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机械牵张应力刺激成骨细胞的差异蛋白质组学研究 被引量:9
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作者 李菲菲 丁寅 +3 位作者 冯雪 王欢 陈富林 李立文 《医用生物力学》 EI CAS CSCD 2010年第6期406-411,共6页
目的应用蛋白质组学方法分析人成骨样细胞Saos-2在牵张应力作用下蛋白质表达的差异,为更全面地阐明成骨细胞对牵张应力的反应机制提供分子基础。方法将Saos-2分为加力组与对照组,采用Flexcell牵张应力加载系统,用12%大小的应力值进行力... 目的应用蛋白质组学方法分析人成骨样细胞Saos-2在牵张应力作用下蛋白质表达的差异,为更全面地阐明成骨细胞对牵张应力的反应机制提供分子基础。方法将Saos-2分为加力组与对照组,采用Flexcell牵张应力加载系统,用12%大小的应力值进行力学刺激24 h后,应用蛋白质双向凝胶电泳分离蛋白样品,质谱技术鉴定差异表达蛋白点,并用生物信息学分析差异蛋白参与的生物学过程和主要功能。结果对照组和加力组分别得到(1031±41)和(928±25)个蛋白质点,质谱鉴定出肽酰脯氨酰异构酶A样3、线粒体ATP合成酶、抗氧化蛋白1、丝切蛋白1、蛋白磷酸酶1、延伸因子2等17个表达增高的差异蛋白质,涉及应激反应、能量代谢、细胞增殖、细胞骨架重建、信号转导及成骨分化等生物学功能。结论成骨细胞在机械牵张应力作用下蛋白表达发生显著变化,这些差异蛋白参与了成骨细胞力学反应机制的不同过程。 展开更多
关键词 机械牵张应力 成骨细胞 蛋白质组学 细胞增殖 信号转导
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活化转录调控因子2(ATF-2)在下颌骨髁突软骨细胞中调控bcl-2机制的研究 被引量:3
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作者 马秦 宋红 +4 位作者 程晓兵 张浚睿 陈富林 吴炜 毛天球 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期459-462,共4页
目的:研究ATF-2通过bcl-2影响髁突软骨生长发育的机制。方法:应用体外培养原代小鼠髁突软骨细胞,原代细胞基因转染,蛋白印迹杂交等技术,阐明ATF-2调控bcl-2表达的机制。结果:外源性的ATF-2在髁突软骨细胞中,与bcl-2的调控子中CRE结合,增... 目的:研究ATF-2通过bcl-2影响髁突软骨生长发育的机制。方法:应用体外培养原代小鼠髁突软骨细胞,原代细胞基因转染,蛋白印迹杂交等技术,阐明ATF-2调控bcl-2表达的机制。结果:外源性的ATF-2在髁突软骨细胞中,与bcl-2的调控子中CRE结合,增强bcl-2调控子的活性;当CRE位点的序列改变,ATF-2不能在髁突软骨细胞中对bcl-2调控子的活性产生影响。结论:ATF-2在软骨细胞中,通过影响有凋亡抑制作用的bcl-2的活性和表达,参与下颌骨髁突软骨的生长发育。 展开更多
关键词 ATF-2 BCL-2 下颌骨髁突 软骨细胞
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CD326分子胞外区表皮生长因子样结构域融合蛋白的表达与纯化 被引量:1
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作者 蒿慧文 王寅炤 +1 位作者 郑燕森 谢鑫 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期923-925,共3页
目的:构建含有CD326分子胞膜外区EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like1+2结构域的真核表达载体,在COS7细胞中表达相应蛋白并纯化。方法:用PCR扩增编码EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like 1+2结构域的cDNA,插入真核表达载体pSecTag2B,... 目的:构建含有CD326分子胞膜外区EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like1+2结构域的真核表达载体,在COS7细胞中表达相应蛋白并纯化。方法:用PCR扩增编码EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like 1+2结构域的cDNA,插入真核表达载体pSecTag2B,脂质体法转染COS-7细胞,利用重组蛋白C端的组氨酸标签(6×His-tag)进行金属螯合亲和层析纯化,最后用SDS-PAGE和Western blot法检测纯化的包含EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like 1+2结构域融合蛋白的纯度。结果:序列测定的结果显示含有CD326分子胞膜外区EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like 1+2结构域序列的载体构建正确。经Ni2+-NTA树脂柱亲和层析纯化得到3种融合蛋白,相对分子质量(Mr)分别约为3 600,7 700和12 000。纯度均约为95%。Western blot检测结果显示3种融合蛋白都具有下游的c-myc表位。结论:成功构建了含有CD326分子胞外区EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like 1+2结构域的真核表达载体,并在COS-7细胞中表达。为制备抗CD326分子不同结构域的单克隆抗体提供了免疫原。 展开更多
关键词 CD326 表皮生长因子样结构域 载体构建 真核表达
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糖基化对斑马鱼发育及再生作用的研究进展
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作者 贾丽苑 冯娟涛 崔继红 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2017年第10期908-918,共11页
对有机体发育和再生的研究一直是生命科学领域探索热点之一,斑马鱼由于具有发育速度快、胚胎透明便于观察以及其尾鳍、心脏、神经系统等组织器官可以再生等众多优点,已经成为应用最为广泛的模式生物之一.在斑马鱼发育及再生过程中,细胞... 对有机体发育和再生的研究一直是生命科学领域探索热点之一,斑马鱼由于具有发育速度快、胚胎透明便于观察以及其尾鳍、心脏、神经系统等组织器官可以再生等众多优点,已经成为应用最为广泛的模式生物之一.在斑马鱼发育及再生过程中,细胞发生增殖、分化、形态建成等代谢活动,而对其中调控机制的研究尚未完全明确,对其深入探究的意义不言而喻,可以为很多疾病的认识治疗、组织工程的发展奠定理论基础.研究已经表明,在此过程中,有很多蛋白质参与发育及再生的调节,而蛋白质糖基化是重要的蛋白质翻译后修饰,糖基化的变化会影响细胞识别、黏附、信号传导等,从而导致炎症、肿瘤等恶性疾病的发生.近年来,糖组学的发展为发育生物学和再生医学提供了新的思路和研究成果,本文就糖基化变化在斑马鱼的发育过程中发挥的作用做一综述,并对今后它对再生过程的作用进行展望. 展开更多
关键词 斑马鱼 糖基化 发育 再生
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