周远群 杨艳 《四川生理科学杂志》 2018年第4期301-306,共6页
血管平滑肌的舒张与收缩是调节血管外周阻力和血压的重要因素,其功能紊乱可能导致高血压。血管调控剂通过细胞内信号转导通路影响肌球蛋白轻链磷酸化水平,从而调节血管平滑肌的收缩。此过程中蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)是重要调... 血管平滑肌的舒张与收缩是调节血管外周阻力和血压的重要因素,其功能紊乱可能导致高血压。血管调控剂通过细胞内信号转导通路影响肌球蛋白轻链磷酸化水平,从而调节血管平滑肌的收缩。此过程中蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)是重要调节因子。研究发现,血管平滑肌中PKC的表达或活性增加可以引起血管过度收缩以及营养性血管变化,导致血管阻力增加和高血压,且PKC突变可能影响个体对血管反应性的敏感性。本文就PKC对高血压状态下血管平滑肌收缩的调节作用及机制进行阐述。 展开更多
关键词 蛋白激酶C 高血压 血管平滑肌收缩 肌球蛋白轻链
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基于Wnt通路治疗心肌纤维化的药物研究 被引量:2
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作者 孙畅 徐鹏喆 +2 位作者 苏洪于 李丽华 李涛 《中国心血管病研究》 CAS 2024年第4期351-356,共6页
Wnt通路是一条在生物体内发挥关键作用的信号传导途径,调节细胞增殖、发育、分化、再生和胚胎发育,对维持组织正常功能至关重要,也是疾病发展中起关键作用的信号传导通路。过去几十年来,通过对Wnt通路的深入研究,对其机制有更多的了解,... Wnt通路是一条在生物体内发挥关键作用的信号传导途径,调节细胞增殖、发育、分化、再生和胚胎发育,对维持组织正常功能至关重要,也是疾病发展中起关键作用的信号传导通路。过去几十年来,通过对Wnt通路的深入研究,对其机制有更多的了解,在诸多领域中显示出重要的影响力。心肌纤维化是由心肌缺血缺氧导致的一种缺血性心肌病,是各种心脏疾病所表现出的共同病理特征。随着对心肌纤维化的机制的深入研究,已发现Wnt通路在心肌纤维化中起重要作用。近年来大量实验也证实许多临床药物通过Wnt通路可以改善心肌纤维化。了解Wnt通路的基本原理、调控机制以及中药、西药通过Wnt通路对心肌纤维化作用的总结,有助于对许多重要问题的进一步认识,为疾病的治疗与预防提供新的线索。 展开更多
关键词 心肌纤维化 WNT通路 西药 天然提取物 中药
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肌球蛋白轻链磷酸酶靶向亚基1在调节血管张力中的作用的研究进展 被引量:1
5
作者 刘小勤 杨艳 《四川生理科学杂志》 2019年第3期237-241,共5页
肌球蛋白轻链磷酸酶靶向亚基1(Myosin phosphatase target subunit1,MYPT1)可通过其亮氨酸亚型转换和丝氨酸/苏氨酸(Serine/threonine,S/T)可磷酸化位点的磷酸化,调节血管张力。虽然MYPT1调节血管张力的功能研究较多,但针对其具体机制,... 肌球蛋白轻链磷酸酶靶向亚基1(Myosin phosphatase target subunit1,MYPT1)可通过其亮氨酸亚型转换和丝氨酸/苏氨酸(Serine/threonine,S/T)可磷酸化位点的磷酸化,调节血管张力。虽然MYPT1调节血管张力的功能研究较多,但针对其具体机制,目前尚不完全清楚。现就肌球蛋白磷酸酶靶向亚基与调节血管张力有关的结构,疾病下该结构与张力调节的关系进行综述,为血管疾病的研究和治疗提供理论基础。 展开更多
关键词 MYPT1 血管张力 亮氨酸拉链结构 丝氨酸/苏氨酸磷酸化位点 NO/cGMP/PKG
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纳米二氧化硅生物毒性的研究进展 被引量:3
6
