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EB病毒LMP1促鼻咽上皮细胞增殖的蛋白分子鉴定 被引量：9
1
作者 张志伟 张琼 +2 位作者 刘洁琼 余艳辉 贺智敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期287-292,共6页
目的:探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)促鼻咽上皮细胞增殖的分子机制。方法:采用逆病毒感染的方法,将浓缩的逆病毒RV-pLNSX(空载体)和RV-LMP1分别感染鼻咽上皮细胞NP69,建立NP69-pLN-SX与NP69-LMP1稳定表达细胞系,通过绘制细胞生长曲线... 目的:探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)促鼻咽上皮细胞增殖的分子机制。方法:采用逆病毒感染的方法,将浓缩的逆病毒RV-pLNSX(空载体)和RV-LMP1分别感染鼻咽上皮细胞NP69,建立NP69-pLN-SX与NP69-LMP1稳定表达细胞系,通过绘制细胞生长曲线、平皿克隆形成实验和软琼脂集落形成实验检测LMP1对NP69细胞增殖的影响;运用比较蛋白质组学方法鉴定LMP1在NP69细胞中参与调节的蛋白,并对部分蛋白表达进行验证。结果:(1)LMP1具有促鼻咽上皮细胞NP69增殖的作用(n=3,P<0.05)。(2)鉴定了22个LMP1参与调节NP69细胞的蛋白(表达上调的蛋白9个,下调的13个),实时荧光定量RT-PCR和Western blotting证实了部分上述蛋白的差异表达。结论:LMP1可能通过参与调节keratin19和vimentin等蛋白的表达促鼻咽上皮细胞NP69增殖。 展开更多
关键词 EB病毒 潜伏性膜蛋白1 细胞增殖 差异蛋白表达
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黄嘌呤核苷促进骨髓间质干细胞体外快速扩增的实验研究 被引量：2
2
作者 刘芳 陈少红 +4 位作者 刘青波 范新娟 唐芳 刘大伟 赵国强 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2389-2393,共5页
目的:探讨黄嘌呤核苷(Xs)对骨髓间质干细胞(BMSCs)增殖及分化状态的影响。方法:将Xs加入骨髓间质干细胞培养体系,观察它对骨髓间质干细胞增殖和分化特性的影响。结果:在Xs的影响下,传至第10代的细胞生长速率与第4代的细胞基本保持一致,... 目的:探讨黄嘌呤核苷(Xs)对骨髓间质干细胞(BMSCs)增殖及分化状态的影响。方法:将Xs加入骨髓间质干细胞培养体系,观察它对骨髓间质干细胞增殖和分化特性的影响。结果:在Xs的影响下,传至第10代的细胞生长速率与第4代的细胞基本保持一致,无下降趋势。而对照组细胞(无Xs影响)传至第10代时,生长速率则有明显下降。经Xs促进增殖的骨髓间质干细胞仍能保持足够的肝向分化能力。结论:Xs作为非平衡细胞动力学分裂方式的抑制剂,既能实现骨髓间质干细胞的分裂方式由非平衡态向平衡态转变,又不影响其肝向分化的特性,有助于提高骨髓间质干细胞的体外增殖效率,有着广泛的应用空间。 展开更多
关键词 黄嘌呤核苷 骨髓间质干细胞 快速扩增 细胞分化
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Calreticulin通过诱导细胞EMT促进鼻咽癌迁移和侵袭 被引量：9
3
作者 朱军辉 金明 +6 位作者 邱浩 张和良 马为 肖玄 李承松 罗招阳 张志伟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期925-929,共5页
目的:观察钙网蛋白(calreticulin,CRT)在鼻咽癌组织中的表达并分析其临床病理学意义,揭示其对鼻咽癌CNE2细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:S-P免疫组化法检测CRT在52例鼻咽癌组织和57例鼻咽部良性病变组织中的表达情况,并分析其临... 目的:观察钙网蛋白(calreticulin,CRT)在鼻咽癌组织中的表达并分析其临床病理学意义,揭示其对鼻咽癌CNE2细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:S-P免疫组化法检测CRT在52例鼻咽癌组织和57例鼻咽部良性病变组织中的表达情况,并分析其临床病理学意义;构建特异性干扰CRT基因的小干扰RNA干扰载体,瞬时转染鼻咽癌CNE2细胞,观察CRT低表达对CNE2细胞形态的影响;Transwell迁移和侵袭实验检测CRT低表达对CNE2细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测CRT低表达对上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、转化生长因子-β(TGF-β)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)等EMT相关蛋白表达的影响。结果:CRT在鼻咽癌组织中的阳性表达率为82.69%(43/52),在鼻咽部良性病变组织的阳性表达率为19.29%(11/57),CRT在鼻咽癌组织中表达显著增高(P<0.05);CRT的阳性表达率与鼻咽癌分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。敲降CRT呈低表达后,CNE2细胞由梭形演变为扁平和鹅卵石样,且细胞排列紧密,细胞的迁移侵袭能力减弱(P<0.05)。敲降CRT呈低表达后,E-cadherin表达显著增高,vimentin、TGF-β以及MMP-9蛋白的表达降低(P<0.05)。结论:Calreticulin在鼻咽癌组织中表达显著增高,且与鼻咽癌临床分期及淋巴结转移呈正相关。Calreticulin可诱导鼻咽癌CNE2细胞发生EMT,进而促进鼻咽癌的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 鼻咽癌 钙网蛋白 上皮-间充质转化 细胞迁移 细胞侵袭
