肠易激综合征发病机制的初步研究 被引量：5

1

作者 杨云生 张振书 +4 位作者 宋于刚 张万岱 周殿元 冯福才 陈昱 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期395-395,406,共2页

肠易激综合征发病机制的初步研究第四军医大学西京医院全军消化病研究所（西安７１００３２），第一军医大学杨云生张振书宋于刚张万岱周殿元冯福才陈昱肠易激综合征（ｉｒｉｔａｂｌｅｂｏｗｅｌｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＩＢ... 肠易激综合征发病机制的初步研究第四军医大学西京医院全军消化病研究所（西安７１００３２），第一军医大学杨云生张振书宋于刚张万岱周殿元冯福才陈昱肠易激综合征（ｉｒｉｔａｂｌｅｂｏｗｅｌｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＩＢＳ）是一种肠运动功能紊乱性疾病，发... 展开更多

关键词 肠疾病 功能性 发病机制

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腺病毒细菌重组系统表达Crg-2蛋白的实验研究

2

作者 宁寒冰 赵丽娜 +4 位作者 李婷婷 王晓霞 李继昌 刘志国 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期283-285,共3页

目的利用腺病毒的细菌重组系统表达同时具有免疫趋化及血管抑制活性的趋化性细胞因子Crg-2重组蛋白。方法首先在大肠杆菌BJ5183中将穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与AdE1区基因缺失的骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,筛选后脂质体法转染入具... 目的利用腺病毒的细菌重组系统表达同时具有免疫趋化及血管抑制活性的趋化性细胞因子Crg-2重组蛋白。方法首先在大肠杆菌BJ5183中将穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与AdE1区基因缺失的骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,筛选后脂质体法转染入具有AdE1区组成性表达的293包装细胞中进行病毒包装、扩增;Westernblot检测病毒感染293细胞的蛋白表达;趋化实验检测感染细胞上清对激活T淋巴细胞的趋化活性。结果穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与骨架质粒pAdEasy-1重组后,经酶切及PCR鉴定获得重组腺病毒基因组质粒pAd/crg-2;病毒Ad/crg-2经包装并扩增后,用组织培养感染半数剂量法(TCID50)法测定病毒滴度达4×109TCID50/L,感染细胞经Westernblot检测有一接近Mr10000蛋白条带,分泌上清对激活的脾淋巴细胞有明显的趋化作用。结论采用细菌重组法成功获得重组腺病毒Ad/crg-2,可高效表达趋化性细胞因子Crg-2。 展开更多

关键词 腺病毒 同源重组 趋化因子 crg-2

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人核糖体蛋白S13(RPS13)编码基因的克隆及其正反义核酸转染胃癌细胞的初步研究 被引量：3

3

作者 翟惠虹 郭新宁 +4 位作者 时永全 王新 兰梅 杨力 樊代明 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期785-789,共5页

目的:扩增人核糖体蛋白S13(RPS13)编码基因序列,构建其正、反义真核表达载体,分别转染胃癌细胞SGC7901及胃癌耐药细胞SGC7901/VCR,以进一步研究RPS13基因与胃癌多药耐药的关系。方法:采用RT-PCR法扩增RPS13cDNA片段编码区全长序列,利用... 目的:扩增人核糖体蛋白S13(RPS13)编码基因序列,构建其正、反义真核表达载体,分别转染胃癌细胞SGC7901及胃癌耐药细胞SGC7901/VCR,以进一步研究RPS13基因与胃癌多药耐药的关系。方法:采用RT-PCR法扩增RPS13cDNA片段编码区全长序列,利用DNA重组技术构建正、反义真核表达载体,经脂质体介导转染胃癌细胞SGC7901及胃癌耐药细胞SGC7901/VCR,筛选正、反义基因稳定转染细胞,RNA斑点杂交法检测正、反义稳定转染细胞mRNA水平的变化。结果:从高表达RPS13的SGC7901/VCR耐药细胞中提取细胞总RNA,RT-PCR法成功扩增了RPS13cDNA片段编码区全长序列,并经测序证实;目的基因按正、反两个方向亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),并经酶切鉴定证实;经脂质体介导将正义真核表达载体转染SGC7901细胞,反义真核表达载体转染SGC7901/VCR细胞,G418筛选获得稳定转染细胞;RNA斑点杂交试验证实:正义稳定转染细胞RPS13mRNA水平上调,反义稳定转染细胞RPS13mRNA水平下调。结论:成功克隆了人RPS13编码基因序列,并构建了其正、反义真核表达载体。在胃癌细胞系SGC7901及长春新碱耐药细胞SGC7901/VCR中得到稳定转染细胞株,正义转染细胞中RPS13mRNA表达明显增加,反义转染细胞中表达明显受抑。 展开更多