作者 刘亚琴(综述) 曹济民(审校) 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2020年第2期220-224,共5页
纳米二氧化硅因为其独特的理化性质而被广泛应用于抗菌剂、分子探针、药物载体等多个领域中。由于纳米材料自身结构和功能的活跃性,其生物安全性近年来也成为毒理学研究的热点。文章综合国内外现有研究报道,从纳米二氧化硅在细胞水平和... 纳米二氧化硅因为其独特的理化性质而被广泛应用于抗菌剂、分子探针、药物载体等多个领域中。由于纳米材料自身结构和功能的活跃性,其生物安全性近年来也成为毒理学研究的热点。文章综合国内外现有研究报道,从纳米二氧化硅在细胞水平和动物水平的毒性作用、影响毒性作用的因素和毒性作用机制进行综述,为纳米二氧化硅的研发、应用和生物安全性提供参考。 展开更多
关键词 纳米二氧化硅 毒性 生物安全性
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中电导钙激活钾通道在细胞迁移中的作用及研究进展
7
作者 蓝婷 徐清波 《四川生理科学杂志》 2020年第4期492-496,共5页
细胞迁移参与个体发育、伤口愈合、免疫反应、癌症发展等多种生理或病理过程。钙激活钾(Calcium-activated potassium,KCa)通道作为钾通道家族中的重要成员,具有维持膜电位、胞内钙稳态和信号传递等作用。KCa通道参与多种细胞迁移过程,... 细胞迁移参与个体发育、伤口愈合、免疫反应、癌症发展等多种生理或病理过程。钙激活钾(Calcium-activated potassium,KCa)通道作为钾通道家族中的重要成员,具有维持膜电位、胞内钙稳态和信号传递等作用。KCa通道参与多种细胞迁移过程,在细胞迁移中的调控机制具有重要临床价值。KCa通道依其单通道电导大小,分为大电导(BKCa)、中电导(IKCa)和小电导(SKCa)三类通道亚型。在细胞迁移相关研究中IKCa通道的报道较多,本文重点综述IKCa通道在细胞迁移中的作用及相关研究进展。 展开更多
关键词 IKCa通道 细胞迁移 增殖 CA^2+
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一种改良的原代大鼠乳鼠心肌细胞分离及培养方法 被引量:6
8
作者 程俊 曾晓荣 +4 位作者 谭晓秋 李鹏云 文静 陈琳琳 杨艳 《四川生理科学杂志》 2016年第4期187-189,共3页
目的:本研究旨在探讨一种经改良后既稳定又高效的分离大鼠乳鼠心肌细胞的原代分离和培养方法,拟建立此种方法,为进一步研究单个心肌细胞上的各种电生理机制等诸多实验提供有利的前提保障。方法:取出生1-3天内SD大鼠心脏,联合应用胰蛋白... 目的:本研究旨在探讨一种经改良后既稳定又高效的分离大鼠乳鼠心肌细胞的原代分离和培养方法,拟建立此种方法,为进一步研究单个心肌细胞上的各种电生理机制等诸多实验提供有利的前提保障。方法:取出生1-3天内SD大鼠心脏,联合应用胰蛋白酶和Ⅱ胶原酶两步消化,离心收集到心肌细胞,差速培养,加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷纯化后得到原代心肌细胞,经高糖DMEM培养,即可得到立体感较强的大鼠乳鼠心肌细胞。结果:联合应用胰蛋白酶和Ⅱ胶原酶两步消化,经过高糖DMEM培养后得到的心肌细胞存活率高、纯度高、折光性好、立体感较强,有节律性搏动。结论:成功建立了一种既简便高效又稳定的分离大鼠乳鼠心肌细胞的方法,为今后研究乳鼠心肌细胞的功能及其基本电生理特性提供良好的单个细胞,可广泛应用于各种心血管疾病的研究中。 展开更多
关键词 乳鼠 心肌细胞
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可诱导稳定表达大电导钙激活钾通道的细胞系构建及蛋白质纯化
9
作者 毛亮 程俊 +4 位作者 黄文俊 谭晓秋 党喜同 曾晓荣 杨艳 《四川生理科学杂志》 2017年第2期55-58,共4页