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LMP1经TRADD促进鼻咽癌SP18细胞增殖 被引量：2
4
作者 肖娟 张先锋 +4 位作者 刘重元 罗招阳 朱建思 张玲 张志伟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期682-687,共6页
目的:探讨潜伏性膜蛋白1(LMP1)羧基末端活化区2(CTAR2)的肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域(TRADD)在鼻咽癌SP18细胞增殖中的作用及机制。方法:首先建立表达LMP1及CTAR2突变型LMP1(LMP1^(TRADD))的SP18细胞系。其次采用细胞生长曲线、平... 目的:探讨潜伏性膜蛋白1(LMP1)羧基末端活化区2(CTAR2)的肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域(TRADD)在鼻咽癌SP18细胞增殖中的作用及机制。方法:首先建立表达LMP1及CTAR2突变型LMP1(LMP1^(TRADD))的SP18细胞系。其次采用细胞生长曲线、平皿集落形成实验、软琼脂集落实验和流式细胞术观察LMP1^(TRADD)对SP18细胞增殖的影响。然后选用基因芯片检测SP18-LMP1和SP18-LMP1^(TRADD)细胞间的差异表达基因。结果:细胞生长曲线、软琼脂集落和平皿集落形成实验结果均显示,SP18-LMP1细胞生长与集落形成能力均较SP18-LMP1^(TRADD)细胞强(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,SP18-LMP1细胞的增殖指数较SP18-LMP1^(TRADD)细胞高(P<0.01)。筛选出63个增殖相关基因,其中SP18-LMP1^(TRADD)细胞中上调的基因33个,下调的基因30个。结论:TRADD活性区是LMP1促进SP18细胞增殖的重要功能活性位点。LMP1可能通过TRADD提高细胞增殖指数,诱导SP18细胞增殖。 展开更多
关键词 鼻咽癌 潜伏性膜蛋白1 肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域 基因芯片 细胞增殖
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LMP1羧基端活化区3对鼻咽癌干细胞SP18迁移与侵袭的影响 被引量：3
5
作者 肖娟 张志伟 +5 位作者 伍石华 刘重元 唐薇 赵强 雷明生 杨代水 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第1期65-72,共8页
为了观察潜伏性膜蛋白1(LMP1)羧基端活性区3(CTAR3)对鼻咽癌干细胞SP18迁移与侵袭的影响,本研究通过建立稳定表达LMP1及CTAR3突变型LMP1(LMP1△252-351)的SP18细胞系(即SP18-LMP1和SP18-LMP1△252-351),观察LMP1-CTAR3缺失突变后对SP18... 为了观察潜伏性膜蛋白1(LMP1)羧基端活性区3(CTAR3)对鼻咽癌干细胞SP18迁移与侵袭的影响,本研究通过建立稳定表达LMP1及CTAR3突变型LMP1(LMP1△252-351)的SP18细胞系(即SP18-LMP1和SP18-LMP1△252-351),观察LMP1-CTAR3缺失突变后对SP18细胞增殖、迁移与侵袭的影响.采用基因芯片分析SP18-LMP1和SP18-LMP1△252-351间的差异表达基因,并验证基因的表达,用生物信息学分析差异表达基因间的相互关系.结果显示:a.SP-LMP1△252-351细胞生长速度较SP-LMP1细胞明显变缓,克隆形成和迁移与侵袭能力降低(n=3,P<0.05);b.鉴定出LMP1羧基端CTAR3影响SP18细胞迁移与侵袭的18个基因(其中表达上调基因13个,下调基因5个),经荧光定量PCR验证与基因芯片检测结果基本一致.c.13个差异基因间相互联系,网络节点联系最多的基因是FN1、MMP14、THBS1、ITGA2、IL1B和IL6基因.结果提示,LMP1羧基端CTAR3可能通过调节FN1、MMP14、THBS1、ITGA2、IL1B和IL6基因的表达,发挥其促鼻咽癌干细胞SP18细胞迁移与侵袭的功能. 展开更多
关键词 鼻咽癌干细胞SP18 LMP1 羧基端活性区3 基因芯片 迁移与侵袭
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miR-125b靶向MCL1抑制胃癌MGC-803细胞增殖 被引量：7
6