关键词 人核糖体蛋白S13 反转录PCR 基因转染 胃癌 基因克隆

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mRNA差异显示研究胃癌相关基因 被引量：2

4

作者 肖冰 尤涵 +2 位作者 崔大祥 时永全 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第2期110-112,共3页

为了克隆与胃癌发病相关的新基因，我们以正常胃粘膜细胞ＧＥＳ和胃癌细胞系７９０１为对比材料，利用ｍＲＮＡ差异显示技术，得到两个ｃＤＮＡ片段。经分析发现，分别与Ｔｒｋ基因及白血病病毒基因有８０％和３０％的同源性及较好的读... 为了克隆与胃癌发病相关的新基因，我们以正常胃粘膜细胞ＧＥＳ和胃癌细胞系７９０１为对比材料，利用ｍＲＮＡ差异显示技术，得到两个ｃＤＮＡ片段。经分析发现，分别与Ｔｒｋ基因及白血病病毒基因有８０％和３０％的同源性及较好的读框，有可能为胃癌相关的新基因片段，已在ＧｅｎＢａｎｋ中登录：１７６１１６，１７６３８５。 展开更多

关键词 胃肿瘤 MRNA差异显示 相关基因

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HSP90β在细胞中的表达水平与化疗敏感性的相关研究 被引量：1

5

作者 刘宪玲 俞召才 +5 位作者 徐立 赵燕秋 樊代明 郭建成 肖冰 赵青川 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2000年第10期725-728,共4页

目的了解胃癌细胞ＳＧＣ７９０１及其耐药细胞ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ中ＨＳＰ９０β蛋白的表达，与化疗药物敏感性的关系及降低细胞ＨＳＰ９０β蛋白的表达是否影响化疗药物的敏感性。方法用免疫组化法检测胃癌细胞ＳＧＣ７９０１... 目的了解胃癌细胞ＳＧＣ７９０１及其耐药细胞ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ中ＨＳＰ９０β蛋白的表达，与化疗药物敏感性的关系及降低细胞ＨＳＰ９０β蛋白的表达是否影响化疗药物的敏感性。方法用免疫组化法检测胃癌细胞ＳＧＣ７９０１及其耐药细胞ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ中ＨＳＰ９０β蛋白的表达。ＭＴＴ法测定ＳＧＣ７９０１、ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ细胞及其相应的ＨＳＰ９０β蛋白低表达细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１和ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ对化疗药物的敏感性，流式细胞仪测定细胞内药物含量。结果ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ细胞ＨＳＰ９０β蛋白的表达高于ＳＧＣ７９０１细胞。ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ细胞对ＡＤＭ、ＶＣＲ、ＭＭＣ和ＣＴＸ的ＩＣ５０分别为０．３９８、１．２５、０．１９９和３ ９８１．０７μｇ／ｍｌ。ＳＧＣ７９０１对ＡＤＭ、ＶＣＲ、ＭＭＣ及ＣＴＸ的ＩＣ５０分别为１．５８×１０－６、１．９９×１０－３、３．１×１０－２及６３０μｇ／ｍｌ。ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ相对于ＳＧＣ７９０１细胞对ＡＤＭ、ＶＣＲ、ＭＭＣ和ＣＴＸ的耐药指数分别为２．５２×１０５、６．２８×１０２、６．４２和６．３２。 展开更多