目的:旨在构建稳定表达人大电导钙激活钾通道(BK_(Ca))的稳定细胞系并对重组蛋白分离纯化。方法:利用基因工程技术将人肠系膜动脉平滑肌BK_(Ca)编码基因克隆到表达载体pcDNA5/FRT/TO/FLAG,并转染Flp-InTMT-RExTM-293宿主细胞,用潮霉素B... 目的:旨在构建稳定表达人大电导钙激活钾通道(BK_(Ca))的稳定细胞系并对重组蛋白分离纯化。方法:利用基因工程技术将人肠系膜动脉平滑肌BK_(Ca)编码基因克隆到表达载体pcDNA5/FRT/TO/FLAG,并转染Flp-InTMT-RExTM-293宿主细胞,用潮霉素B筛选建立稳定表达的单克隆细胞系。BK_(Ca)-pcDNA5-293细胞系经四环素诱导后,用anti-FLAG抗体对表达的BK_(Ca)蛋白质进行纯化。用western blot检测BK_(Ca)通道蛋白质的表达,用单通道膜片钳检测通道的电生理特性。结果:BK_(Ca)-pcDNA5-293细胞系经四环素诱导后表达了高水平的BK_(Ca)-FLAG融合蛋白,BK_(Ca)通道电导值为213.39±9.52pS(n=15,cell-attached)和225.72±10.61pS(n=13,inside-out),BK_(Ca)通道具有典型的大电导特性、电压依赖性、Ca2+依赖性及IbTX敏感性,与在体的人肠系膜动脉平滑肌BK_(Ca)通道具有相同的特征。纯化后的BK_(Ca)蛋白质条带单一,纯度约为89%。结论:成功构建BK_(Ca)-pcDNA5-293细胞系并获得纯化的BK_(Ca)蛋白质,为进一步深入研究通道功能及药物筛选奠定了重要的基础。 展开更多
关键词 稳定表达细胞系 BKCa重组蛋白质 膜片钳
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右美托咪定对乳大鼠心肌细胞线粒体活性氧和细胞凋亡的影响 被引量:1
10
作者 曹露 周丹 +4 位作者 李涛 陈琳琳 谭晓秋 刘力 刘雪茹 《四川生理科学杂志》 2017年第1期6-8,共3页
目的:探讨右美托咪定(Dexmedetomidine,DEX)对线粒体介导的乳大鼠心肌细胞氧化应激通路的作用。方法:取新生乳大鼠(3~4天)的心肌进行原代培养,培养24h后分为对照组(C组)、H_2O_2组(终浓度500μM,H组)、右美托咪定组(5μM DEX,D组)、联... 目的:探讨右美托咪定(Dexmedetomidine,DEX)对线粒体介导的乳大鼠心肌细胞氧化应激通路的作用。方法:取新生乳大鼠(3~4天)的心肌进行原代培养,培养24h后分为对照组(C组)、H_2O_2组(终浓度500μM,H组)、右美托咪定组(5μM DEX,D组)、联合用药组(500μM H_2O_2+5μM DEX,DH组)。各组细胞分别给予相应药物刺激6h,采用流式细胞仪测定活性氧自由基(Reactive oxygen species,ROS)水平及心肌细胞凋亡变化;并通过ELISA法测定各组乳大鼠心肌细胞线粒体介导的凋亡因子Caspase-3,Caspase-9表达的变化。结果:与H_2O_2组相比,DEX明显抑制H_2O_2介导的乳大鼠心肌细胞的ROS水平增加(P<0.05);下调线粒体介导的下游凋亡因子Caspase-3,Caspase-9的表达(P<0.05),从而减少H_2O_2诱导的凋亡(P<0.05)。结论:右美托咪定通过抑制心肌细胞活性氧水平以及下调线粒体介导的Caspase-3和Caspase-9的表达发挥抑制凋亡作用,对心肌细胞有一定的保护作用。 展开更多
关键词 右美托咪定 心肌细胞 活性氧 氧化应激 细胞凋亡
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导管接触溶栓联合Angiojet机械吸栓在伴有髂静脉受压综合征的下肢深静脉血栓形成中的应用 被引量:20
11
作者 冯松林 余皓 +4 位作者 周浩戈 郭剑 吴欣择 李朝阳 施森 《中国心血管病研究》 CAS 2021年第7期657-660,共4页