作者 胡泽刚 伍石华 +4 位作者 刘重元 谢黎明 张和良 肖玄 张志伟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2018年第5期544-552,共9页
探讨mi R-125b对胃癌MGC-803细胞增殖的影响及机制,为阐明胃癌发病的分子机制提供实验依据.采用q RT-PCR和原位杂交,检测mi R-125b在正常胃黏膜(NGM)和胃癌(GAC)组织中的表达.将mi R-125b导入胃癌MGC-803细胞,观察mi R-125b高表达对MGC-... 探讨mi R-125b对胃癌MGC-803细胞增殖的影响及机制,为阐明胃癌发病的分子机制提供实验依据.采用q RT-PCR和原位杂交,检测mi R-125b在正常胃黏膜(NGM)和胃癌(GAC)组织中的表达.将mi R-125b导入胃癌MGC-803细胞,观察mi R-125b高表达对MGC-803细胞增殖的影响.利用Targetscan 6.2软件及荧光素酶报告基因检测,分析mi R-125b对MCL1基因的靶向性作用.构建MCL1干扰载体,观察干扰MCL1基因表达对MGC-803细胞增殖的影响.结果发现,mi R-125b在胃癌组织中低表达,其表达与胃癌的分化程度及患者预后呈正相关,与TNM分期、淋巴结转移呈负相关(P<0.01).mi R-125b高表达后MGC-803细胞的增殖降低、凋亡率增加、裂解caspase-3与裂解PARP表达增加(P<0.01);mi R-125b与MCL1基因的3′UTR(2 613~2 620)结合,抑制MCL1的m RNA及蛋白质表达(P<0.01);沉默MCL1基因表达后MGC-803细胞的增殖降低、凋亡率增加、裂解caspase-3与裂解PARP表达增加(P<0.01).从而得出结论,mi R-125b在胃癌组织中低表达,其表达与胃癌组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移及患者预后密切相关;mi R-125b靶向抑制MCL1基因表达,活化caspase-3信号通路,抑制MGC-803细胞增殖. 展开更多
关键词 胃癌 miR-125b MCL1基因 细胞增殖
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LMP1调节鼻咽上皮与鼻咽癌组织中p27与RPLP0蛋白的表达 被引量：4
7
作者 赵强 张志伟 +3 位作者 刘重元 杨科 谢妮 张婕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1830-1834,共5页
目的:观察p27和核糖体磷酸化蛋白大亚基P0(RPLP0)蛋白在潜伏膜蛋白1(LMP1)阳性鼻咽癌细胞中的表达,揭示蛋白质之间的相互作用规律及临床病理学意义。方法:采用Western blotting分析p27和RPLP0蛋白表达与LMP1表达之间的关系,S-P免疫组织... 目的:观察p27和核糖体磷酸化蛋白大亚基P0(RPLP0)蛋白在潜伏膜蛋白1(LMP1)阳性鼻咽癌细胞中的表达,揭示蛋白质之间的相互作用规律及临床病理学意义。方法:采用Western blotting分析p27和RPLP0蛋白表达与LMP1表达之间的关系,S-P免疫组织化学染色检测LMP1、p27和RPLP0蛋白在30例鼻咽上皮组织和60例鼻咽低分化鳞状细胞癌中表达,并分析其临床病理学意义。结果:(1)LMP1在鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为73.3%和90.0%;(2)与LMP1(-)组织比较,p27蛋白在LMP1(+)的鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中表达降低,而RPLP0蛋白表达与之相反;(3)p27蛋白和RPLP0蛋白表达与鼻咽癌患者年龄、LMP1蛋白的表达、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05),患者年龄小、LMP1(-)、无淋巴结转移、TNM I期和II期时,p27蛋白表达阳性率较高,而RPLP0蛋白表达则反之(P<0.05)。结论:LMP1在鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中下调p27和上调RPLP0蛋白的表达;鼻咽癌患者年龄小、LMP1(-)、无淋巴结转移、TNM I期和II期时,p27蛋白表达阳性率较高,而RPLP0蛋白表达则与之相反。 展开更多
关键词 鼻咽上皮 鼻咽肿瘤 潜伏膜蛋白1 P27蛋白 核糖体磷蛋白大亚基P0
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hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达载体的构建与功能研究
8
作者 张志伟 贺修胜 +2 位作者 罗招阳 李艳兰 曹建国 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第4期416-425,共10页
