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人肺腺癌细胞株A549中HIF-1α对survivin的表达调控
被引量:
4
1
作者
李伟
陈余清
+2 位作者
孙艳
赵成岭
王效静
《中国癌症杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期427-434,共8页
背景与目的:survivin是一种重要的抗凋亡基因,在肿瘤组织中特异性高表达,并参与调控细胞周期和细胞凋亡,其高表达与肿瘤进展、药物抵抗以及预后关系密切。但survivin在肺癌中高表达的转录调控机制研究甚少。课题组前期研究成功构建含有s...
背景与目的:survivin是一种重要的抗凋亡基因,在肿瘤组织中特异性高表达,并参与调控细胞周期和细胞凋亡,其高表达与肿瘤进展、药物抵抗以及预后关系密切。但survivin在肺癌中高表达的转录调控机制研究甚少。课题组前期研究成功构建含有survivin核心启动子的荧光报告载体pGL3-SVP230-luc,并发现核心启动子区存在缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的潜在位点。本研究拟通过免疫荧光双标记法、电泳迁移率实验(EMSA)、共转染等方法探讨缺氧条件下人肺腺癌细胞株A549中HIF-1α调控survivin转录的确切机制。方法:⑴运用免疫荧光双标记检测缺氧A549细胞中HIF-1α与survivin的表达;⑵HIF-1α表达质粒和HIF-1αsiRNA分别转染A549细胞,30 h后RT-PCR、Western blot和免疫荧光双标法检测survivin mRNA和蛋白表达;⑶pGL3-SVP230-luc(含有survivin核心启动子的荧光报告载体)与HIF-1α表达质粒和HIF-1αsiRNA分别共转染A549细胞,测定萤光素酶的表达活性;⑷EMSA分析HIF-1α与survivin核心启动子结合情况;(5)流式细胞术和MTT法检测细胞凋亡和增殖。结果:⑴HIF-1α与survivin共表达于A549细胞中;⑵转染HIF-1α表达质粒组survivin mRNA和蛋白表达水平显著上调,转染HIF-1αsiRNA组survivin mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01);⑶HIF-1α表达质粒组pGL3-SVP230-luc相对活性分别为78.84,显著高于空质粒组及对照组(P<0.01),HIF-1αsiRNA组pGL3-SVP230-luc相对活性分别为28.84,显著低于空质粒组及对照组(P均<0.01);⑷HIF-1α与survivin核心启动子区转录起始点上游-19~-16 bp序列结合转录激活survivin;⑸流式细胞术和MTT检测结果显示,HIF-1αsiRNA组细胞凋亡显著增加,细胞抑制率明显升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P均<0.01)。结论:缺氧状态下A549细胞中survivin与HIF-1α存在共表达;HIF-1α可以通过survivin核心启动子区的结合位点激活survivin转录和表达;靶向HIF-1α可以诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖,并为survivin的靶向治疗研究提供了进一步的实验基础。
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关键词
缺氧诱导因子-1Α
SURVIVIN
转录调节
非小细胞肺癌
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职称材料
晚期非小细胞肺癌中Survivin表达对顺铂敏感性和预后的预测价值
被引量:
2
2
作者
李伟
丁静
陈余清
《中国肿瘤临床》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第16期1216-1221,共6页
目的:探讨Survivin预测晚期非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂敏感性的价值。方法:RT-PCR、Western blot法检测人肺腺癌细胞株A549和耐药株A549/CDDP中Survivin表达,Survivin siRNA转染A549/CDDP细胞,MTT、流式细胞术检测细胞生长与凋亡;免疫组...
目的:探讨Survivin预测晚期非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂敏感性的价值。方法:RT-PCR、Western blot法检测人肺腺癌细胞株A549和耐药株A549/CDDP中Survivin表达,Survivin siRNA转染A549/CDDP细胞,MTT、流式细胞术检测细胞生长与凋亡;免疫组织化学和RT-PCR检测晚期NSCLC组织中Survivin mRNA和蛋白表达。结果:A549/CDDP中Survivin mRNA和蛋白表达均高于A549细胞(P<0.01);A549/CDDP细胞中Survivin siRNA+CDDP组的生长抑制率达76.4%,IC_(50)为(34.12+3.55)μg/mL,耐药指数为6.71倍,均低于对照组(P<0.05)。该组的细胞凋亡率高于对照组(P<0.01);93例NSCLC蜡块组织中,Survivin蛋白表达阴性组接受含顺铂方案化疗有效率(44.4%)高于阳性组(19.3%,P<0.01);Survivin表达阴性组总生存、无疾病进展时间较阳性组长,但差异无统计学意义(P>0.05)。Cox多因素分析结果显示Survivin蛋白表达水平不是影响预后的独立因素。20例新鲜组织中Survivin mRNA低表达组反应率(RR)(60%)和蛋白表达阴性组RR(66.7%)高于mRNA高表达组(10%)和蛋白表达阳性组(9%,P<0.05)。结论:NSCLC组织中Survivin表达阳性提示顺铂耐药,检测Survivin表达对晚期NSCLC筛选含顺铂化疗方案具有指导意义。
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关键词
SURVIVIN
非小细胞肺癌
顺铂
A549
A549/CDDP
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职称材料
题名
人肺腺癌细胞株A549中HIF-1α对survivin的表达调控
被引量:
4
1
作者
李伟
陈余清
孙艳
赵成岭
王效静
机构
蚌埠医学院第一附属医院呼吸科安徽省呼吸系病基础与临床省级重点实验室
出处