关键词 多药耐药性 药敏试验 胃癌 HSP90β

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携带反义热休克蛋白70的重组腺病毒载体的构建 被引量：1

6

作者 王晓侠 李胜利 +3 位作者 姚小宝 嵇宪生 朱宏亮 樊代明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第16期1478-1478,1481,共2页

关键词 反义热体克蛋白70 重组 腺病毒

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我对医学科学研究的几点建议 被引量：6

7

作者 樊代明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期1-1,共1页

关键词 医学 科学研究 基础研究 中西医结合 临床应用 其他学科

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转录激活蛋白AP-1的研究进展 被引量：1

8

作者 尤涵 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第2期158-160,共3页

转录激活蛋白ＡＰ１存在于不同类型的细胞中，许多基因的调节区都有ＡＰ１的结合位点。ＡＰ１通过调节基因的转录，对肿瘤的引发。

关键词 AP-1 信号传导 转录激活蛋白 研究进展

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肿瘤抗原研究的启示 被引量：2

9

作者 徐立 樊代明 金伯泉 《医学与哲学》 2000年第3期39-40,共2页

本世纪初Ｅｈｒｌｉｃｈ根据在动物个体间进行肿瘤移植时,移植瘤能自行萎缩消退的现象,提出了肿瘤抗原及肿瘤免疫概念。近一个世纪以来肿瘤抗原的研究一直居肿瘤免疫学研究的中心地位。回顾其研究历程,不难得到许多有益的哲学启示。1　... 本世纪初Ｅｈｒｌｉｃｈ根据在动物个体间进行肿瘤移植时,移植瘤能自行萎缩消退的现象,提出了肿瘤抗原及肿瘤免疫概念。近一个世纪以来肿瘤抗原的研究一直居肿瘤免疫学研究的中心地位。回顾其研究历程,不难得到许多有益的哲学启示。1　正确结论得益于方法选择肿瘤细胞是否... 展开更多

关键词 肿瘤抗原 研究

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胃癌特异性纳米疫苗的制备及其生物学活性的研究 被引量：1

10

作者 师瑞 吴开春 +3 位作者 吴道澄 宁晓暄 林涛 樊代明 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2005年第1期9-12,共4页

目的:以胃癌特异性多肽抗原MG7为靶点研制胃癌特异性纳米疫苗,并观察其对小鼠的免疫效能。方法:人工合成胃癌MG7-Ag的模拟表位多肽,用磁力超声法将其包封于纳米乳剂中,通过透析纯化,HPLC检测其包封效率。用包封有MG7抗原肽的纳米疫苗免... 目的:以胃癌特异性多肽抗原MG7为靶点研制胃癌特异性纳米疫苗,并观察其对小鼠的免疫效能。方法:人工合成胃癌MG7-Ag的模拟表位多肽,用磁力超声法将其包封于纳米乳剂中,通过透析纯化,HPLC检测其包封效率。用包封有MG7抗原肽的纳米疫苗免疫健康Balb/c小鼠,以空白纳米疫苗和PBS作为对照,测定其免疫活性,通过ELISA测定血清中抗MG7抗体的效价;ELISPOT测定小鼠脾CTL活性。同时,用表达MG7-Ag的小鼠艾氏腹水瘤细胞进行肿瘤攻击2周,观察疫苗对小鼠的保护作用。结果:成功制备了胃癌MG7-Ag的纳米疫苗,并具有较好的包封率和较好的稳定性,小鼠产生MG7抗体,ELISPOT检测包封组与对照组相比分泌IFN-γ的活性淋巴细胞数量明显增高。疫苗免疫组8只小鼠中有2只未见肿瘤形成,而对照组8只小鼠则全部成瘤。结论:胃癌MG7-Ag表位纳米疫苗具有免疫原性,可以诱导小鼠产生抗肿瘤免疫。 展开更多

关键词 胃癌MG-7抗原肽 纳米乳剂 纳米疫苗

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MDR相关性单克隆抗体MGr－1逆转胃癌细胞耐药的体外研究