为了探讨端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子调控重组血管基膜衍生多功能肽(rVBMDMP)基因表达抑制肺癌细胞生长的作用机制,采用PCR方法,克隆hTERT启动子核心区片段,并检测其功能活性.然后,构建pLNSX/hTERT/rVBMDMP逆病毒载体,获取逆病毒,感... 为了探讨端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子调控重组血管基膜衍生多功能肽(rVBMDMP)基因表达抑制肺癌细胞生长的作用机制,采用PCR方法,克隆hTERT启动子核心区片段,并检测其功能活性.然后,构建pLNSX/hTERT/rVBMDMP逆病毒载体,获取逆病毒,感染肺癌A549细胞,检测hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达对细胞形态、细胞生长、细胞凋亡以及Caspase-3表达的影响.另外,观察hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达对裸鼠成瘤的抑制作用、瘤组织细胞的凋亡及Caspase-3表达情况.结果发现:a.hTERT启动子核心区能调控rVBMDMP基因的表达(n=3,P<0.05);b.hTERT启动子调控rVBMDMP基因的表达具有抑制肺癌A549细胞的生长和裸鼠成瘤作用(n=6,P<0.05);c.rVBMDMP基因表达能促进肺癌A549细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达.以上结果说明,hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达后,通过提高Caspase-3的表达水平,促进细胞凋亡而抑制肺癌A549细胞的生长. 展开更多
关键词 HTERT启动子 rVBMDMP基因 细胞凋亡 CASPASE-3蛋白
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胃粘膜非典型增生中微环境蛋白质的相互作用 被引量：2
9
作者 谢渊 刘重元 +5 位作者 谢黎明 张和良 黄琳 李昌键 李承松 张志伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期487-497,共11页
微环境在胃癌发病过程中发挥重要作用。了解胃粘膜早期癌变的分子机制,对防治胃癌具有十分重要的意义。为了解胃粘膜非典型增生过程中,微环境中蛋白质的相互作用及调节机制,采用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技... 微环境在胃癌发病过程中发挥重要作用。了解胃粘膜早期癌变的分子机制,对防治胃癌具有十分重要的意义。为了解胃粘膜非典型增生过程中,微环境中蛋白质的相互作用及调节机制,采用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术,纯化正常胃粘膜组织(normal gastric mucosa tissue,NGM)和胃粘膜非典型增生(gastric mucosal atypical hyperplasia,GMAH)间质,通过同位素标记定量蛋白质组学技术分析,鉴定NGM和GMAH间质的差异表达蛋白质。利用生物信息学软件,分析NGM和GMAH间质差异表达蛋白质的相互作用及其联系。共鉴定出165个GMAH间质差异表达蛋白质,其中GMAH组织中表达上调者99个,下调者66个。它们涉及一些与肿瘤相关的信号通路,如p53信号通路、MAPK信号通路、细胞周期与凋亡等信号通路,且与细胞生长、增殖、凋亡和体液免疫应答等生物学过程有关。这些差异表达蛋白质,在STRING网络中呈现相互作用,两两间相互联系。本文的研究提示,胃粘膜非典型增生微环境中存在S100A6和SOD3等蛋白质间的相互作用,它们通过影响p53信号通路、MAPK信号通路、细胞周期与凋亡等信号通路,在胃癌发病过程中发挥作用。 展开更多
关键词 胃粘膜非典型增生 微环境 蛋白质表达
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环状RNA在胃癌中的研究现状与策略 被引量：7
10
作者 王攀 徐高生 +5 位作者 马蔚 叶东梅 李昱萱 罗苇如 肖懿洋 张志伟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2019年第3期238-247,共10页
环状RNA (circRNA)是一种共价闭合的非编码RNA,可以调节真核生物中的基因表达.最近应用高通量RNA测序和生物信息学方法揭示人类细胞中存在大量circRNA.许多circRNA具有一定的组织和时序特异性,且与生理发育和各种肿瘤等疾病密切相关. ci... 环状RNA (circRNA)是一种共价闭合的非编码RNA,可以调节真核生物中的基因表达.最近应用高通量RNA测序和生物信息学方法揭示人类细胞中存在大量circRNA.许多circRNA具有一定的组织和时序特异性,且与生理发育和各种肿瘤等疾病密切相关. circRNA被证明在细胞质中富集和稳定,表明其具有作为肿瘤生物标志物的潜力.胃癌(gastric carcinoma,GC)是一种常见的恶性肿瘤,在全球癌症相关死亡原因中排第3位.尽管该疾病在诊断和治疗方面取得了许多进展,但GC患者的预后仍然很差,大多数国家的5年总生存率低于30%.因此,寻找能调节GC发生发展和评估预后的新分子机制和治疗靶标至关重要.近年来circRNA在胃癌中的研究不断增多,其在胃癌的发生发展、诊断、治疗及预后过程中扮演重要角色.本文就circRNA产生机制及一般特征、生物学功能、在胃癌中的研究进展及研究中存在的问题作一综述. 展开更多
关键词 circRNA 胃癌 肿瘤生物标志物 肿瘤诊断
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