目的评估导管接触溶栓(CDT)联合Angiojet机械吸栓在伴有髂静脉受压综合征(IVCS)的急性下肢深静脉血栓形成(LEDVT)中的疗效。方法回顾性分析我院2018年12月至2020年8月共计29名LEDVT伴IVCS患者,将CDT联合Angiojet患者作为研究组(n=11),单... 目的评估导管接触溶栓(CDT)联合Angiojet机械吸栓在伴有髂静脉受压综合征(IVCS)的急性下肢深静脉血栓形成(LEDVT)中的疗效。方法回顾性分析我院2018年12月至2020年8月共计29名LEDVT伴IVCS患者,将CDT联合Angiojet患者作为研究组(n=11),单纯CDT患者作为对照组(n=18),分析两组患者下肢肿胀消除率、静脉通畅率、尿激酶使用量和溶栓时间、住院时间及并发症等指标,评估两种治疗方式的效果。结果两组患者中技术成功率100%,研究组与对照组的大腿肿胀消除率为[(87.19±2.46)%和(52.42±3.53)%,P<0.05],小腿肿胀消除率为[(95.45±0.65)%和(86.74±2.14)%,P<0.05],血栓清除率为[(92.89±3.13)%和(82.23±2.93)%,P<0.05],溶栓时间为[(31.13±7.71)h和(81.50±11.77)h,P<0.05],尿激酶量为[(138.00±34.36)×10^(4)U和(296.90±35.68)×10^(4)U,P<0.05],住院时间为[(7.18±0.52)d和(10.33±0.73)d,P<0.05];研究组均出现一过性血红蛋白尿,两组均无急性肾损伤、肺栓塞、出血等并发症发生。结论相比单纯CDT疗效,CDT联合Angiojet机械吸栓在LEDVT伴IVCS患者中具有肿胀消退快、溶栓效率高、溶栓时间短、尿激酶使用少、出血风险低、住院时间短等优点,近期疗效可靠。 展开更多
关键词 深静脉血栓形成 导管接触溶栓 Angiojet机械吸栓
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小G蛋白Rab5对表达在HEK293细胞上的大电导钙激活钾通道的影响 被引量:3
12
作者 周丹 刘雪茹 +3 位作者 李涛 刘力 谭晓秋 刘玉林 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第8期21-24,I0001,共5页
目的探讨小G蛋白Rab5对HEK293细胞大电导钙激活钾通道(BKCa)的影响。方法将对数生长期HEK293细胞,随机分为Control组、Rab5WT组、Rab5CA组和Rab5DN组。采用脂质体转染法进行转染,Control组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和对照质粒pc DNA3.1,R... 目的探讨小G蛋白Rab5对HEK293细胞大电导钙激活钾通道(BKCa)的影响。方法将对数生长期HEK293细胞,随机分为Control组、Rab5WT组、Rab5CA组和Rab5DN组。采用脂质体转染法进行转染,Control组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和对照质粒pc DNA3.1,Rab5WT组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和Rab5WT质粒,Rab5CA组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和Rab5CA质粒,Rab5DN组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和Rab5DN质粒,每组两种质粒总量为4μg,按质量比1∶1共转染至3.5 mm培养皿中。转染72 h、荧光显微镜下观察转染效率在70%以上时,采用膜片钳、Western blotting法和流式细胞术观察Rab5对HEK293细胞BKCa的作用。结果与Control组比较,Rab5WT组、Rab5CA组BKCa全细胞电流密度明显增加,而Rab5DN组明显降低;Rab5WT组、Rab5CA组BKCa膜蛋白的相对表达量明显升高,而Rab5DN组明显降低(P均<0.05);Rab5WT组、Rab5CA组Flag+/GFP+明显增加,而Rab5DN组明显降低(P均<0.05)。结论 Rab5能够明显增加表达在HEK293细胞上的BKCa电流及细胞膜上的表达,并可促进BKCa向质膜的转运过程。 展开更多
关键词 小G蛋白家族 大电导钙激活钾通道 蛋白转运 基因转染
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光学标测技术评价异丙肾上腺素诱导的应激性心肌病小鼠心脏电活动