11

作者 刘炯 周绍娟 +3 位作者 樊代明 张筱茵 徐立 陈峥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1996年第3期39-42,共4页

目的：研究胃癌细胞耐药相关性单克隆抗体ＭＧｒ－１对耐长春新碱胃癌细胞（ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ）多药耐药性（ＭＤＲ）的影响。方法：用ＭＴＴ法检测阿霉素的细胞毒性；用流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积及潴留。结果：ＭＧｒ... 目的：研究胃癌细胞耐药相关性单克隆抗体ＭＧｒ－１对耐长春新碱胃癌细胞（ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ）多药耐药性（ＭＤＲ）的影响。方法：用ＭＴＴ法检测阿霉素的细胞毒性；用流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积及潴留。结果：ＭＧｒ－１能明显逆转ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ细胞对阿霉素的耐药性（Ｐ＜０．０１），并可增加ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ细胞内阿霉素的蓄积（Ｐ＜０．０１）及潴留（Ｐ＜０．０１）。结论：ＭＧｒ－１具有通过增加细胞内药物蓄积及潴留逆转ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ细胞耐药性的功能。提示ＭＧｒ－１所对应的细胞膜抗原可能为一种新的有活性功能并与ＭＤＲ相关的分子。 展开更多

关键词 单克隆抗体 多药耐药性 癌 阿霉素 胃肿瘤

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Rho GTPases对肿瘤血管生成相关分子的作用 被引量：18

12

作者 薛妍 毕锋 +3 位作者 刘娜 潘阳林 时永全 张学庸 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期664-669,共6页

探讨RhoGTPases的 3个主要分子RhoA、Rac1和Cdc4 2对肿瘤血管生成相关分子的作用 .构建负显性RhoA、Rac1和Cdc4 2的真核表达质粒 ,在Lipofectamine2 0 0 0 介导下转染胃癌细胞AGS ,应用ELISA检测细胞培养上清中VEGF的含量 ,应用Western... 探讨RhoGTPases的 3个主要分子RhoA、Rac1和Cdc4 2对肿瘤血管生成相关分子的作用 .构建负显性RhoA、Rac1和Cdc4 2的真核表达质粒 ,在Lipofectamine2 0 0 0 介导下转染胃癌细胞AGS ,应用ELISA检测细胞培养上清中VEGF的含量 ,应用Western印迹检测肿瘤血管生成相关分子HIF 1α、P5 3和PTEN的表达水平 .成功地构建了负显性RhoA、Rac1和Cdc4 2的真核表达质粒 ,转染胃癌细胞AGS并经G4 18筛选出单克隆 .ELISA表明转染细胞培养上清中VEGF的含量可被明显抑制 ;Western印迹表明 ,负显性RhoGTPases在蛋白水平上可下调HIF 1α表达水平 ,上调P5 3的表达水平 .结果表明 ,Rho家族的 3个主要分子可能通过调节血管生成相关分子的表达来促进肿瘤血管生成 . 展开更多

关键词 RHO GTPASES 肿瘤 血管生成

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经颈内静脉肝内门腔静脉分流术治疗Budd-Chiari综合征 被引量：14

13

作者 韩国宏 何创业 +7 位作者 殷占新 孟祥杰 王建宏 张宏博 周新民 吴开春 丁杰 樊代明 《介入放射学杂志》 CSCD 2008年第4期239-242,共4页