《中国癌症杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期427-434,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目(No:30772532)
安徽省自然科学基金资助项目(No:070413094)
文摘
背景与目的:survivin是一种重要的抗凋亡基因,在肿瘤组织中特异性高表达,并参与调控细胞周期和细胞凋亡,其高表达与肿瘤进展、药物抵抗以及预后关系密切。但survivin在肺癌中高表达的转录调控机制研究甚少。课题组前期研究成功构建含有survivin核心启动子的荧光报告载体pGL3-SVP230-luc,并发现核心启动子区存在缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的潜在位点。本研究拟通过免疫荧光双标记法、电泳迁移率实验(EMSA)、共转染等方法探讨缺氧条件下人肺腺癌细胞株A549中HIF-1α调控survivin转录的确切机制。方法:⑴运用免疫荧光双标记检测缺氧A549细胞中HIF-1α与survivin的表达;⑵HIF-1α表达质粒和HIF-1αsiRNA分别转染A549细胞,30 h后RT-PCR、Western blot和免疫荧光双标法检测survivin mRNA和蛋白表达;⑶pGL3-SVP230-luc(含有survivin核心启动子的荧光报告载体)与HIF-1α表达质粒和HIF-1αsiRNA分别共转染A549细胞,测定萤光素酶的表达活性;⑷EMSA分析HIF-1α与survivin核心启动子结合情况;(5)流式细胞术和MTT法检测细胞凋亡和增殖。结果:⑴HIF-1α与survivin共表达于A549细胞中;⑵转染HIF-1α表达质粒组survivin mRNA和蛋白表达水平显著上调,转染HIF-1αsiRNA组survivin mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01);⑶HIF-1α表达质粒组pGL3-SVP230-luc相对活性分别为78.84,显著高于空质粒组及对照组(P<0.01),HIF-1αsiRNA组pGL3-SVP230-luc相对活性分别为28.84,显著低于空质粒组及对照组(P均<0.01);⑷HIF-1α与survivin核心启动子区转录起始点上游-19~-16 bp序列结合转录激活survivin;⑸流式细胞术和MTT检测结果显示,HIF-1αsiRNA组细胞凋亡显著增加,细胞抑制率明显升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P均<0.01)。结论:缺氧状态下A549细胞中survivin与HIF-1α存在共表达;HIF-1α可以通过survivin核心启动子区的结合位点激活survivin转录和表达;靶向HIF-1α可以诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖,并为survivin的靶向治疗研究提供了进一步的实验基础。
关键词
缺氧诱导因子-1Α
SURVIVIN
转录调节
非小细胞肺癌
Keywords
HIF-1α
survivin
Transcriptional regulation
NSCLC
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
晚期非小细胞肺癌中Survivin表达对顺铂敏感性和预后的预测价值
被引量:
2
2
作者
李伟
丁静
陈余清
机构
蚌埠医学院第一附属医院呼吸科安徽省呼吸系病基础与临床省级重点实验室
安徽省
淮北市人民
医院
呼吸
内
科
出处
《中国肿瘤临床》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第16期1216-1221,共6页
基金
安徽省科技厅省级实验室项目
安徽省科技计划项目(编号:11010402169)
安徽省卫生厅医学科研重点项目(编号:2010A014)资助~~
文摘
目的:探讨Survivin预测晚期非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂敏感性的价值。方法:RT-PCR、Western blot法检测人肺腺癌细胞株A549和耐药株A549/CDDP中Survivin表达,Survivin siRNA转染A549/CDDP细胞,MTT、流式细胞术检测细胞生长与凋亡;免疫组织化学和RT-PCR检测晚期NSCLC组织中Survivin mRNA和蛋白表达。结果:A549/CDDP中Survivin mRNA和蛋白表达均高于A549细胞(P<0.01);A549/CDDP细胞中Survivin siRNA+CDDP组的生长抑制率达76.4%,IC_(50)为(34.12+3.55)μg/mL,耐药指数为6.71倍,均低于对照组(P<0.05)。该组的细胞凋亡率高于对照组(P<0.01);93例NSCLC蜡块组织中,Survivin蛋白表达阴性组接受含顺铂方案化疗有效率(44.4%)高于阳性组(19.3%,P<0.01);Survivin表达阴性组总生存、无疾病进展时间较阳性组长,但差异无统计学意义(P>0.05)。Cox多因素分析结果显示Survivin蛋白表达水平不是影响预后的独立因素。20例新鲜组织中Survivin mRNA低表达组反应率(RR)(60%)和蛋白表达阴性组RR(66.7%)高于mRNA高表达组(10%)和蛋白表达阳性组(9%,P<0.05)。结论:NSCLC组织中Survivin表达阳性提示顺铂耐药,检测Survivin表达对晚期NSCLC筛选含顺铂化疗方案具有指导意义。
关键词
SURVIVIN
非小细胞肺癌
顺铂
A549
A549/CDDP
Keywords
Survivin
NSCLC
A549
A549 / CDDP
CDDP
分类号
R734.2 [医药卫生—肿瘤]
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作者
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人肺腺癌细胞株A549中HIF-1α对survivin的表达调控
李伟
陈余清
孙艳
赵成岭
王效静
《中国癌症杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
4
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职称材料
2
晚期非小细胞肺癌中Survivin表达对顺铂敏感性和预后的预测价值
李伟
丁静
陈余清
《中国肿瘤临床》
CAS
CSCD
北大核心
2012
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