13
作者 叶珂君 羊军 +6 位作者 刘竹 陈唐葶 周小琳 张瑞 谭晓秋 雷鸣 欧贤红 《中华老年心脑血管病杂志》 北大核心 2022年第4期412-417,共6页
目的 筛选异丙肾上腺素(ISO)诱导应激性心肌病(SIC)模型小鼠的最佳方案,建立光学标测技术评价SIC对小鼠心脏电活动影响的方法。方法 选择6~8月龄雌性C57BL/6J小鼠60只,分为对照组10只,其余50只根据ISO剂量不同分为给药1组,给药2组,给药3... 目的 筛选异丙肾上腺素(ISO)诱导应激性心肌病(SIC)模型小鼠的最佳方案,建立光学标测技术评价SIC对小鼠心脏电活动影响的方法。方法 选择6~8月龄雌性C57BL/6J小鼠60只,分为对照组10只,其余50只根据ISO剂量不同分为给药1组,给药2组,给药3组,给药4组,给药5组,每组10只;另取C57BL/6J小鼠20只,腹腔注射300 mg/kg ISO模型成功的10只作为SIC组。比较各组不同给药时间(6、12 h)对SIC模型小鼠心功能的影响,包括左心室短轴缩短率(LVFS)、LVEF、左心室前壁厚度、左心室后壁厚度、左心室内径。采用光学标测技术检测小鼠心脏动作电位时程复极80%时间(APD80)、传导速度、100%组织激动时间(AT100)评价心脏电活动。结果 给药3组、给药4组ISO诱导SIC模型成功率为60%~70%,明显高于给药1组、给药2组。对照组和SIC组心尖部LVEF和LVFS明显高于心底部,差异有统计学意义(P<0.01);SIC组心尖部和心底部LVEF和LVFS明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。SIC组电刺激时心尖部和心底部APD80较对照组明显延长,差异有统计学意义(P<0.01)。SIC组电刺激时心尖部传导速度明显低于心底部,AT100明显大于心底部,差异有统计学意义(P<0.01);SIC组ISO+电刺激时心尖部传导速度明显低于心底部[(67.84±7.30)ms vs(115.30±5.98)ms,P<0.01],AT100明显大于心底部[(6.67±1.54)ms vs(4.17±0.66)ms,P<0.01]。结论 SIC导致小鼠心底部和心尖部LVEF、LVFS、APD80、传导速度及AT100不均一变化可能是SIC发病机制之一。 展开更多
关键词 异丙肾上腺素 Takotsubo心肌病 动作电位 电刺激 小鼠
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TRPM4通道对人口腔颊黏膜成纤维细胞增殖和迁移的影响
14
作者 王薛藤 聂敏海 +2 位作者 左东川 邓浩 曾锦 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2020年第5期490-495,共6页
目的:验证TRPM4(transient receptor potential melastatin-4)在口腔颊黏膜成纤维细胞的表达,探讨其对人口腔颊黏膜成纤维细胞迁移与增殖中的作用。方法:收集人正常颊黏膜组织进行原代细胞提取与原代培养;采用RT-PCR和细胞免疫荧光方法... 目的:验证TRPM4(transient receptor potential melastatin-4)在口腔颊黏膜成纤维细胞的表达,探讨其对人口腔颊黏膜成纤维细胞迁移与增殖中的作用。方法:收集人正常颊黏膜组织进行原代细胞提取与原代培养;采用RT-PCR和细胞免疫荧光方法检测成纤维细胞中TRPM4的表达。全细胞膜片钳记录成纤维细胞TRPM4通道的全细胞电流。MTT法和细胞划痕实验分别检测应用TRPM4通道特异性阻断剂(9-菲酚)或特异性siRNA抑制TRPM4通道的功能对成纤维细胞增殖和迁移的影响。结果:人口腔颊黏膜成纤维细胞功能性表达TRPM4。抑制TRPM4通道的功能能够明显降低成纤维细胞的增殖和迁移能力。结论:TRPM4通道参与成纤维细胞增殖以及迁移能力的调控。 展开更多
关键词 颊黏膜成纤维细胞 TRPM4 细胞增殖 细胞迁移
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