目的探讨经颈静脉肝内门腔静脉分流术(TIPS)治疗Budd-Chiari综合征(BCS)的疗效。方法本组14例患者经影像学检查确诊为BCS,因进行性肝功能损害,或严重门脉高压并发症(顽固性腹水,食管胃底静脉曲张上消化道出血),或广泛肝静脉闭塞而行TIP... 目的探讨经颈静脉肝内门腔静脉分流术(TIPS)治疗Budd-Chiari综合征(BCS)的疗效。方法本组14例患者经影像学检查确诊为BCS,因进行性肝功能损害,或严重门脉高压并发症(顽固性腹水,食管胃底静脉曲张上消化道出血),或广泛肝静脉闭塞而行TIPS术治疗。其中混合型8例,肝静脉型5例,肝静脉广泛闭塞型1例。TIPS术中对于下腔静脉、肝静脉的不同情况,灵活选择肝静脉或下腔静脉穿刺点进行穿刺,7例从肝静脉开口处行门静脉穿刺,建立门-腔静脉分流道,4例从下腔静脉直接穿刺门静脉分支,3例经皮穿刺开通肝右静脉后再经肝右静脉穿刺门静脉。术后对分流道支架开通情况进行长期随访。结果14例手术均获成功,门静脉压力由术前平均(4.9±1.4)kPa,降至术后(3.2±1.5)kPa,术后随访5～64个月,2例因支架狭窄分别于术后13、24个月再发上消化道出血,行分流道球囊扩张治疗,术后恢复良好。结论TIPS适用BCS合并有进行性肝功能损害或门静脉高压引起的上消化道出血、顽固性腹水的治疗。对于已行下腔静脉或肝静脉成形术后再发或加重的门静脉高压患者亦为适应证,但手术难度增加。 展开更多

关键词 布加综合征 门静脉高压 血管成形术 经颈内静脉肝内门腔分流术

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利用聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化的微量蛋白制备抗血清 被引量：9

14

作者 时永全 韩者艺 +4 位作者 王新 张宇梅 宁晓暄 翟惠虹 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期621-623,共3页

目的　以SDS PAGE纯化的微量蛋白制备抗人层粘连蛋白受体前体蛋白 (LRP)的血清。方法　以SDS PAGE分离纯化原核表达的人LRP与 6×组氨酸的融合蛋白 ,切下并粉碎融合蛋白所在凝胶块。将含 10 μg融合蛋白的凝胶颗粒与弗氏佐剂混匀后 ... 目的　以SDS PAGE纯化的微量蛋白制备抗人层粘连蛋白受体前体蛋白 (LRP)的血清。方法　以SDS PAGE分离纯化原核表达的人LRP与 6×组氨酸的融合蛋白 ,切下并粉碎融合蛋白所在凝胶块。将含 10 μg融合蛋白的凝胶颗粒与弗氏佐剂混匀后 ,免疫BALB/c小鼠。以Westernblot检测所获抗血清的滴度和特异性。结果　以胃癌细胞总蛋白为靶抗原时 ,Westernblot显示 ,所获抗血清仅识别 1条Mr 约 4 2 0 0 0的蛋白带 ,将抗血清做 1∶2 0 0 0稀释后 ,仍能清晰地显示其靶抗原所在位置。结论　以聚丙烯酰胺凝胶颗粒为载体 。 展开更多

关键词 聚丙烯酰胺凝胶电泳 纯化 微量蛋白 抗血清 人层粘连蛋白受体前体蛋白

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一步法从人血浆中制备天然血管生成抑制素 被引量：10

15

作者 李福洋 何鹏 +5 位作者 刘新平 张英起 杨静华 樊代明 药立波 fmmu.edu.cn 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第3期325-327,共3页

血管生成抑制素 (angiostatin)能特异地抑制新生血管生成 ,有潜在的临床应用价值 .利用亲和层析从人血浆中纯化纤溶酶原 ,并在原位进行弹性蛋白酶有限消化产生angiostatin片段 ,经过洗涤 ,然后用 0 2mol/L 6 氨基己酸溶液将angiostati... 血管生成抑制素 (angiostatin)能特异地抑制新生血管生成 ,有潜在的临床应用价值 .利用亲和层析从人血浆中纯化纤溶酶原 ,并在原位进行弹性蛋白酶有限消化产生angiostatin片段 ,经过洗涤 ,然后用 0 2mol/L 6 氨基己酸溶液将angiostatin特异性洗脱 .此改进使整个制备过程变得简单、快速和高效 . 展开更多

关键词 血管生成抑制素 抗肿瘤转移 一步亲和层析 血浆

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噬菌体抗体库技术筛选结肠癌单抗MC3的抗独特型抗体 被引量：5

16

作者 何凤田 乔太东 +4 位作者 陈宝军 韩者艺 聂勇战 宋保华 樊代明 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第7期358-360,362,共4页

目的 :获得结肠癌单抗MC3的噬菌体呈现型抗独特型抗体 (anti Id)。方法 :分离经单抗免疫鼠脾脏的mRNA ,经RT PCR分别扩增抗体VH和VLDNA ,进而连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7挽救后获... 目的 :获得结肠癌单抗MC3的噬菌体呈现型抗独特型抗体 (anti Id)。方法 :分离经单抗免疫鼠脾脏的mRNA ,经RT PCR分别扩增抗体VH和VLDNA ,进而连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7挽救后获得噬菌体呈现型ScFv文库。以MC3对文库进行四轮筛选后 ,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现anti IdScFv的噬菌体单克隆。结果 :VH、VL和ScFvDNA分别约为 34 0、32 0和 75 0bp。抗体ScFv文库经四轮筛选后 ,在随机筛检的 5 0个克隆中得到 15个呈现anti IdScFv的噬菌体单克隆。结论 :用噬菌体抗体库技术成功地获得了单抗MC3的anti IdScFv,从而为进行结肠癌重组anti 展开更多

关键词 结肠癌 抗独特型抗体 抗体库 噬菌体

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血管特异结合短肽GNSNPKS受体在胃癌和结肠癌中的差异表达 被引量：5

17

作者 韩宇 洪流 +3 位作者 吴开春 乔泰东 陈峥 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期234-235,共2页

目的:探讨血管特异结合短肽GNSNPKS受体(GNSNPKSR)在胃癌和结肠癌中的表达及与肿瘤分化程度的关系。方法:采用免疫组化SP法检测GNSNPKSR在胃癌和结肠癌中的表达及其分化程度。结果:GNSNPKSR在高、中、低度分化胃癌的血管中表达率依次为1... 目的:探讨血管特异结合短肽GNSNPKS受体(GNSNPKSR)在胃癌和结肠癌中的表达及与肿瘤分化程度的关系。方法:采用免疫组化SP法检测GNSNPKSR在胃癌和结肠癌中的表达及其分化程度。结果:GNSNPKSR在高、中、低度分化胃癌的血管中表达率依次为12/18(67%)、17/23(74%)、22/24(92%);在高、中、低度分化结肠癌的血管中的表达率依次为3/16(19%)、5/21(24%)和7/23(30%)。GNSNPKSR在胃癌组织中的表达明显高于结肠癌组织(P<0.05),在低分化胃癌组织中的表达明显高于高分化和中分化胃癌组织(P<0.05)。结论:GNSNPKS与胃癌的血管特异结合,可作为肿瘤血管抑制治疗的靶向载体。 展开更多

关键词 GNSNPKS 胃癌 结肠癌 免疫组化

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人核糖体蛋白S13的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备 被引量：4

18

作者 郭雪艳 时永全 +5 位作者 翟惠虹 孙力 刘理礼 韩霜 雷婷 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期363-366,共4页

目的克隆人核糖体蛋白S13(ribosomal protein S13,RPS13)cDNA全长,构建原核表达质粒,诱导表达、纯化RPS13蛋白并制备其多克隆抗体。方法应用RT-PCR方法从胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR中扩增出RPS13的cDNA全长,利用DNA重组技术构建重组... 目的克隆人核糖体蛋白S13(ribosomal protein S13,RPS13)cDNA全长,构建原核表达质粒,诱导表达、纯化RPS13蛋白并制备其多克隆抗体。方法应用RT-PCR方法从胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR中扩增出RPS13的cDNA全长,利用DNA重组技术构建重组原核表达载体pET-28a(+)-RPS13,双酶切及测序鉴定。将重组载体转化入大肠杆菌BL21中,筛选抗性克隆并经DNA测序证实。IPTG诱导融合蛋白的表达,利用镍离子亲和层析柱提纯融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot鉴定。用纯化的融合蛋白His-RPS13免疫BALB/c小鼠,ELISA法测定抗体效价,饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体,Western blot检测抗体活性。结果RT-PCR扩增片段与预计目的基因片段大小一致;双酶切鉴定表明,重组表达载体pET-28a(+)-RPS13构建成功,DNA测序结果显示所获基因序列与GenBank中收录完全相同。IPTG诱导3h后,经SDS-PAGE检测显示在Mr19000处出现一新生条带,与预计的融合白大小一致;利用抗His标签的抗体进行Western blot,结果证实融合蛋白表达成功。其免疫血清经Western blot证实可特异性的识别蛋白RPS13。结论成功地获得了RPS13的编码基因序列,并获得了纯化的RPS13蛋白质,为制备RPS13的单克隆抗体、进一步研究RPS13在肿瘤中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 核糖体蛋白S13 原核表达 融合蛋白 纯化 多克隆抗体

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RhoC在胃癌细胞中的表达及其小干扰RNA表达载体的构建与鉴定 被引量：6

19

作者 刘娜 毕锋 +4 位作者 潘阳林 薛妍 韩者艺 刘长江 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期148-151,共4页

目的 :检测RhoC在胃癌细胞系中的表达 ,并构建其小干扰RNA(siRNA)表达载体。方法 :以Westernblot方法检测RhoC在多株胃癌细胞系中的表达。利用计算机辅助设计RhoC特异性siRNA ,体外合成siRNA基因并将其定向克隆入真核表达载体mU6pro。... 目的 :检测RhoC在胃癌细胞系中的表达 ,并构建其小干扰RNA(siRNA)表达载体。方法 :以Westernblot方法检测RhoC在多株胃癌细胞系中的表达。利用计算机辅助设计RhoC特异性siRNA ,体外合成siRNA基因并将其定向克隆入真核表达载体mU6pro。以脂质体法转染RhoC siRNA载体至高转移的人胃癌细胞系AGS中 ,以Westernblot方法鉴定RhoC siRNA对RhoC表达的作用。结果 :RhoC蛋白在具有高转移潜能的胃癌细胞系中表达增强。利用BbsⅠ和XbaⅠ双酶切法鉴定重组载体后 ,DNA测序证实合成的siRNA基因序列正确并已被准确克隆入mU6pro载体。RhoC siRNA载体可特异性抑制AGS细胞中RhoC的表达。结论 :RhoC特异性siRNA表达载体成功构建 。 展开更多

关键词 RHOC 小干扰RNA 胃癌 转移

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反义核酸抑制胃癌细胞Bcl-2表达 被引量：4

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作者 肖冰 王佐佑 +3 位作者 时永全 赵燕秋 尤涵 樊代明 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1998年第3期194-198,共5页

本文采用分子克隆技术成功地构建了反义核酸表达载体ｐＤＯＲ－Ｂｃｌ－２ ｃＤＮＡ。以奚质体介导法将重组反义核酸表达载体转染受体细胞ＳＧＣ７９０１，并Ｇ４１８筛选，从２×１０＾５细胞中筛选出大约１５０个抗性克隆，转导... 本文采用分子克隆技术成功地构建了反义核酸表达载体ｐＤＯＲ－Ｂｃｌ－２ ｃＤＮＡ。以奚质体介导法将重组反义核酸表达载体转染受体细胞ＳＧＣ７９０１，并Ｇ４１８筛选，从２×１０＾５细胞中筛选出大约１５０个抗性克隆，转导率大于１‰，随机挑选２个克隆继续筛选与扩增培养，获得了１株稳定的抗性细胞，从而建立了Ｂｃｌ－２表达阻断的胃癌细胞株，我们命名为７９０１ａｎＢｃｌ－２ｃｅｌｌｓ。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法、 展开更多

关键词 BCL-2 反义核酸 胃癌细胞 基因表达 抑制作用

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